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Análise dos genes mitocondriais COI e 16S de populações de Chrysoperla externa (Hagen, 1861) (Neuroptera: Chrysopidae) de diferentes localidades geográficasBaggio, Mariah Valente [UNESP] 24 February 2010 (has links) (PDF)
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baggio_mv_me_jabo.pdf: 512063 bytes, checksum: 11244a431e6c0f8cc5195b1c7d20e1bd (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Chrysoperla externa é uma espécie de crisopídeo encontrada em diversos agroecossistemas brasileiros, capaz de se alimentar de diferentes pragas agrícolas. Em cada ambiente em que for encontrada poderá sofrer diferentes pressões seletivas do ambiente. Para a verificação das mutações genéticas presentes nas populações de C. externa podem ser usados marcadores moleculares, em especial os genes mitocondriais, que são de fácil manipulação. C. externa é de fácil criação e a mais estudada para multiplicação massal, por isso se faz necessário estudar a resposta das populações quando liberadas em ambientes diferentes, visto que estas podem não sobreviver em áreas biogeográficas distintas, inviabilizando o seu papel como agente de controle de pragas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar geneticamente as populações de C. externa nos municípios de Brotas (SP), Jaboticabal (SP), Rifaina (SP), São Carlos (SP), São José dos Campos (SP) e São Sebastião do Paraíso (MG). Para o gene COI foram verificados oito haplótipos, seis mutações e a maior diversidade haplotípica foi encontrada em Brotas e São Sebastião do Paraíso. Para o gene 16S foram observadas quatro mutações, seis haplótipos e a maior diversidade haplotípica ocorreu no município de São Sebastião do Paraíso. A distância genética encontrada entre as populações de C. externa não foi significativa para os dois genes analisados, evidenciando que provavelmente as populações são geneticamente compatíveis. O estudo da estrutura genética dessas populações de C. externa, de ambos os genes, mostrou que essas populações não apresentam um padrão de distribuição haplotípica. Então, talvez sejam necessários outros estudos com populações desta espécie oriundas de localidades mais distantes geograficamente dos que as utilizadas neste trabalho / Chrysoperla externa is a species of green lacewing found in several Brazilian agroecosystems able to feed on various agricultural pests. In each environment that is found may experience different environmental selective pressures. In order to verify genetic mutations in C. externa populations it may be used molecular markers, in particular mitochondrial genes, which are easy handling and extraction. C. externa is easy to create and the most studied for mass multiplication, so it is necessary to study on the response of populations when released in different environments, since they may not survive in different biogeographic areas, derailing its role as a pest controller. The objective of this study was to characterize genetically the populations of C. externa from the cities of Brotas (SP), Jaboticabal (SP), Rifaina (SP), São Carlos (SP), São José dos Campos (SP) and São Sebastião do Paraíso (MG). For the COI gene it was found eight haplotypes, six mutations and greater haplotype diversity in Brotas and São Sebastião do Paraíso. In the 16S there were four mutations, six haplotypes and haplotype diversity was higher in São Sebastião do Paraíso. The genetic distance among populations of C. externa was not significant for the two genes analyzed, showing that the populations are probably genetically compatible. The study of the genetic structure of populations of C. externa, showed for both genes that these populations do not show a pattern of haplotype distribution. So, it may need further study on populations of this species originating from geographically more distant locations of those used in this work
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Análise dos genes mitocondriais COI e 16S de populações de Chrysoperla externa (Hagen, 1861) (Neuroptera: Chrysopidae) de diferentes localidades geográficas /Baggio, Mariah Valente. January 2010 (has links)
