The work described in this thesis was performed in order to develop advanced analytical methods suitable to select and characterize GS- 3β inhibitors in vitro. GSK-3β is recognized as a key target for the development of new therapeutic agents for Alzheimer disease (AD). We validated an UHPLC-UV-Vis diode arrays detector (DAD) method for the very fast identification (resolution in less than 2 min) and determination of ADP and ATP in enzyme-based assay containing GSM-S syntetic peptide, ATP and GSK-3β. By using this method, selected inhibition hits will be characterized by defining their competitive mode of action with the substrate rather than with the ATP cofactor, in view of the discovery of compounds endowed of an increased GSK-3β selectivity over other protein-kinases. Next we hypothesized that GSK-3β could be directly involved in the regulation of histone acetylation through HDAC protein. Our hypothesis accounts that inhibition of GSK-3β, which leads to reduced HDAC activity, could restores the acetylation level in histones, protecting against neurodegeneration as both aging and AD pathology are associated with loss of histone acetylation (H4/H3) at N-terminus. Therefore, quantification of histone modifications on individual lysine residues is of crucial importance to understand their role in cell biology. We developed a targeted liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS) method for the site-specific quantification of lysine acetylation in the N-terminal region of histone H4 from murine macrophage-like cell line RAW 264.7, with the perspective to apply the method on neuronal cells upon administration of GSK-3β inhibitors. The analytical strategy we developed shows that careful optimization of chemical derivatization steps at the protein and at the peptide level, combined with a more extensive digestion using chymotrypsin and trypsin, allows to differentiate between acetylation levels of each lysine residues.

Polypharmacology-based strategies are gaining ever-increasing attention as useful approaches to develop disease-modifying drug candidates for effective Alzheimer’s disease (AD) treatment. In this scenario, multitarget-directed ligands could increase efficiency by simultaneous modulation of several targets involved in AD pathogenesis. In drug discovery, natural products (NPs) represent an excellent source of evolutionary-chosen “privileged structures”. In this thesis, the polyphenol curcumin, found in Curcuma longa L, encompassing the essential structural elements for the concurrent inhibition of two validated AD targets, BACE-1 and GSK-3β, was rationally identified as lead compound. Aimed at developing well-balanced dual BACE-1/GSK-3β modulators with good BBB permeability, different series of curcumin-based derivatives were designed and synthetized by introducing suitable chemical modifications on the side aryl ring(s) and in the 4-position of the main scaffold. Furthermore, considering the pivotal role of the intramolecular H-bond network of curcumin’s central fragment in establishing appropriate interactions with target binding sites, several complexation and bioisosteric cyclization strategies were performed. Thanks to its strong Michael acceptor reactivity toward critical cysteine residues, curcumin exerts neuroprotection by additional activation of the Keap1-Nrf2-ARE signaling pathway. Thus, aimed at affecting the electrophilicity of its α,β-unsaturated carbonyl fragment, allowing a fine-tuning of its reactivity, diverse electrophilic functions were inserted in different positions of the curcumin scaffold. Furthermore, considering the neuroprotective and antioxidant potentials of simple coumarins, several curcumin-coumarin hybrids were also prepared. Recently, the inhibition of additional AD-correlated protein kinases (PKs), such as CK1 and LRRK2, could offer promises to achieve a successful treatment and indole was envisaged as useful scaffold for both PKs’ inhibition. Thus, a small library of indole-based derivatives was designed and synthetized as valuable BBB permeable pharmacological tools. Finally, chitosan (CS), a natural, nontoxic, biocompatible and biodegradable polysaccharide, was selected to develop CS-based bioconjugates for nanoparticles’ preparation as innovative drug delivery and targeting systems.

La presente tesi si concentra sull'effettività che la garanzia formale dei diritti, oggetto di proclamazioni al di fuori dei confini statali, riceve dalla tutela giurisdizionale della Corte europea dei diritti dell’uomo e della Corte di Giustizia dell’Unione europea. L'analisi si sofferma sull’impatto delle pronunce dei “giudici europei” nel sistema di protezione nazionale e sulle scelte del legislatore in materia di diritti. Gli ambiti presi in considerazione sono i seguenti: "nuovi diritti", materia penale, "violazioni strutturali". / The topic of the research is the "judicial dialogue" on human rights which involved the European Court of Human Rights, the European Court of Justice and the national courts and its impact on the national reforms. In the Italian system the "dialogue" between different jurisdiction created an effectiveness protection of human rights, for instance, on the prisoners rights.

