A Aniba canelilla (H.B.K.) Mez é uma planta aromática proveniente da região amazônica cujo óleo essencial apresenta como componentes majoritários o 1-nitro-2-feniletano e o metileugenol. Apesar das atividades antifúngicas e anti-inflamatórias cientificamente comprovadas e do uso popular do óleo para o tratamento de dermatites, acnes e feridas, não existe até o momento um estudo que verse sobre a quantificação desses compostos na pele. O objetivo deste trabalho foi a validação de um método bioanalítico otimizado por microextração em fase sólida no modo headspace em cromatógrafo gasoso com detector de ionização de chama (HS-SPME-GC-FID) para a determinação do 1-nitro-2-feniletano e metileugenol a partir do óleo essencial em diferentes amostras de estudo de permeação cutânea in vitro. Uma metodologia foi desenvolvida e validada por HS-SPME-GC-FID. A faixa da curva de calibração foi de 2,08 - 207,87 μg.mL-1 para o 1-nitro-2-feniletano e de 0,40-40,41 μg.mL-1 para o metileugenol. A presença de matriz e as características intrínsecas da metodologia de HS-SPME requereram uma transformação da curva de calibração. A transformação logarítmica (Log10) foi então aplicada aos dados e os resultados apresentaram homocedasticidade, resíduos dispersos, coeficiente de determinação (r²> 0,99) e recuperação adequados. Estudos de permeação cutânea foram realizados em células de Franz com diferentes quantidades (20, 100 e 200 μL) de óleo essencial de A. canelilla para avaliar o perfil de permeação e retenção em pele de orelha suína e fluido receptor. A análise das amostras nas condições validadas mostrou uma grande permeação e retenção dos compostos na seguinte ordem: fluido receptor >> derme >> epiderme >> estrato córneo. Verificou-se um aumento progressivo e dependência na retenção com base na quantidade aplicada no compartimento doador e grande retenção principalmente no fluido receptor e derme, resultado este compatível com as características físico-químicas de Log P, afinidade ao ambiente hidrofílico e lipofílico, tamanho e peso molecular do 1-nitro-2-feniletano e metileugenol. Em conclusão, o método proposto por HS-SPME-GC-FID para quantificar os compostos majoritários do óleo essencial de A. canelilla em amostras de pele de orelha suína e fluido receptor foi seletivo, preciso, exato e adequado, e pode ser utilizado em análises futuras. / Aniba canelilla (H.B.K.) Mez is an aromatic plant from the Amazon region whose essential oil has 1-nitro-2-phenylethane and methyleugenol as major compounds. Despite of the scientifically proved antifungal and anti-inflammatory activities and the popular use of oil for the treatment of dermatitis, acnes and wounds, there is no study up to date about the quantification of these compounds in skin samples. The aim of this study was the validation of an optimized bioanalytical method by solid phase microextraction on headspace mode in gas chromatograph with flame ionization detector (HS-SPME-GC-FID) for the determination of 1-nitro-2-phenylethane and methyleugenol from the essential oil in different samples of in vitro cutaneous permeation study. A methodology was developed and validated by HS-SPME-GC-FID. The ranges of calibration curves were 2.08 - 207.87 μg.mL-1 for 1-nitro-2-phenylethane and 0.40 - 40.41 μg.mL-1 for methyleugenol. The presence of matrix and the intrinsic characteristics of the HS-SPME methodology required a transformation to the calibration curves. The logarithmic transformation (Log10) was then applied to the data and the results showed homoscedasticity, dispersed residues, and adequate coefficient of determination (r²> 0.99) and recovery. Skin permeation studies were performed on Franz cells with different amounts (20, 100 and 200 μL) of A. canelilla essential oil to evaluate the skin permeation and retention profile in porcine ear skin and receptor fluid. The analysis of the samples under the validated conditions showed a high permeation and retention of the major compounds in the following order: receptor fluid >> dermis >> epidermis >> stratum corneum. A progressive increase and retention dependence were observed based on the amount applied in the donor compartment, and large retention mainly on the receptor fluid and dermis was observed, in accordance with the physicochemical characteristics of Log P, affinity to the hydrophilic and lipophilic environment, size and molecular weight of 1-nitro-2-phenylethane and methyleugenol. In conclusion, the method proposed by HS-SPME-GC-FID to quantify the major compounds of A. canelilla essential oil in porcine ear skin and receptor fluid samples was selective, accurate, precise and adequate, and can be used in future analyzes.