Orientador: Sérgio de Freitas / Banca: Nilza Maria Martinelli / Banca: Karina Lucas da Silva Brandão / Resumo: Chrysoperla externa é uma espécie de crisopídeo encontrada em diversos agroecossistemas brasileiros, capaz de se alimentar de diferentes pragas agrícolas. Em cada ambiente em que for encontrada poderá sofrer diferentes pressões seletivas do ambiente. Para a verificação das mutações genéticas presentes nas populações de C. externa podem ser usados marcadores moleculares, em especial os genes mitocondriais, que são de fácil manipulação. C. externa é de fácil criação e a mais estudada para multiplicação massal, por isso se faz necessário estudar a resposta das populações quando liberadas em ambientes diferentes, visto que estas podem não sobreviver em áreas biogeográficas distintas, inviabilizando o seu papel como agente de controle de pragas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar geneticamente as populações de C. externa nos municípios de Brotas (SP), Jaboticabal (SP), Rifaina (SP), São Carlos (SP), São José dos Campos (SP) e São Sebastião do Paraíso (MG). Para o gene COI foram verificados oito haplótipos, seis mutações e a maior diversidade haplotípica foi encontrada em Brotas e São Sebastião do Paraíso. Para o gene 16S foram observadas quatro mutações, seis haplótipos e a maior diversidade haplotípica ocorreu no município de São Sebastião do Paraíso. A distância genética encontrada entre as populações de C. externa não foi significativa para os dois genes analisados, evidenciando que provavelmente as populações são geneticamente compatíveis. O estudo da estrutura genética dessas populações de C. externa, de ambos os genes, mostrou que essas populações não apresentam um padrão de distribuição haplotípica. Então, talvez sejam necessários outros estudos com populações desta espécie oriundas de localidades mais distantes geograficamente dos que as utilizadas neste trabalho / Abstract: Chrysoperla externa is a species of green lacewing found in several Brazilian agroecosystems able to feed on various agricultural pests. In each environment that is found may experience different environmental selective pressures. In order to verify genetic mutations in C. externa populations it may be used molecular markers, in particular mitochondrial genes, which are easy handling and extraction. C. externa is easy to create and the most studied for mass multiplication, so it is necessary to study on the response of populations when released in different environments, since they may not survive in different biogeographic areas, derailing its role as a pest controller. The objective of this study was to characterize genetically the populations of C. externa from the cities of Brotas (SP), Jaboticabal (SP), Rifaina (SP), São Carlos (SP), São José dos Campos (SP) and São Sebastião do Paraíso (MG). For the COI gene it was found eight haplotypes, six mutations and greater haplotype diversity in Brotas and São Sebastião do Paraíso. In the 16S there were four mutations, six haplotypes and haplotype diversity was higher in São Sebastião do Paraíso. The genetic distance among populations of C. externa was not significant for the two genes analyzed, showing that the populations are probably genetically compatible. The study of the genetic structure of populations of C. externa, showed for both genes that these populations do not show a pattern of haplotype distribution. So, it may need further study on populations of this species originating from geographically more distant locations of those used in this work / Mestre
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Systematics of southern African Anostostomatidae (Orthoptera) based on morphological and molecular dataBrettschneider, Helene 22 June 2006 (has links)
The eight southern African King Cricket genera, namely Bochus, Borborothis, Henicus, Libanasa, Libanasidus, Nasidius, Onosandridus, and Onosandrus are redescribed from type and museum material and a key to the genera is provided. Additionally, the status of Libanasidus impicta is investigated and species characteristics confirmed. A key to the two Libanasidus species is also provided. No morphological support for these eight southern African anostostomatid genera was attained with cladistic analysis, despite the incorporation of taxonomically important characters. High levels of homoplasy and possible incorrect species placement, resulting in character ambiguity within genera, renders many of the diagnostic characters of this group ineffective for resolving generic relationships. Genetic data based on the large ribosomal subunit (16S) did provide phylogenetic resolution between six of the genera with good bootstrap support. This confirmed speculation by previous authors as to the ancestral nature of Bochus and Borborothis to other genera within the Anostostomatini tribe, as well as the placement of Libanasa within a separate tribe, the Lutosini. The recent merge of the genus Platysiagon with