Pfaffia glomerata (Spregen.) Pedersen stands out as a species of great medical and commercial importance due to its major secondary metabolite β-ecdysone, which content can vary in roots under adverse conditions as nutritional stress. The aim of this study was to evaluate the effects of increasing concentrations of Cu and P in soil on the production of β-ecdysone of two accessions of P. glomerata (JB and BRA). The plants used were obtained through in vitro micropropagation and were subsequently acclimatized in hydroponics and then transplanted and grown in pots containing 4 kg of a Paleudalf soil, under glasshouse conditions. Twelve treatments were evaluated in a full factorial scheme (4x3), represented by the combination of four Cu levels (0, 20, 40 and 80 mg kg-1) and three P levels (10, 60 and 120 mg kg-1). After 100 days, the plants were harvested for evaluation of growth, nutrient content and root production of β-ecdysone. The maximum dry matter production of plants for both accesses (JB and BRA) occurred at doses of 40 mg kg-1 Cu and 10 mg kg-1 of P, and root dry matter of JB access was significantly higher when compared to BRA access. The dose of 60 mg kg-1 P influenced root growth of JB accessions at higher Cu, moreover, access roots acted as a barrier reducing the transference of the metal to the shoot. Plants of both accesses in high dose of Cu and in the presence of 10 and 120 mg kg-1 P exhibited marked growth inhibition, however the dose of 60 mg kg-1 P favored the growth of plants under conditions of metal excess in soil solution.The concentrations of β-ecdysone detected in roots of P. glomerata JB access were higher when compared to BRA access. High levels of Cu in the soil did not affect the production of β-ecdysone. However, the addition of P (120 mg kg-1) to soil reduced production of β-ecdysone. / A Pfaffia glomerata (Spregen.) Pedersen destaca-se como uma espécie de grande importância medicinal e comercial devido a seu principal metabólito secundário, a β-ecdisona, que pode sofrer variações em seus teores nas raízes por condições adversas, dentre elas o estresse nutricional. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos das concentrações crescentes de Cu e P no solo sobre a produção de β-ecdisona de dois acessos de P. glomerata (JB e BRA). As plantas utilizadas foram obtidas através de micropropagação in vitro e posteriormente foram aclimatizadas em hidroponia, sendo então transplantadas e cultivadas em vasos contendo 4 kg de um Argissolo Vermelho distrófico típico em casa de vegetação. Foram avaliados 12 tratamentos em um esquema bifatorial completo (4x3), representados pela combinação de quatro níveis de Cu (0, 20, 40 e 80 mg kg-1) e três níveis de P (10, 60 e 120 mg kg -1). Após 100 dias, a plantas foram colhidas e avaliou-se o crescimento, os teores de nutrientes e a produção de β-ecdisona nas raízes. A máxima produção de massa seca de plantas para ambos os acessos (JB e BRA) ocorreu nas doses de 40 mg kg-1 de Cu e 10 mg kg-1 de P, sendo que a massa seca do sistema radicular do acesso JB foi significativamente maior quando comparada ao acesso BRA. A dose de 60 mg kg-1 de P influenciou o crescimento do sistema radicular das plantas do acesso JB na maior dose de Cu, além disso, as raízes deste acesso atuaram como uma barreira reduzindo a transferência do metal para a parte aérea. As plantas de ambos os acessos na dose elevada de Cu e na presença de 10 e 120 mg kg-1 de P apresentaram acentuada inibição do crescimento, no entanto a dose de 60 mg kg-1 de P favoreceu o crescimento das plantas em condições de excesso de metal na solução do solo. As concentrações de β-ecdisona detectadas nas raízes de P. glomerata do acesso JB foram maiores quando comparadas ao acesso BRA. Altos teores de Cu no solo não afetaram a produção de β-ecdisona. No entanto, a adição de P (120 mg kg-1) ao solo reduziu a produção de β-ecdisona.