CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Gastric cancer is a serious health problem. Several risk factors have been identified to contribute to its development, such as virulence genes of H. pylori, SNPs in hostâs key genes and epigenetic events. The aim of this study was to investigate the relationship between genes methylation in gastric cancer, its association with H. pylori virulence genes, and verify the influence of CDH1 and MLH1 SNPs in the methylation status and correlate methylation of the promoter of miR-34b/c expression of MET protein in those cases. The promoter genes methylation was assessed by MS-PCR and HRM (for miR-34b/c) techniques. H.pylori genes were detected by PCR and SNPs, by PCR-RFLP. H.pylori genes were detected by PCR and SNPs, by PCR-RFLP. The genes of higher and lower methylation frequency were MSH2 and MLH1, respectively. Patients aged ≥ 50 had CDH1 more frequently methylated than those younger. The MLH1 gene was significantly less methylated in cardia tumors. As for the TNM, the CDH1-M gene was associated with advanced tumor extension, even when subdivided by subtype, since same association has been shown in tumors of intestinal subtype. Already the combination CDKN2A-M/MLH1-U was associated with absence of distant metastases. Taking into account the virulence genes of H. pylori, it was seen that patients infected vacAm1+ or cagG+ strains had a higher frequency of CDKN2A-U vacAs1 + was associated with COX-2-U and CDH1-U, while hopQII with MLH1-U. Patients infected with cagE+ and virB11+ strains had higher frequency of MSH2-M. It was also observed that less virulent strains tended to non-methylation for CDH1 and MLH1 genes. The classification trees made according to the histological subtype, showed that in tumors of diffuse subtype cagE+ and virB11 + strains (separately or together) were also attached to a methylator character of some of the analyzed genes. Already strains virB11+cagA+ did not lead to methylation in two genes. In intestinal subtype tumors was not observed a pattern having a variation in the combinations of H. pylori genes leading to the methylation. CDH1 SNPs presented no relation to the methylation of this gene, while the GA genotype of MLH1 SNP showed a tendency to not methylation of the gene. As regards the promoter methylation of miR-34b/c, the distribution percentage of the cases showed that the majority of cases presented methylation above 50%. The larger frequency among tumors of the intestinal subtype was in the methylation range of 50-75%, and to diffuse subtype from 75%. Already c-MET expression was positive in 86.36% of cases were not found differences among the different locations and subtypes. There was no correlation between the methylation percentage of miR-34b/c and c-MET expression. Observing each case, it was seen that in most cases whose c-MET expression was negative (H-score 0) had a high percentage of methylation of miR-34b/c. In conclusion, the methylation status of the studied genes appear to be dependent on the tumor location and is also related to the TNM staging and tumor subtype. In addition, more virulent H. pylori strains may be involved in this process by increasing inflammatory response leading to methylation of these genes. Already c-MET is overexpressed in cases of gastric cancer and the promoter region of miR-34b/c hipermethylated, indicating a possible involvement of these factors in carcinogenesis of the stomach, although it was not found a direct relationship between the two variables. / O cÃncer gÃstrico constitui um sÃrio problema de saÃde pÃblica. Diversos fatores de risco parecem estar envolvidos na contribuiÃÃo para o seu desenvolvimento, tais como: genes de virulÃncia de H. pylori, SNPs em genes-chave no hospedeiro e eventos epigenÃticos. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar a relaÃÃo entre a metilaÃÃo de genes em casos de cÃncer gÃstrico, sua associaÃÃo com genes de virulÃncia de H. pylori, verificar a influÃncia dos SNPs de CDH1 e MLH1 em seu status de metilaÃÃo, bem como correlacionar a metilaÃÃo do promotor de miR-34b/c e a expressÃo da proteÃna MET nesses mesmos casos. A metilaÃÃo dos genes foi obtida atravÃs da realizaÃÃo da tÃcnica MS-PCR e HRM (para miR-34b/c). Os genes de H. pylori foram detectados por PCR e os SNPs, por PCR-RFLP. Os genes de maior e menor frequÃncia de metilaÃÃo foram MSH2 e MLH1, respectivamente. O corte de idade mostrou que pacientes com idade ≥ 50 anos tiveram CDH1 mais frequentemente metilado que aqueles mais jovens. O gene MLH1 foi significativamente menos metilado em tumores da cÃrdia. Quanto ao TNM, o gene CDH1-M foi associado à extensÃo tumoral avanÃada, inclusive quando subdividido por subtipo, jà que mesma associaÃÃo foi mostrada em tumores do subtipo intestinal. Jà a combinaÃÃo CDKN2A-M/MLH1-U foi associada à ausÃncia de metÃstase à distÃncia. Levando em consideraÃÃo os genes de virulÃncia de H. pylori, foi visto que