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Because of the potentially irreversible impact of groundwater quality deterioration in the Ferrara coastal aquifer, answers concerning the assessment of the extent of the salinization problem, the understanding of the mechanisms governing salinization processes, and the sustainability of the current water resources management are urgent. In this light, the present thesis aims to achieve the following objectives: Characterization of the lowland coastal aquifer of Ferrara: hydrology, hydrochemistry and evolution of the system The importance of data acquisition techniques in saltwater intrusion monitoring Predicting salinization trends in the lowland coastal aquifer Ammonium occurrence in a salinized lowland coastal aquifer Trace elements mobility in a saline coastal aquifer / A causa dell'impatto potenzialmente irreversibile del deterioramento della qualità delle risorse idriche , l'obiettivo primario di questa tesi è stato quello di ottenere una comprensione quantitativa dei processi che hanno causato la salinizzazione delle acque sotterranee nella falda acquifera costiera ferrarese. In secondo luogo si è voluto indagare l’impatto che i cambiamenti climatici potranno avere sul processo di salinizzazione in atto e le eventuali conseguenze che un aumento di salinità possono avere sulla mobilizzazione di contaminanti sia maggiori che in tracce. Alla luce di quanto detto sin qui, lo studio in oggetto si propone di raggiungere i seguenti obiettivi: - Caratterizzazione della falda acquifera costiera della pianura di Ferrara: idrologia, idrochimica ed evoluzione del sistema - Importanza di tecniche di monitoraggio nella comprensione dei processi di salinizzazione - L’influenza della salinizzazione sui trend di concentrazione dell’ammonio e degli elementi nell’acquifero costiero - Previsione dei trend di salinizzazione della falda acquifera costiera

Il carcinoma squamoso orale (CSO) è spesso preceduto da lesioni definite potenzialmente maligne tra cui la leucoplachia e il lichen ma una diagnosi precoce avviene ancora oggi in meno della metà dei casi. Inoltre spesso un paziente trattato per CSO svilupperà secondi tumori. Scopo del lavoro di ricerca è stato: 1) Studiare, mediante metodica di next generation sequencing, lo stato di metilazione di un gruppo di geni a partire da prelievi brushing del cavo orale al fine di identificare CSO o lesioni ad alto rischio di trasformazione maligna. 2) Valurare la relazione esistente tra sovraespressione di p16INK4A e presenza di HPV in 35 pazienti affetti da lichen 3) Valutare la presenza di marker istopatologici predittivi di comparsa di seconde manifestazioni tumorali 4) valutare la relazione clonale tra tumore primitivo e metastasi linfonodale in 8 pazienti mediante 2 metodiche di clonalità differenti: l’analisi di mtDNA e delle mutazioni del gene TP53. I risultati hanno mostrato: 1) i geni ZAP70 e GP1BB hanno presentato un alterato stato di metilazione rispettivamente nel 100% e nel 90,9% di CSO e lesioni ad alto rischio, mentre non sono risultati metilati nei controlli sani; ipotizzando un ruolo come potenziali marcatori per la diagnosi precoce nel CSO. 2)Una sovraespressione di p16INK4A è risultata in 26/35 pazienti affetti da lichen ma HPV-DNA è stato identificato in soli 4 campioni. Nessuna relazione sembra essere tra sovraespressione di p16INK4A e virus HPV. 3)L’invasione perineurale è risultato un marker predittivo della comparsa di recidiva locale e metastasi linfonodale, mentre lo stato dei margini chirurgici si è rilevato un fattore predittivo per la comparsa di secondi tumori primitivi 4) Un totale accordo nei risultati c’è stato tra analisi di mtDNA e analisi di TP53 e le due metodiche hanno identificato la presenza di 4 metastasi linfonodali non clonalmente correlate al tumore primitivo. / Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) is often preceded by Potentially Malignant Lesions, Leukoplakia and Lichen Planus (LP), but still today is usually diagnosed in advanced stage. Additionally patients treated for OSCC have a good chance to develop a second primary OSCC. The purpose of the research was: 1) to assess, by bisulfite Next Generation Sequencing, the methylation status of a list of candidate genes obtained from oral brushing specimens to early detect OSCC using non-invasive procedures. 2) to yield more insights into the relationship between p16INK4A over-expression and the presence of HPV-DNA in 35 LP samples. 3) to identify the clinicopathologic parameters significantly related to a second loco-regional event in a population of 180 patients treated for primary OSCC 4) to evaluate the relationship between primary OSCC and lymph node metastasis in 8 patients using two different 2 clonality tests: mt-DNA D-loop and TP53 sequence analysis. The results showed that: 1) ZAP70 and GP1BB showed an aberrant methylation status respectively in 100% and 90,9% of OSCC and High Risk lesions, while resulted unmethylated in normal healthy donors. DNA methylation analysis of GP1BB and ZAP70 seems to be a promising non invasive tool to early detect OSCC from oral brushing specimens. 2) p16INK4A over-expression was found in 26/35 LP samples, whereas HPV was found in 4/35 lesions: 3 low-risk HPV and 1 high-risk HPV. P16INK4A overexpression is not correlated with HPV in patients with LP. 3) Perineural invasion was significantly related to lymph-node metastasis (18% vs 8%) and Local Recurrence (15% vs 5%), while the status of the surgical margin resulted an independent factor influencing Second Primary Tumor. 4) The results from mtDNA analysis showed a good agreement with results of p53 mutation analysis and revealed the presence of 4/11 neck nodal metastases not phylogenetically related respect to primary tumor.

