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Chicken and pufferfish genomic libraries were screened with the intent of isolating PEA3 orthologues from evolutionarily removed vertebrate species. The chicken PEA3 gene was found to reside within 15 kb of genomic sequence, and approximately 2 kb of promoter sequence has been identified. Although the pufferfish PEA3 genomic sequence has yet to be completed, exons 2, 3, 4, 5, 12 and 13 have been found, and approximately 1 kb of sequence upstream of the putative start codon has been determined. In addition to the genomic sequence that was isolated, 5' RACE using pufferfish heart RNA produced a 334 bp cDNA sequence encompassing exons 2 to 5 of pufferfish PEA3. A pufferfish homologue of the human RNA helicase 1 (HRH1) gene was also found 3' of the PEA3 gene. Given that HRH1 is also found 3' of human PEA3 (E1AF) on chromosome 17q21, this finding would seem to indicate that chromosomal synteny is maintained between the human and pufferfish PEA3 loci. A four-way alignment of the mouse, human, chicken and pufferfish PEA3 promoters revealed that a region spanning from +1 to -260, relative to the transcriptional start site of mouse PEA3, is well conserved across the four promoters. Conserved transcription factor binding sites for SRY, HNF3β, NFY, AP-1, TCF, AP-2, v-myb, δEF1, and c-Ets-1 were found in three, and in some cases four of the promoters. An additional outcome of the pufferfish genomic library screen was the isolation of a pufferfish orthologue of the Ets transcription factor ERM. The relevance of these findings to the issue of transcriptional regulation of PEA3 expression is discussed. / Thesis / Master of Science (MS)

Undersökningen syftar till att ge en bild av vilka förutsättningar och möjligheter det finns för uppförande av en försorteringsanläggning där plasten i avfallet kan sorteras ut. Detta sker genom att undersöka ekonomiska besparingar genom minskat behov av utsläppsrätter, identifiera lämplig utsorteringsteknik, utreda hur avsättningen för utsorterad plast kan se ut genom att identifiera potentiella mottagare samt kostnader för avsättning och transport. Undersökningen tyder på att NIR-teknik är den mest lämpliga för en försorteringsanläggning. Med Svensk Plaståtervinning som mottagare beräknas en framtida försorteringsanläggning kunna minska mängden plast som går till förbränning med 48%. Detta motsvarar en kostnadsbesparing i utsläppsrätter på 7 670 000 kr per år med dagens utsläppsrättspriser och 9 850 000 kronor per år med estimerade värden för framtidens utsläppsrättspriser. En medförd årlig transportkostnad av den utsorterade plasten till mottagare beräknas uppgå på 632 000 kronor per år. Det finns idag ett flertal potentiella mottagare av den utsorterade plasten men ett pris för denna hantering är svårt att få och kräver vidare utredning och diskussion. Ett ungefärligt europeiskt marknadspris för hantering av utsorterad förpackningsplast är givet till cirka 250 €/ton.

Les protéines de la Famille Ets sont des facteurs de transcription qui reconnaissent par l'intermédiaire d'un domaine de liaison à l'ADN, appelé le domaine ETS, une séquence nucléotidique centrée sur un core consensus 5'-GGAA/T-3'. Le gène fev, un membre de cette famille, a été isolé chez l'humain après avoir été identifié dans une tumeur de Ewing chez l'enfant comme le résultat d'une translocation chromosomique. Une étude préliminaire de 1997 indiquait que chez l'Homme, Fev possède une expression tissulaire restreinte au petit intestin et à la prostate "adulte". Dans la première partie de ce travail, nous avons observé une surexpression de l'ARNm de ce facteur de transcription dans une large série d'adénocarcinomes prostatiques de différenciation variable en comparaison au profil d'expression observé dans un groupe témoin de prostates hyperplasiées. En recherchant des lignées cellulaires qui expriment ce facteur, nous avons mis en évidence la présence de ce messager dans la lignée humaine d'origine prostatique LNCaP. De même, les lignées humaines d'origine hématopoïétiques Dami/HEL92.1.7, K-562, KU-812 F et U-937 expriment ce facteur. Parallèlement, nous avons réalisé l'étude de l'expression de Fev dans le cerveau humain. En effet, chez le rat et chez la souris, l'homologue de Fev (mPet-1/Pet-1) est exprimé spécifiquement dans les neurones sérotoninergiques. Nous avons ainsi montré sur le cerveau humain que l'ARNm de Fev est exclusivement exprimé dans les noyaux du raphé qui contiennent les neurones sérotoninergiques. Il est co-exprimé avec deux marqueurs de ces neurones, la SERT/5-HTT et la TPH2. Parallèlement, nos travaux de caractérisation fonctionnelle de la protéine Fev ont permis de définir ce facteur comme un répresseur transcriptionnel. En effet, ce facteur possède un domaine carboxy-terminal riche en résidus alanines qui lui confère, en partie, sa fonction de répresseur de la transcription (répression active); la délétion de cette région conduisant à une réduction drastique de l'effet répresseur. Parallèlement, nous avons montré que le domaine ETS de Fev est responsable d'une activité répressive passive par l'occupation des sites de liaison aux facteurs Ets. Néanmoins, nous ne connaissons pas, à l'heure actuelle, les gènes-cibles spécifiques qui sont directement réprimés par Fev dans les cellules dans lesquelles le gène est normalement exprimé. Nous avons tenté de développer, par établissement de clones stables, des modèles cellulaires où le gène d'intérêt est surexprimé, mais ces tentatives furent infructueuses. Cet effet drastique de Fev est conféré par la partie carboxy-terminale. Il est ainsi probable que la surexpression de ce répresseur transcriptionnel spécifique de certains gènes cibles de la famille Ets provoque des effets sur la survie des cellules en régulant des gènes indispensables à la croissance cellulaire, et ainsi empêchant la prolifération de clones cellulaires.