pacientes infectados por cepas vacAm1+ ou cagG+ tiveram uma maior frequÃncia de CDKN2A-U, vacAs1+ foi associado com COX-2-U e CDH1-U, enquanto hopQII, com MLH1-U. Pacientes infectados por cepas cagE+ e virB11+ tiveram maior frequÃncia de MSH2-M. Foi observado tambÃm que cepas menos virulentas apresentaram uma tendÃncia à nÃo-metilaÃÃo para os genes MLH1 e CDH1. As Ãrvores de classificaÃÃo, feitas de acordo com o subtipo histolÃgico, mostraram que em tumores do subtipo difuso, cepas cagE+ e virB11+ (separados ou em concomitÃncia) tambÃm estavam associadas a um carÃter metilador em alguns dos genes analisados. Jà cepas virB11+cagA+ nÃo levavam à metilaÃÃo em dois genes. Nos tumores do subtipo intestinal, nÃo foi observado um padrÃo, havendo uma variaÃÃo nas combinaÃÃes dos genes de H. pylori que levavam à metilaÃÃo. Os SNPs de CDH1 e nÃo apresentaram relaÃÃo com a metilaÃÃo desses gene, enquanto o genÃtipo GA de MLH1 apresentou uma tendÃncia à nÃo metilaÃÃo do gene. Quanto à metilaÃÃo do promotor de miR-34b/c, a distribuiÃÃo dos casos por percentual mostrou que a maioria dos casos apresentou metilaÃÃo acima de 50%. A maior frequÃncia de casos entre os tumores do subtipo intestinal estava na faixa de metilaÃÃo de 50-75%, e para os do subtipo difuso, a partir de 75%. Jà a expressÃo de c-MET foi positiva em 86,36% dos casos, nÃo sendo encontradas diferenÃas entres as diferentes localizaÃÃes e subtipos. NÃo foi encontrada uma correlaÃÃo entre o percentual de metilaÃÃo de miR-34b/c e a expressÃo da proteÃna c-MET. Observando caso a caso, foi visto que na maioria dos casos cuja expressÃo de c-MET era negativa (H-score 0) possuia um elevado percentual de metilaÃÃo de miR-34b/c. Assim, pode-se concluir que os status de metilaÃÃo dos genes estudados parecem ser dependentes da localizaÃÃo tumoral e està relacionado tambÃm ao estadiamento TNM e ao subtipo tumoral. AlÃm disso, cepas de H. pylori mais virulentas podem estar envolvidas nesse processo, aumentando a resposta inflamatÃria e levando à metilaÃÃo desses genes. Jà a proteÃna c-MET està superexpressa em casos de cÃncer gÃstrico e a regiÃo promotora de miR-34b/c, hipermetilada, indicando um possÃvel envolvimento desses fatores na carcinogÃnese do estÃmago, embora nÃo tenha sido encontrada uma relaÃÃo direta entre as duas variÃveis.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O cÃncer gÃstrico (CG) à a terceira causa de morte por cÃncer no mundo. A etiologia do CG à multifatorial sendo bem estabelecida a associaÃÃo com a infecÃÃo por Helicobacter pylori. A susceptibilidade genÃtica ao CG à postulado pela exposiÃÃo de uma grande proporÃÃo da populaÃÃo a fatores de risco, mas somente um grupo desenvolve essa neoplasia. Por outro lado, o carÃter patogÃnico de H. pylori à dado pela presenÃa da ilha de patogenicidade cag-PAI (cytotoxin associated gene pathogenicity island - cagPAI) bem como a variaÃÃo alÃlica vacA s1m1. Pelo lado do hospedeiro, polimorfismos genÃticos tÃm sido relacionados com o risco de CG, indicando que estas alteraÃÃes sÃo marcadores potenciais de susceptibilidade genÃtica nestes tumores, entretanto, poucos SNPs de enzimas de reparo sÃo estudadas. No contexto da carcinogenÃse gÃstrica, hà ainda que se considerar as diferenÃas com respeito a histopatologia, idade e gÃnero. Assim o objetivo deste trabalho à verificar a associaÃÃo dos SNPs em genes de reparo do DNA, APE1 2197(T>G) e MLH1 -93(G>A), adicionadas aos SNPs de CDH1 -160 (C>A) e -347 (G>GA) por ser uma proteÃna associada ao cÃncer difuso hereditÃrio, com a susceptibilidade genÃtica. Os subtipos histolÃgicos, idade e sexo foram dados importantes considerados para as anÃlises. O genÃtipo de H. pylori, foi determinado pela presenÃa dos genes cagA, cagE, cagG, cagT, virB11, vacA, oipA e hopQII sendo os genÃtipos de H. pylori considerado no estudo de risco e individualizada no Ãltimo estudo. Para isso, foram incluÃdos 285 pacientes com cÃncer gÃstrico e 391 controles saudÃveis pareados por idade e sexo (1:1ou 1:2) de duas regiÃes diferentes do Brasil: Cearà e ParÃ. Positividade para H. pylori em 87,71% dos casos. Foi observado no estudo de risco uma proteÃÃo para os tumores intestinais foi associado ao alelo G de APE1 (T>G) em mulheres com <55 anos e o alelo GA de CDH1 -347 (G>GA) para homens com &#8805; 55 anos de idade. Nos tumores difusos, o grupo com < 55 anos, o alelo A de MLH1 -93 (G>A) foi associado à proteÃÃo e o alelo G de APE1 (T>G) foi associado com o risco em homens neste grupo de idade. O alelo G de APE1 (T>G) tambÃm foi associado à ausÃncia de metÃstase a distÃncia e o alelo A de MLH1 (G>A) com ausÃncia de metÃstase em linfonodos regionais. No subtipo intestinal, pacientes portadores do alelo G de APE1(T>G) foram significativamente infectados por cepas menos virulentas. No estudo com as cepas de H. pylori a maioria dos casos possuiu a ilha completa independente do subtipo histolÃgico. Os genes cagA e cagE estavam presentes na maioria das cepas. Segundo