In this thesis, we consider the problem of solving large and sparse linear systems of saddle point type stemming from optimization problems. The focus of the thesis is on iterative methods, and new preconditioning srategies are proposed, along with novel spectral estimtates for the matrices involved.

La tesi riprende un tema che è stato oggetto in passato di studi anche molto approfonditi; oggi sembra essere tornato alla ribalta grazie ad alcuni contributi che hanno nuovamente stimolato la dottrina a confrontarsi su aspetti così delicati anche alla luce della crisi economica. E'stato da sempre rilevato che la buona scrittura delle norme è un fattore fondamentale per il rilancio dell’economia del paese, per la semplificazione e per garantire ordine, coerenza e chiarezza all’ordinamento giuridico. La prima parte è incentrata su una ricostruzione storica e giuridica delle fonti che hanno disciplinato le “regole per la qualità delle regole”, oltre ad una panoramica della dottrina che si è occupata in passato del tema. Segue l’individuazione specifica di quali sono le regole formali e sostanziali di drafting. In particolare, una parte è dedicata alla giurisprudenza costituzionale per comprendere se esiste o meno un aggancio per la Corte Costituzionale da permetterle il sindacato sulle “regole oscure” e dichiararle illegittime. La seconda parte analizza le pressai, in particolare si è scelto di analizzare il rapporto tra Governo e Parlamento nelle problematiche principali che attengono al procedimento legislativo e alla cornice entro la quale viene esplicato in relazione alla decretazione d’urgenza, maxiemendamenti, questione di fiducia, istruttoria in commissione, gruppi di pressione. Ciò che è stato rilevato, è una scarsa aderenza ai principi e ai criteri di better regulation, peraltro difficilmente giustiziabili da parte della Corte costituzionale e sottratti al controllo di chi, al contrario, ha competenza in questo settore, ossia il Comitato per la legislazione e il DAGL. Le conclusioni, pertanto, prendono le mosse da una serie di criticità rilevate e tentano di tracciare una strada da percorrere che sia rispettosa dei canoni della “better regulation” anche alla luce delle riforme costituzionali e dei regolamenti parlamentari in corso di approvazione. / Thesis is focused on a theme that has been the object of very investigated studies too much in the past. Today it seems to be back in the limelight thanks to some scientific contributions that have that have stimulated on sensitive in the scientific community to exchange views on sensitive issues especially in the light of the current economic crisis. So, everyone agrees that better regulation is important to economic recovery of the country, for the simplification of legislation and to ensure order, consistency and clarity for the legal system. The first part focuses on a reconstruction of the historical and legal sources of laws that governed the "rules for the quality of the rules". Follows of which may be the procedural and substantive rules that the regulator should follow in the law making process. In particular, chapter three is focused on constitutional jurisprudence in order to understand if the Constitutional Court could censure "the obscure rules" and, if necessary, declare them illegal. The second part of the thesis is focused on the practice, in particular it was decided to analyze the relationship between the Government and Parliament about the problems of law making process and the framework within which it is carried on in realtion to an urgent decree, maxi-amendaments, matter of trust, the role of committees, lobbies. What it has been detected is a poor adherence to the principles of better regulation, however, hardly justiciable by the Constitutional Court and avoid a review of those who, on the contrary, has expertise in this area, namely Comitato per la legislazione and DAGL. Research, therefore, takes the moves by the identification of some critical issues and try to plot a way forward that is respectful of the canons of "better regulation" in light of constitutional and parliamentary rules being approved.

