Compreender a função das diferentes proteínas e citocinas durante a vigência de alterações inflamatórias pode contribuir para um melhor conhecimento do sistema imunológico dos mamíferos marinhos e sua relação com os processos patológicos. A toninha, Pontoporia blainvillei, é um cetáceo costeiro e o único golfinho brasileiro considerado ameaçado de extinção devido às atividades antrópicas. O objetivo desse trabalho foi avaliar as imunoexpressões das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e proteínas S-100 e lisozima em amostras pulmonares e esplênicas de 34 espécimes de P. blainvillei. Com base nas alterações histopatológicas, os animais foram divididos em dois grupos: G1 (n = 8) - animais sem doença inflamatória pulmonar; G2 (n = 26) - animais com doenças inflamatórias pulmonares. Os fragmentos de pulmão e baço foram processados de acordo com os protocolos de rotina. A padronização das reações de imuno-histoquímica e análise morfométrica foram realizadas conforme procedimentos descritos na literatura. Os nossos dados demonstram que as P. blainvillei pertencentes ao G2 apresentam imunoexpressão pulmonar das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e proteínas S-100 e lisozima significativamente maior que os animais do G1. Tais resultados corroboram os dados disponíveis na literatura, indicando que a P. blainvillei apresenta citocinas com funções semelhantes às encontradas em outros mamíferos.Evidenciamos também, que as P. blainvillei pertencentes ao G2 não apresentam imunoexpressão esplênica das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e da proteína lisozima significativamente maior que os animais do G1. Estudos mais detalhados, incluindo aqueles relacionados com os métodos utilizados, são necessários para a adequada compreensão destes resultados. E finalmente, apesar de tratar-se de dados ainda preliminares, observou-se uma possível associação entre elevadas concentrações de organoclorados no tecido adiposo subcutâneo de parcela dos exemplares de P. blainvillei estudados na presente investigação e a ocorrência de depleção linfóide esplênica nestes animais. Tais dados ratificam a importância do desenvolvimento de análise mais detalhada sobre estes tópicos em futuras investigações científicas. / The understanding of the role of different proteins and cytokines during the inflammatory diseases could lead to better knowledge of the marine mammal immune system and its relation to pathological process. Franciscana dolphin, Pontoporia blainvillei, is a coastal cetacean and the only Brazilian dolphin considered threatened with extinction, due to the human activities. The aim of the current study was to investigate the immunoexpression of TGF-β, TNF-α and IL-12 cytokines, and S-100 and Lysozyme proteins in pulmonary and splenic samples of 34 Pontoporia blainvillei. Based on histopathological examination, the animals were divided in two groups: G1 (n = 8) animals without pulmonary inflammatory disease; G2 (n = 26) animals with pulmonary inflammatory diseases. Fragments of lung and spleen were processed according to routine protocols. The immunohistochemistry and morphometric procedures were tested and optimized according to proceedings described in literature. Our results showed that P. blainvillei from G2 presented significant increase in the pulmonary immunoexpression of TGF-β, TNF-α and IL-12 cytokines, and S-100 and Lysozyme proteins in comparison with animals from G1. These results are according to the literature and suggest that P. blainvillei presents same cytokines observed in other mammals. We evidenced also that the P. blainvillei belonging to the G2 did not show splenic immunoexpression to TGF-β, TNF-α and IL- 12 cytokines and Lysozyme protein significantly higher than animals from G1. Further studies, including those related to the methods used, are necessary for the proper understanding of these results. And finally, although these are still preliminary data, we observed a possible association between high concentrations of organochlorines in subcutaneous adipose tissue of a portion of P. blainvillei studied in this research and the occurrence of splenic lymphoid depletion in these animals. These data confirm the importance of developing more detailed analysis on these topics in future scientific investigations.