as anÃlises atravÃs do mÃtodo da Ãrvore de classificaÃÃo, alguns genes como cagG e cagE (em cepas vacAs1) se mostraram fundamentais na separaÃÃo dos subtipos histolÃgicos de CG. A presenÃa dos genes cagG e cagE concomitantemente, ou ausÃncia de cagG in H. pylori parece classificar o tumor em intestinal. Enquanto que a presenÃa do gene cagG associado a ausÃncia de cagE classifica os tumores em difusos. O genÃtipo cagM (+) cagG (+) com a presenÃa do gene cagE classifica o tumor em intestinal , jà na ausÃncia de cagE, classifica os tumores em difusos. Em relaÃÃo aos genes de adesÃo houve uma maior frequÃncia do gene oipA, seguido de hopQI e hopQII. Em resumo, estes dados indicam que o genÃtipo de H. pylori , subtipo histolÃgico, idade e gÃnero sÃo importantes fatores a serem considerados em anÃlises com polimorfismos. E apesar da complexidade de explicar quais sÃo os fatores que contribuem para a separaÃÃo das cepas nos subtipos intestinal e difuso, à notÃrio que existem vias diferentes associadas a essas cepas. E que estes genes podem ser potenciais marcadores de diferentes subtipos histolÃgicos.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Chromobacterium violaceum à classificada como uma &#946;-proteobactÃria, saprÃfita, comumente encontrada em solo de regiÃes de clima tropical e subtropical, produz vÃrios metabÃlitos de grande interesse biotecnolÃgico, dentre eles, a violaceÃna. Este trabalho consiste numa caracterizaÃÃo fenotÃpica e genotÃpica de cinco cepas de Chromobacterium violaceum isolados nos MunicÃpios de TejussuÃca e BanabuiÃ, ambas, no Estado do CearÃ. A caracterizaÃÃo genotÃpica consistiu de sequenciamento da regiÃo rDNA 16S e anÃlises RFLP do gene recA. Para a caracterizaÃÃo fenotÃpica, foram realizados testes bioquÃmicos e susceptibilidade a antibiÃticos, a Ãleos essenciais de Lippia alba, bem como seus constituintes majoritÃrios. Com o sequenciamento, as cepas isoladas no estado do Cearà sÃo espÃcies de Chromobacterium violaceum. Por ser um gene conservado, o recA à utilizado como marcador molecular, fornecendo mais informaÃÃes na especificidade dos genoma bacterianos. Pela a anÃlise por RFLP, as cepas 1425, 1323, 2221 e a ATCC 12472 apresentaram trÃs fragmentos digeridos pela enzima, enquanto que as cepas 1221 e 1222 apresentaram dois fragmentos, indicando sequÃncias nucleotÃdicas diferentes para este gene conservado. As cincos cepas apresentaram caracterÃsticas fenotÃpicas iguais a Chromobacterium violaceum ATCC 12472, todas demonstraram ser resistentes a uma grande variedade de antibiÃticos &#946;-lactÃmicos e mais susceptÃveis as fluorquinolonas. Este à o primeiro trabalho na literatura cientÃfica que trata da aÃÃo antimicrobiana dos Ãleos essenciais da Lippia alba sobre a Chromobacterium violaceum, e pelos resultados obtidos, os Ãleos essenciais exerceram aÃÃo bactericida sobre todas as cepas, sugerindo ser uma possÃvel alternativa de tratamento nos casos de doenÃa provocada pela Chromobacterium violaceum, que na maioria dos casos à confundida pela classe mÃdica com a melioidose provocada pela Burkholderia pseudomallei.

Submitted by Ana Caroline Costa (ana_caroline212@hotmail.com) on 2018-11-30T18:44:39Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thaylla Horbylon Nascimento - 2017.pdf: 2748481 bytes, checksum: 12679d6d81f935cee0a82be36ee7480a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-12-03T13:14:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thaylla Horbylon Nascimento - 2017.pdf: 2748481 bytes, checksum: 12679d6d81f935cee0a82be36ee7480a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-12-03T13:14:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thaylla Horbylon Nascimento - 2017.pdf: 2748481 bytes, checksum: 12679d6d81f935cee0a82be36ee7480a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-12-12 / Outro / Paracoccidioides comprises the genus of fungi causing paracoccidioidomycosis. The research of new treatments, especially those based on inhibition of metabolic pathways important for microorganisms has gained prominence and the aspartate pathway, necessary for the biosynthesis of threonine, isoleucine and methionine in microorganisms, is not found in humans. Catalyzing the second step of this pathway, we found aspartate semialdehyde dehydrogenase (ASADH), which has not yet been characterized in Paracoccidioides spp. and has no substituents in its catalytic function in the aspartate pathway. Thus, it is of interest the determination of its biological properties experimentally that their biological properties be determined experimentally. ASADH from Pb18 was cloned into vector pGEX-4T3, expressed in E. coli Stellar cells and purified on a glutathione-sepharose column. Then, antibodies were produced and used in Western blot assay to confirm protein expression. The pull-down-GST assay was performed and allowed the identification of complexes of interactions between ASADH and soluble proteins present in total protein