Memoria para optar al Título profesional de Ingeniera Agrónoma Mención Sanidad Vegetal / La pudrición ácida, causada por Geotrichum candidum, afecta a carozos en postcosecha. La fuente de inóculo son los frutos podridos en el huerto, que contaminan los materiales de cosecha, aguas de lavado, líneas de selección y embalaje. Los síntomas de la enfermedad se presentan en los mercados de destino y escasamente en almacenamiento o laboratorio, no existiendo una metodología para reproducirla, siendo difícil conocer su epidemiología o el efecto de las medidas de manejo. Investigaciones previas han mostrado que el congelamiento y posterior incubación a temperatura ambiente permiten la detección de poblaciones epífitas del patógeno sobre la fruta. Para inhibir el desarrollo de hongos saprófitos que impiden el recuento de G. candidum en postcosecha, como Penicillium y Rhizopus, se evaluaron las mezclas de fungicidas dicloran + iprodione, dicloran + imazalil, dicloran + pyrimethanil y dicloran + benomyl, asperjándolas sobre duraznos cv. Zee Lady posteriormente congelados y mantenidos en cámara húmeda durante cinco días, comparando los resultados con un tratamiento testigo (sin fungicida). Se determinó el porcentaje de frutos con poblaciones epífitas de cada hongo, resultando efectivas para el recuento de G. candidum todas las mezclas excepto dicloran + imazalil. Para verificar efectos inhibitorios de los fungicidas sobre Geotrichum candidum, duraznos cv. Ross fueron inoculados con el hongo previo al tratamiento con fungicidas y congelación. Todas las mezclas permitieron el recuento del patógeno. Aunque los fungicidas no eliminaron completamente los saprófitos Rhizopus, Cladosporium, Penicillium y Aspergillus, sí impidieron que éstos colonizaran totalmente los frutos, permitiendo el desarrollo y recuento de G. candidum. También se determinó el efecto de los fungicidas sobre el crecimiento miceliar in vitro de dos cepas de G. candidum, comparadas con un testigo sin fungicidas. Dicloran + pyrimethanil y dicloran + benomyl, a la mitad de la dosis, presentaron la menor inhibición del crecimiento miceliar del hongo. Además, se determinó el porcentaje de frutos con poblaciones epífitas de Geotrichum candidum en duraznos cv. Sweet September provenientes de huertos comerciales con y sin historial de pudrición ácida, en tres etapas del proceso de embalaje (bins llegada a la planta, hidrocooler y caja embalada). Se observó que la fruta de los huertos sin historial alcanzó el mismo nivel de inóculo en caja embalada que la de aquellos con historial. Esto se debería a la redistribución del inóculo de G. candidum durante el proceso de selección y embalaje, después del hidrocooler. En ambos casos se determinó que casi la totalidad de los frutos presentaron poblaciones epífitas del hongo una vez embalados. / Sour rot of stone fruit caused by Geotrichum candidum has become an important disease in exported peaches. The inoculum coming from rotten fruits in the orchard contaminates the fruit and picking materials, as well as water tanks and packing lines at the packing facilities. Disease symptoms appear in the export markets, but the incidence is barely observed at the national storage or markets. There is not at the present a methodology to replicate the disease in order to better know the disease and the effectiveness of control practices. Previous work showed that freezing the fruit and incubating at room temperature allowed the detection of the epiphytic populations of the pathogen on the fruit, but the colonies of G. candidum were sometimes overgrowth by other saprophytic fungi, like Penicillium and Rhizopus. To inhibit the saprophytic fungi that prevent G. candidum enumeration, fungicide mixtures of dicloran + iprodione, dicloran + imazalil, dicloran + pyrimethanil and dicloran + benomyl were spray over Zee Lady peaches before freezing for 4 days. To observe the effect of the fungicide combination on G. candidum, inoculated Ross peaches were also treated. The effect of the mixtures of fungicides was also evaluated in vitro for the inhibition of the mycelial growth of the pathogen. Finally, the epiphytic populations of G. candidum on Sweet September peaches, from orchards with or without history of the disease, were determined at the arrival of the fruit at the packing facility, after the hidrocooler and at the end of the packing line. All the fungicide mixtures but dicloran + imazalil effectively reduced the saprophytic growth of Rhizopus, Cladosporium, Penicillium and Aspergillus. All mixtures allowed enumeration of G candidum and although the fungicides did not eliminate saprophytic fungi, they prevented complete fruit colonization, allowing G. candidum growth. Half dose of dicloran + pyrimethanil and dicloran + benomyl had less inhibition of the in vitro miceliar growth of G. candidum. The epiphytic population of G. candidum was lower in fruit coming from the orchards without history of the disease. The population did not increased after the hidrocooler but raised to almost a 100 % at the end of the packing line for both kinds of fruit.

Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo / Con el fin de evaluar la virulencia y características genéticas de aislados chilenos de Botrytis cinerea con distinta sensibilidad a iprodione, se seleccionaron nueve aislados altamente resistentes (EC50: 1,35 – 2,47 μg·mL-1) y cuatro aislados sensibles (EC50: 0,26 – 0,31 μg·mL-1). La virulencia se evaluó en plántulas de pepino (Cucumis sativus L.) mediante inoculación de discos de agar con micelio del hongo de tres días de edad y en bayas de vid (Vitis vinífera L.) Thompson Seedless con distinto grado de madurez (7°, 14° y 17° Brix), mediante inoculación de una suspensión conidial (equivalente a 2·105 conidias·mL-1). Posterior a la inoculación las plántulas de pepino se mantuvieron a 20-25°C y 100% de humedad relativa y las bayas de vid en cámaras de crecimiento a 20°C. La evaluación se realizó mediante medición del diámetro de la lesión en la zona de inoculación luego de 96 y 72 horas en hojas de pepino y bayas de vid, respectivamente. Los resultados obtenidos fueron sometidos a un ANDEVA simple y en las dos pruebas de virulencia realizadas los aislados de Botrytis cinerea resistentes y sensibles presentaron niveles de agresividad similares. La caracterización genética de los aislados se realizó amplificando mediante PCR el gen bos1 asociado a resistencia de Botrytis cinerea a dicarboximidas, utilizando 5 pares de partidores específicos. Posteriormente los productos de PCR purificados fueron secuenciados por Macrogen USA Corp. El análisis de las secuencias nucleotídicas de los nueve aislados resistentes detectó un cambio aminoacídico en la posición T1259A de la proteína. En ocho de éstos fueron detectadas las mutaciones I365N y R104Q y en el aislado restante un cambio en la posición I365S y una sustitución en la posición L849V. Esta última sustitución no ha sido descrita previamente desconociéndose su implicancia en el nivel de resistencia. En ninguno de los cuatro aislados sensibles secuenciados, el gen bos1 presentó mutaciones asociadas a resistencia a dicarboximidas. / In order to evaluate the virulence and genetic characteristics to Chilean isolates Botrytis cinerea of with different sensitivity to iprodione, were selected nine highly resistant isolates (EC50: 1, 35 to 2.47 μg·mL-1) and four susceptible isolates (EC50: 0.26 to 0.31 μg·mL-1). The virulence was evaluated inoculating cucumber seedlings (Cucumis sativus L.) with three days old Botrytis cinerea mycelium and different ripe (7 °, 14 ° 17 ° Brix) Thompson Seedless grape berries (Vitis vinifera L.) with a conidial suspension (2·105 conidia·mL-1). Cucumber seedlings were kept at 20-25°C and relative humidity 100% and grape berries in growth chambers at 20°C. The evaluation was done measuring the lesion diameter after 96 and 72 hours in cucumber leaves and grape berries, respectively. The results were subjected to a simple ANOVA and in both virulence tests carried out, the sensitive and resistant Botrytis cinerea isolates showed similar levels of aggressiveness. The genetic characterization was performed by PCR amplification of the dicarboximide resistance associated Botrytis cinerea bos1 gene, by means of five specific primers. The purified PCR product was sequenced by Macrogen USA Corp. By means of sequences analysis the bos1 gene nucleotide, in all the nine resistant isolates was detected an amino acid change at the T1259A protein position. The I365N and R104Q mutations were detected in eight of the isolates and in the other isolate a change in the position I365S and a substitution at position L849V. The latter substitution has not been previously detected and it implications on resistance is unknown. The bos1 gene showed no mutations associated to the resistance to dicarboximides in any one of the four susceptible isolates sequenced.

