La famille ETS comprend une trentaine de gènes codant des facteurs de transcription impliqués dans de nombreux processus physiologiques et néoplasiques. Le gène Erg (ETS Related Gene) appartient à cette famille. Il est exprimé de manière précoce et transitoire au cours du développement embryonnaire dans la mise en place du cartilage. Afin d’étudier la fonction du gène Erg, des souris transgéniques ont été établies au laboratoire. Elles expriment une protéine Erg tronquée à effet trans-dominant négatif de manière spécifique dans les chondrocytes embryonnaires. Le phénotype des souris obtenues s’apparente à un vieillissement précoce du squelette. Dans ce contexte, nous nous sommes intéressés à l’identification de nouvelles cibles des protéines Erg par l’étude transcriptomique des chondrocytes sauvages et transgéniques. Certains gènes dont l’expression est modifiée chez les souris transgéniques codent des protéines de la matrice extracellulaire du cartilage suggérant une composition anormale de la matrice chez l’embryon. Par ailleurs, la recherche de gènes-cibles des protéines Erg a permis de mettre en évidence un nouveau gène exprimé dans les structures cartilagineuses chez l’embryon. La protéine correspondante possède de nombreux résidus Gla, la rattachant ainsi à la famille des protéines dépendantes de la vitamine K (VKD). Ce gène se nomme maintenant Ucma/GRP (Upper zone of Cartilage Matrix Associated/Gla Rich Protein). Nous avons mis en évidence l’existence de quatre types de transcrits suite à l’épissage alternatif des exons 2 et/ou 4. Enfin, nos premières expériences in vitro ont montré que les protéines Erg pourraient réprimer l’expression d’Ucma/GRP. / The Ets family includes more than thirty nuclear transcription factors involved in many physiological and neoplasic processes. The Ets related Gene (Erg) belongs to this family. It is expressed during embryogenesis and involved in chondrogenesis. In order to study the Erg gene functions, a transgenic mouse model, which expressed in embryo chondrocytes a truncated Erg protein with transdominant effects, has been developed in our laboratory. These transgenic mice develop early-ageing associated phenotype.In this context, we focused on the identification of new targets of the Erg protein in embryo chondrocytes using the transcriptomic screening approach. We found out a set of modulated genes, most of which encode extracellular matrix proteins. This suggests a disturbed composition of the extracellular matrix during embryogenesis.Moreover, the research of the Erg target genes highlights a new gene expressed in mouse embryo cartilaginous structure. This gene named Ucma/GRP (Upper zone of cartilage matrix associated/Gla Rich Protein). The encoded proteins contain many Gla residues and therefore belong to the vitamin K-dependent (VKD) protein family. Further research works led us to identify four new alternatively spliced transcript variants of Ucma/GRP in mouse chondrocytes. Finally, our preliminary results of Ucma/GRP promoter regulation showed that Erg protein represses Ucma/GRP expression.