Libanasa is also provisionally supported. Close association was obtained between Libanasidus and Nasidius with Onosandrus being more related to Bochus and Borborothis, supported by the lack of sexual dimorphism in Onosandrus and Borborothis. The phylogenetic position of the genera Henicus and Onosandridus remains unresolved. It is suggested that the designation of the eight anostostomatid genera in southern Africa are valid, but that species placement within these genera need to be revised to resolve character conflict. Focusing on the genetic and morphometric structuring within the famous Parktown Prawn, Libanasidus vittatus from southern Africa consistently suggests two main population assemblages. These correspond to a large North-South ranging population including individuals west of the prominent escarpment, and a smaller population including individuals from the eastern side of the escarpment. COI sequence data recovers two clades representing these two populations with good bootstrap support in likelihood, parsimony, Bayesian and distance analyses. Genetic divergence between the two clades averaged 3.3%, while population parameters estimated using maximum likelihood methods show low migration rates corresponding to less that one female migration per generation. A priori morphometric analyses including PCA&clustering methods show no biologically meaningful variation, suggesting that the two clades recovered represent cryptic sibling species. Inferring a molecular clock of 2% divergence per million years used for sister taxa, signifies isolation of the eastern population at 1.65 mya. A posteriori morphometric analyses confirmed the genetic results, based on 11 size-related measurements. This study provides a starting point for further work on the taxonomy, behaviour and ecology of these fascinating insects. Cytogenetics, multiple genetic loci and geometric morphometrics will provide useful insight into the taxonomic status of the 51 anostostomatid species in southern Africa and is promoted for further studies. / Dissertation (MSc Entomology)--University of Pretoria, 2006. / Zoology and Entomology / unrestricted
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Ferramentas auxiliares na identificação de espécies de abelhas Meliponini, com ênfase no gênero Schwarziana (Lepeletier, 1836) / Auxiliar tools for Meliponini bees identification, emphasizing the genus SchwarzianaSilva, Raphael Antonio de Oliveira 27 August 2010 (has links)
As abelhas sem ferrão estão entre os animais mais importantes para o equilíbrio do meio ambiente, isso devido a fatores como sua enorme diversidade e principalmente por serem importantes polinizadores tanto de ecossistemas naturais como de agroecossistemas. A necessidade de identificação dos animais amostrados por especialistas é fundamental para estudos ecológicos. Neste trabalho foram feitas análises interespecíficas e intra-populacionais sobre os indivíduos do gênero Schwarziana a fim de aperfeiçoar a utilização da técnica de morfometria geométrica, que nos permite identificações baseadas apenas nos padrões de venação das asas desses insetos. Não obstante, foram realizadas também análises de sequenciamento de dois genes do DNA mitocondrial, o COI e o 16S. O gênero estudado foi Schwarziana, com duas espécies válidas, S. quadripunctata e S. mourei. Nas análises morfométricas, os testes realizados por indivíduos os testes de validação cruzada identificaram de forma correta 70% das amostras de um total de 10 localidades diferentes. Esta acurácia aumenta ainda mais à medida que novos grupos são formados, alcançando próximo de 85% quando separadas por regiões. Em todos os ensaios realizados com a morfometria geométrica (partial warps e coordenadas alinhadas) atingiu-se uma taxa de 100% de identificação correta entre as duas espécies e nos ensaios feitos com as médias das colônias esta taxa também foi atingida para a identificação de todas as populações amostradas. Os testes feitos com os partial warps mostraram-se mais eficazes em relação às coordenadas alinhadas, já que nestes últimos a tolerância mínima para a separação dos grupos não foi atingida em alguns ensaios. As análises moleculares apontaram 53 sítios polimórficos para o gene COI, com um índice de diversidade nucleotídica de 0,02180 e de diversidade haplotípica de 0,8854, separando as amostras em 9 haplótipos, porém a rede de haplótipos não foi suficientemente conclusiva. A diferenciação genética total medida pelo parâmetro Fst somente para as populações de S. quadripunctata foi de 0.9453 (P<0,05). Já para o gene 