Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:03:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andréa F. Grava.pdf: 2269814 bytes, checksum: 93a2229b90f5c8d077e8753c3fe82db6 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:04:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andréa F. Grava.pdf: 2269814 bytes, checksum: 93a2229b90f5c8d077e8753c3fe82db6 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:04:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andréa F. Grava.pdf: 2269814 bytes, checksum: 93a2229b90f5c8d077e8753c3fe82db6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T13:04:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andréa F. Grava.pdf: 2269814 bytes, checksum: 93a2229b90f5c8d077e8753c3fe82db6 (MD5) Previous issue date: 2014-12-11 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Malaria is a parasitic disease with the highest number of hospitalizations and deaths each year worldwide, one of the major public health problems in Africa, South America and East Asia. According to estimates by the World Health Organization, 198 million people became ill in 2014. This evidence led to the development of new strategies for the treatment of malaria in order to minimize the growing problem of parasite resistance to commonly used medicinal products. With the elucidation of metabolic pathways essential for some of the malaria parasite development, new molecular targets have been proposed for the development of new drugs, among which can be cited Hypoxanthine Guanine Phosphoribosyltransferase (HGPRT) Chorismate synthase, enoyl-ACP reductase and purine nucleoside phosphorylase (PNP). Objective: The objective of this study was the identification of compounds as potential inhibitors of beta-ketoacyl-ACP reductase enzyme - OAR Plasmodium falciparum. Results: The 28kDa enzyme was expressed in Escherichia coli and purified by affinity chromatography. Searches of new molecules through Sceenning by Virtual Docking were able to find 30 molecules of which was selected Skyrin molecule due to its higher affinity for the enzyme OAR. Analysis of enzyme activity by spectrophotometry using NADPH and acetoacetyl-CoA substrates the enzyme showed activity OAR reducing NADPH in the various substrates concentrations, and was shown to be inhibited by Skyrin. It was also possible to show by surface plasmon resonance (SPR) Skyrin that the molecule binds to the enzyme OAR but dissociates easily.In tests using cell cultures infected with P. falciparum this molecule showed antimalarial activity with IC50 8,88μg / ml, and is not toxic to HepG2 cell line. Conclusion:This new approach has significant advantages compared to traditional methods, since it establishes in advance the specific bioactive and its mechanism of action. Ideal targets for the development of antimalarial drugs against infectious agents must be essential to the survival of the pathogen and the host is absent. / A Malária é a doença parasitária com maior número de internações e mortes por ano em todo o mundo, sendo um dos maiores problemas de saúde pública na África, América do Sul e Ásia Oriental. Segundo estimativas da Organização Mundial de Saúde, 198 milhões de pessoas ficaram doentes em 2014. Essas evidências levaram ao desenvolvimento de novas estratégias para o tratamento da malária a fim de minimizar o crescente problema da resistência do parasita aos medicamentos de uso corrente. Com a elucidação de algumas Vias Metabólicas essenciais para do desenvolvimento do parasita da malária, novos alvos moleculares foram propostos para o desenvolvimento de novas drogas, entre eles pode-se citar a Hipoxantina Guanina Fosforribosiltransferase (HGPRT), Corismato sintase, Enoil –ACP redutase e a Fosforilase de nucleosídeos purínicos (PNP). Objetivo: O objetivo desse estudo foi a identificação de compostos como possíveis inibidores contra a enzima Beta-cetoacil- ACP- redutase - OAR de Plasmodium falciparum. Resultados: A enzima de 28kDa, foi expressa em Escherichia coli e purificada através de cromatografia de afinidade. Buscas de novas moléculas através de Sceenning Virtual por Docking foram capazes de encontrar 30 moléculas das quais foi selecionada a molécula Skyrin por apresentar maior afinidade pela enzima OAR. Análise da atividade enzimática por espectrofotometria utilizando os substratos NADPH e Acetoacetil-COA a enzima OAR apresentou atividade reduzindo NADPH, em concentrações dos substratos variadas, e mostrou ser inibida por Skyrin. Foi possível mostrar também por Ressonância Plasmônica de Superfície (SPR) que a Skyrin liga-se à enzima OAR porém dissocia-se facilmente. Em testes utilizando-se culturas celulares infectadas com P. falciparum essa molécula apresentou atividade antimalárica com IC50 de 8,88μg/mL, não sendo tóxica para a linhagem celular HepG2. Conclusão: Esta nova abordagem apresenta vantagens significativas quando comparada aos métodos tradicionais, uma vez que se estabelece antecipadamente a especificidade do bioativo e respectivo mecanismo de ação. Alvos ideais para o desenvolvimento de fármacos contra agentes infecciosos antimaláricos devem ser essencial para a sobrevivência do patógeno e estar ausente no hospedeiro.