Compreender a função das diferentes proteínas e citocinas durante a vigência de alterações inflamatórias pode contribuir para um melhor conhecimento do sistema imunológico dos mamíferos marinhos e sua relação com os processos patológicos. A toninha, Pontoporia blainvillei, é um cetáceo costeiro e o único golfinho brasileiro considerado ameaçado de extinção devido às atividades antrópicas. O objetivo desse trabalho foi avaliar as imunoexpressões das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e proteínas S-100 e lisozima em amostras pulmonares e esplênicas de 34 espécimes de P. blainvillei. Com base nas alterações histopatológicas, os animais foram divididos em dois grupos: G1 (n = 8) - animais sem doença inflamatória pulmonar; G2 (n = 26) - animais com doenças inflamatórias pulmonares. Os fragmentos de pulmão e baço foram processados de acordo com os protocolos de rotina. A padronização das reações de imuno-histoquímica e análise morfométrica foram realizadas conforme procedimentos descritos na literatura. Os nossos dados demonstram que as P. blainvillei pertencentes ao G2 apresentam imunoexpressão pulmonar das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e proteínas S-100 e lisozima significativamente maior que os animais do G1. Tais resultados corroboram os dados disponíveis na literatura, indicando que a P. blainvillei apresenta citocinas com funções semelhantes às encontradas em outros mamíferos.Evidenciamos também, que as P. blainvillei pertencentes ao G2 não apresentam imunoexpressão esplênica das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e da proteína lisozima significativamente maior que os animais do G1. Estudos mais detalhados, incluindo aqueles relacionados com os métodos utilizados, são necessários para a adequada compreensão destes resultados. E finalmente, apesar de tratar-se de dados ainda preliminares, observou-se uma possível associação entre elevadas concentrações de organoclorados no tecido adiposo subcutâneo de parcela dos exemplares de P. blainvillei estudados na presente investigação e a ocorrência de depleção linfóide esplênica nestes animais. Tais dados ratificam a importância do desenvolvimento de análise mais detalhada sobre estes tópicos em futuras investigações científicas. / The understanding of the role of different proteins and cytokines during the inflammatory diseases could lead to better knowledge of the marine mammal immune system and its relation to pathological process. Franciscana dolphin, Pontoporia blainvillei, is a coastal cetacean and the only Brazilian dolphin considered threatened with extinction, due to the human activities. The aim of the current study was to investigate the immunoexpression of TGF-β, TNF-α and IL-12 cytokines, and S-100 and Lysozyme proteins in pulmonary and splenic samples of 34 Pontoporia blainvillei. Based on histopathological examination, the animals were divided in two groups: G1 (n = 8) animals without pulmonary inflammatory disease; G2 (n = 26) animals with pulmonary inflammatory diseases. Fragments of lung and spleen were processed according to routine protocols. The immunohistochemistry and morphometric procedures were tested and optimized according to proceedings described in literature. Our results showed that P. blainvillei from G2 presented significant increase in the pulmonary immunoexpression of TGF-β, TNF-α and IL-12 cytokines, and S-100 and Lysozyme proteins in comparison with animals from G1. These results are according to the literature and suggest that P. blainvillei presents same cytokines observed in other mammals. We evidenced also that the P. blainvillei belonging to the G2 did not show splenic immunoexpression to TGF-β, TNF-α and IL- 12 cytokines and Lysozyme protein significantly higher than animals from G1. Further studies, including those related to the methods used, are necessary for the proper understanding of these results. And finally, although these are still preliminary data, we observed a possible association between high concentrations of organochlorines in subcutaneous adipose tissue of a portion of P. blainvillei studied in this research and the occurrence of splenic lymphoid depletion in these animals. These data confirm the importance of developing more detailed analysis on these topics in future scientific investigations.

