Thesis (M.Sc. (Microbiology))--Mahidol University, 1978.

Thesis (Ph. D.)--University of Alabama at Birmingham, 2007. / Additional advisors: Asim K. Bej, Susan K. Hollingshead, Daniel D. Jones, Stephen A. Watts. Description based on contents viewed June 23, 2009; title from PDF t.p. Includes bibliographical references.

Zugl.: Berlin ; Freie Univ., Diss., 2008

Thesis (M.Med.Sc.)--University of Hong Kong, 2003. / Also available in print.

Zugl.: Berlin ; Freie Universiẗat, Diss., 2008.

Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin, 1947. / Typescript (carbon copy). eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references (leaves 127-145).

Thesis (Ph.D.)--University of Florida, 2004. / Typescript. Title from title page of source document. Document formatted into pages; contains 190 pages. Includes Vita. Includes bibliographical references.

A resistência aos antibióticos dos patógenos mais comuns do trato respiratório está aumentando mundialmente. Recentemente, Streptococcus pneumoniae resistente à penicilina tem sido isolado em diversos países, e a freqüência dessas cepas tem elevado de modo alarmante. O aumento da resistência, com conseqüentes implicações terapêuticas, tem levado a uma reavaliação do uso dos antibióticos ß-lactâmicos para o tratamento de infecções pneumocócicas. No presente trabalho, um total de 107 amostras de Streptococcus pneumoniae, obtidas de materiais provenientes de pacientes adultos ambulatoriais e hospitalizados, em dois centros médicos de duas cidades do Rio Grande do Sul (Porto Alegre e Caxias do Sul), os quais apresentavam quadro clínico-radiológico de infecção pulmonar, foram analisadas com o objetivo de estudar-se a resistência do germe à penicilina. As amostras constituídas de escarro (80,4%), lavado brônquico (13,5%) e aspirado traqueal (6,6%) foram coletadas no período compreendido entre Julho de 1998 e Julho de 1999. O material foi semeado em meio de Agar sangue e as colônias suspeitas de Streptococcus pneumoniae foram transferidas para meio de Mueller-Hinton para teste de optoquina e de sensibilidade à penicilina com discos de oxacilina. Um halo de inibição da oxacilina menor do que 20 mm indicava a realização de teste para determinação da concentração inibitória mínima (MIC) com E-test. Um total de nove cepas foi identificado como tendo resistência intermediária à penicilina (MIC 0,1-1,0μg/ml) e nenhuma cepa resistente (resistência elevada: MIC > 2,0 μg/ml) foi identificada. Uma monitorização local das cepas quanto à resistência antimicrobiana é de grande importância para os clínicos no manejo de infecções pneumocócicas. / Antibiotic resistance to the common respiratory tract pathogens is increasing worldwide. Recently, penicillin-resistant pneumococci have been isolated in several countries, and the incidence of these strains has risen alarmingly. The increased of resistance with consequence therapeutic implications has led to a re-evaluation of ß-lactam antibiotics for the treatment of streptococcal infections. In present study a total of 107 isolates of Streptococcus pneumoniae from samples of adult hospitalizated patients ando outpatients were prospectively collected in 2 different medical centers of Rio Grande do Sul - Brazil (Caxias do Sul and Porto Alegre) with clinical and radiologyc signs of respiratory infections, were analyzed with objective to study the penicillin-resistant pneumococci. The samples consisting of sputum (80,4%), bronchial lavage (13,5%) and inhaled traqueal (6,6%) had been colected in the period understood between 98 July and 99 July. The material was sown in agar-blood and the colonies suspicion of Streptococcus pneumoniae had been transferred to Mueller-Hinton for test of optochin and for sensitivity to penicillin test with oxacilin disks. One inhibition of the lesser that 20 mmm for oxacilin indicates the test accomplishment to determine minimum inhibitory concentration (MIC) with E-test. A total of 9 strains were intermediate-resistant to penicillin (MIC 0,1-1,0μg/ml) and neither was resistant to penicillin (MIC > 2,0 μg/ml). Monitoring local of antimicrobial resistant strains is of great importance to clinicians for the management of pneumococcal infections.