L’expression d’un gène donné est généralement le résultat de la dualité qui existe entre l’activation et la répression transcriptionnelle de ce gène. Au laboratoire, nous tentons de mieux comprendre la régulation de la transcription génique, et c’est dans ce cadre que nous étudions certaines protéines qui appartiennent à la famille de facteurs de transcription Ets. Ces derniers sont caractérisés par un domaine de liaison à l’ADN hautement conservé, le domaine ETS, qui se lie sur les promoteurs de leurs gènes cibles au niveau de sites comportant le motif central 5’- GGAA/T -3’. Certaines de ces protéines ont été montrées comme étant impliquées dans des processus du développement normal et cancéreux. Dans la première partie de ce travail, nous avons étudié le facteur transcriptionnel Fev dont l’expression est restreinte au noyau du raphé dans le cerveau, à la prostate et à l’intestin grêle. Nous avons participé à la caractérisation fonctionnelle de ce facteur permettant de le définir comme répresseur transcriptionnel. Plus particulièrement, nous avons identifié la partie carboxy-terminale riche en résidus alanine comme étant impliquée dans la répression. Afin de mieux comprendre le mécanisme moléculaire qui régit la répression induite par Fev, nous avons tenté d’identifier les partenaires protéiques impliqués dans ce processus transcriptionnel. Dans un premier temps, nous avons montré que Fev interagit physiquement avec les co-répresseurs transcriptionnels à activité histone désacétylase HDAC1 et HDAC3. Aussi, nous proposons de définir le rôle biologique de cette interaction. Par la suite, nous avons utilisé le système de criblage de banques par « double hybride en levures ». En utilisant comme appât soit Fev, soit sa partie carboxy-terminale, nous avons isolé plusieurs candidats interacteurs, dont la protéine DP103 qui est impliquée dans la régulation transcriptionnelle induite par d’autres facteurs de transcription de la famille Ets. Après avoir montré par co-immunoprécipitation que Fev interagit avec DP103, nous tentons de mettre en évidence la fonctionnalité de cette interaction. Dans la seconde partie de ce travail, nous avons étudié Erm, un activateur transcriptionnel de la famille Ets, qui est exprimé dans certains types de tumeurs, telles que les cancers mammaires métastatiques, et qui y régule l’expression de métalloprotéases. Ce facteur joue aussi un rôle régulateur dans les lymphocytes CD4+ T helper de type 1 (Th1) via l’interleukine-12. Néanmoins, les cibles ainsi que le rôle de Erm ne sont pas encore clairement identifiés dans les lymphocytes. Dans cette partie du travail, nous avons initié une étude sur les voies de signalisation impliquées dans la régulation transcriptionnelle de Erm. Nous avons montré que dans la lignée cellulaire Molt4 d’origine lymphoblastique ce facteur de transcription est la cible de la cascade de signalisation impliquant la famille des protéines kinases C (PKC). Grâce à l’utilisation d’inhibiteurs spécifiques des différentes sous-familles des PKC, nous avons montré que la transcription de Erm est régulée par les PKC conventionnelles. Aussi, après avoir isolé un fragment de 0,5 Kpb du promoteur de Erm, en amont de l’exon 1a, nous avons identifié une région régulatrice qui est activée par la voie des PKC. Ainsi, les approches que nous avons développées dans ce travail nous ont permis de progresser dans la caractérisation des facteurs de transcription Fev et Erm.

Since the EU-ETS was placed at the centre of EU climate governance in 2003,its influence has not been restricted to environmental policy but has spread to theeconomic and political domains. But its implementation remains blocked even after the EU revised it by the Climate and Energy Package (CEP). The larger problem is, the ‘East-West’ split toward the revised EU-ETS triggered by the ambitious but ‘missions complicated’ CEP and diffused to energy governance, which put EU's climate governance into the deadlock (Wettestad, 2014). Skjærseth and Wettestad (2009, 2010) argued that the revised EU-ETS could be the result of the changing MS’ preferences, but they did not unpack these preferences formulated during the EU-ETS implementation. This thesis fills the gap by reinvestigating the EU-ETS implementation to identify what the domestic contextual factors are and how they affect and reshape MS’ preferences to the EU-ETS. By applying the five stage policy-making cycle andthe multilevel governance (MLG) in this study, it is concluded that the difficulty offixing the EU-ETS is not merely limited to the revised climate governance structure, but also the need to reconcile MS’ energy-economic structures and coordinate with their climate and energy policy. To solve the MS’ problem of ‘asymmetrical energy-economic interests’, it is vital for the EU to improve the cross-level reconciliation between the EU-ETS and national energy policies and to increase the coordination between policy instruments when reforming the EU’s climate governance structure. The EU-ETS development encourages both national and EU’s climate governance structures to fall in line with MLG concepts (flexible design and more jurisdictional levels involved in the policy network). Therefore, it has become the turning point of European integration, by which the traditional dichotomy between ‘top-down’ and ‘bottom-up’ integration starts transitioning to the ‘two-way reconciliation.’