Tesis para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo y al grado de Magíster en Ciencias Agropecuarias mención Sanidad Vegetal / El repilo del olivo, causado por el hongo Fusicladium oleagineum, es considerado la enfermedad más importante del olivo (Olea europaea) y está extendida en todas las áreas del mundo donde éste se cultiva: Cuenca del Mediterráneo, Sudáfrica, California, Sudamérica y Australia. En Chile, la superficie de olivos ha ido en aumento y se estimó en 24.000 ha para el año 2010. Esta enfermedad provoca defoliaciones prematuras que tienen como consecuencia un debilitamiento progresivo del árbol y una disminución importante de la productividad. La medida de control más utilizada es la aplicación de fungicidas, en forma preventiva, por lo tanto es importante conocer la epidemiología de la enfermedad, para lograr un adecuado control. La utilización de cultivares resistentes es otra forma de lucha contra la enfermedad, pero la información existente al respecto es contradictoria debido a que la mayoría de los trabajos se refieren a observaciones de campo. Este trabajo tuvo como objetivo conocer los períodos críticos de infección, establecer la dinámica de esporulación del hongo y evaluar la susceptibilidad de 6 cultivares de olivo Arbosana, Bossana, Coratina, Frantoio, Koroneiki y Leccino inoculados artificialmente con F. oleagineum bajo condiciones de campo. Los períodos críticos de infección se establecieron en tres huertos, en la región de Coquimbo, Metropolitana y de Valparaíso, estos fueron similares siendo los meses de otoño-invierno los más severos, con una fuerte dependencia de parámetros climáticos principalmente precipitaciones, pero además, se observó la importancia del agua libre producto de rocíos que da inicio a las infecciones. La dinámica de esporulación se estableció para dos huertos, ubicados en la región de Atacama y Metropolitana, confirmándose dos períodos de mayor esporulación, otoño y primavera, sin embargo, si las condiciones de humedad lo permiten F. oleagineum puede producir conidias durante todo el año. El estudio de susceptibilidad de 6 cultivares de olivo se llevó a cabo en un huerto de la región Metropolitana, donde se determinó que los cultivares Bossana y Coratina son susceptibles a la enfermedad y los cultivares Arbosana, Frantoio, Koroneiki y Leccino son moderadamente susceptibles. / The olive leaf spot caused by Fusicladium oleagineum (Castagne) is widespread in the Mediterranean basin and other world regions were olive trees are grown. The disease causes premature defoliation which result in a progressive weakening of the tree and a significant decrease in productivity. It is important to understand the epidemiology of the fungus to achieve adequate control of the disease. In this work the critical periods of infection were established for the Coquimbo, Valparaíso and Metropolitan regions, where the higher disease incidence occurred during the fall and winter months, with a strong dependence of climatic parameters mainly rainfall, but disease was observed to occur before the first fall rains as a result of morning dew. The sporulation dynamics of F. oleagineum in one orchard in the Atacama and one orchard in the Metropolitan Regions were also determined. Fall and spring time were confirmed as the periods with the highest sporulation. Finally, the susceptibility of 6 olive cultivars was studied in a commercial orchard located in the Metropolitan Region. Bossana and Coratina were susceptible while Arbosana, Frantoio, Koroneiki and Leccino were moderately susceptible.

Determina la capacidad antagonista de actinomicetos aislados de la rizósfera de plantaciones de papa colectadas en la localidad de Andahuaylas en la región de Apurímac, frente a cuatro hongos fitopatógenos de importancia agrícola: Fusarium sp., Lasiodiplodia sp., Rhizoctonia solani y Phytophthora infestans. Se aisla 49 cepas de actinomicetos, en su mayoría caracterizadas fenotípicamente como Streptomyces sp. El 69,4% (34) de estas cepas inhibe el crecimiento del hongo Fusarium sp., el 44,9% (22) presenta capacidad antagónica frente a Lasiodiplodia sp., el 55,1% (27) es antagonista de Rhizoctonia solani y el 46,9% (23) frente a Phytophthora infestans; mientras que el 38.8% (19) es antagonista de los cuatro hongos evaluados. Se observa que el crecimiento de los actinomicetos se ve fuertemente influenciado por las bajas temperaturas y pHs bajos. Los extractos orgánicos de la cepa AND 24 obtenidos con diclorometano y etil acetato revelan actividad antifúngica frente a Lasiodiplodia sp., mientras que el extracto butanólico muestra actividad antifúngica frente a Fusarium sp. El análisis filogenético del gen del ADNr 16S revela que el actinomiceto en cuestión es probablemente Streptomyces sampsonii. Concluye que los actinomicetos rizosféricos de la papa son excelentes productores de compuestos bioactivos capaces de inhibir notablemente el desarrollo de hongos fitopatógenos, por lo que se considera como potenciales candidatos a ser utilizados en programas de control biológico de plagas que afectan la papa. / Tesis