La grande famille des facteurs de transcription Ets est caractérisée par un domaine de liaison à l’ADN, le domaine ETS, qui présente une structure de type hélice-tour-hélice ailé et qui reconnaît la séquence nucléotidique GGAA/T. Ces facteurs sont des protéines modulaires, dont les domaines sont structurellement conservés, régulent la transcription de leurs gènes cibles. L’action régulatrice de ces facteurs de transcription, ainsi que leur spécificité, dépendent de leurs sites d’expression, du taux auquel ils sont exprimés ainsi que des modifications post-traductionnelles qui les touchent. Au sein de la famille Ets, les trois membres du groupe PEA3 - Erm, Pea3 et Er81 - sont impliqués dans divers processus tant physiologiques tels que le développement des neurones sensitifs et moteurs que pathologiques tels que la croissance et l’invasion tumorale ou l’apparition de métastases, au niveau mammaire notamment. Notre travail a eu pour ambition de mieux comprendre les relations structure/fonction des membres du groupe PEA3, et plus particulièrement de Erm. Pour réaliser l’étude structurelle des trois membres du groupe PEA3, nous les avons produits, via le système d’expression baculoviral, et purifiés. Dans ces conditions, nous avons obtenu plusieurs mg de la protéine Erm purifiée à plus de 95%. Nous avons dès lors réalisé des études par dichroïsme circulaire et spectrométrie infrarouge qui ont mis en évidence une faible structuration de la protéine. Ces résultats corrèlent avec les prédictions bioinformatiques pour la structuration en hélice alpha. Néanmoins, certaines divergences sont apparues en ce qui concerne la détermination de la structuration en feuillets beta, ces derniers étant probablement surévalués dans les études expérimentales suite à une forte propension à l’agrégation protéique. En parallèle, nous avons pris part à la démonstration du fait que la protéine Erm est modifiée par ubiquitinylation. Cette modification post-traductionnelle a pour conséquence de diriger Erm vers la voie de dégradation par le protéasome et donc de rendre ce facteur de transcription très labile. C’est ainsi qu’à l’heure actuelle, les tentatives de cristallisation de la protéine sont restées sans succès. Afin de mettre en évidence les gènes régulés par les membres du groupe PEA3 dans le cancer mammaire métastatique, nous avons effectué des études par micro-array dans la lignée humaine MDA-MB-231. Lors d’expériences où l’expression de erm et de er81 a été diminuée par la technique des shRNA, nous n’avons malheureusement pas pu identifier de gènes dont l’expression était modulée de façon reproductible. Enfin, dans le but de mieux cerner les mécanismes qui conduisent à la surexpression des facteurs de transcription du groupe PEA3, nous nous sommes intéressés à la régulation de leur expression. Aussi, suite au travail initié préalablement au laboratoire sur le gène erm humain, nous avons déterminé une région de 24 nucléotides au sein du promoteur sensible à l’activation par la voie des PKCs conventionnelles (cPKCs). Cette région contient des sites putatifs de liaison pour plusieurs facteurs de transcription. Les expériences de mutagenèse dirigée et de retard sur gel indiquent que la régulation positive de erm par la voie des cPKCs semble être le résultat de la modification de l'activité d'un ou plusieurs facteur(s) transcriptionnel(s) qui reste(nt) à identifier.