Introdução e Objetivo: A invasão de nervos pelo carcinoma da próstata, em biópsias por agulha, pode ser um preditor independente de extensão extra-prostática e pode influenciar no manejo cirúrgico. Nervos são, algumas vezes, difíceis de serem visualizados em biópsias por agulha da próstata coradas pela técnica da hematoxilina e eosina. É possível que, utilizando-se a técnica da imuno-histoquímica com o anticorpo para a proteína S-100, os nervos e a invasão de nervos sejam mais facilmente detectados, reduzindo-se a quantidade de falso-negativos. Material e Método: Foram examinados 101 exames de biópsias por agulha, correspondendo a setenta pacientes, com carcinoma da próstata, através de lâminas coradas pela técnica da hematoxilina e eosina, selecionados a partir de 500 exames consecutivos. Obtiveram-se novos cortes dos mesmos blocos de parafina que foram corados pela técnica imuno-histoquímica, utilizando o anticorpo policlonal para a proteína S-100. O número total de nervos, o número de nervos invadidos pelo carcinoma da próstata, o número de nervos por área de tecido, o número de nervos invadidos por área de carcinoma e o diâmetro dos nervos invadidos pelo carcinoma foram determinados por dois investigadores, nas duas técnicas de coloração. Resultados: Dos 70 pacientes avaliados 31 (44,3%) apresentaram invasão de nervo pelo carcinoma no HE e 43 (61,4%) apresentaram invasão de nervo com a técnica imunohistoquímica da proteína S-100 (p<0,001). Na área de carcinoma foram detectados mais nervos invadidos no S-100 do que no HE (p<0,001). O diâmetro do menor nervo invadido pelo carcinoma foi menor no S-100 do que no HE (p=0,007). Conclusão: A coloração com a técnica imuno-histoquímica com o anticorpo para a proteína S-100 aumenta a sensibilidade para reconhecer nervos em material de punção-biópsia da próstata por agulha. Também, com o S-100 se reconhecem mais invasões de nervos pelo carcinoma da próstata, as quais não eram visualizadas quando coradas com o HE. Desta forma reduziu-se a quantidade de casos falso-negativos e demonstrou-se que o exame criterioso de espécimes corados com o HE não é suficiente para detectar todas as invasões de nervos pelo carcinoma da próstata. / Background: The identification of perineural invasion in prostate needle biopsies may be an independent predictor of extraprostatic extension of prostatic carcinoma and may also affect surgical management. Nerves are often difficult to recognize on hematoxylin and eosin stained prostate needle biopsies. Perhaps using an immunohistochemical stain for S-100 protein, nerves and the presence of perineural invasion, may be more easily detected. Methods: We examined 101 (70 patients) cases of prostatic carcinoma by routine HE stain to determine perineural invasion and nerves. Step sections were immunostained for S- 100 protein (polyclonal antibody). The total nunmber of nerves, the number of nerves showing perineural invasion, the number of nerves per square millimeter of tissue, the number of nerves showing perineural invasion per square millimeter of prostatic carcinoma and the diameter of perineural invasion were determined by two investigators on the HE and S-100 stained prostate needle biopsies. Results: Among the 70 patients, perineural invasion was detected in 31 (44,3%) patients on HE stained sections and in 43 (61,4%) on S-100 stained sections (p<0,001). The prostate needle biopsies on median showed more perineural invasion on S-100 stained than on HE (P<0,001). The minimum diameter of perineural invasion was smaller on S-100 stained than on HE (p=0,007). Conclusions: S-100 staining increases the sensivity with which nerves are recognized in prostate needle biopsies. More significantly, S-100 staining reveals perineural invasion by prostatic carcinoma that is often unrecognized in HE stained sections. These results support that careful examination of routine HE-stained specimens is not sufficient to detect all important nerve invasion.

Introdução e Objetivo: A invasão de nervos pelo carcinoma da próstata, em biópsias por agulha, pode ser um preditor independente de extensão extra-prostática e pode influenciar no manejo cirúrgico. Nervos são, algumas vezes, difíceis de serem visualizados em biópsias por agulha da próstata coradas pela técnica da hematoxilina e eosina. É possível que, utilizando-se a técnica da imuno-histoquímica com o anticorpo para a proteína S-100, os nervos e a invasão de nervos sejam mais facilmente detectados, reduzindo-se a quantidade de falso-negativos. Material e Método: Foram examinados 101 exames de biópsias por agulha, correspondendo a setenta pacientes, com carcinoma da próstata, através de lâminas coradas pela técnica da hematoxilina e eosina, selecionados a partir de 500 exames consecutivos. Obtiveram-se novos cortes dos mesmos blocos de parafina que foram corados pela