16S foram encontrados 14 sítios polimórfico e um índice de diversidade nucleotídica de 0,00649 e de diversidade haplotípica de 0,8419, com 7 haplótipos gerados. O parâmetro Fst para todas amostras foi de 0.9552 (P<0,05) e somente para as de S. quadripunctata foi de 0.8736 (P<0,05). Para ambos os genes os testes Fst par-a-par mostraram uma maior variação entre as populações dos estados, mostrando que estas populações estão estruturadas. Os testes de Mantel correlacionaram positivamente os dados morfométricos, geográficos e moleculares. Das duas metodologias aplicadas em nossa pesquisa, podemos afirmar que a morfometria mostrou-se extremamente eficiente na diferenciação das populações amostradas. As análises moleculares indicaram que estas populações estão estruturadas mesmo analisando poucas amostras. No entanto ao unirmos estas duas metodologias, combinamos a simplicidade e a rapidez da morfometria geométrica com a capacidade sempre inovadora de estudos moleculares, obtendo desta forma ferramentas eficazes para acessar a biodiversidade em Meliponini, inclusive para rastrear geograficamente espécimes a partir de estudos com indivíduos de sua área de distibuição natural. / Stingless bees are among the most important animals to the environmental balance, that due to their diversity and mainly because they are important pollinators of both natural and agro-ecosystems. The need for identification of sampled animals by experts is essential for ecological studies. In this work, intra and interspecific population analysis was performed in order to improve the technique of geometric morphometry, which allows us to access this biodiversity through identifications based on patterns of wing venation of these insects. We also sequenced two mitochondrial genes, the COI and 16S. Schwarziana Lepeletier 1836 was the gender studied with two valid species, S. quadripunctata and S. mourei. In morphometric analysis, cross-validation tests carried out by individuals correctly identified 70% of samples from a total of 10 different locations. This accuracy increases further as new groups are formed, according to geographic proximity, reaching around 85% when separated by regions. In all tests with geometric morphometry (partial warps and aligned coordinates) reached a rate of 100% correct identification between the two species and the tests made with the averages of the colonies that rate achieved the perfect identification of all populations sampled. Partial warps tests were more effective in relation to aligned coordinates ones, as these last a minimum tolerance for the separation of the groups was not achieved in some tests. Molecular analysis showed 53 polymorphic sites for the COI gene, with nucleotide diversity of 0.02180 and haplotype diversity of 0.8854, separating the samples into 9 haplotypes, but their network of haplotypes was not sufficiently conclusive. The total genetic differentiation measured by Fst parameter only for the populations of S. quadripunctata was 0.9453 (P <0.05). As for the gene 16S, we found 14 polymorphic sites and a nucleotide diversity of 0.00649 and haplotype diversity of 0.8419, with seven haplotypes generated. The parameter Fst for all samples was 0.9552 (P <0.05) and only for S.quadripunctata was 0.8736 (P <0.05). For both genes Fst pairwise tests showed greater variation among populations of the states, showing these groups as a genetic structure. Mantel tests were positively correlated for morphometric, geographical and molecular data. Of the two methodologies in our research, we can affirm that the morphometry proved to be extremely efficient in the differentiation of populations. Molecular analysis showed that populations are consistent, even that a low sample size is available. However combining these two methodologies, we have joined the simplicity and speed of geometric morphometric with the always innovative ability of molecular studies, thus achieving effective tools for accessing biodiversity in Meliponini, including a geographically trace for specimens by studying individuals from their natural range.
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Isolamento e caracterização de microrganismo envolvido na desnitrificação autrófica pela oxidação de sulfeto em reator vertical de leito fixo / Isolation and characterization of a microorganism involved on autotrophic denitrification by sulfide oxidation in a vertical fixed-bed reactorMestrinelli, Fabiana 15 October 2010 (has links)