extract of the yeast form of Pb18. Interactions with proteins of several functional categories, among them those related to the metabolism of threonine, isoleucine and methionine, were found, reinforcing the performance of ASADH in the amino acid biosynthesis of Pb18, as well as proteins related to substrate supply to the aspartate pathway and proteins that use metabolites of this pathway. Interactions with proteins involved in other metabolic pathways were also observed, as well as unprecedented interactions, suggesting the importance of ASADH in the functional processes of microorganisms. / Paracoccidioides compreende o gênero de fungos causadores da paracoccidioidomicose. A pesquisa de novos tratamentos, sobretudo aqueles baseados em inibição de vias metabólicas importantes para micro-organismos, tem ganhado destaque e a via do aspartato não é encontrada em humanos. A via do aspartato é necessária para a síntese de treonina, isoleucina e metionina. Catalisando o segundo passo dessa via, encontramos a aspartato semialdeído desidrogenase (ASADH), que ainda não foi caracterizada em Paracoccidioides spp. e não possui substituintes em sua função catalítica na via do aspartato. Assim, é de interesse que suas propriedades biológicas sejam determinadas experimentalmente. A ASADH proveniente de Pb18 foi clonada em vetor pGEX-4T3, expressa em células E. coli Stellar e purificada em coluna de glutationa-sefarose. Em seguida, anticorpos foram produzidos e utilizados em ensaio de Western-blot para confirmar a expressão proteica. O ensaio de pull-down-GST foi realizado e permitiu a identificação de complexos de interações entre a ASADH e proteínas solúveis presentes em extrato proteico total da forma de levedura de Pb18. Foram encontradas interações com proteínas de diversas categorias funcionais, dentre elas relacionadas ao metabolismo de treonina, isoleucina e metionina, reforçando a atuação da ASADH na biossíntese de aminoácidos de Pb18, bem como proteínas relacionadas ao fornecimento de substrato para a via do aspartato e proteínas que utilizam os metabólitos dessa via. Também foram observadas interações com proteínas envolvidas em outras vias metabólicas, assim como interações inéditas, sugerindo a importância de ASADH nos processos funcionais de micro-organismos.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_otavio_martins_cruz.pdf: 364672 bytes, checksum: 4c494367518aef716a4090f1f8e5da0e (MD5) Previous issue date: 2012-10-25 / The spontaneous abortion (SA) is characterized as a loss of fetal product before 20 weeks of gestation and its etiology has not completely understood. Numerous studies have shown that polymorphisms in the gene of the enzyme metilenotetrahydrofolate reductase (MTHFR) are involved in susceptibility to AE. Then, the present study was conducted to evaluate the polymorphisms 677C>T and 1298A>C MTHFR gene and their associations in susceptibility to spontaneous abortion in a sample of women in the South of Brazil in a casecontrol approach. Ninety-eight women with SA (cases) and two hundred and twenty-seven healthy women with no history of miscarriage (controls) were studied. Genotyping of MTHFR677C>T and MTHFR1298A>C polymorphisms were analyzed by allele discrimination with TaqMan® pre-designed probes in Real Time PCR. The results showed that there was not difference in the distribution of allelic and genotypes frequencies of MTHFR677C>T and MTHFR1298A>C SNPs between cases and control group. It was observed an increase in the risk of SA in relation to genotype THFR1298CC when compared to genotype MTHFR1298AA (RR: 1,13 95%CI: 1,04; 1,23; p=0.02). Moreover, the classification of the type of abortion is different between genotypes of MTHFR1298A>C polymorphism (p = 0.03). In the control group, non-electron carriers of 677T allele have a higher number of pregnancies than women 677T (p = 0.04). The results presented in our work suggests that the CC genotype of polymorphism MTHF1298A > C is associated with increased risk of SA. However, the polymorphism MTHFR677C>T is not involved in the occurrence of miscarriage in studied population. / O aborto espontâneo (AE) é caracterizado como a perda do produto fetal antes de 20 semanas de gestação e sua etiologia não é completamnete esclarecida. Inúmeros estudos têm demonstrado que polimorfismos no gene da enzima metilenotetraidrofolato redutase (MTHFR) estão envolvidos na susceptibilidade ao AE. Dessa forma, o presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar os polimorfismos 677C>T e 1298A>C do gene da MTHFR e suas associações na susceptibilidade ao aborto espontâneo em uma amostra de mulheres do Sul do Brasil em uma abordagem de caso-controle. Noventa e oito mulheres com AE (casos) e duzentas e vinte sete mulheres saudáveis e sem histórico de aborto espontâneo (controles) foram estudadas. A genotipagem dos polimorfismos MTHFR677C>T e MTHFR1298A>C foi analisada através da técnica de discriminação alélica com