O Streptococcus pneumoniae é responsável por altos índices de morbidade e mortalidade pelo mundo. No início do século XX os percentuais de morte causados por essa bactéria atingiram mais de 80%. Com o surgimento da antibioticoterapia, principalmente com o uso da penicilina, o combate ao pneumococo tornou-se mais efetivo. A partir da década de 1980, o combate a essa bactéria começou a ser mais difícil, devido ao aumento da resistência pneumocócica aos antimicrobianos. No Brasil e, de forma geral, no mundo todo são verificados percentuais crescentes de resistência pneumocócica. Tais percentuais variam de um país para outro e, até mesmo, dentro de um mesmo país significativamente. Dessa forma, faz-se necessário o monitoramento desses índices de resistência para se ter conhecimento da efetividade dos antimicrobianos comumente usados contra o pneumococo. A resistência do pneumococo tem origem cromossomal. No caso da eritromicina, os genes de resistência são denominados erm(B) e mef(A/E). Como ocorre com os percentuais de resistência, a prevalência dos genes citados também muda de acordo com a região pesquisada. Assim como a verificação da resistência, é importante a pesquisa da origem da resistência antimicrobiana, no caso dos genes erm(B) e mef(A/E). O presente trabalho verificou a resistência pneumocócica em 64 cepas obtidas de diferentes hospitais de Porto Alegre. Os resultados obtidos foram de 28% de resistência para a penicilina (8% de resistência plena e 20% de resistência intermediária), 15% de resistência plena para a eritromicina, 18% para a tetraciclina (14% intermediárias), 3% plenamente resistentes para o cloranfenicol, 68% de resistência para a associação trimetropima/sulfametoxazol (64% plenamente resistentes), 1% plenamente resistente à ceftriaxona e 0% de resistência à vancomicina. Pôde-se relacionar a presença dos genes com a resistência à eritromicina. O erm(B) mostrou uma predominância maior nessas cepas. Foram 6 cepas com o gene erm(B), 2 com o mef(A/E), uma amostra apresentou os dois genes e apenas uma não apresentou nenhum. Os resultados obtidos nesse trabalho estão relacionados ao período de 2004 e 2005, situando Porto Alegre em relação ao nível de resistência do pneumococo e seus genes de resistência à eritromicina. Cabe salientar que pesquisas subseqüentes devem ser feitas para o monitoramento da resistência do S. pneumoniae e dos determinantes dessa resistência. / The Streptococcus pneumoniae is responsible for high indices of morbility and mortality around the world. In the beginning of century XX the percentages of death caused by these bacteria had reached more than 80%. With the appearance of the antibiotical therapy, mainly with the use of penicillin, the combat to pneumococcus has became more effective. From the decade of 1980, the combat against these bacteria started to be more difficult due to the increase of the pneumococcal resistance to antimicrobials. In Brazil and, of general form, in the entire world has been verified the increase of pneumococcal resistance. Such percentages vary significantly from a country to another one and even inside of the same country. In this way, it’s necessary to have knowledge of the effectiveness of common antibiotics used against pneumococcus through the monitoriment of these resistance’s indices. The resistance of pneumococcus originates from the chromosome. In the case of the erythromycin, the resistance genes are called erm(B) and mef(A/E). As it occurs with the percentages of resistance, the prevalence of these genes also change in accordance with the searched region. As well as the verification of the resistance, the research of the origin of the antimicrobial resistance is important, in the case of the genes erm(B) and mef(A/E). The present work verified the pneumococcal resistance in 64 strains from different hospitals of Porto Alegre. The results were 28% of resistance for penicillin, 14% of resistance for erythromycin, 18% of resistance for tetracyclin, 3% of resistance for chloranphenicol, 68% of resistance for resistance trimetropim/ sulfametoxazole association, 1% of resistance ceftriaxone and 0% of resistance to the vancomycin. The presence of the genes with the erythromycin resistance could be related. The erm(B) showed a high preponderance in these strains. There were 6 erm(B) gene strains, 2 mef(A/E), a sample with the two genes and only one with none gene. It’s important to point out that the values found in this work hasn’t been constant and subsequent research must be made to monitor the S. pneumoniae resistance.