A Aniba canelilla (H.B.K.) Mez é uma planta aromática proveniente da região amazônica cujo óleo essencial apresenta como componentes majoritários o 1-nitro-2-feniletano e o metileugenol. Apesar das atividades antifúngicas e anti-inflamatórias cientificamente comprovadas e do uso popular do óleo para o tratamento de dermatites, acnes e feridas, não existe até o momento um estudo que verse sobre a quantificação desses compostos na pele. O objetivo deste trabalho foi a validação de um método bioanalítico otimizado por microextração em fase sólida no modo headspace em cromatógrafo gasoso com detector de ionização de chama (HS-SPME-GC-FID) para a determinação do 1-nitro-2-feniletano e metileugenol a partir do óleo essencial em diferentes amostras de estudo de permeação cutânea in vitro. Uma metodologia foi desenvolvida e validada por HS-SPME-GC-FID. A faixa da curva de calibração foi de 2,08 - 207,87 μg.mL-1 para o 1-nitro-2-feniletano e de 0,40-40,41 μg.mL-1 para o metileugenol. A presença de matriz e as características intrínsecas da metodologia de HS-SPME requereram uma transformação da curva de calibração. A transformação logarítmica (Log10) foi então aplicada aos dados e os resultados apresentaram homocedasticidade, resíduos dispersos, coeficiente de determinação (r²> 0,99) e recuperação adequados. Estudos de permeação cutânea foram realizados em células de Franz com diferentes quantidades (20, 100 e 200 μL) de óleo essencial de A. canelilla para avaliar o perfil de permeação e retenção em pele de orelha suína e fluido receptor. A análise das amostras nas condições validadas mostrou uma grande permeação e retenção dos compostos na seguinte ordem: fluido receptor >> derme >> epiderme >> estrato córneo. Verificou-se um aumento progressivo e dependência na retenção com base na quantidade aplicada no compartimento doador e grande retenção principalmente no fluido receptor e derme, resultado este compatível com as características físico-químicas de Log P, afinidade ao ambiente hidrofílico e lipofílico, tamanho e peso molecular do 1-nitro-2-feniletano e metileugenol. Em conclusão, o método proposto por HS-SPME-GC-FID para quantificar os compostos majoritários do óleo essencial de A. canelilla em amostras de pele de orelha suína e fluido receptor foi seletivo, preciso, exato e adequado, e pode ser utilizado em análises futuras. / Aniba canelilla (H.B.K.) Mez is an aromatic plant from the Amazon region whose essential oil has 1-nitro-2-phenylethane and methyleugenol as major compounds. Despite of the scientifically proved antifungal and anti-inflammatory activities and the popular use of oil for the treatment of dermatitis, acnes and wounds, there is no study up to date about the quantification of these compounds in skin samples. The aim of this study was the validation of an optimized bioanalytical method by solid phase microextraction on headspace mode in gas chromatograph with flame ionization detector (HS-SPME-GC-FID) for the determination of 1-nitro-2-phenylethane and methyleugenol from the essential oil in different samples of in vitro cutaneous permeation study. A methodology was developed and validated by HS-SPME-GC-FID. The ranges of calibration curves were 2.08 - 207.87 μg.mL-1 for 1-nitro-2-phenylethane and 0.40 - 40.41 μg.mL-1 for methyleugenol. The presence of matrix and the intrinsic characteristics of the HS-SPME methodology required a transformation to the calibration curves. The logarithmic transformation (Log10) was then applied to the data and the results showed homoscedasticity, dispersed residues, and adequate coefficient of determination (r²> 0.99) and recovery. Skin permeation studies were performed on Franz cells with different amounts (20, 100 and 200 μL) of A. canelilla essential oil to evaluate the skin permeation and retention profile in porcine ear skin and receptor fluid. The analysis of the samples under the validated conditions showed a high permeation and retention of the major compounds in the following order: receptor fluid >> dermis >> epidermis >> stratum corneum. A progressive increase and retention dependence were observed based on the amount applied in the donor compartment, and large retention mainly on the receptor fluid and dermis was observed, in accordance with the physicochemical characteristics of Log P, affinity to the hydrophilic and lipophilic environment, size and molecular weight of 1-nitro-2-phenylethane and methyleugenol. In conclusion, the method proposed by HS-SPME-GC-FID to quantify the major compounds of A. canelilla essential oil in porcine ear skin and receptor fluid samples was selective, accurate, precise and adequate, and can be used in future analyzes.