técnica imuno-histoquímica, utilizando o anticorpo policlonal para a proteína S-100. O número total de nervos, o número de nervos invadidos pelo carcinoma da próstata, o número de nervos por área de tecido, o número de nervos invadidos por área de carcinoma e o diâmetro dos nervos invadidos pelo carcinoma foram determinados por dois investigadores, nas duas técnicas de coloração. Resultados: Dos 70 pacientes avaliados 31 (44,3%) apresentaram invasão de nervo pelo carcinoma no HE e 43 (61,4%) apresentaram invasão de nervo com a técnica imunohistoquímica da proteína S-100 (p<0,001). Na área de carcinoma foram detectados mais nervos invadidos no S-100 do que no HE (p<0,001). O diâmetro do menor nervo invadido pelo carcinoma foi menor no S-100 do que no HE (p=0,007). Conclusão: A coloração com a técnica imuno-histoquímica com o anticorpo para a proteína S-100 aumenta a sensibilidade para reconhecer nervos em material de punção-biópsia da próstata por agulha. Também, com o S-100 se reconhecem mais invasões de nervos pelo carcinoma da próstata, as quais não eram visualizadas quando coradas com o HE. Desta forma reduziu-se a quantidade de casos falso-negativos e demonstrou-se que o exame criterioso de espécimes corados com o HE não é suficiente para detectar todas as invasões de nervos pelo carcinoma da próstata. / Background: The identification of perineural invasion in prostate needle biopsies may be an independent predictor of extraprostatic extension of prostatic carcinoma and may also affect surgical management. Nerves are often difficult to recognize on hematoxylin and eosin stained prostate needle biopsies. Perhaps using an immunohistochemical stain for S-100 protein, nerves and the presence of perineural invasion, may be more easily detected. Methods: We examined 101 (70 patients) cases of prostatic carcinoma by routine HE stain to determine perineural invasion and nerves. Step sections were immunostained for S- 100 protein (polyclonal antibody). The total nunmber of nerves, the number of nerves showing perineural invasion, the number of nerves per square millimeter of tissue, the number of nerves showing perineural invasion per square millimeter of prostatic carcinoma and the diameter of perineural invasion were determined by two investigators on the HE and S-100 stained prostate needle biopsies. Results: Among the 70 patients, perineural invasion was detected in 31 (44,3%) patients on HE stained sections and in 43 (61,4%) on S-100 stained sections (p<0,001). The prostate needle biopsies on median showed more perineural invasion on S-100 stained than on HE (P<0,001). The minimum diameter of perineural invasion was smaller on S-100 stained than on HE (p=0,007). Conclusions: S-100 staining increases the sensivity with which nerves are recognized in prostate needle biopsies. More significantly, S-100 staining reveals perineural invasion by prostatic carcinoma that is often unrecognized in HE stained sections. These results support that careful examination of routine HE-stained specimens is not sufficient to detect all important nerve invasion.

Introdução e Objetivo: A invasão de nervos pelo carcinoma da próstata, em biópsias por agulha, pode ser um preditor independente de extensão extra-prostática e pode influenciar no manejo cirúrgico. Nervos são, algumas vezes, difíceis de serem visualizados em biópsias por agulha da próstata coradas pela técnica da hematoxilina e eosina. É possível que, utilizando-se a técnica da imuno-histoquímica com o anticorpo para a proteína S-100, os nervos e a invasão de nervos sejam mais facilmente detectados, reduzindo-se a quantidade de falso-negativos. Material e Método: Foram examinados 101 exames de biópsias por agulha, correspondendo a setenta pacientes, com carcinoma da próstata, através de lâminas coradas pela técnica da hematoxilina e eosina, selecionados a partir de 500 exames consecutivos. Obtiveram-se novos cortes dos mesmos blocos de parafina que foram corados pela técnica imuno-histoquímica, utilizando o anticorpo policlonal para a proteína S-100. O número total de nervos, o número de nervos invadidos pelo carcinoma da próstata, o número de nervos por área de tecido, o número de nervos invadidos por área de carcinoma e o diâmetro dos nervos invadidos pelo carcinoma foram determinados por dois investigadores, nas duas técnicas de coloração. Resultados: Dos 70 pacientes avaliados 31 (44,3%) apresentaram invasão de nervo pelo carcinoma no HE e 43 (61,4%) apresentaram invasão de nervo com a técnica imunohistoquímica da proteína S-100 (p<0,001). Na área de carcinoma foram detectados mais nervos invadidos no S-100 do que no HE (p<0,001). O diâmetro do menor nervo invadido pelo carcinoma foi menor no S-100 do que no HE (p=0,007). Conclusão: A coloração com a técnica imuno-histoquímica com o anticorpo para a proteína S-100 aumenta a