Os peixes além de suas qualidades nutricionais podem também ser considerados como um dos mais significantes indicadores em sistemas aquáticos para a estimativa de níveis de poluição por metais tóxicos, porque eles bioacumulam esses metais, ocupam diferentes níveis tróficos e são de tamanhos e idades diferentes. Esse estudo pretendeu contribuir com dados importantes para o conhecimento dos constituintes nutricionais e tóxicos em músculos de pescados mais consumidos em duas regiões costeiras, Cananéia e Cubatão. De Cananéia, as espécies mais consumidas foram Micropogonias furnieri (Corvina), Macrodon ancylodon (Pescada), Centropomus undecimalis (Robalo Peba) e Mugil platanus (Tainha). De Cubatão, Micropogonias furnieri (Corvina), Macrodon ancylodon (Pescada), Menticirrhus americanus (Perna de moça), Sardella braziliensis (Sardinha) e Mugil liza (Tainha). Para a realização desse estudo foram desenvolvidas e validadas quanto à precisão e exatidão, metodologias analíticas por meio da análise de materiais de referências certificados. A determinação dos micronutrientes (Ca, Fe, K, Na, Se e Zn) e alguns elementos traço (As, Br, Co, Cr, Rb, etc) em pescados, foi feita por meio da técnica de Ativação Neutrônica (AAN). Utilizou-se a Espectrometria de Absorção Atômica com Geração de Vapor Frio (CVAAS) para a determinação de Hg e com atomização eletrotérmica (ETAAS), para os elementos Cd e Pb. Para essas amostras ainda foram realizadas Análise de Composição Centesimal de acordo com metodologias preconizadas pela AOAC e de Ácidos Graxos, por cromatografia gasosa. Com relação aos ácidos graxos da família -6, a Tainha apresentou os maiores teores (8,9%) e a Pescada, os menores teores (4,4%), das espécies de Cananéia. Analisando-se os resultados para o pool das espécies de Cananéia e Cubatão, verificou-se que a sardinha apresentou a maior percentagem de ácidos graxos ômega 3 (31,8%). Quanto aos teores de micronutrientes, houveram grandes variações de concentrações entre indivíduos da mesma espécie e entre as espécies. Aos resultados obtidos foi aplicada a análise discriminante, buscando identificar grupos de amostras de composição química similares, para os elementos determinados e os seus respectivos hábitos alimentares. A partir dos resultados obtidos, com relação ao risco populacional à exposição a elementos tóxicos, nesse caso As e Hg, as espécies Corvina e Pescada comercialmente disponíveis em Cananéia e, Corvina, Sardinha e Tainha comercialmente disponíveis em Cubatão, apresentaram os maiores valores para As, excedendo os limites propostos pela legislação brasileira para esse contaminante. Para Hg, todas as espécies analisadas não ultrapassaram os limites da legislação tanto para as espécies predadoras quanto para as não predadoras. Os resultados obtidos sugerem que a Corvina, é a mais indicada entre as espécies estudadas e pode ser usada como bioindicador de poluição por metais traço (As, Cd, Cr, Hg, Pb e Zn) em estuários, uma vez que bioacumula metais e permanece no estuário até alcançar a idade adulta sendo então, um bom indicador das condições da região costeira onde vive. / Aside from their nutritional importance, fish are considered one of the most important bioindicators in aquatic systems for the estimation of pollution levels by toxic metals. This is so, since fish can bioaccumulate these elements and they occupy different trophic levels and present different sizes and age. The purpose of the present study was to contribute with important data for the knowledge of nutritional and toxic constituents in muscles of the most consumed fish species from two coastal regions, Cananéia and Cubatão. Cananéia fish species analyzed were: Micropogonias furnieri (Corvina), Macrodon ancylodon (Pescada), Centropomus undecimalis (Robalo Peba) and Mugil platanus (Tainha). From Cubatão, Micropogonias furnieri (Corvina), Macrodon ancylodon (Pescada), Menticirrhus americanus (Perna de moça), Sardella braziliensis (Sardinha) and Mugil liza (Tainha). For this study, analytical methodologies were developed and validated, regarding precision and accuracy, by means of certified reference materials. Micronutrients (Ca, Fe, K, Na, Se e Zn) and some trace elements (As, Br, Co, Cr, Rb) in fish muscle were determined by means of neutron activation analysis (NAA). Cold Vapor Atomic Absorption Spectrometry (CV AAS) was used for total Hg determination and Electrothermal Atomic Absorption Spectrometry (ET AAS) for Cd and Pb determinations. Proximate Composition determinations according to AOAC methodologies and fatty acids profiles by gas chromatography were done in these muscle fish samples. Regarding fatty acids profile from the -6 family, Tainha species pool presented the highest values (8.9%) and Pescada species pool the lowest ones (4.4%) for Cananéia species. Fatty acids from the -3 family, Sardinha pool species presented the highest values (31.8%) for all especies analyzed. Regarding micronutrients content great concentration variations between individual of the same species and between different species were observed. Discriminate analysis was used for the values for micronutrient content for all fish species analyzed in order to identify samples of similar chemical composition and respective food habits. Concerning populational risk to toxic elements exposure, in this case As and Hg, it was possible to conclude that Corvina and Pescada from Cananeia and Corvina, Sardinha and Tainha from Cubatão presented the highest values for As exceeding the Brazilian legislation limits for this contaminant. For Hg, all the species analyzed did not exceed the Brazilian legislation limits for predatory and non predatory species. Results from this study also suggest that Corvina species can be used as a bioindicator since this species bioaccumulate metals and remains in the estuary until it reaches adulthood. Thus, Corvina can be considered as a good indicator of the conditions of the coastal region where it inhabits.

Os peixes além de suas qualidades nutricionais podem também ser considerados como um dos mais significantes indicadores em sistemas aquáticos para a estimativa de níveis de poluição por metais tóxicos, porque eles bioacumulam esses metais, ocupam diferentes níveis tróficos e são de tamanhos e idades diferentes. Esse estudo pretendeu contribuir com dados importantes para o conhecimento dos constituintes nutricionais e tóxicos em músculos de pescados mais consumidos em duas regiões costeiras, Cananéia e Cubatão. De Cananéia, as espécies mais consumidas foram Micropogonias furnieri (Corvina), Macrodon ancylodon (Pescada), Centropomus undecimalis (Robalo Peba) e Mugil platanus (Tainha). De Cubatão, Micropogonias furnieri (Corvina), Macrodon ancylodon (Pescada), Menticirrhus americanus (Perna de moça), Sardella braziliensis (Sardinha) e Mugil liza (Tainha). Para a realização desse estudo foram desenvolvidas e validadas quanto à precisão e exatidão, metodologias analíticas por meio da análise de materiais de referências certificados. A determinação dos micronutrientes (Ca, Fe, K, Na, Se e Zn) e alguns elementos traço (As, Br, Co, Cr, Rb, etc) em pescados, foi feita por meio da técnica de Ativação Neutrônica (AAN). Utilizou-se a Espectrometria de Absorção Atômica com Geração de Vapor Frio (CVAAS) para a determinação de Hg e com atomização eletrotérmica (ETAAS), para os elementos Cd e Pb. Para essas amostras ainda foram realizadas Análise de Composição Centesimal de acordo com metodologias preconizadas pela AOAC e de Ácidos Graxos, por cromatografia gasosa. Com relação aos ácidos graxos da família -6, a Tainha apresentou os maiores teores (8,9%) e a Pescada, os menores teores (4,4%), das espécies de Cananéia. Analisando-se os resultados para o pool das espécies de Cananéia e Cubatão, verificou-se que a sardinha apresentou a maior percentagem de ácidos graxos ômega 3 (31,8%). Quanto aos teores de micronutrientes, houveram grandes variações de concentrações entre indivíduos