O vírus linfotrópico de células T humanas do tipo 1 (HTLV-1) é um retrovírus associado a duas manifestações clínicas principais: i) mielopatia associada ao HTLV- 1/paraparesia espástica tropical (HAM/TSP) e a ii) leucemia/linfoma de células T do adulto (ATL). Devido à ausência de tratamentos específicos e efetivos, faz-se necessário o desenvolvimento de novas drogas para o tratamento das doenças associadas ao HTLV-1. Nesse sentido, nosso objetivo foi realizar a triagem de compostos químicos para identificar indutores de apoptose e/ou bloqueadores da proliferação celular em linhagem celular infectada pelo HTLV-1 (MT-2), bem como drogas com efeito sobre a atividade de Tax viral. Inicialmente, foi estabelecido um ensaio baseado em células, o qual permitiu realizar a triagem de compostos pelo método de redução da resazurina. A partir de 26 derivados 1,2,3-triazólicos, oito compostos (hits) apresentaram atividade >= 70% por reduzirem de forma significativa a atividade metabólica da MT-2. Tais hits foram selecionados para as etapas de validação. O composto 61 foi o único a induzir uma parada na fase S do ciclo celular, enquanto os compostos 48, 49, 65 e 66 induziram a apoptose da linhagem MT-2. Na avaliação do efeito dos compostos sobre a atividade da proteína viral Tax, uma linhagem repórter com a expressão induzida de Tax foi estabelecida. Verificamos que apenas os compostos 48 e 49 foram capazes de reduzir a expressão de GFP, e consequentemente, interferir na atividade de Tax. Uma biblioteca de 707 compostos do NIH também foi avaliada neste estudo. A partir da triagem primária, 34 compostos (hits) com atividade >= 50% foram obtidos, enquanto na triagem secundária, apenas cinco hits foram confirmados. Entretanto, apenas dois destes foram selecionados para as futuras etapas de validação (dissulfiram e bromidrato de galantamina). Por fim, exceto os compostos 65 e 66, os demais hits não interferiram na viabilidade da linhagem hepática Huh-7. Os resultados deste estudo mostraram que os compostos 48, 49, 61, dissulfiram e bromidrato de galantamina deveriam ser explorados como novas abordagens terapêuticas das doenças associadas ao HTLV-1. / Human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) is a retrovirus associated with two main clinical manifestations: i) HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP) and ii) adult T cell leukemia/lymphoma (ATL). Due to the lack of a specific and an effective therapy, the development of new drugs for treatment of HTLV-1 associated diseases is urgently required. Thus, our aim was to perform a drug screening for identification of apoptosis inducers and/or cell proliferation inhibitors in a HTLV-1-infected cell line (MT-2), as well as drugs with effect on activity of viral Tax. First, it was established a cell-based assay in order to perform a drug screening by resazurin reduction method. From 26 1,2,3-triazole derivatives, eight compounds (hits) presented >= 70% of activity, since they significantly reduced the metabolic activity of MT-2. These hits were selected for the further validation steps. Compound 61 was the only one that induced an S phase cell cycle arrest, while compounds 48, 49, 65 and 66 promoted apoptosis of MT-2. In the evaluation of the effect of these compounds on activity of Tax viral protein, an inducible-tax reporter cell line was established. We verified that only compounds 48 and 49 were able to reduce GFP expression and, then, get involved on the Tax activity. A NIH library of 707 compounds was also assessed in this study. From a primary screening, 34 compounds (hits) with activity >= 50% were obtained, while in secondary screening, five hits were confirmed, of which two of them were selected for future validation steps (disulfiram and galantamine hydrobromide). Finally, except for compounds 65 and 66, other hits did not interfere in cellular viability of hepatic cell line, Huh-7. The results of this study showed that compounds 48, 49, 61, disulfiram and galantamine hydrobromide should be explored as new therapeutic approaches of HTLV-1-associated diseases.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-22112018-081731 |
| Date | 11 September 2018 |
| Creators | Santos, Daiane Fernanda dos |
| Contributors | Haddad, Simone Kashima, Júnior, Lucio Holanda Gondim de Freitas |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Tese de Doutorado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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