uso de sondas pré-desenhadas TaqMan® por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que não houve diferença na distribuição das frequências dos alelos e dos genótipos dos SNPs MTHFR677C>T e MTHFR1298A>C entre os casos e o grupo controle. Foi observado um aumento do risco de AE em relação ao genótipo MTHFR1298CC quando comparado ao genótipo MTHFR1298AA (RR: 1,13 95%IC: 1,04; 1,23; p=0.02). Além disso, a classificação do tipo de aborto é diferente entre os genótipos do polimorfismo MTHFR1298A>C (p = 0,03). No grupo controle, mulheres não-carreadoras do alelo 677T apresentam um maior número de gestações do que mulheres 677T (p = 0,04). Os resultados apresentados neste trabalho sugerem que o genótipo CC do polimorfismo MTHF1298A>C é associado ao aumento do risco do AE, entretanto, em nossa população, o polimorfismo MTHFR677C>T não está envolvido na ocorrência do aborto espontâneo.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miguel Soto.pdf: 3392628 bytes, checksum: 62e83dd8713fab1173dd8f45d005072c (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Within the great biodiversity of freshwater fish of South America, the Characidae family has been one of the most controversial groups taxonomically. In the trans-Andean country of Chile, the family is represented only by the Cheirodontinae of the genus Cheirodon and its five species, of which C. pisciculus, C. galusdae, C. kiliani and C. australe are endemic, and C. interruptus is native to the Atlantic basins of Argentina, Uruguay and Brazil. In order to contribute to the description of the evolutionary relationships and taxonomic delimitation of the species of genus Cheirodon present in Chile, the karyotypes of these five species are described for the first time and compared by their diploid number, chromosomic morphology, C bands, Nucleolar Organizer Regions (Ag-NOR) and the rDNA 5S and 18S marking by fluorescence in situ hybridization (FISH). For all the analyzed species the diploid number was 50 chromosomes, varying in the karyotype formula among the metacentric, submetacentric, subtelocentric and acrocentric types. The number of chromosome arms was 68 in C. australe and C. kiliani and 66 in C. galusdae, C. pisciculus and C. interruptus. The presence and distribution of constitutive heterochromatin was similar in the five species, being observed mainly in the centromeres and telomeres. Variation in the number and distribution of the 5S and 18S rDNA regions was observed, being those two clusters on different chromosomes or in syntenia. It was also observed a variation in the activity of RONs, being found in C. kiliani and C. galusdae, the highest level of relative activity. There is a greater karyotype similarity between the two species that living more to the south in relation to those with the most central and north distribution, evidencing a reflection of hydrograph formation and species isolation. / Dentro da grande biodiversidade de peixes de água doce de América do Sul,a família Characidae tem sido um dos grupos mais controversos taxonomicamente. No país transandino Chile, a família é representada apenas pelos Cheirodontinae do gênero Cheirodon e suas cinco espécies, das quais C. pisciculus, C. galusdae, C. kiliani e C. australe são endêmicas. No entanto C. interruptus é originaria das bacias atlânticas da Argentina, Uruguai e Brasil. Para contribuir na descrição das relações evolutivas e delimitação taxonômica das espécies do gênero Cheirodon presentes no Chile, são descritos pela primeira vez os cariótipos destas cinco espécies e comparados segundo seu número diplóide, morfologia cromossômica, bandas C, Regiões Organizadoras do Nucléolo (Ag-RON) e a marcação de DNAr 5S e 18S por hibridação in situ fluorescente (FISH). Para todas as espécies analisadas o número diplóide foi de 50 cromossomos, variando na fórmula cariotípica entre os tipos metacêntricos, submetacêntricos, subtelocêntricos e acrocêntricos. O número de braços cromossômicos foi de 68 em C. australe e C. kiliani e de 66 em C. galusdae, C. pisciculus e C. interruptus. A presença e distribuição da heterocromatina constitutiva foi similar nas cinco espécies, sendo observada principalmente nos centrômeros e telômeros. Foi observada variação no número e distribuição das regiões de DNAr 5S e 18S, podendo esses dois clusters estar em cromossomos diferentes ou em sintenia. Também foi observada variação na atividade das RONs, sendo encontrado em C. kiliani e em C. galusdae, o maior nível de atividade relativa. Existe maior similaridade cariotípica entre as duas espécies ocorrentes mais ao sul do que destas em relação àquelas mais centrais e ao norte, mostrando um reflexo da formação da hidrografia e isolamento das espécies.