The formation of the embryonic vasculature is essential for life. The components driving this process are well conserved across vertebrate species. At the core of vascular development is the specification of endothelial precursor cells from nascent mesoderm. Transcription factors of the ETS family are important regulators of endothelial specification. In this document we characterize the role of the ETS transcription factors, ETV2, during embryonic vascular development.Expression analysis shows that Etv2 is highly expressed in hematopoietic and endothelial precursor cells in the Xenopus embryo. In gain-of-function experiments, ETV2 is sufficient to activate ectopic expression of vascular endothelial markers. In addition, ETV2 activated expression of hematopoietic genes representing the myeloid but not the erythroid lineage. Loss-of-function studies indicate that ETV2 is required for expression of all endothelial markers examined. However, knockdown of ETV2 has no detectable effects on expression of either myeloid or erythroid markers. This contrasts with studies in mouse and zebrafish where ETV2 is required for development of the myeloid lineage. Our studies confirm an essential role for ETV2 in endothelial development, but also reveal important differences in hematopoietic development between organisms.Although ETV2 is a pivotal molecule in development it remains unidentified in the chicken genome. We hypothesize that chicken Etv2 is expressed in the early Gallus embryo, and is necessary for endothelial specification consistent with its role in other species. To test this hypothesis we attempted to amplify Etv2 transcripts from Gallus embryos using degenerate PCR. Disappointingly this strategy did not reveal a putative Etv2 candidate. However, some important findings were uncovered, including the cloning of a previously uncharacterized Gallus ETS protein, SPDEF. Additionally the identification of an annotation error mis-identifying Ets gene "Erf" as "Etv3" (also an Ets gene) provided details on gene arrangement previously unknown. The workflow described could be used in future studies for the identification of other members of gene families that exhibit gaps, keeping in mind the goal of the study and the limitations of each technology.

Textured surfaces are universally adopted in the steel sheet production industry, and manufacturers are continuously improving the quality of the finished products through intense research in the surface characterisation field. Deterministic Surfaces are textured with specifically designed rolls in order to present a certain degree of regularity, which allows better control over the functional behaviour of the metal sheets. The regularity of the texture impressed on the steel sheets also allows unconventional approaches to surface characterisation and to the assessment of the texture's structure. Statistical analysis is the most effective way to target the isolation of the deterministic part of the surface, which represents the desired product, from the stochastic part, called ‘noise’ and associated with the inaccuracies of production and measurement. This work addresses the problem of characterisation of deterministic textures through statistical analysis, proposing innovative filtering techniques aimed at the realisation of an On-line Process Control System. Firstly the techniques proposed are theoretically formulated and studied, addressing in particular the physical meaning of the geometrical parameters extracted through statistical analysis of highly correlated portions of the textures. A method for isolating the deterministic textures present on a surface, called the Statistical Surface Filter, is presented and discussed in detail, and tested on existing laboratory samples. Secondly the filter is applied to preliminary measurements acquired by an innovative on-line measurement system currently under development, and evidence is shown that the technique is effective in separating the information regarding the regular patterns from the stochastic noise. The possible applications to on-line Statistical Process Control are discussed. Thirdly, the Statistical Surface Filter is tested on a set of measurements representing texturing rolls and textured sheets with different characteristics; statistical analysis of the surface parameters extracted from the filtered surfaces show that the technique allows the assessment of the different contributions of the various stages of the texturing process to the final product. Finally, a software package is implemented for the practical application of the filtering techniques and the parameters extraction; the algorithms that perform the statistical filtering are described and discussed, concluding with the operations of optimisation and fine-tuning for production-line implementation.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Tato diplomová práce se zaměřuje na mezinárodní právní nástroje ochrany klimatu, zejména flexibilní mechanismy v kontextu Kjótského protokolu a Evropský systém pro obchodování s povolenkami na emise ("EU ETS"). První kapitola představuje vědecké teorie zabývající se změnou klimatu. Ve druhé kapitole je shrnut historický vývoj mezinárodní činnosti v oblasti ochrany klimatu. Ve třetí kapitole se nachází analýza principů vztahujících se k ochraně klimatu a úprava flexibilních mechanismů. Následující kapitola analyzuje ochranu klimatu v kontextu EU. Pátá kapitola detailněji analyzuje EU ETS, jeho praktické aspekty a další vývoj. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)

This Master thesis analyses the European Union Emissions Trading Scheme (EU ETS). The aim is to analyse this instrument and its achievements. Emission allowances represent a new market instrument of the European Union's policy to reduce greenhouse gas emissions in order to combat the climate change. The first part of the thesis focuses on international climate negotiations, in particular on the Kyoto Protocol, which triggered the establishment of the EU ETS. The second part focuses on the system functioning and its achievements. The third part deals with the functioning of the EU ETS in the Czech Republic.