O presente estudo teve como objetivo avaliar a comunidade envolvida na desnitrificação autotrófica pela oxidação de sulfetos, aplicada ao pós-tratamento de efluentes anaeróbios. O enriquecimento da comunidade bacteriana e da comunidade desnitrificante autotrófica foi realizado a partir de amostras da biomassa coletadas de três reatores verticais de leito fixo operados em condições distintas, sendo, redução autotrófica de nitrato, redução autotrófica de nitrito e redução autotrófica de nitrato com excesso de sulfeto. Após a determinação da melhor condição de enriquecimento, a cultura foi purificada, identificada por meio de ferramentas da biologia molecular e caracterizada quanto às melhores condições de crescimento. O enriquecimento foi bem sucedido com a biomassa dos três reatores. No entanto, a condição de redução de nitrato com relação \'N\'/\'S\' igual a 0,8 foi a que apresentou maior concentração de microrganismos desnitrificantes autotróficos. A bactéria isolada foi identificada como Pseudomonas stutzeri. A velocidade específica máxima de crescimento da cultura (\'mü\'máx) foi de 0,037/h, com tempo de duplicação de 18,7 horas. O rendimento celular (Y) do composto nitrogenado foi de 0,15 gSSV.g/\'N\' e a velocidade de desnitrificação foi de aproximadamente 0,24 g\'N\'/gSSV.h. Os dados obtidos indicaram a viabilidade da aplicação da espécie isolada no processo de desnitrificação autotrófica utilizando sulfeto como doador de elétrons. / The aim of this study was to evaluate the community involved on autotrophic denitrification by sulfide oxidation applied to the post-treatment of anaerobic effluents. The enrichment of the bacterial community and autotrophic denitrifier community was accessed in three immobilized bed reactors operated at the conditions of autotrophic reduction of nitrate, autotrophic reduction of nitrite and autotrophic reduction of nitrate under excess of sulfide. Following the determination of the best enrichment conditions, the culture was purified, identified by molecular biology tools and the best growth conditions were characterized. Enriched cultures were obtained for the three operational conditions, but the best condition for the growth of autotrophic denitrifiers microorganisms was at \'N\'/\'S\' ratio of 0,8. The isolated microorganism was identified as Pseudomonas stutzeri. The maximum specific growth rate (\'mü\'máx) was 0.037/h, with a doubling time of 18.7 hours. The growth yield (Y) of nitrogen compound was 0.15 gSSV/g\'N\' and the specific rate of nitrogen utilization was approximately 0.24 g\'N\'/gSSV.h. The results indicated the viability of application of this microorganism for autotrophic denitrification using sulfide as electron donor.
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Ferramentas auxiliares na identificação de espécies de abelhas Meliponini, com ênfase no gênero Schwarziana (Lepeletier, 1836) / Auxiliar tools for Meliponini bees identification, emphasizing the genus SchwarzianaRaphael Antonio de Oliveira Silva 27 August 2010 (has links)
As abelhas sem ferrão estão entre os animais mais importantes para o equilíbrio do meio ambiente, isso devido a fatores como sua enorme diversidade e principalmente por serem importantes polinizadores tanto de ecossistemas naturais como de agroecossistemas. A necessidade de identificação dos animais amostrados por especialistas é fundamental para estudos ecológicos. Neste trabalho foram feitas análises interespecíficas e intra-populacionais sobre os indivíduos do gênero Schwarziana a fim de aperfeiçoar a utilização da técnica de morfometria geométrica, que nos permite identificações baseadas apenas nos padrões de venação das asas desses insetos. Não obstante, foram realizadas também análises de sequenciamento de dois genes do DNA mitocondrial, o COI e o 16S. O gênero estudado foi Schwarziana, com duas espécies válidas, S. quadripunctata e S. mourei. Nas análises morfométricas, os testes realizados por indivíduos os testes de validação cruzada identificaram de forma correta 70% das amostras de um total de 10 localidades diferentes. Esta acurácia aumenta ainda mais à medida que novos grupos são formados, alcançando próximo de 85% quando separadas por regiões. Em todos os ensaios realizados com a morfometria geométrica (partial warps e coordenadas alinhadas) atingiu-se uma taxa de 100% de identificação correta entre as duas espécies e nos ensaios feitos com as médias das colônias esta taxa também foi atingida para a identificação de todas as populações amostradas. Os testes feitos com os partial warps mostraram-se mais eficazes em relação às coordenadas alinhadas, já que nestes últimos a tolerância