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-07T15:51:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoImunohistoquimicaAtividade.PDF: 1932325 bytes, checksum: 69c3e8a8eb0bb294e0d6240088b6bbb0 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2014-03-10T16:23:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_AvaliacaoImunohistoquimicaAtividade.PDF: 1932325 bytes, checksum: 69c3e8a8eb0bb294e0d6240088b6bbb0 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-10T16:23:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_AvaliacaoImunohistoquimicaAtividade.PDF: 1932325 bytes, checksum: 69c3e8a8eb0bb294e0d6240088b6bbb0 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2008 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo teve por objetivo avaliar a correlação entre a atividade de macrófagos e a apoptose nas formas polares da hanseníase. Para tal foram analisadas amostras constituídas de 29 biopsias de pele de pacientes com as formas polares da hanseníase. Para a medida da atividade macrofágica e da apoptose, utilizou-se o método imunohistoquímico, visando os marcadores lisozima, CD68, iNOS (para atividade de macrófago) e caspase 3 (para apoptose). No tratamento estatístico, foi utilizado o teste não paramétrico de Mann-Whitney e a Correlação linear de Spearman. Os resultados obtidos sugerem que a taxa de apoptose sofre influência direta da atividade macrofágica nas lesões de pacientes TT, contudo nas lesões LL, notou-se que outros fatores devem estar induzindo a morte celular programada, possivelmente o TGF-β. / The present study had for objective to evaluate the correlation between the activity of macrophage and the apoptosis in the polar forms of the leprosy. For such constituted samples of 29 biopsies of patients' skin were analyzed with the polar forms of the leprosy. For the measure of the activity of macrophage and of the apoptosis, the method immunohistochemistry was used, seeking the markers lysozyme, CD68, iNOS (for activity of macrophage) and caspase 3 (for apoptosis). In the statistical treatment, it was used the test non parametric of Mann-Whitney and the lineal Correlation of Spearman. Do the obtained results suggest that the apoptosis rate suffers direct influence of the activity of macrophages in the lesions of patient TT, however in the lesions what was LL, noticed other factors they must it is inducing the programmed cellular death, possibly TGF-β.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-10T12:10:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoMolecularCepasVirus.pdf: 1867488 bytes, checksum: d9b8346d11c562383d6eacefda707681 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-07T16:31:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_CaracterizacaoMolecularCepasVirus.pdf: 1867488 bytes, checksum: d9b8346d11c562383d6eacefda707681 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-07T16:31:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_CaracterizacaoMolecularCepasVirus.pdf: 1867488 bytes, checksum: d9b8346d11c562383d6eacefda707681 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2009 / A febre do dengue é uma das mais importantes arboviroses distribuída por todas as áreas tropicais do mundo. O vírus dengue (VDEN) é transmitido principalmente pela picada do mosquito Aedes aegypti infectado. A dispersão do vetor e o aumento do fluxo migratório entre países possibilitaram a ocorrência de grandes epidemias e manifestações clínicas severas, como febre hemorrágica do dengue (FHD) e Síndrome do choque do dengue (SCD). O objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização molecular de isolados do VDEN sorotipo 1 (VDEN-1) no Brasil ao nível dos genes estruturais C/prM/M/E de 29 cepas isoladas durante epidemias ocorridas no Brasil no período de 1994 a 2008. A identidade nucleotídica entre as cepas de VDEN-1 do estudo em relação às outras isoladas no Brasil variou de 96,1% a 100%, enquanto o percentual de identidade de aminoácidos foi determinado entre 98,4% a 100%. As diferenças de aminoácidos entre as cepas do estudo, quando comparadas com a cepa FGA/89 (Guiana Francesa), mostraram a presença de importantes substituições não-sinônimas com mudança de caráter bioquímico, tais como os resíduos E297 (Met Tre) e E338 (Ser Leu), sendo necessário estudos para verificar se essas alterações podem ou não estar relacionadas à virulência. A análise filogenética para a proteína E, realizada por meio do método de máxima verossimilhança para as cepas do estudo e outras cepas selecionadas do banco de dados do Genbank, mostraram que as cepas de VDEN-1 isoladas no Brasil desde 1982 pertencem ao genótipo V, corroborando com os resultados publicados anteriormente. O tempo de divergência do VDEN-1, estimado através da hipótese de relógio molecular, mostrou que este vírus teve sua origem a partir de uma linhagem ancestral, há aproximadamente, 113 anos e observou-se ainda que as cepas de VDEN-1 circulantes no Brasil e as provenientes da África possuem um ancestral comum, sendo necessário estudos de filogeografia que mostrem as possíveis rotas de entrada do VDEN-1 no Brasil. / Dengue fever is one of the most important arboviral disease distributed