sensibilidade para reconhecer nervos em material de punção-biópsia da próstata por agulha. Também, com o S-100 se reconhecem mais invasões de nervos pelo carcinoma da próstata, as quais não eram visualizadas quando coradas com o HE. Desta forma reduziu-se a quantidade de casos falso-negativos e demonstrou-se que o exame criterioso de espécimes corados com o HE não é suficiente para detectar todas as invasões de nervos pelo carcinoma da próstata. / Background: The identification of perineural invasion in prostate needle biopsies may be an independent predictor of extraprostatic extension of prostatic carcinoma and may also affect surgical management. Nerves are often difficult to recognize on hematoxylin and eosin stained prostate needle biopsies. Perhaps using an immunohistochemical stain for S-100 protein, nerves and the presence of perineural invasion, may be more easily detected. Methods: We examined 101 (70 patients) cases of prostatic carcinoma by routine HE stain to determine perineural invasion and nerves. Step sections were immunostained for S- 100 protein (polyclonal antibody). The total nunmber of nerves, the number of nerves showing perineural invasion, the number of nerves per square millimeter of tissue, the number of nerves showing perineural invasion per square millimeter of prostatic carcinoma and the diameter of perineural invasion were determined by two investigators on the HE and S-100 stained prostate needle biopsies. Results: Among the 70 patients, perineural invasion was detected in 31 (44,3%) patients on HE stained sections and in 43 (61,4%) on S-100 stained sections (p<0,001). The prostate needle biopsies on median showed more perineural invasion on S-100 stained than on HE (P<0,001). The minimum diameter of perineural invasion was smaller on S-100 stained than on HE (p=0,007). Conclusions: S-100 staining increases the sensivity with which nerves are recognized in prostate needle biopsies. More significantly, S-100 staining reveals perineural invasion by prostatic carcinoma that is often unrecognized in HE stained sections. These results support that careful examination of routine HE-stained specimens is not sufficient to detect all important nerve invasion.

1 Abstract Introduction Autologous transplants of the cartilage tissue from the pinna is commonly used in reconstructive surgery of the nasal skeleton. The present study used animal models to elucidate responses of the auricular cartilage to its damage or transplantation to ectopic sites. Histomorphological analysis of changes observed in auricular cartilage including immunohistochemical study of different isoforms of actin and S-100 proteins was performed. Human articular cartilage prepared by in vitro cultivation using artificial scaffolds was also studied after its transplantation. Aims of the study The aim was to study histological changes and expression of chondrocytic markers (α- SMA and S-100 proteins) in intact, artificially traumatised, or in a human auricular cartilage cultivated in culture medium. An attempt to grow human auricular cartilage chondrocytes implanted in vitro into various types of three dimensional scaffolds aimed at testing chondrocyte survival and phenotype both in the culture and after transplantation to immunodeficient mice. A human auricular cartilage transplanted into the nasal skeleton of patients during a reconstruction surgery should be submitted to a histomorphological examination. Research assumed also comparison of the auricular cartilage responses to a damage,...

1 Abstract Introduction Autologous transplants of the cartilage tissue from the pinna is commonly used in reconstructive surgery of the nasal skeleton. The present study used animal models to elucidate responses of the auricular cartilage to its damage or transplantation to ectopic sites. Histomorphological analysis of changes observed in auricular cartilage including immunohistochemical study of different isoforms of actin and S-100 proteins was performed. Human articular cartilage prepared by in vitro cultivation using artificial scaffolds was also studied after its transplantation. Aims of the study The aim was to study histological changes and expression of chondrocytic markers (α- SMA and S-100 proteins) in intact, artificially traumatised, or in a human auricular cartilage cultivated in culture medium. An attempt to grow human auricular cartilage chondrocytes implanted in vitro into various types of three dimensional scaffolds aimed at testing chondrocyte survival and phenotype both in the culture and after transplantation to immunodeficient mice. A human auricular cartilage transplanted into the nasal skeleton of patients during a reconstruction surgery should be submitted to a histomorphological examination. Research assumed also comparison of the auricular cartilage responses to a damage,...