En aquest treball s'utilitza el fong Trametes versicolor, per al tractament de lleixius negres. Aquestes aigües residuals, procedents de la industria paperera son molt tòxiques i contenen una elevada càrrega orgànica, constituint un veritable problema ambiental per aquelles empreses que les produeixenDesprés d'una introducció general sobre la producció del paper i la seva problemàtica ambiental, es continua amb la presentació dels resultats obtinguts. Aquests es presenten diferenciats en dos capítols:- Inicialment es presenten les investigacions realitzades en el tractament del lleixius negres amb el fong Trametes versicolor. Aquests treballs es varen iniciar amb erlenmeyer, determinat-se les condicons de treball en quant a temperatura agitació i concentració de glucosa. Seguidament es passà a realitzar assaigs amb bioreactors. S'han utilitzat diferents tipus de bioreactors i de diferents volums. S'ha treballat des de tancs agitats de 300 ml, fins a un reactor tipus air-lift de 2 l. Els millors resultats, però, s'han obtingut amb reactors de tipus llit fluiditzat de 450 ml i reactors de llit fix de 450 ml. S'ha treballat amb el fong en forma de pellets i amb el fong immobilitzat en cubs de niló i d'escuma de poliuretà. A partir dels resultats obtinguts s'ha estudiat tant, la relació entre la producció enzimàtica i els paràmetres ambientals seguits com, la relació entre si dels diferents paràmetres ambientals.- En un segon apartat es presenten els treballs duts a terme en el monitoratge del procés. En aquest sentit s'ha realitzat el muntatge d'un sistema d'adquisició de dades que inclou, mesura del pH i del pO2 i, mesures en línia, utilitzant la tècnica FIA (Flow Injection Analysis) del color, els compostos aromàtics i dels enzims lacasa i lignina peroxidasa. A més, en realitzar la validació del FIA de lignina peroxidasa amb lleixius negres, es va detectar un problema d'inhibició de l'enzim en presència de composts lignínics.El treball finalitza amb l'Apèndix, on s'inclouen una bona part dels programes, muntatges i circuits electrònics realitzats, que han estat utilitzats en el monitoratge del procés. / En este trabajo se utiliza el hongo Trametes versicolor, para el tratamiento de lejías negras. Estas aguas residuales, procedentes de la industria papelera son muy tóxicas y contienen una elevada carga orgánica, constituyendo un verdadero problema ambiental en aquellas empresas que las producen.Después de una introducción general sobre la producción del papel y su problemática ambiental, se continúa con la presentación de los resultados obtenidos. Estos se presentan diferenciados en dos capítulos:- Inicialmente se presentan las investigaciones realizadas en el tratamiento del lejías negras con el hongo Trametes versicolor. Estos trabajos se iniciaron a escala erlenmeyer, determinándose las condiciones de trabajo en cuanto a temperatura agitación y concentración de glucosa. Seguidamente se pasó a realizar ensayos con biorreactores. Se han utilizado diferentes tipos de biorreactores y de diferentes volúmenes. Se ha trabajado con reactores de tanque agitado de 300 ml, así como con un reactor tipo air-lift de 2 l. Los mejores resultados, pero, se han obtenido con reactores de tipo lecho fluidizado de 450 ml y reactores de lecho fijo de 450 ml. Se ha trabajado con el hongo en forma de pellets y con el hongo inmovilizado en cubos de nylon y de espuma de poliuretano. A partir de los resultados obtenidos se ha estudiado tanto, la relación entre la producción enzimática y los parámetros ambientales seguidos como, la relación entre si de los diferentes parámetros ambientales.- En un segundo apartado se presentan los trabajos llevados a cabo en la monitorización del proceso. En este sentido se ha realizado el montaje de un sistema de adquisición de datos que incluye, medida del pH y del pO2 y, medidas en línea, utilizando la técnica FÍA (Flow Injection Analysis) del color, los compuestos aromáticos y de las enzimas lacasa y lignina peroxidasa. Además, al realizar la validación del FÍA de lignina peroxidasa con lejías negras, se detectó un problema de inhibición de la enzima en presencia de compuestos lignínicos.El trabajo finaliza con un Apéndice, dónde se incluyen una buena parte de los programas, montajes y circuitos electrónicos realizados, que han sido utilizados en la monitorización del proceso. / In this work the white-rot fungus Trametes versicolor is used for the treatment of black liquors. This type of wastewaters, coming from the pulp and paper industry, are very toxic and they content a high organic load, constituting a significant environmental problem for those companies that produce them.A general introduction on the pulp and paper industry and its environmental problems is followed with the presentation of the obtained results. These results are shown in two main chapters:- Initially the research carried out with Trametes versicolor applied to the treatment of black liquor is shown. These works started at Erlenmeyer level, to determine the work conditions with respect to agitation, temperature and glucose concentration. Next, assays in bioreactor were carried out. Different types of bioreactors (with different volumes) have been used. Work was performed with agitated tanks of 300 ml, and air-lift type reactor of 2 l. The best results, however, were obtained when 450 ml bed fluidized reactor was used. Assays were performed with the fungus in the form of pellets and with the fungus immobilized in cubes of nylon and polyurethane foam. From the obtained results, correlations between the enzymatic production and the environmental parameters, and the correlation among the different environmental parameters, have been studied.- In a second chapter research carried out on process monitoring are presented. An automated system for on-line measurement of enzyme activity is proposed. The system uses a flow injection manifold in the stopped-flow mode to measure initial reaction rates. The time during which the flow is halted is selected in such a way as to optimise the enzyme/substrate ratio for the correct determination of activity values. The proposed system was used to determine the activity of laccase produced by the fungus Trametes versicolor immobilised on nylon in a fixed-bed reactor used for treating pulp mill waste water. Also a data acquisition system was developed for the monitoring of pH, pO2, color and aromatic compounds.