to all tropical areas of the world. Dengue virus (DENV) is transmitted mainly by the bite of infected Aedes aegypti mosquitoes. The dispersion of the vector and the increase of migration between countries caused the occurrence of major epidemics and severe clinical manifestations, such as the dengue hemorrhagic fever (DHF) and the dengue shock syndrome (DSS). The objective of this study was the molecular characterization of isolates of DENV-1 in Brazil at the level of structural genes C / prM / M / E of 29 strains isolated during outbreaks occurred in Brazil between 1994 and 2008. The nucleotide identity among strains of this DENV-1 study compared with other strains isolated in Brazil ranged from 96.1% to 100%, while the percentage of amino acid identity was determined between 98.4% to 100%. The amino acid differences between strains of the study, compared with the strain FGA/89 (French Guiana) showed the presence of important non-synonymous substitutions change of the amino acid biochemical character, such as the E297 residue (Met Thr) and E338 (Ser Leu), more detailed studies are needed to investigate if any of them may be related to DENV-1 virulence. The phylogenetic analysis of the E gene, performed using the maximum likelihood method for the studied strains and other strains selected from the database of GenBank showed that the DENV-1 isolates from Brazil since 1982 belonged to genotype V, confirming previously published data. The time of divergence of DENV-1, estimated by molecular clock method, showed that this virus was originated from an ancestral lineage, there are approximately 113 years and it was also observed that DENV-1 strains circulating in Brazil and those from Africa have a common ancestor, and finally it is necessary phylogeographic studies to show the possible routes of entry of DENV-1 in Brazil.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-10T14:45:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoMolecularVirus.pdf: 2145926 bytes, checksum: a9fa4b1749574d6c532ca36612200d11 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-22T13:52:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_CaracterizacaoMolecularVirus.pdf: 2145926 bytes, checksum: a9fa4b1749574d6c532ca36612200d11 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-22T13:52:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_CaracterizacaoMolecularVirus.pdf: 2145926 bytes, checksum: a9fa4b1749574d6c532ca36612200d11 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2007 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As cepas do Virus Melao (VMEL), BE AR 8033 e BE AR 633512 foram isoladas de mosquitos Ochlerotatus (Ochlerotatus) scapularis, em Belém- PA (1955) e Alta Floresta do Oeste- RO (2000), respectivamente. Este trabalho teve como objetivo caracterizar molecularmente as cepas BE AR 633512 e BE AR 8033 e realizar estudos histopatológicos, bioquímicos e imunológicos comparativos em hamsters dourados (Mesocricetus auratus). Hamsters mostraram suscetibilidade às cepas do VMEL. A viremia em hamsters para BE AR 633512 ocorreu do 3º ao 6º dias pós-infecção (dpi.), e para a cepa BE AR 8033 ocorreu no 2º dpi. Anticorpos neutralizantes para ambas as cepas foram detectados a partir de 5 dpi., e se mantiveram até 30 dpi. As cepas testadas alteraram os marcadores bioquímicos AST, ALT e uréia, enquanto que a creatinina só apresentou alteração estatisticamente significante nos animais infectados com a cepa viral BE AR 633512, em comparação aos animais controles não infectados. Alterações histopatológicas foram observadas no SNC, fígado, rim e baço dos hamsters infectados pelas cepas do VMEL, sendo a infecção nesses órgãos confirmada por imunohistoquímica. A cepa BE AR 633512 foi mais virulenta e patogênica para hamsters que a cepa BE AR 8033. A análise genética dos genes N, Gn e Gc revelou que para os genes N e Gn, a cepa BE AR 8033 e do protótipo VMEL (TRVL 9375) são mais geneticamente relacionados. Para o gene Gc, a cepa BE AR 8033 é mais relacionada com a cepa BE AR 633512, sendo que esta última cepa apresentou maior variabilidade genética, principalmente no gene Gn com várias substituições de aminoácidos, mas as mutações no gene Gc provavelmente foram responsáveis pelo aumento da virulência e patogenicidade em hamsters. / The Melao Virus (MELV) strains, BE AR 8033 e BE AR 633512 were isolated from lots of Ochlerotatus (Ochlerotatus) scapularis mosquitoes, in Belém- PA (1955) and Alta Floresta do Oeste- RO (2000), Brazil, respectively. The aim of this study was to carry out molecular characterization of the MELV strains BE AR 633512 and BE AR 8033 and to describe the histopathologic, biochemistry and immunological changes in golden hamsters (Mesocricetus auratus). Hamsters showed susceptibility to these MELV strains. The viremia produced in hamsters by BE AR 633512 strain occurred between 3 and 6 days post-infection (dpi.), and for the BE AR 8033 occurred only in the 2nd