mínima para a separação dos grupos não foi atingida em alguns ensaios. As análises moleculares apontaram 53 sítios polimórficos para o gene COI, com um índice de diversidade nucleotídica de 0,02180 e de diversidade haplotípica de 0,8854, separando as amostras em 9 haplótipos, porém a rede de haplótipos não foi suficientemente conclusiva. A diferenciação genética total medida pelo parâmetro Fst somente para as populações de S. quadripunctata foi de 0.9453 (P<0,05). Já para o gene 16S foram encontrados 14 sítios polimórfico e um índice de diversidade nucleotídica de 0,00649 e de diversidade haplotípica de 0,8419, com 7 haplótipos gerados. O parâmetro Fst para todas amostras foi de 0.9552 (P<0,05) e somente para as de S. quadripunctata foi de 0.8736 (P<0,05). Para ambos os genes os testes Fst par-a-par mostraram uma maior variação entre as populações dos estados, mostrando que estas populações estão estruturadas. Os testes de Mantel correlacionaram positivamente os dados morfométricos, geográficos e moleculares. Das duas metodologias aplicadas em nossa pesquisa, podemos afirmar que a morfometria mostrou-se extremamente eficiente na diferenciação das populações amostradas. As análises moleculares indicaram que estas populações estão estruturadas mesmo analisando poucas amostras. No entanto ao unirmos estas duas metodologias, combinamos a simplicidade e a rapidez da morfometria geométrica com a capacidade sempre inovadora de estudos moleculares, obtendo desta forma ferramentas eficazes para acessar a biodiversidade em Meliponini, inclusive para rastrear geograficamente espécimes a partir de estudos com indivíduos de sua área de distibuição natural. / Stingless bees are among the most important animals to the environmental balance, that due to their diversity and mainly because they are important pollinators of both natural and agro-ecosystems. The need for identification of sampled animals by experts is essential for ecological studies. In this work, intra and interspecific population analysis was performed in order to improve the technique of geometric morphometry, which allows us to access this biodiversity through identifications based on patterns of wing venation of these insects. We also sequenced two mitochondrial genes, the COI and 16S. Schwarziana Lepeletier 1836 was the gender studied with two valid species, S. quadripunctata and S. mourei. In morphometric analysis, cross-validation tests carried out by individuals correctly identified 70% of samples from a total of 10 different locations. This accuracy increases further as new groups are formed, according to geographic proximity, reaching around 85% when separated by regions. In all tests with geometric morphometry (partial warps and aligned coordinates) reached a rate of 100% correct identification between the two species and the tests made with the averages of the colonies that rate achieved the perfect identification of all populations sampled. Partial warps tests were more effective in relation to aligned coordinates ones, as these last a minimum tolerance for the separation of the groups was not achieved in some tests. Molecular analysis showed 53 polymorphic sites for the COI gene, with nucleotide diversity of 0.02180 and haplotype diversity of 0.8854, separating the samples into 9 haplotypes, but their network of haplotypes was not sufficiently conclusive. The total genetic differentiation measured by Fst parameter only for the populations of S. quadripunctata was 0.9453 (P <0.05). As for the gene 16S, we found 14 polymorphic sites and a nucleotide diversity of 0.00649 and haplotype diversity of 0.8419, with seven haplotypes generated. The parameter Fst for all samples was 0.9552 (P <0.05) and only for S.quadripunctata was 0.8736 (P <0.05). For both genes Fst pairwise tests showed greater variation among populations of the states, showing these groups as a genetic structure. Mantel tests were positively correlated for morphometric, geographical and molecular data. Of the two methodologies in our research, we can affirm that the morphometry proved to be extremely efficient in the differentiation of populations. Molecular analysis showed that populations are consistent, even that a low sample size is available. However combining these two methodologies, we have joined the simplicity and speed of geometric morphometric with the always innovative ability of molecular studies, thus achieving effective tools for accessing biodiversity in Meliponini, including a geographically trace for specimens by studying individuals from their natural range.
