Lors de la prise d'un repas sanguin par le moustique Aedes (Ae) aegypti, le virus de la dengue (DENV) est transmis à l'homme avec la salive du moustique. Ce mélange complexe est en partie déposé dans le compartiment cutané extravasculaire lors de la piqûre de moustique. Il est donc important de prendre en compte la triade virus-vecteur-hôte vertébré dans les mécanismes de transmission de ce virus à l'hôte vertébré. Des analyses de génomique et protéomique des glandes salivaires d'Ae. Aegypti infectées ou non par le DENV nous ont permis de mettre en évidence dans les glandes salivaires de moustiques infectés, la surexpression d'un gène codant pour un peptide antimicrobien (PAM) cationique. Nous avons démontré, que ce PAM possède une activité antibactérienne et antivirale contre les virus de la dengue et du chikungunya. Nos travaux soulignent l'importance chez les invertébrés, du compartiment « glandes salivaires » dans la réponse immunitaire innée du moustique. Nous avons également démontré que les kératinocytes humains sont des cellules permissives pour le DENV et que l'infection de ces cellules stimule la réponse immunitaire innée antivirale. Nos travaux démontrent que des extraits de glandes salivaires d'Ae. Aegypti augmentent l'infection du virus de la dengue dans les kératinocytes humains. Nous avons par la suite identifié une protéine salivaire d'Ae. Aegypti (34kDa), qui augmente l'infection du DENV en supprimant la production d'interféron. L'ensemble de ces travaux ont permis de contribuer aux connaissances sur la transmission du DENV, mais aussi d'identifier de nouvelles cibles potentielles pour le contrôle de la réplication virale. / Dengue virus (DENV) transmission is initiated when a blood-feeding Aedes (Ae) aegypti mosquito injects saliva, together with the virus, into the epidermis of its mammalian host. Studies of DENV should, therefore, take into account the triad virus-vector-vertebrate host. We have used functional genomic and proteomic analyses, of the salivary glands of female Ae. Aegypti, to demonstrate that this compartment harbors a potent immune response against DENV, represented by the production of an antimicrobial peptide (AMP). This AMP was found to exert, in addition to its anti-bacterial activity, an anti-viral activity against DENV and Chikungunya. Our data demonstrate, for the first time, the permissiveness of human epidermal keratinocytes to DENV infection. Remarkably, DENV replication in keratinocytes contributes to the establishment of anti-viral innate immunity that might occur shortly after the mosquito bite. To investigate the role of Ae. aegypti saliva in DENV transmission to man, primary human keratinocytes were infected with DENV in the presence of Ae. aegypti salivary gland extract. We show that Ae. aegypti saliva enhances dengue virus infection of human keratinocytes by suppressing innate immune responses. Furthermore, we have found a 34-kDa protein, in the saliva of Ae.aegypti, that strongly enhances DENV replication by suppressing type-I IFN production. This study provides new insights into the role of Ae. aegypti salivary glands and saliva in DENV transmission. The data presented here provide novel targets for the control of DENV replication in mammalian hosts.

Les infections virales transmises à l'homme par les moustiques Aedes, sont en pleine émergence ou ré-émergence dans le monde entier. Le contrôle des populations de vecteurs reste la seule méthode de lutte. Pour un contrôle plus efficace, de nombreux efforts sont déployés pour développer de nouveaux indicateurs évaluant l'exposition de l'Homme aux piqûres des Aedes. Dans ce contexte, l'objectif de la thèse était de développer un biomarqueur, basé sur l'évaluation quantitative de la réponse anticorps (Ac) spécifique au peptide salivaire Nterm-34kDa d'Ae. aegypti chez les populations exposées. Pour cela, nous avons évalué le potentiel de cette réponse Ac spécifique à i) mesurer l'intensité d'exposition aux piqûres, ii) évaluer le risque de transmission des arboviroses et iii) évaluer l'efficacité des stratégies de lutte anti-vectorielle (LAV). Nos résultats ont montré qu'une réponse IgG anti-peptide Nterm-34kDa pouvait être détectée chez les individus exposés à Ae. aegypti et Ae. albopictus. Le niveau de cette réponse IgG spécifique augmentait entre les saisons de faibles densités de moustiques et celles de fortes densités, indiquant que ce candidat biomarqueur permettrait d'évaluer l'exposition aux piqûres des Aedes. La distribution spatiale similaire de la prévalence de nouvelles infections au virus de la dengue et la prévalence de la réponse IgG spécifique montrait également que ce candidat biomarqueur permettrait d'identifier des zones à risque de transmission. La comparaison des réponses IgG anti-peptide Nterm-34kDa avant et après les interventions de LAV, a montré qu'une baisse post-LAV de cette réponse Ac spécifique permettrait d'évaluer l'efficacité de la LAV contre les Aede. Ce biomarqueur salivaire pourrait donc représenter un indicateur de la réduction du contact homme-vecteur. L'ensemble de ces travaux montre que la réponse Ac spécifique au peptide salivaire Nterm-34kDa constitue un pertinent biomarqueur pour évaluer l'exposition de l'Homme aux vecteurs des arboviroses. La validation supplémentaire de ce biomarqueur et son développement sous forme de test rapide permettraient aux structures en charge de la surveillance des arboviroses et de la lutte anti-vectorielle, de disposer d'un outil complémentaire des indicateurs entomologiques et épidémiologiques de référence. / Human viral infections transmitted by Aedes mosquitoes are rapidly emerging or re-emerging worldwide. Vector control strategies remain currently the unique method to control these infections. To improve the effectiveness of this control, much effort is being devoted to develop new indicators for measuring the human exposure to Aedes bites. In this way, this project aimed to develop a biomarker based on the quantitative assessment of antibody response (Ab) to Ae. aegypti Nterm - 34kDa salivary peptide, in human exposed populations. We evaluated thus the potential of this specific Ab response to: i) measure the intensity of human exposure to Aedes bites, ii) assess the risk of transmission of arboviruses and iii) evaluate the efficacy of vector control strategies. Our results showed that a specific IgG response to Nterm-34kDa peptide could be detected in individuals exposed to Ae. aegypti or Ae. albopictus. The level of specific IgG response increased from the season of low mosquito densities to high densities one, indicating that this biomarker candidate could evaluate the intensity of exposure to the Aedes bites. The observed similar spatial distribution of the prevalence of new infections with dengue virus and specific IgG response showed that this biomarker candidate could identify areas at risk of transmission. The comparison of the specific IgG responses to Nterm-34kDa peptide before and after the vector control intervention showed a decline of the specific Ab response after implementation of control. It indicated that such salivary biomarker could assess the effectiveness of vector control against Aedes, and that this salivary biomarker could be an indicator of the reduction of man-vector contact. Altogether, the results of this work show that the specific IgG response to the Nterm-34kDa salivary peptide could be a relevant biomarker for assessing human exposure to arboviruses vectors. This promising indicator, developed as a rapid test, could represent a complementary tool for entomological and epidemiological surveillance of arboviruses diseases.

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