Background: Environmental tobacco smoke (ETS) is a combination of the smoke exhaled by smokers and the smoke burning from a cigarette, cigar or pipe that is not being inhaled. It contains over 4000 chemicals many of them being known carcinogens and toxins. The recently-identified hazards of ETS have resulted in the implementation of new legislation to protect non-smokers’ health in jurisdictions worldwide. Purpose: This study tests the hypothesis that legislation eliminating ETS from all enclosed public places improves the health of hospitality workers. Methods: This is a descriptive, case-series study, which investigates tobacco smoke exposure in non-smoking hospitality workers in Canada and Italy. Data was obtained by testing workers for levels of carbon monoxide before and immediately after working in venues where smoking was permitted and was not permitted. Workers also provided information on respiratory and sensory irritation symptoms. Conclusion: Legislation eliminating ETS improves the health of hospitality industry workers. / May 2007

Background: Environmental tobacco smoke (ETS) is a combination of the smoke exhaled by smokers and the smoke burning from a cigarette, cigar or pipe that is not being inhaled. It contains over 4000 chemicals many of them being known carcinogens and toxins. The recently-identified hazards of ETS have resulted in the implementation of new legislation to protect non-smokers’ health in jurisdictions worldwide. Purpose: This study tests the hypothesis that legislation eliminating ETS from all enclosed public places improves the health of hospitality workers. Methods: This is a descriptive, case-series study, which investigates tobacco smoke exposure in non-smoking hospitality workers in Canada and Italy. Data was obtained by testing workers for levels of carbon monoxide before and immediately after working in venues where smoking was permitted and was not permitted. Workers also provided information on respiratory and sensory irritation symptoms. Conclusion: Legislation eliminating ETS improves the health of hospitality industry workers.

Background: Environmental tobacco smoke (ETS) is a combination of the smoke exhaled by smokers and the smoke burning from a cigarette, cigar or pipe that is not being inhaled. It contains over 4000 chemicals many of them being known carcinogens and toxins. The recently-identified hazards of ETS have resulted in the implementation of new legislation to protect non-smokers’ health in jurisdictions worldwide. Purpose: This study tests the hypothesis that legislation eliminating ETS from all enclosed public places improves the health of hospitality workers. Methods: This is a descriptive, case-series study, which investigates tobacco smoke exposure in non-smoking hospitality workers in Canada and Italy. Data was obtained by testing workers for levels of carbon monoxide before and immediately after working in venues where smoking was permitted and was not permitted. Workers also provided information on respiratory and sensory irritation symptoms. Conclusion: Legislation eliminating ETS improves the health of hospitality industry workers.

ERM est un facteur de transcription de la famille ETS appartenant au groupe PEA3 qui joue un rôle important dans divers processus biologiques dont la tumorigenèse mammaire. La régulation de son activité transcriptionnelle nécessite des modifications post-traductionnelles et des interactions avec des partenaires. Nous avons mis au point différentes techniques de chromatographie d’affinité dans le but d’identifier de nouveaux partenaires d’ERM. Parmi ceux-ci, trois ont été confirmés comme partenaires directs d’ERM : la protéine CoAA (CoActivator Activator) et les protéines MED23 et MED25. MED23 et MED25 sont des sous-unités du médiateur, complexe qui régule la transcription en intégrant les signaux entre des facteurs de transcription et la machinerie transcriptionnelle. Nous avons démontré que ces protéines interagissent in vitro et in vivo avec ERM et sont nécessaires à l’activation transcriptionnelle induite par ce facteur de transcription. Toutefois, ces sous-unités ont une capacité différente de recrutement du médiateur sur ERM in vitro.La ribonucléoprotéine CoAA régule l’expression de certains gènes et l’épissage alternatif des ARN messagers. CoAA interagit in vitro et in vivo avec ERM. L’activité d’ERM est augmentée par la surexpression de CoAA tandis qu’elle est diminuée par sa sous-expression. Cette activation médiée par CoAA est liée à une modulation du taux de sumoylation d’ERM. Ces travaux ont permis de définir de nouvelles voies de régulation de l’activité transcriptionnelle d’ERM et des autres membres du groupe PEA3. Il reste maintenant à préciser les mécanismes impliqués dans la modulation de l’activité des membres du groupe PEA3 par ces nouveaux interacteurs. / ERM is an ETS transcription factor which belongs to the PEA3 group and is involved in several processes such as migration and dissemination during organogenesis and cancer development. Regulation of its transcriptional activity requires post-translational modifications and interactions with partner proteins. In order to identify new ERM partners, we have developed various affinity chromatography techniques to isolate new potential partners. Among these candidates, CoAA (CoActivator Activator), MED23 and MED25 directly interact with ERM.MED23 and MED25 are subunits of the mediator. The mediator is a 30 sub-units multi-protein complex which mediates signals from transcription factors bound at upstream promoter elements or enhancers to RNA polymerase II and the general initiation factors bound at the core promoter. We found that MED23 and MED25 interact with ERM in vitro and in vivo and are required for transcriptional activation induced by ERM. However, these sub-units display various ability to recruit the mediator on ERM in vitro. The heterogeneous nuclear ribonucleoprotein-like protein CoAA regulates gene expression and RNA splicing. We demonstrated that ERM interacts in vitro and in vivo with CoAA. ERM transcriptional activity is enhanced upon CoAA overexpression and is decreased by CoAA knock-down. We demonstrated that CoAA modulates ERM transcriptional activity by decreasing sumoylated ERM levels. This work demonstrated new ways to regulate the activity of ERM and the two other PEA3 group members. The molecular mechanisms involved in the modulation of PEA3 member activity by these partners remain to be clarified.