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Isolamento e caracterização de microrganismo envolvido na desnitrificação autrófica pela oxidação de sulfeto em reator vertical de leito fixo / Isolation and characterization of a microorganism involved on autotrophic denitrification by sulfide oxidation in a vertical fixed-bed reactorFabiana Mestrinelli 15 October 2010 (has links)
O presente estudo teve como objetivo avaliar a comunidade envolvida na desnitrificação autotrófica pela oxidação de sulfetos, aplicada ao pós-tratamento de efluentes anaeróbios. O enriquecimento da comunidade bacteriana e da comunidade desnitrificante autotrófica foi realizado a partir de amostras da biomassa coletadas de três reatores verticais de leito fixo operados em condições distintas, sendo, redução autotrófica de nitrato, redução autotrófica de nitrito e redução autotrófica de nitrato com excesso de sulfeto. Após a determinação da melhor condição de enriquecimento, a cultura foi purificada, identificada por meio de ferramentas da biologia molecular e caracterizada quanto às melhores condições de crescimento. O enriquecimento foi bem sucedido com a biomassa dos três reatores. No entanto, a condição de redução de nitrato com relação \'N\'/\'S\' igual a 0,8 foi a que apresentou maior concentração de microrganismos desnitrificantes autotróficos. A bactéria isolada foi identificada como Pseudomonas stutzeri. A velocidade específica máxima de crescimento da cultura (\'mü\'máx) foi de 0,037/h, com tempo de duplicação de 18,7 horas. O rendimento celular (Y) do composto nitrogenado foi de 0,15 gSSV.g/\'N\' e a velocidade de desnitrificação foi de aproximadamente 0,24 g\'N\'/gSSV.h. Os dados obtidos indicaram a viabilidade da aplicação da espécie isolada no processo de desnitrificação autotrófica utilizando sulfeto como doador de elétrons. / The aim of this study was to evaluate the community involved on autotrophic denitrification by sulfide oxidation applied to the post-treatment of anaerobic effluents. The enrichment of the bacterial community and autotrophic denitrifier community was accessed in three immobilized bed reactors operated at the conditions of autotrophic reduction of nitrate, autotrophic reduction of nitrite and autotrophic reduction of nitrate under excess of sulfide. Following the determination of the best enrichment conditions, the culture was purified, identified by molecular biology tools and the best growth conditions were characterized. Enriched cultures were obtained for the three operational conditions, but the best condition for the growth of autotrophic denitrifiers microorganisms was at \'N\'/\'S\' ratio of 0,8. The isolated microorganism was identified as Pseudomonas stutzeri. The maximum specific growth rate (\'mü\'máx) was 0.037/h, with a doubling time of 18.7 hours. The growth yield (Y) of nitrogen compound was 0.15 gSSV/g\'N\' and the specific rate of nitrogen utilization was approximately 0.24 g\'N\'/gSSV.h. The results indicated the viability of application of this microorganism for autotrophic denitrification using sulfide as electron donor.
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Effets de l’alimentation végétale sur les capacités digestives de la truite arc-en-ciel et sur le microbiote associé à sa muqueuse digestive en fonction de son génotype / Impact of plant-based diet nutrition on rainbow trout digestive capacity and on it associated mucosal microbiotaBorey, Marion 24 May 2017 (has links)
La pression sur les quotas de pêche et l’augmentation de la production aquacole ont contribué à une substitution importante des farines et des huiles de poisson incorporées dans les aliments pour poissons carnivores, par des farines et des huiles végétales. La truite arc-en-ciel, qui est un poisson carnivore, est affectée par ce changement de régime. Ainsi un retard de croissance apparaît dès le plus jeune stade si certaines transformations et supplémentations ne sont pas apportées aux végétaux. L’objectif de ce travail a été d’évaluer, aux stades alevins et juvéniles, l’impact d’une substitution totale des huiles et farines de poisson sur le tractus digestif de la truite arc-en-ciel, et plus particulièrement sur ses capacités digestives et sur la composition de son microbiote intestinal. Le but in fine étant de déterminer si certaines enzymes de la digestion, transporteurs intestinaux, ou sous-communautés bactériennes sont impactés par le changement de régime et peuvent expliquer le retard de croissance observé. Chacun de ces facteurs ont été étudiés via une approche de métagénomique par séquençage de nouvelle génération NGS pour la caractérisation du microbiote, et via de la PCR quantitative et des mesures d’activités enzymatiques pour la comparaison des capacités digestives. Des lignées isogéniques de truites, identifiées comme divergentes dans leur réponse à l’alimentation végétale (capables d’adaptation ou réfractaires) ont permis de disposer d’un matériel biologique pertinent pour répondre à cette question. Une modification du microbiote intestinal associé à la muqueuse digestive pourrait également contribuer à la baisse de l’homéostasie intestinale. Le changement de régime conduit en effet à une