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O objetivo do presente estudo foi avaliar o uso de técnicas moleculares diretamente em líquor visando detectar e caracterizar genotipicamente Streptococcus pneumoniae em casos de meningite. Um estudo prospectivo de corte transversal foi realizado no Hospital Couto Maia, no período entre abril de 2006 a dezembro de 2010. As amostras de líquor foram selecionadas de acordo com critérios de inclusão como celularidade superior a 100 células/mm3 e/ou Glicorraquia inferior a 40 mg/dl e/ou Proteinorraquia superior a 65 mg/dl, e foram submetidas a análises de rotina do hospital, e posteriormente testadas por técnica de PCR em tempo real para detecção de S. pneumoniae, usando como alvo o gene lytA e a reação de PCR-Multiplex para a dedução do sorotipo capsular. A caracterização genotípica foi realizada através da técnica de Multilocus Sequence Typing (MLST). Foram analisadas 1141 amostras de líquor provenientes de pacientes com suspeita clínica de meningite bacteriana. Destas, 92 amostras foram positivas para S. pneumoniae por PCR em tempo real. Das quais, 68 amostras (73,9%) foram cultura positiva e 24 (26,1%) cultura negativa. Os sorotipos de 21 dos 24 casos cultura negativa foram deduzidos. Cerca de 46% dos sorotipos encontrados nos casos cultura negativa, foram não vacinais. Dentre os sorotipos vacinais mais frequentes estavam o 6A/B/C com 6 casos (25%), 14 com 3 casos (12,5%), 23F com 2 (8,3%), 18A/B/C com 1 caso (4,2%) e 4 com 1 caso (4,2%). Do total de 24 casos cultura negativa, três casos (12,5%) não apresentaram positividade para qualquer dos 40 sorotipos testados, embora tenham apresentado positividade para o gene cpsA, permanecendo então como não determinados. Seis amostras (25%) tiveram genótipo caracterizado por MLST, sendo definidos os STs 750, 6403 e 2814. Este estudo conclui que as técnicas moleculares de PCR em tempo real e Multiplex PCR podem ser bastante úteis quando aplicadas diretamente em espécimes clínicos, possibilitando uma melhor detecção e diagnóstico dos casos, mesmo quando todas as outras técnicas diagnósticas convencionais não são capazes de fazê-lo, além de proporcionar um ganho de informações epidemiológicas que não seriam possíveis de serem obtidos por métodos convencionais, devido à ausência de positividade das culturas bacteriológicas. / Streptococcus pneumoniae is a major cause of severe invasive diseases such as pneumonia, meningitis and bacteremia. It is estimated death in about 2.0 million children in developing countries. The gold standard for diagnosis of this agent is the culture, but its sensitivity is low and therefore the accurate diagnosis of cases of pneumococcal meningitis remains a challenge. The aim of this study was to evaluate the use of molecular techniques to detect directly in CSF samples, and genotype Streptococcus pneumoniae in meningitis cases. A prospective cross-sectional study was conducted at Hospital Couto Maia, in the period from April 2006 to December 2010. The CSF samples were selected according to inclusion criteria as cellularity above 100 cells/mm3 and / or CSF glucose less than 40 mg/dl and / or protein levels over than 65 mg / dl, and were submitted to routine hospital and subsequently tested by PCR in real time for the detection of S. pneumoniae, using targeting the lytA gene and PCR-Multiplex for the deduction of capsular serotype. The genotypic characterization was performed by Multilocus Sequence Typing technique (MLST). One amount of 1141 CSF samples were collected from patients with suspected bacterial meningitis and submitted for analysis. Of these, 92 samples were positive for S. pneumoniae by real-time PCR. Of which, 68 samples (73.9%) were culture positive and 24 (26.1%) culture negative. The serotypes of 21 of the 24 culture-negative cases were found. About 46% of the serotypes found in culture-negative cases were non vaccine types. Among the most common vaccine serotypes were the 6A/B/C with 6 cases (25%), 14 with 3 cases (12.5%), 23F with 2 (8.3%), 18A/B/C with one case (4.2%) and 4 with 1 case (4.2%). Of the total of 24 culture-negative cases, three cases (12.5%) showed positivity for any of the 40 serotypes tested, although they presented positive result for the gene CPSA amplification and remain as not determined. Six samples (25%) had the genotype characterized by MLST, the STs being set 750, 6403 and 2814. This study concludes that the molecular techniques of real-time PCR and multiplex PCR can be useful when applied directly on clinical specimens, enabling better detection and diagnosis of cases, even when all other conventional diagnostic techniques are not able to do it, and provide a gain of epidemiological information that would not be possible to obtain by conventional methods, due to the absence of positive bacterial cultures.