Memoria para optar al título profesional de
Ingeniero Agrónomo / Con el fin de evaluar la virulencia y características genéticas de aislados chilenos
de Botrytis cinerea con distinta sensibilidad a iprodione, se seleccionaron nueve
aislados altamente resistentes (EC50: 1,35 – 2,47 μg·mL-1) y cuatro aislados
sensibles (EC50: 0,26 – 0,31 μg·mL-1).
La virulencia se evaluó en plántulas de pepino (Cucumis sativus L.) mediante
inoculación de discos de agar con micelio del hongo de tres días de edad y en bayas
de vid (Vitis vinífera L.) Thompson Seedless con distinto grado de madurez (7°, 14°
y 17° Brix), mediante inoculación de una suspensión conidial (equivalente a 2·105
conidias·mL-1). Posterior a la inoculación las plántulas de pepino se mantuvieron a
20-25°C y 100% de humedad relativa y las bayas de vid en cámaras de crecimiento
a 20°C. La evaluación se realizó mediante medición del diámetro de la lesión en la
zona de inoculación luego de 96 y 72 horas en hojas de pepino y bayas de vid,
respectivamente. Los resultados obtenidos fueron sometidos a un ANDEVA simple
y en las dos pruebas de virulencia realizadas los aislados de Botrytis cinerea
resistentes y sensibles presentaron niveles de agresividad similares.
La caracterización genética de los aislados se realizó amplificando mediante PCR el
gen bos1 asociado a resistencia de Botrytis cinerea a dicarboximidas, utilizando 5
pares de partidores específicos. Posteriormente los productos de PCR purificados
fueron secuenciados por Macrogen USA Corp.
El análisis de las secuencias nucleotídicas de los nueve aislados resistentes detectó
un cambio aminoacídico en la posición T1259A de la proteína. En ocho de éstos
fueron detectadas las mutaciones I365N y R104Q y en el aislado restante un
cambio en la posición I365S y una sustitución en la posición L849V. Esta última
sustitución no ha sido descrita previamente desconociéndose su implicancia en el
nivel de resistencia. En ninguno de los cuatro aislados sensibles secuenciados, el
gen bos1 presentó mutaciones asociadas a resistencia a dicarboximidas. / In order to evaluate the virulence and genetic characteristics to Chilean isolates
Botrytis cinerea of with different sensitivity to iprodione, were selected nine highly
resistant isolates (EC50: 1, 35 to 2.47 μg·mL-1) and four susceptible isolates (EC50:
0.26 to 0.31 μg·mL-1).
The virulence was evaluated inoculating cucumber seedlings (Cucumis sativus L.)
with three days old Botrytis cinerea mycelium and different ripe (7 °, 14 ° 17 °
Brix) Thompson Seedless grape berries (Vitis vinifera L.) with a conidial
suspension (2·105 conidia·mL-1).
Cucumber seedlings were kept at 20-25°C and relative humidity 100% and grape
berries in growth chambers at 20°C. The evaluation was done measuring the lesion
diameter after 96 and 72 hours in cucumber leaves and grape berries, respectively.
The results were subjected to a simple ANOVA and in both virulence tests carried
out, the sensitive and resistant Botrytis cinerea isolates showed similar levels of
aggressiveness.
The genetic characterization was performed by PCR amplification of the
dicarboximide resistance associated Botrytis cinerea bos1 gene, by means of five
specific primers. The purified PCR product was sequenced by Macrogen USA
Corp.
By means of sequences analysis the bos1 gene nucleotide, in all the nine resistant
isolates was detected an amino acid change at the T1259A protein position. The
I365N and R104Q mutations were detected in eight of the isolates and in the other
isolate a change in the position I365S and a substitution at position L849V. The
latter substitution has not been previously detected and it implications on resistance
is unknown. The bos1 gene showed no mutations associated to the resistance to
dicarboximides in any one of the four susceptible isolates sequenced.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/112283 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Araneda Rubio, María José |
| Contributors | Esterio Grez, Marcela, Auger Saavedra, Jaime, Facultad de Ciencias Agronómicas, Escuela de Pregrado |
| Publisher | Universidad de Chile |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
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