De grampositiva bakterierna enterokocker tillhör normalfloran i tarmen hos människor samt djur. I detta arbete studeras vancomycin-variabla enterokocker (VVE) som är vanA positiva enterokocker, känsliga för vancomycin och kan utveckla resistens in vivo. Vancomycin-resistenta enterokocker (VRE) består av två arter bakterier Entrococcus faecalis och Enterococcus faecium. VVE består av Enterococcus faecium och är svåra att detektera med odlingsbaserad diagnostik och kan därför leda till att bakterien är underdiagnostiserad, samt att den tyst kan sprida sig inom sjukhusmiljön. VVE har en förmåga att kunna övergå från vancomycin-variabla till att vara vancomycin-resistenta fenotyper. Därför undersöks i denna studie vid vilken vancomycinkoncentration (5, 4, 3, 2 mg/L) som VVE kan anrikas i buljongerna inför amplifiering med hjälp av real-time polymerase chain reaction (real-time PCR). Resultatet visade att vancomycinkoncentrationen skulle behövas sänkas till 2 mg/L, dock kan bakgrundsfloran vara för hög vid denna koncentration av antibiotika. / The Gram-positive bacteria Enterococci, belong to the normal intestinal flora in humans and in animals. In the following study, vancomycin-variable enterococci (VVE) are investigated. VVE is a vanA-positive bacteria, meaning that they are sensitive to vancomycin and can develop a resistance in vivo. Vancomycin-resistant enterococci (VRE) consists of two different species of bacteria, Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium. Furthermore, VVE consists of E. faecium and can be difficult to detect with a culture-based diagnostic andcan therefore lead to the bacterium being underdiagnosed. This in turn means that the bacteria can be quietly spread within the hospital. VVE has a unique ability, it can transition from vancomycin-variables to having vancomycin-resistant phenotypes. Therefore, this study investigates at what vancomycin concentration the VVE broths can be enriched in the broths before the qPCR. The results show that the vancomycin concentration is optimal at 2 mg/L. However, for the background flora this might be a too high concentration.

En ökad utbredning av vankomycinresistenta enterokocker (VRE) har setts i Sverige sedan 2007. Bakteriemi orsakad av VRE är mycket svårbehandlad, varför snabbare tillförlitlig resistensdiagnostik är betydelsefullt för att minska dödlighet, vårdtider, vårdkostnader och belastning på sjukvårdssystemet. På mikrobiologilaboratoriet, Region Jönköpings län (RJL), tar idag identifiering av fenotypisk vankomycinresistens vid optimala förhållanden 6 timmar, räknat från att enterokocker konstaterats växa i blodet. Resistensgenerna vanA och vanB, som bland andra orsakar vankomycinresistens hos enterokocker, kan genetiskt verifieras med loop-mediated isothermal amplification men tar idag upp till ett dygn då bakteriekolonier används som analysmaterial i arbetsrutinen på molekylärbiologilaboratoriet, RJL. Syftet med studien var att utvärdera bakteriepellet som analysmaterial för genetisk identifiering av vanA och vanB, på Genie® II Mk2 med eazyplex® VRE basic, hos enterokocker från positiva blododlingar. För att utvärdera bakteriepellet som analysmaterial analyserades isolat av Enterococcus faecium (n=17) och Enterococcus faecalis (n=5) från bakteriepellets tillverkade från simulerade positiva blododlingar med eazyplex® VRE basic på Genie® II Mk2, varpå resultaten jämfördes mot isolatens faktiska närvaro/frånvaro av vanA/vanB. Samstämmigheten av de uppmätta- och de förväntade resultaten var fullständig, vilket indikerar att bakteriepellet med hög tillförlitlighet kan användas som analysmaterial till eazyplex® VRE basic för att påvisa vanA och vanB hos enterokocker i blododlingar. / An increased prevalence of vancomycin-resistant enterococci (VRE) has been observed in Sweden since 2007. Treating bacteremia caused by VRE is difficult, which is why faster, and reliable resistance diagnostics are important. At the Microbiology laboratory, Region Jönköping County, the identification of phenotypic vancomycin resistance under optimal conditions takes 6 hours from when growth of enterococci in blood is determined. The genes vanA and vanB, which among others cause vancomycin resistance, can be genetically verified by loop-mediated isothermal amplification, but takes up to one day since bacterial colonies are used as analysis material. The aim of the study was to evaluate bacterial pellet as an analytical material for genetic identification of vanA and vanB, on Genie® II Mk2 with eazyplex® VRE basic, in enterococci from positive blood cultures. To evaluate the bacterial pellet, isolates of Enterococcus faecium (n=17) and Enterococcus faecalis (n=5) from bacterial pellets made from simulated positive blood cultures were analyzed with eazyplex® VRE basic on the Genie® II Mk2, and the results were compared to the actual presence/absence of vanA/vanB in the isolates. The complete coherence between the expected and measured results indicates that the bacterial pellet can be used as an analytical material for eazyplex® VRE basic.