A Aniba canelilla (H.B.K.) Mez é uma planta aromática proveniente da região amazônica cujo óleo essencial apresenta como componentes majoritários o 1-nitro-2-feniletano e o metileugenol. Apesar das atividades antifúngicas e anti-inflamatórias cientificamente comprovadas e do uso popular do óleo para o tratamento de dermatites, acnes e feridas, não existe até o momento um estudo que verse sobre a quantificação desses compostos na pele. O objetivo deste trabalho foi a validação de um método bioanalítico otimizado por microextração em fase sólida no modo headspace em cromatógrafo gasoso com detector de ionização de chama (HS-SPME-GC-FID) para a determinação do 1-nitro-2-feniletano e metileugenol a partir do óleo essencial em diferentes amostras de estudo de permeação cutânea in vitro. Uma metodologia foi desenvolvida e validada por HS-SPME-GC-FID. A faixa da curva de calibração foi de 2,08 - 207,87 μg.mL-1 para o 1-nitro-2-feniletano e de 0,40-40,41 μg.mL-1 para o metileugenol. A presença de matriz e as características intrínsecas da metodologia de HS-SPME requereram uma transformação da curva de calibração. A transformação logarítmica (Log10) foi então aplicada aos dados e os resultados apresentaram homocedasticidade, resíduos dispersos, coeficiente de determinação (r²> 0,99) e recuperação adequados. Estudos de permeação cutânea foram realizados em células de Franz com diferentes quantidades (20, 100 e 200 μL) de óleo essencial de A. canelilla para avaliar o perfil de permeação e retenção em pele de orelha suína e fluido receptor. A análise das amostras nas condições validadas mostrou uma grande permeação e retenção dos compostos na seguinte ordem: fluido receptor >> derme >> epiderme >> estrato córneo. Verificou-se um aumento progressivo e dependência na retenção com base na quantidade aplicada no compartimento doador e grande retenção principalmente no fluido receptor e derme, resultado este compatível com as características físico-químicas de Log P, afinidade ao ambiente hidrofílico e lipofílico, tamanho e peso molecular do 1-nitro-2-feniletano e metileugenol. Em conclusão, o método proposto por HS-SPME-GC-FID para quantificar os compostos majoritários do óleo essencial de A. canelilla em amostras de pele de orelha suína e fluido receptor foi seletivo, preciso, exato e adequado, e pode ser utilizado em análises futuras. / Aniba canelilla (H.B.K.) Mez is an aromatic plant from the Amazon region whose essential oil has 1-nitro-2-phenylethane and methyleugenol as major compounds. Despite of the scientifically proved antifungal and anti-inflammatory activities and the popular use of oil for the treatment of dermatitis, acnes and wounds, there is no study up to date about the quantification of these compounds in skin samples. The aim of this study was the validation of an optimized bioanalytical method by solid phase microextraction on headspace mode in gas chromatograph with flame ionization detector (HS-SPME-GC-FID) for the determination of 1-nitro-2-phenylethane and methyleugenol from the essential oil in different samples of in vitro cutaneous permeation study. A methodology was developed and validated by HS-SPME-GC-FID. The ranges of calibration curves were 2.08 - 207.87 μg.mL-1 for 1-nitro-2-phenylethane and 0.40 - 40.41 μg.mL-1 for methyleugenol. The presence of matrix and the intrinsic characteristics of the HS-SPME methodology required a transformation to the calibration curves. The logarithmic transformation (Log10) was then applied to the data and the results showed homoscedasticity, dispersed residues, and adequate coefficient of determination (r²> 0.99) and recovery. Skin permeation studies were performed on Franz cells with different amounts (20, 100 and 200 μL) of A. canelilla essential oil to evaluate the skin permeation and retention profile in porcine ear skin and receptor fluid. The analysis of the samples under the validated conditions showed a high permeation and retention of the major compounds in the following order: receptor fluid >> dermis >> epidermis >> stratum corneum. A progressive increase and retention dependence were observed based on the amount applied in the donor compartment, and large retention mainly on the receptor fluid and dermis was observed, in accordance with the physicochemical characteristics of Log P, affinity to the hydrophilic and lipophilic environment, size and molecular weight of 1-nitro-2-phenylethane and methyleugenol. In conclusion, the method proposed by HS-SPME-GC-FID to quantify the major compounds of A. canelilla essential oil in porcine ear skin and receptor fluid samples was selective, accurate, precise and adequate, and can be used in future analyzes.