TSG101 is a tumor susceptibility gene, which exhibits many biological functions including the regulation of transcription, cell growth and differentation, protein trafficking and receptor recycling. Recent studies have revealed overexpression of TSG101 in human cancers of papillary thyroid carcinoma and breast cancer, whereas downregulation in the periphery of cancer tissue. These data indicated that the amount of TSG101 gene products might be relevant to tumor formation. Understanding the detail regulation of TSG101 gene expression might advance our knowledge on the processes of neoplastic conversion. In this regard, our lab have cloned and characterized upstream sequence of TSG101 transcription start site, and defined the region of -1~-436 as proximal promoter by luciferase reporter assay. Sequence analysis of this region using NSITE program on Softberry web site has revealed several transcription factor binding sites including MAZ, Sp1, ETF and ETS-1. Using EMSA and luciferase assay, we have demonstrated MAZ and Sp1 as major transcription factors regulate TSG101 proximal promoter. In this thesis, we advance our study to further explore the role of ETF and ETS-1 sites in regulation TSG101 promoter. We first cloned the region encompassing two ETS-1 sites in ¡V190~-1 region into pGL3-basic( -190/pGL3-basic ). The luciferase reporter assay of wildtype and mutant ¡V190/pGL3-basic plasmids further demonstrated important role of these ETS-1 sites. To explore detail contribution of the above mentioned transcription factor binding sites in regulation TSG101 promotor, we have made mutant reporter constructs containing different assortment of mutations in these binding sites, and assayed the effect of mutant on TSG101 promoter activity. The results showed that in cancer cell lines (COS-1, ARO and WRO) tested, Sp1, ETF, and ETS-1 binding sites are essential and they act co-operatively in regulating the activity of TSG101 proximal promoter. The results also indicated that Sp1 and ETS-1 were positive regulators, while ETF worked as a negative regulator.