Memoria para optar al título profesional de: Ingeniero Agrónomo / El presente estudio se realizó con el objetivo de comprobar la patogenicidad de Verticillium albo-atrum, hongo asociado al decaimiento y muerte de plantas de kiwi dorado (Actinidia chinensis) cultivar Hort16A. Con este propósito plantas de Hort16A de un año de edad injertadas sobre Hayward (Actinidia deliciosa) se inocularon con una suspensión conidial de 106 conidias·ml -1. Al cabo de sesenta días, solamente las plantas inoculadas con V. alboatrum manifestaron síntomas de clorosis, marchitez y defoliación. Desde plantas con síntomas se recuperó en medio de cultivo Agar Agua y Agar Papa Dextrosa a V. alboatrum, identificado morfológicamente y mediante la amplificación del espacio intergénico entre los genes 18S y 28S que codifican para el RNA ribosomal del micelio del hongo. Desde tejido vegetal de plantas de kiwi dorado con síntomas se comprobó la presencia de V. albo-atrum utilizando la técnica de PCR anidado. Se realizó un estudio comparativo de la morfología y temperatura óptima de desarrollo entre V. albo-atrum y V. dahliae. Destacándose como la principal diferencia morfológica la presencia de hifas melanizadas en V. albo-atrum y la formación de microesclerocios en V. dahliae. La temperatura óptima de crecimiento para V. albo-atrum fue de 20°C y de 25°C para V. dahliae. / The objective of this study was to verify the pathogenicity of Verticillium albo-atrum, fungi associated with decline and death of gold kiwifruit (Actinidia chinensis) cultivar Hort16A. For this purpose Hort16A plants of one year old grafted on Hayward (Actinidia deliciosa) were inoculated with a suspension of 106 conidias·ml -1. After sixty days, only plants inoculated with V. albo-atrum showed symptoms of chlorosis, wilting and defoliation. The isolated fungus from symptomatic plant was recovered in water agar and potato dextrose agar medium and identified morphologically and by amplification of intergenic space between rRNA 18S and 28S coding genes of V. albo-atrum mycelium. From symptomatic plants tissue was detected the presence of V. albo-atrum using nested PCR. It was performed a comparative study of morphology and optimum temperature growth between V. albo-atrum and V. dahliae, being the main morphological difference the presence of melanized hiphae on V. albo-atrum and of microesclerotia on V. dahliae. The optimum growth temperature of V. albo-atrum and V. dahliae were 20°C and 25°C respectively.

Los hongos fitopatógenos atacan a los diferentes cultivos agrícolas, y son los principales causantes de enfermedades como la roya, mildiu, podredumbre; siendo muy destructivos por su rápido crecimiento, su reproducción explosiva y su fácil expansión. Actualmente se buscan nuevas técnicas amigables con el ambiente que puedan controlar el ataque de agentes patógenos. Una de estas técnicas innovadoras es el uso de extractos de plantas que producen componentes químicos que tienen el potencial de reducir o detener por completo el crecimiento de hongos fitopatógenos. Se evalúa el efecto antifúngico de los extractos etanólicos de las hojas de Phyllanthus niruri (“Chanca piedra”) y Minthostachys mollis (“Muña”) en cultivos in vitro de Botrytis cinerea. Las plantas fueron recolectadas en el departamento de Cusco, fueron lavadas y secadas en estufa de 45°C durante 5 horas. Luego se prepararon los extractos etanólicos que fueron filtrados, concentrados y esterilizados. El hongo Botrytis cinerea fue aislado de aguaymanto con la técnica de cámara húmeda. La evaluación del efecto etanólico se realizó en los medios de Agar Papa Dextrosa (APD) y Agar con harina de kiwicha, cada uno contenía diferentes concentraciones de extractos (0; 1; 2,5; 5; 7,5 y 10 %) y cada concentración estaba compuesta por tres pruebas con cuatro repeticiones cada una. En total se evaluó 72 placas por cada medio y se tomó cuatro mediciones del crecimiento micelial por placa cada día durante una semana. Se observó que la concentración mínima inhibitoria (CMI) para el extracto de Phyllanthus niruri en medio APD y kiwicha es 5% y 2.5% respectivamente, mientras que para el extracto de Minthostachys mollis es 5% en ambos medios. Esto puede deberse a que ambos extractos presentan similares metabolitos secundarios como alcaloides y compuestos fenólicos. Los resultados evidencian que los extractos de Phyllanthus niruri y Minthostachys mollis tienen potencial antifúngico frente a Botrytis cinerea. / Tesis