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Previamente, foi demonstrado que o tratamento via intravenosa com 1-nitro-2-feniletano (NFE) induziu hipotensÃo que resulta principalmente de sua aÃÃo vasodilatadora diretamente sobre o mÃsculo liso. Nesse estudo, estudamos o mecanismo subjacente ao efeito miorrelaxante do NFE em tecidos vasculares isolados de ratos. Registros isomÃtricos foram obtidos a partir de anÃis isolados de artÃria aorta e do segundo ramo da mesentÃrica de ratos atravÃs de sistema de aquisiÃÃo de dados. Experimentos in silico (docking) de simulaÃÃo da formaÃÃo de complexos entre o NFE e a enzima guanilato ciclase foram realizados. Em preparaÃÃes de aorta isolada com endotÃlio intacto, NFE (1-300 &#61549;g/mL) relaxou a contraÃÃo induzida por fenilefrina ou K+, com valores de CI50 de 35,0 [23,3â52,6] e 73,2 [39,5â134,3] &#61549;g/mL, respectivamente. Os efeitos vasorrelaxantes do NFE foram significativamente (P < 0,05, teste de Mann-Whitney) reduzidos pelo tratamento prÃvio com ODQ (10 ÂM), azul de metileno (10 ÂM), TEA (5 mM), glibenclamida (10 ÂM) ou 4-aminopiridina (1 mM), mas nÃo pela remoÃÃo do endotÃlio vascular ou pelo prÃ-tratamento com L-NAME (100 &#956;M), indometacina (10 &#956;M), MDL-12.330A (3 &#956;M), KT5823 (0.5 ÂM) ou KT5720 (1 &#956;M). A potÃncia do NFE para induzir efeito vasorrelaxante foi significantemente maior (p < 0,01, teste de Mann-Whitney) nas preparaÃÃes de artÃria mesentÃrica quando comparado à aorta, tanto nas contraÃÃes induzidas por K+ como por noradrenalina com valores de CI50 de 5,3 [2,6â10,5] e 6,5 [2,8â14,9] Âg/mL, respectivamente. Em um meio sem cÃlcio, na presenÃa de K+ 60 mM ou fenilefrina 1 ÂM, as contraÃÃes induzidas CaCl2 foram significativamente reduzidas e atà mesmo abolidas pelo NFE na concentraÃÃo de 100 Âg/mL, respectivamente. Em meio sem cÃlcio, contendo EGTA, a resposta contrÃtil da fenilefrina foi significantemente reduzida pelo NFE (100 Âg/mL ), efeito impedido pelo tratamento com ODQ (10 ÂM), enquanto nÃo teve efeito significativo sobre as contraÃÃes induzidas por cafeÃna. Resultados semelhantes foram obtidos com nitroprussiato de sÃdio. NFE tambÃm foi capaz de inibir a contraÃÃo induzida pela entrada capacitativa de cÃlcio e pelo Ãster de forbol. AlÃm disso, os resultados de docking revelam que existem clusters de provÃveis interaÃÃes do NFE com a enzima guanilato ciclase. O presente estudo sugere que a atividade vasorrelaxante do NFE em aorta de rato à causada por provÃvel estimulaÃÃo da guanilato ciclase e consequente ativaÃÃo da cascata enzimÃtica guanilato ciclase/GMPc/canais de K+. / It was early shown that intravenous treatment with 1-nitro-2-phenylethane (NPE) induced hypotension resulting mainly from its direct vasodilatory action on vascular smooth muscle. Here, it was sudied the underlying mechanism involved in the vasorelaxant effect of NPE in isolated rings of rat arteries. Isometric recordings were obtained from rings made from aorta or mesenteric artery using a digital acquisition system. Experiments in silico (docking) for simulation of molecular interactions between NPE and the enzyme guanylate cyclase were performed. In endothelium-intact aortic preparations, NPE (1-300 &#61549;g/mL) relaxed the phenylephrine or K+-induced contractions with IC50 values of 35.0 [23.3- 52.6] and 73.2 [39.5-134.3] &#61549;g/mL, respectively. Vasorelaxant effects of NPE were significantly (P <0.05, Mann-Whitney test) decreased by pretreatment with ODQ (10 ÂM), methylene blue (10 ÂM), TEA (5 mM), glibenclamide (10 ÂM) or 4-aminopyridine (1 mM) but not by vascular endothelium removal or by pretreatment with L-NAME (100 ÂM), indomethacin (10 ÂM), MDL-12.330A (3 ÂM), KT5823 (0.5 ÂM ) or KT5720 (1 ÂM). Pharmacological potency of NPE was significantly greater (p <0.01, Mann-Whitney test) in preparations of mesenteric artery compared to that of aorta, as in K+- and norepinephrine-induced contraction with IC50 values of 5.3 [2.6-10.5] and 6.5 [2.8-14.9] &#61549;g/mL, respectively. In calcium-free medium, in presence of K+ 60 mM or phenylephrine 1 &#956;M, the CaCl2-induced contractions were significantly reduced and almost abolished by NPE at 100 &#956;g/mL, respectively. In calcium-free medium, containing EGTA, the contractile response of phenylephrine was significantly reduced by NPE (100 &#61549;g/mL), an effect prevented by treatment with ODQ (10 ÂM), whereas NPE was deprived of any significant effect on caffeine-induced contractions. Similar results were obtained with sodium nitroprusside. NPE also inhibited the contractions induced by the capacitive calcium entry or by phorbol ester. In addition, docking results revealed clusters of interactions of NPE with the guanylate cyclase molecule. The present study suggests that vasorelaxant activity of NPE on rat aorta is due to its stimulatory properties on guanylate cyclase, which activates the guanylate cyclase/cGMP/K+ channels pathway.