équitabilité plus faible chez les truites ayant reçue un aliment végétal, ce qui reflète un changement dans la représentativité de certains OTUs. Ce changement de régime s’est également traduit par des communautés dissimilaires en moyenne à 70 %, d’après l’estimation de la β-diversité entre les communautés de truites nourries avec l’aliment marin et celles nourries avec l’aliment végétal. La sélection opérée par l’aliment a conduit à un remplacement des OTUs rencontrés au sein des Firmicutes, c’est-à-dire que différentes espèces bactériennes de Firmicutes sont rencontrées suivant le régime considéré. La comparaison de communautés bactériennes entre les différentes lignées isogéniques a montré que la sélection opérée par le génotype de l’hôte a davantage eu lieu sur le remplacement des β-Protéobactéries. Enfin, les comparaisons d’abondances en certaines espèces bactériennes particulières suggèrent que les bactéries Cetobacterium somerae, capables de synthétiser de la vitamine B12, et Shewanella, dont l’implication dans la stimulation des cellules β du pancréas endocrine a déjà été observée chez d’autres espèces, pourraient être impliquées dans la réponse métabolique des truites aux végétaux. Les modifications identifiées dans ce travail constituent des indicateurs biologiques qui pourront être mis à profit pour évaluer la réponse du tractus digestif des truites à de nouvelles formules alimentaires. / Over-fishing pressure and increasing aquaculture production led to an important substitution of fish oil and fish meal with oil and meal from plant origin in feed meant for farming fish. However this replacement has some deleterious incidence on fish. For rainbow trout, which are carnivorous fish, some growth delay often appears from the early life stages when they are fed with plant based diet. The aim of this work was to assess, at alevin and juvenile stages, the impact of a total replacement of fish meal and oil on rainbow trout gastrointestinal tract, and more particularly on the digestive capacity and the associate microbiota. The objective, in fine, being to determine if some digestive enzymes, intestinal transporters, or bacterial communities are impacted by the dietary replacement and if these biological factors can be related to the observed growth delay. Metagenomic approach using next generation sequencing was used to characterize the gut bacterial communities, while digestive capacity was assessed through quantitative PCR and enzymatic measurements in order to compare rainbow trout responses to a plant-based diet. In our investigations, rainbow trout isogenic lines that diverge in their response to this alternative diet (tolerant or rather reluctant) were adopted because they constitute a pertinent biological material for answering this question.In alevin rainbow trout, a plant-based diet led to an increase of pepsinogen, trypsinogen, and chymotrypsinogen genes which codes for proteolitic enzymes. Two main assumptions can explain this response, and their effectivness remains to investigate: wether this is a physiological response due to a lower weight of trout fed with the plant-based diet, or so it is due to an increase transcritpion of pancreatic enzymes to compensate for a reduction of protein digestibility. In the intestine, it appears that an increase transcription of IAP, SGLT1, CCK-t, and PEPT1 genes, and a decrease transcription of GLUT2 gene under a plant-based diet could reflect a disability to grow under a vegetable diet.In juvenile rainbow trout, a plant-based diet led to a decrease of lipid digestibility, and of triglycerides and total amino acid plasmatic levels. These perturbations could be explained in part by a decrease of the phosphatase alkaline activity, which suggest perturbancesof intestinal homeostasis, and by a decrease of phospholipase A2 activity. Transcriptional decrease of the triglycerides transporter MTP and of the prolidase, which is a peptidase from intestinal cell cytosol, has also been observed. Some modification of the microbiota associated to the intestinal mucosa could also contribute to the decrease of the intestinal homeostasis. The dietary replacement effectively led to reduce evenness of the bacterial communities in trout fed with a plant-based diet, which reflected a shift in the representativeness of some OTUs. Bacterial community from trout fed with a marine diet and trout fed with a plant-based diet were on average 70 % dissimilar. Dietary substitution led to the replacement of OTUs from the Firmicutes class, different bacterial species being observed according to the considered diet. The comparison of bacterial community between the isogenic lines showed that the genotype led to the replacement of β-Proteobacteria. Finally, abundance comparison suggested that Cetobacterium somerae, which is able to synthesise vitamin B12, and Shewanella, which has already been reported to stimulate pancreatic β cells, could be implicated in the trout response to vegetable.Modifications observed in this work constitute biological indicator that could be used to assess the response of the digestive tract to future feed formulations.
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