La espectroscopía de absorción transitoria ha resultado ser una
herramienta útil para investigar la formación y desaparición de estados
excitados singlete formados por aniquilación triplete-triplete, tras
sensibilización. De este modo, tras excitar selectivamente BZP a 355 nm
en presencia de NPT, se detectó mediante espectroscopía de absorción
transitoria una banda negativa centrada a 340 nm, cuya formación y
desaparición ocurría en la escala de los microsegundos. Esta banda fue
asignada como fluorescencia retardada tipo P de NPT. En el caso de
sistemas BZP/NPT quirales, se observó estereodiferenciación en las
cinéticas de los procesos fotofísicos implicados.
Se ha profundizado en el comportamiento del estado excitado
triplete de pseudopéptidos basados en naftaleno en presencia de
benzofenona y/o bifenilo, como cromóforos dadores de energía. Este
comportamiento ha sido comparado con el del compuesto modelo
DMN. En todos los casos, la absorción triplete-triplete de NPT se ha
detectado por espectroscopía de absorción transitoria, tras excitación
selectiva de benzofenona a 355 nm. Las cinéticas de desaparición y
formación de estas especies resultaron ser menores en los PSP, debido a
que son más lentos los procesos de transferencia de energía tripletetriplete y formación de exciplejos. La fluorescencia retardada detectada
en el modelo de naftaleno no fue observada en los PSP.
Se han estudiado las interacciones entre FBP y dThd unidos
covalentemente, formando diadas (S)- o (R)-FBP-dThd. En ellas, la única especie que emisora fue 1
FBP*, pero con rendimientos cuánticos y
tiempos de vida de fluorescencia menores que los del FBP libre en
disolución. Estos resultados indican una desactivación dinámica debida a
una transferencia electrónica o formación de exciplejo, donde FBP es la
especie dadora de carga. En acetonitrilo, ambos mecanismos resultaron
favorables, mientras que en dioxano predominó la formación de
exciplejo. El enantiómero (S)- presentó valores más bajos de ¿F y ¿F que
su análogo (R)- indicando que la disposición espacial de ambos
cromóforos desempeñaba un papel importante. El rendimiento cuántico
de triplete de las diadas resultó ser mayor que el esperado únicamente
a partir de los ¿CIS de 1
FBP*-dThd, siendo ¿T ((S)-) > ¿T ((R)-). Este hecho
se pudo explicar debido a una recombinación de carga del par de iones
radicales y/o exciplejos, que podrían depender de factores geométricos.
El tiempo de vida de las diadas resultó ser similar al del FBP libre,
indicando ausencia de interacción en el estado excitado triplete.
Con el propósito de estudiar las interacciones fármaco/proteína
se sintetizaron diadas conteniendo un derivado de bifenilo unido
covalentemente a triptófano. En el caso de las diadas FBP-Trp se
observó una notable desactivación de la fluorescencia, cuya emisión fue
asignada al residuo de Trp. Esta desactivación se asignó a una TESS
desde 1
FBP* a Trp que resultó ser muy rápida y estereoselectiva, con
una constante de desactivación mayor para el diastereómero (R,S)-FBPTrp. A escalas de tiempo mayores, se observó una desactivación,
también estereoselectiva, de la fluorescencia del 1
Trp* debido a una
transferencia de electrón y/o la formación de un exciplejo.
Para el caso de los sistemas BPOH-Trp, la sustitución de F por OH
en FBP produjo una disminución de la ES. La emisión en las diadas fue
asignada al residuo de BPOH, este hecho fue debido a una TESS desde el
1
Trp* al BPOH. Se observó una marcada desactivación en las diadas, que
resultó ser estereoselectiva, con kD mayor para el diastereómero (S,R)-.
La desactivación se explica por transferencia de electrón intramolecular
y/o formación de un exciplejo. El diasterómero (S,R)- presentó una
conformación plegada que justifica los valores obtenidos de ¿F y ¿F,
siendo éstos menores para la diada (S,R)- que para la (S,S)-. El tiempo de
vida de las diadas resultó inferior al de BPOH, confirmando que la
desactivación de las primeras era de naturaleza dinámica.
Por otro lado, se estudiaron las interacciones entre derivados de
bifenilo y ASH. En el caso de los sistemas FBP/ASH las cinéticas de
desaparición a ¿em = 310 nm revelaron una desactivación dinámica de
1
ASH*, tanto en la escala de picosegundos (FU) como nanosegundos
(TCSPC). El proceso de transferencia de energía desde 1
FBP* a la ASH
resultó ser estereoselectivo. Las cinéticas de desaparición a ¿em = 380
nm, donde únicamente emite la proteína, también fueron dependientes
de la configuración de FBP, aunque en menor medida. La desactivación
puede ser debida a una transferencia electrónica y/o formación de
exciplejo.
Se ha caracterizado fotofísicamente BPOH en ausencia de
proteína; el espectro de emisión de fluorescencia en medio acuoso
presentó dos bandas, una a 332 nm correspondiente a 1
BPOH* y otra a
414 nm correspondiente al 1
(BPOH-
)*. En presencia de ASH se detectó la formación de un complejo BPOH@ASH en el estado fundamental
(máximo a ca. 300 nm), cuya intensidad se veía aumentada a
concentraciones más elevadas de proteína. Tras adición de ASH se
observó una disminución de la banda de emisión del fenolato (a ¿em ca.
410 nm), confirmando la inhibición de la desprotonación en el estado
excitado dentro de la cavidad hidrofóbica de la proteína. Tras adición de
(S)-IBP, como sonda desplazante del sitio II de la ASH la banda
correspondiente al complejo BPOH@ASH disminuyó significativamente;
en cambio, reapareció la banda correspondiente al fenolato. También se
observó una gran estereodiferenciación tanto en la formación del
complejo en el estado fundamental como en la desprotonación en el
estado excitado. En el espectro de absorción transitoria del BPOH se
observó una banda centrada a 380 nm correspondiente a su estado
excitado triplete; en presencia de ASH el tiempo de vida del mismo
aumentó de 1.3 a 19 µs; en este caso no se observó
diastereodiferenciación. / Bonancía Roca, P. (2012). Especies transitorias en sistemas bioorgánicos modelo conteniendo cromóforos de tipo bifenilo, naftaleno o benzofenona [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/27553 / TESIS
| Identifer | oai:union.ndltd.org:upv.es/oai:riunet.upv.es:10251/27553 |
| Date | 07 March 2013 |
| Creators | Bonancía Roca, Paula |
| Contributors | Jiménez Molero, María Consuelo, Miranda Alonso, Miguel Ángel, Universitat Politècnica de València. Departamento de Química - Departament de Química |
| Publisher | Universitat Politècnica de València |
| Source Sets | Universitat Politècnica de València |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/acceptedVersion |
| Source | Riunet |
| Rights | http://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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