La tesi si propone l’obiettivo di indagare le modalità di interazione tra conoscenze tecnico-scientifiche e dato normativo, a partire dallo studio delle c.d. norme tecniche, ossia le norme, dotate di forza giuridica o meno, elaborate sulla base di conoscenze tecnico-scientifiche. La ricerca analizza diversi settori dell’ordinamento, accomunati da un’elevata influenza di saperi tecnici e al tempo stesso da un’indubbia rilevanza dal punto di vista costituzionale (la disciplina delle sperimentazioni cliniche dei farmaci, quella delle emissioni inquinanti di origine industriale e quella relativa agli standard di sicurezza dei prodotti), individuando quelle che al loro interno si possono considerare norme tecniche e mettendone in luce sia i profili formali (in quali atti-fonte sono contenute, quale natura giuridica presentano) che il procedimento di formazione, con particolare attenzione ai soggetti che vi prendono parte. Si propone quindi una sistematizzazione degli elementi emersi dall’indagine a partire da due diverse prospettive: in primo luogo tali dati vengono analizzati dal punto di vista dogmatico, individuando i diversi meccanismi di ingresso del dato tecnico-scientifico nel tessuto normativo (incorporazione nella norma giuridica, impiego di clausole generali, rinvio a norme extra-giuridiche), al fine di mettere in luce eventuali profili problematici per quanto riguarda il sistema delle fonti. La seconda prospettiva prende invece quale punto di riferimento il “centro di elaborazione sostanziale” delle norme considerate, al fine di evidenziarne i diversi fattori di legittimazione: a partire da esigenze di armonizzazione della disciplina e dall’assunto della neutralità delle conoscenze tecnico-scientifiche rispetto agli interessi coinvolti, l’elaborazione delle norme tecniche vede infatti un significativo ripensamento degli equilibri non solo fra attori pubblici e privati, ma anche tra legittimazione politica e legittimazione “tecnica” della scelta normativa. A tali aspetti è dedicata la parte conclusiva del lavoro, in particolare per quanto riguarda la conformità rispetto al disegno costituzionale. / The research aims at investigating the interaction between technical-scientific knowledge and law, adopting the perspective of technical legislation. Having defined technical rules as those rules, binding or voluntary, which are elaborated on the basis of technical-scientific facts, the research consists in an analysis of three sectors of the legal system which are characterized by a high impact of scientific knowledge (clinical trials, industrial emissions, product safety standards). The technical rules operating in each of these sectors have been identified and investigated, both from a formal perspective (in which legal sources are they incorporated? Which is their nature?) and seeking to highlight the decision-making process leading to their adoption. The results of the empirical analysis are then systematized from two complementary perspectives: primarily from a dogmatic standpoint, pointing out the mechanisms through which technical-scientific facts enter the domain of law (incorporation within the legal rule, general clauses, reference), and the tensions they determine in relation to the system of the sources of law. Secondly, the analysis of the decision-making processes aims at highlighting the different factors of legitimacy that come into play in the adoption of a technical rule, and in particular the interaction between political-constitutional legitimacy and technical-scientific legitimacy.

La tesi di ricerca si propone di indagare il riflesso che i principi/valori producono sul parametro nel sindacato di legittimità costituzionale, al fine di verificarne le implicazioni sulla legalità, in termini di prevedibilità e certezza. In particolare, delineata la connessione tra principi e valori costituzionali e, ricostruito, secondo la teoria dell'ordinamento, il rapporto tra valori e normatività,si analizzano i riflessi prodotti, sul piano interpretativo, dall’apertura del parametro costituzionale alla logica dei valori, enfatizzandone le ricadute sul controllo di costituzionalità delle leggi. Identificato il nesso tra principi e valori nella capacità funzionale dei primi di realizzare i diritti fondamentali, si è inteso rimarcare come la più estesa realizzazione dei principi-valori costituzionali potrebbe compiersi a spese della legge e della certezza del diritto, in una relazione inversamente proporzionale. Ciò apparirebbe evidente dall’ottica privilegiata della materia penale, per cui una legalità materiale, letta alla luce di criteri di adeguatezza e di ragionevole proporzione, seppur vicina alle esigenze di giustizia del caso concreto, se spinta in eccessi interpretativi rischia di invadere il campo del legislatore, unico deputato a compiere scelte di valore. / The thesis aims to investigate the effects that principles/ values ​​product on the constitutional parameter, in order to verify the impact on the legality in terms of predictability and certainty. In particular, outlined the connection between constitutional principles and values, and rebuilit, at the same time, the relationship between values ​​and normativity, we analyze the effects that the logic of values product on the constitutional parameter, emphasizing the impact on the constitutional judgement. So identified the link between principles and values in the functional capacity of the first to realize the fundamental rights, the intention is to point out how the most extensive implementation of the principles-constitutional values could be accomplished at the expense of the law and of legal certainty in a relationship inversely proportional. This would appear evident from the privileged optic of criminal matters,for which the legality, read in the light of criteria of adequacy and reasonable proportion, closed to the needs of the justice of the case, if pushed in excess of interpretation threatens to invade the field of the legislature, the only deputy to make value choices.