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Análise da expressão do TNF-α, β-Defensinas 2 e 3 e proteína p16 na mucosa anal de pacientes infectados pelo Papilomavírus humanoNUNES, Maria Julliana Galvão 03 March 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-03-03 / FACEPE / A incidência de carcinoma anal e lesões precursoras relacionadas tem aumentado no mundo, em homens e mulheres e a infecção persistente pelo Papilomavírus humano (HPV) desempenha um papel fundamental na carcinogênese anal. Os fatores de risco para o desenvolvimento de câncer anal incluem intercurso anal, múltiplos parceiros e infecção cervical pelo HPV. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a infecção simultânea pelo HPV na mucosa cervical e anal e elucidar a associação entre a expressão local da proteína p16, β-defensina-2 e 3 e TNF-α (fator de necrose tumoral alfa) na mucosa anal e o grau de lesões anais associadas ao HPV. O grupo de estudo foi constituído por mulheres sexualmente ativas, com idade entre 18 e 60 anos. A coleta de células foi realizada a partir da mucosa cervical e anal com escova ginecológica, seguida de exame de colposcopia e anuscopia. O DNA foi extraído de amostras de células anais e cervicais e a PCR convencional foi realizada para detectar presença de HPV (tipos: 6, 16, 18, 31 e 33). A PCR em tempo real foi realizada utilizando primers específicos para a β-defensina 2, 3 e TNF-α. Os fragmentos de biopsia foram submetidos a coloração hematoxilina-eosina de rotina para a avaliação histológica e reação imunohistoquímica utilizando anticorpo anti-p16. Neste estudo, a positividade para p16 foi associada ao grupo com neoplasia, estatisticamente significativo (p = 0,0002) e padrão contínuo foi predominante. Cerca de 75% dos pacientes com neoplasia foram positivos para HPV e p16. Verificou-se alta taxa de infecção por HPV nas mucosas anal (70,52%), cervical (74,73%) e infecção simultânea cervical e anal (54,73%). A infecção simultânea (mucosa anal e cervical) pelo mesmo tipo de HPV foi observada em 17,30% dos pacientes. Entre os tipos de HPV identificados, o genótipo predominante nas amostras anal e cervical foi HPV6 (26,38%) e (19,71%), respectivamente. Nossos resultados também mostraram uma diminuição da expressão de TNF-α em lesões anais de alto grau em comparação com o normal HPV-positivo (p <0,0001), enquanto que os níveis de expressão de β-defensina 3 aumentaram em pacientes de alto grau (p = 0,0009). A aquisição de infecção simultânea anal e cervical pode ocorrer por diferentes meios, mostrando que o canal anal é uma fonte de infecção. / The incidence of anal carcinoma and related precursor lesions have been increasing worldwide for both men and women. The human papillomaviruses (HPVs) play a fundamental role in anal carcinogenesis, through persistent infection. Women with cervical cancer and history anal intercourse have an increased risk of anal cancer. The aim of this study was to evaluate simultaneous HPV infection in cervical and anal mucosa and to elucidate the association between p16 protein, β-defensin-2, 3 and TNF-α (tumor necrosis factor alpha) expression local in the anal mucosa and the degree of HPV-associated anal lesions. Study group was composed of sexually active immunocompetent women. Cells collection was performed from cervical and anal mucosa with a brush, followed by anuscopy and colposcopy exam. DNA was extracted from anal and cervical cell samples and PCR was performed to detect HPV presence (types: 6, 16, 18, 31 and 33). Real-time PCR was performed using specific primers to β-defensin 2, 3 and TNF-α. Biopsy fragments were subjected to routine hematoxylin-eosin staining for the histological assessment and immunohistochemistry reaction using anti-p16 antibody. In our study, positivity for p16 was frequently associated with group with neoplasia, statistically significant (P = 0.0002) and continuous pattern was predominant. About 75% of patients with neoplasia were positive for HPV and p16. A high rate of HPV infection in anal (70.52%), cervical (74.73%) and simultaneous cervical and anal mucosa (54.73%) was found. Simultaneous infection (anal and cervical mucosa) by the same type HPV was observed in 17.30% of the patients. Among all HPV types identified, the predominant genotype in anal and cervical samples was HPV6 (26.38%) and (19.71%), respectively. Our findings also showed a decreased TNF-α expression in high-grade anal lesion compared to normal HPV-positive (p < 0.0001), whereas expression levels of β-defensin 3 were increased in high-grade patients (p = 0.0009). The acquisition of simultaneous infection anal and cervical may occur by different means, showing that the anal canal is also a source of infection.