Le gène B4GALNT2 code l’enzyme β1,4-N-acétylgalactosaminyltransférase II qui contrôle l’expression de l’antigène glucidique de groupe sanguin Sda (GalNAcβ1,4[Neu5Acα2-3]Galβ1-4GlcNAc-R). Cet antigène glucidique est aussi détecté dans les tissus humains, principalement dans le tractus gastro-intestinal. Il est exprimé dans le côlon sain et tend à disparaître dans le côlon cancéreux, alors que l’antigène sLex (Neu5Acα2-3Galβ1-4[Fucα1-3]GlcNAc-R) normalement absent dans le côlon sain apparaît dans les cellules cancéreuses coliques. Cependant les mécanismes moléculaires permettant l’expression de l’antigène tumoral sLex au dépend de l’antigène Sda restent inconnus. Le gène B4GALNT2 gouverne l’expression de différents transcrits résultant de l’utilisation de deux sites d’initiation de la transcription différents localisés à 200 pb l’un de l’autre. L’utilisation alternative de deux premiers exons (E1s et E1L) conduit à la production de deux types de transcrits majoritaires, l’un court, l’autre long. Pour comprendre les mécanismes transcriptionnels qui régulent l’expression du gène B4GALNT2 dans le côlon, nous avons établi le profil d’expression du gène B4GALNT2 dans différentes lignées cellulaires et différents tissus humains par Q-PCR et nous avons entrepris une identification des régions génomiques régulatrices essentielles du gène B4GALNT2. La quantification relative de chaque type de transcrit indique que le transcrit court est le transcrit majoritairement exprimé dans les cellules coliques, dans le côlon et l’estomac dont l’expression diminue fortement dans le côlon cancéreux. Nous avons délimité une région minimale promotrice en transfectant transitoirement des constructions contenant différentes régions génomiques en amont du gène rapporteur de la luciférase, dans différentes lignées cellulaires, coliques saines ou non et gastriques. Des expériences de retard sur gel nous ont permis de mettre en évidence des complexes protéines-acide nucléique. Des sites de fixation potentiels pour des facteurs de transcription ont été déterminés par des analyses bioinformatiques de la région promotrice basale. La mutation de ces sites par mutagénèse dirigée nous a permis de déterminer l’implication de ces facteurs de transcription dans la régulation du gène B4GALNT2. Enfin, la fixation in cellulo de ces facteurs de transcription au niveau de la région promotrice minimale du gène B4GALNT2 a été confirmée par immunoprécipitation de la chromatine. Nos résultats suggèrent que le transcrit court du gène B4GALNT2 humain soit majoritairement exprimé dans le colon sain est régulé par un ensemble de facteurs de transcription tels que Ets-1, DMP1 ou Sp1. / The B4GALNT2 gene encodes the β1,4-N-acetylgalactosaminyltransferase II enzyme that controls expression of the histo blood group antigen Sda (GalNAcβ1,4[Neu5Acα2-3]Galβ1-4GlcNAc-R). This carbohydrate antigen is detected in human tissues primarily in the gastrointestinal tract. It is expressed in healthy colon and tends to disappear in colon cancer, whereas the sLex antigen (Neu5Acα2-3Galβ1-4[Fucα1-3]GlcNAc-R) normally absent in healthy colon appears in colic cancer cells. However, molecular mechanisms underpinning expression of sLex tumor antigen at the expense of Sda antigen remain largely unknown. The B4GALNT2 gene drives the expression of several transcripts with alternative first exon named E1S (Short) and E1L (Long) arising from the use of two different transcriptional start sites located 200 bp apart from each other. To understand the transcriptional mechanisms that govern B4GALNT2 gene expression in colon, we have established the B4GALNT2 transcript expression profile in various cell lines and tissues using Q-PCR and we have undertaken an identification of essential regulatory genomic regions of the B4GALNT2 gene. The relative quantification of each transcript indicated that the short transcript variant of B4GALNT2 is the major transcript expressed in colic cells, and in colon and stomach, and is dramatically reduced in cancer colon. We report on the delineation of a minimal promoter region using transient cell expression of genomic deletion constructs harboring the luciferase reporter gene in healthy colic (or not) and gastriccell lines. Electrophoretic Mobility Shift Assay experiences allowed us to highlight protein-nucleic acid interactions in this minimal promoter region. Transcription factor binding sites were determined by bioinformatics analysis of the minimal promoter region. Mutation of these sites by directed mutagenesis allowed us to determine their implication in the regulation of the B4GALNT2 gene. Finally, in cellulo fixation of these transcription factors to the minimal promoter region of the B4GALNT2 gene was confirmed by chromatin immunoprecipitation. Our data further suggest that the short B4GALNT2 transcript is predominantly expressed in healthy colon and is regulated by a combination of various transcription factors such as Ets-1, DMP1 or Sp1.

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