da mesma espécie e entre as espécies. Aos resultados obtidos foi aplicada a análise discriminante, buscando identificar grupos de amostras de composição química similares, para os elementos determinados e os seus respectivos hábitos alimentares. A partir dos resultados obtidos, com relação ao risco populacional à exposição a elementos tóxicos, nesse caso As e Hg, as espécies Corvina e Pescada comercialmente disponíveis em Cananéia e, Corvina, Sardinha e Tainha comercialmente disponíveis em Cubatão, apresentaram os maiores valores para As, excedendo os limites propostos pela legislação brasileira para esse contaminante. Para Hg, todas as espécies analisadas não ultrapassaram os limites da legislação tanto para as espécies predadoras quanto para as não predadoras. Os resultados obtidos sugerem que a Corvina, é a mais indicada entre as espécies estudadas e pode ser usada como bioindicador de poluição por metais traço (As, Cd, Cr, Hg, Pb e Zn) em estuários, uma vez que bioacumula metais e permanece no estuário até alcançar a idade adulta sendo então, um bom indicador das condições da região costeira onde vive. / Aside from their nutritional importance, fish are considered one of the most important bioindicators in aquatic systems for the estimation of pollution levels by toxic metals. This is so, since fish can bioaccumulate these elements and they occupy different trophic levels and present different sizes and age. The purpose of the present study was to contribute with important data for the knowledge of nutritional and toxic constituents in muscles of the most consumed fish species from two coastal regions, Cananéia and Cubatão. Cananéia fish species analyzed were: Micropogonias furnieri (Corvina), Macrodon ancylodon (Pescada), Centropomus undecimalis (Robalo Peba) and Mugil platanus (Tainha). From Cubatão, Micropogonias furnieri (Corvina), Macrodon ancylodon (Pescada), Menticirrhus americanus (Perna de moça), Sardella braziliensis (Sardinha) and Mugil liza (Tainha). For this study, analytical methodologies were developed and validated, regarding precision and accuracy, by means of certified reference materials. Micronutrients (Ca, Fe, K, Na, Se e Zn) and some trace elements (As, Br, Co, Cr, Rb) in fish muscle were determined by means of neutron activation analysis (NAA). Cold Vapor Atomic Absorption Spectrometry (CV AAS) was used for total Hg determination and Electrothermal Atomic Absorption Spectrometry (ET AAS) for Cd and Pb determinations. Proximate Composition determinations according to AOAC methodologies and fatty acids profiles by gas chromatography were done in these muscle fish samples. Regarding fatty acids profile from the -6 family, Tainha species pool presented the highest values (8.9%) and Pescada species pool the lowest ones (4.4%) for Cananéia species. Fatty acids from the -3 family, Sardinha pool species presented the highest values (31.8%) for all especies analyzed. Regarding micronutrients content great concentration variations between individual of the same species and between different species were observed. Discriminate analysis was used for the values for micronutrient content for all fish species analyzed in order to identify samples of similar chemical composition and respective food habits. Concerning populational risk to toxic elements exposure, in this case As and Hg, it was possible to conclude that Corvina and Pescada from Cananeia and Corvina, Sardinha and Tainha from Cubatão presented the highest values for As exceeding the Brazilian legislation limits for this contaminant. For Hg, all the species analyzed did not exceed the Brazilian legislation limits for predatory and non predatory species. Results from this study also suggest that Corvina species can be used as a bioindicator since this species bioaccumulate metals and remains in the estuary until it reaches adulthood. Thus, Corvina can be considered as a good indicator of the conditions of the coastal region where it inhabits.