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Estudo comparativo entre os exames de citologia esfoliativa convencional e em base líquida para o rastreamento de lesões intraepiteliais anais associadas à infecção pelo papilomavírus humano em pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana / Comparative study between conventional and liquid-based cytology in the screening of anal squamous intraepithelial lesions associated with human papillomavirus infection in HIV-positive patientsMaia, Livia Bravo 17 July 2013 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-10-22T12:24:32Z
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2013_LiviaBravoMaia.pdf: 3004337 bytes, checksum: 90f9a4183246f2afa79632bb98b45c41 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-10-22T12:34:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1
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2013_LiviaBravoMaia.pdf: 3004337 bytes, checksum: 90f9a4183246f2afa79632bb98b45c41 (MD5) / INTRODUÇÃO: O carcinoma escamoso anal tem um papel importante na morbi-mortalidade em pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Similarmente ao câncer cervical, as neoplasias intraepiteliais anais tem forte associação com a infecção pelo papillomavírus humano (HPV), além de ser passível de ser rastreado pelos métodos citológicos. A citolologia esfoliativa convencional (CC) é de fácil execução, não agressiva e de baixo custo operacional. A citologia em base líquida (CBL) é uma técnica citológica que vem sendo utilizada por oferecer leituras mais purificadas, embora seja mais dispendiosa. São poucos os estudos que comprovem a eficácia do rastreamento do câncer anal, porém, tal prática vem sendo discutida e incentivada nos grupos considerados de risco ao desenvolvimento das neoplasias intraepiteliais anais. OBJETIVO: Avaliar a concordância das citologias esfoliativas convencional e meio líquido no rastreamento nas lesões precursoras do câncer do canal anal e comparar os achados dos padrões anuscópicos, histopatológicos e de genotipagem associados aos métodos de citologia. MÉTODOS: Estudo comparativo em pacientes de ambos os sexos, maiores de 18 anos e infectados pelo HIV. Todos os pacientes foram submetidos a exame clínico com toque retal, seguido da anuscopia de alta
resolução e biopsia das lesões suspeitas. Foram obedecidos os critérios de Bethesda para classificação das lesões citológicas. Foram calculados os índices de concordância entre os métodos citológicos e sua correlação com os achados dos demais exames de rastreamento. RESULTADOS: Nas CC as amostras demonstraram os seguintes diagnósticos: 54,5% negativos, 12,1% ASC-US, 18,1% LSIL e 15,1% HSIL. Pelo método CBL as amostras demostraram os seguintes diagnósticos: 54,5% de negativos, 9,0% de ASC-US, 3,0% de ASC-H, 30,0% de LSIL, 3,0% de HSIL. A concordância diagnóstica entre os dois métodos utilizados apresentou significância estatística (p < 0,05) com teste Kappa de 0,8778 (quase perfeita) e intervalo de confiança de 95% (0,7136 a 1,000). Do total de 33 casos, 28 foram concordantes. Dos 18 casos de CC e CBL negativos, em 15 (15/18) a anuscopia foi igualmente negativa. Assim, observa-se que capacidade do teste CC identificar corretamente aqueles pacientes com biópsia positiva foi de 75,0%, com intervalo de confiança de 95% variando de 34,9% a 96,8% e, para CBL, 85,7%, com intervalo 95% de confiança variando de 34,9% a 96,8%. Quanto à
genotipagem, os diagnósticos de LSIL na CC e CBL foram os que apresentaram maior positividade para os diversos subtipos do HPV. Os mais comuns do subtipo de alto risco na CC foram o 16 e o 68 e, na CBL, o 16, 18 e 68 e os de baixo risco mais comuns foram os subtipos 44/55 para ambos os métodos. Foi observada significância estatística quando associado múltiplas infecções para HPV com os achados histopatológicos. CONCLUSÃO: Concluímos que a citologia esfoliativa convencional e a em base líquida demonstraram ser igualmente eficazes, podendo ser utilizadas no auxílio do rastreamento das lesões precursoras do câncer anal. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / INTRODUCTION: The anal squamous carcinoma plays an important role in morbidity and
mortality of HIV-positive patients. Similar to cervical cancer, anal intraepithelial neoplasia is strongly associated with HPV infection and can be diagnosed by cytological methods as well. The conventional cytology (CC) is easy to perform, non-aggressive and a low cost test. The liquid-based cytology (LBC) is a technique that has been used for offering more clear samples results, although it is more expensive. There are few studies that prove the effectiveness of screening for anal cancer, however, this practice has been discussed and encouraged in groups considered at risk for anal cancer. OBJECTIVE: To evaluate the agreement of conventional and liquid-based cytology in the screening of anal squamous intraepithelial lesions and
compare the anuscopic results, histopathological and genotyping with both methods of cytology. METHODS: Comparative study of patients, more than 18 years old, infected by HIV. All patients were underwent clinical examination with digital rectal examination, followed by high-resolution anuscopy and biopsy of suspicious lesions. We used Bethesda criteria for classification of cytological lesions. The concordance between cytological
methods was calculated and analyzed their relation with the findings of other screening tests. RESULTS: The CC samples had the following diagnoses: 54.5% negative, 12.1% of ASC-US, 18.1% of LSIL and 15.1% of HSIL. The LBC samples had the following diagnoses: 54.5% negative, 9.0% of ASC-US, 3.0% of ASC-H, 30.0% of LSIL, 3.0% HSIL. The diagnostic agreement between the two methods was statistically significant (p <0.05) with Kappa test 0.8778 (almost perfect) and confidence interval of 95% (0.7136 to 1.000). Of total
33 cases, 28 were concordant. Of Eighteen negative cases of LBC and CC, in 15 (15/18) the anoscopy was equally negative. Thus, we observe that CC can correctly identify those patients with positive biopsy in 75.0%, with a confidence interval of 95% ranging from 34.9% to 96.8%, and LBC, 85.7 %, with 95% confidence interval ranging from 34.9% to 96.8%. In the molecular biology, the LSIL diagnostic in the CC and LBC had higher positivity for the various subtypes of HPV. The most common high-risk subtype in the CC were 16 and 68, and
in the LBC, 16, 18 and 68 and the most common low-risk subtypes were 44/55 for both methods. Statistical significance was observed when combined with multiple HPV infections with histopathologic findings. CONCLUSION: We conclude that conventional and liquid-based cytology shown to be equally effective and can be used both as screening for preneoplastic anal lesions.
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