dpi. Neutralizing antibodies for both strains were initially detected on the 5th dpi. and remained up to the 30 dpi. The biochemistry markers AST, ALT and blood urea nitrogen showed values statistically significants among inoculated animals with both VMEL strains, while creatinine value it was only altered by BE AR 633512 strain. Histopathologic changes were observed in the central nervous system, liver, kidney, and spleen of the hamsters, and infection was confirmed by immunohistochemical assay in all them. Strain BE AR 633512 caused more intense tissue damage showing increases virulence and pathogenicity than BE AR 8033 strain. The genetic analysis of the N, Gn and Gc genes revealed that for N and Gn genes, the BE AR 8033 and prototype strain (TRVL 9375) are genetically more closed related, and for the Gc gene, the BE AR 8033 and BE AR 633512 strains are more related. BE AR 633512 strain showed increased genetic variability, mainly in the Gn gene, were several aminoacid changes were observed, but the Gc mutations should be responsible for the increased virulence for hamsters.

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-02-06T20:30:27Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Felipe Souto Araújo - 2014..pdf: 3055145 bytes, checksum: 201375acf3007e213c1265f0cae0ff5e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-02-19T14:44:14Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Felipe Souto Araújo - 2014..pdf: 3055145 bytes, checksum: 201375acf3007e213c1265f0cae0ff5e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-19T14:44:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Felipe Souto Araújo - 2014..pdf: 3055145 bytes, checksum: 201375acf3007e213c1265f0cae0ff5e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-06-02 / Paracoccidioides spp, dimorphic pathogenic fungi, is the etiologic agent of paracoccidioidomycosis (PCM). PCM is an endemic disease that affects at least 10 million people in Latin America, causing severe public health problem. The drugs used against pathogenic fungi have various side effects and have limited efficacy, therefore there is an inevitable and urgent medical needing for the development of new antifungal drugs. In the present study, we evaluated the transcriptional profile of Paracoccidioides spp exposed to argentilactone, a constituent of the essential oil of Hyptis ovalifolia. A total of 1,058 genes were identified, of which 208 were up-regulated and 850 down-regulated. The cell rescue, defense and virulence, with a total of 26 genes, was a functional category with a large number of genes induced, among them, heat shock protein 90 (hsp 90), cytochrome c peroxidase (ccp), hemoglobin ligant RBT5 (rbt5) and superoxide dismutase (sod). Quantitative real-time PCR revealed an increase in the expression level of all those genes. Enzymatic assay showed a significant increase in SOD activity. The reduced growth of Pbhsp90-aRNA, Pbccp-aRNA, Pbsod-aRNA, Pbrbt5-aRNA isolates in the presence of argentilactone indicates the importance of these genes in Paracoccidioides spp responding to argentilacone. Paracoccidioides spp cell wall was also evaluated. The results showed that argentilactone causes a decrease in the levels of polymers of the cell wall. These results suggest that argentilactone is a potential candidate for antifungal therapy. / Paracoccidioides spp, fungo patogênico dimórfico, é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM). PCM é uma doença endêmica que afeta pelo menos 10 milhões de pessoas na América Latina, causando grave problema de saúde pública. Os medicamentos usados contra fungos patogênicos têm vários efeitos secundários e têm eficácia limitada, por conseguinte, existe uma inevitável e urgente necessidade médica para o desenvolvimento de novas drogas anti-fúngicas. No presente estudo, foi avaliado o perfil transcricional de Paracoccidioides spp expostos a argentilactona, um componente do óleo essencial de Hyptis ovalifolia. Um total de 1.058 genes foram identificados, dos quais 208 foram induzidos e 850 reprimidos. Resgate celular, defesa e virulência, com um total de 26 genes, foi uma categoria funcional com um grande número de genes induzidos, entre eles, proteína de choque térmico 90 (HSP 90), citocromo c peroxidase (CCP), hemoglobina ligante RBT5 (rbt5) e superóxido dismutase (SOD). Quantitative real-time PCR revelou um aumento do nível de expressão de todos esses genes. Ensaio enzimático mostrou um aumento significativo na atividade de SOD. O crescimento reduzido de Pbhsp90-aRNA, Pbccp-aRNA, Pbsod-aRNA, Pbrbt5-aRNA na presença de argentilactona indica a importância desses genes em Paracoccidioides spp respondendo a argentilacona. Parede celular de Paracoccidioides spp também foi avaliada. Os resultados mostraram que argentilactona provoca uma diminuição nos níveis de polímeros da parede celular. Estes resultados sugerem que argentilactona é um candidato potencial para a terapia antifúngica.