Les malalties neurodegeneratives són un conjunt de malalties que afecten al cervell. Aquestes malalties estan relacionades amb la pèrdua progressiva de l'estructura o la funció de les neurones, incloent-hi la mort d'aquestes. La malaltia de l'Alzheimer és una de les malalties neurodegeneratives més comunes. Actualment, no es coneix cap cura per a l'Alzheimer, però es creu que hi ha un grup de medicaments que el que fan és retardar-ne els principals símptomes. Aquests s'han de prendre en les primeres fases de la malaltia ja que sinó no tenen efecte. Per tant, el diagnòstic precoç de la malaltia de l'Alzheimer és un factor clau. En aquesta tesis doctoral s'han estudiat diferents aspectes relacionats amb la neurociència per investigar diferents eines que permetin realitzar un diagnòstic precoç de la malaltia en qüestió. Per fer-ho, s'han treballat diferents aspectes com el preprocessament de dades, l'extracció de característiques, la selecció de característiques i la seva posterior classificació. / Neurodegenerative diseases are a group of disorders that affect the brain. These diseases are related with changes in the brain that lead to loss of brain structure or loss of neurons, including the dead of some neurons. Alzheimer's disease (AD) is one of the most well-known neurodegenerative diseases. Nowadays there is no cure for this disease. However, there are some medicaments that may delay the symptoms if they are used during the first stages of the disease, otherwise they have no effect. Therefore early diagnose is presented as a key factor. This PhD thesis works different aspects related with neuroscience, in order to develop new methods for the early diagnose of AD. Different aspects have been investigated, such as signal preprocessing, feature extraction, feature selection and its classification.

Pichia pastoris es identificada como una de las factorías celulares más eficientes para la producción de proteínas recombinantes. Más de 500 proteínas han sido expresadas usando este sistema de expresión. P. pastoris combina la habilidad de crecer en medios mínimos a altas densidades celulares con la de secreción de proteína heteróloga, ayudando a su recuperación. En este trabajo, la proteína modelo seleccionada es la lipasa recombinante de Rhizopus oryzae (ROL). La producción heteróloga de ROL en cultivos fed-bach de P. pastoris PAOX1 (Mut+) ha sido estudiada desde el punto de vista de la monitorización y control del bioproceso, la modelización cinética y el diseño y desarrollo de estrategias operacionales. El primer paso en la investigación ha sido la estimación de la concentración de biomasa, sustrato y velocidad específica de crecimiento (μ) mediante dos observadores no lineales y uno lineal. El objetivo de este estudio ha sido comparar las prestaciones de los diferentes algoritmos en bioproceso de P. pastoris. La producción de proteína recombinante está estrechamente relacionada con la μ. Por lo tanto, debido a su elevada relevancia en el bioproceso, μ fue estimada utilizando el análisis de los gases de salida en línea o las medidas de la concentración de sustrato. La biomasa y el sustrato fueron obtenidos directamente de sus correspondientes balances de materia. La estrategia de cultivo más frecuentemente utilizada para conseguir altas densidades celulares y elevada producción de proteína heteróloga con el sistema PAOX1 (Mut+) es la operación fed-batch. Las estrategias operacionales estándar están basadas en el control de la concentración de sustrato próximas a cero (estrategias limitantes) o manteniendo la concentración a un valor contante (estrategias no limitantes). En consecuencia se estudió el efecto de las estrategias operacionales fed-batch de metanol no limitante (MNLFB) y metanol limitante (MLFB) en la producción de ROL. Éstas son las estrategias de control más comunes que tienen como objetivo mantener contantes las velocidades específicas claves: crecimiento celular (μ), consumo de sustrato (qs) y producción de proteína (qp) a partir de la hipótesis de estado quasiestacionario para el sustrato. Los resultados se analizaron con el objetivo de determinar la condición más apropiada en función de rendimientos y productividades. Las velocidades específicas medias y las variables de estado para varios cultivos fedbatch, bajo condiciones de metanol limitante y no limitante, se usaron para el desarrollo de un modelo macrocinético no estructurado para la producción heteróloga de la ROL por el sistema P. pastoris PAOX1. Posteriormente, se ha realizado un metaanálisis comparativo sobre la producción de varias proteínas heterólogas modelo para P. pastoris bajo el promotor AOX1 y se ha desarrollado una estrategia general para mejorar la producción de proteínas a partir de la cinética como clave para la optimización del proceso. Adicionalmente se ha estudiado y caracterizado la capacidad de transferencia de oxigeno en diferentes biorreactores a escala laboratorio y piloto. El modelo de transferencia de oxigeno ha sido también desarrollado y validado en la producción de ROL en P. pastoris bajo el promotor AOX1. Finalmente, el modelo cinético previamente desarrollado para la producción heteróloga de ROL y el modelo de transferencia de oxigeno han sido aplicados para definir estrategias alternativas de operación basadas en operaciones con oxígeno limitante (OLFB) comparándose con las estrategias estándar. / Pichia pastoris is recognized as one of the most efficient cell factories for the production of recombinant proteins. More than 500 proteins have been expressed using this system. P. pastoris combines the ability of growing on minimal medium at very high cell densities with secreting the heterologous protein, aiding to their recovery. In this work, the selected target protein has been is the recombinant Rhizopus oryzae lipase (ROL). The heterologous ROL production in P. pastoris PAOX1 (Mut+) fed-batch cultures has been studied for bioprocess monitoring and control, kinetic modelling, and the design and development operational strategies. The first step in the research has been the estimation of biomass, substrate and specific growth rate (μ) by means of two non-linear observers and a linear estimator. The aim of this study has been to compare the performance of the different algorithms in P. pastoris bioprocesses. Heterologous protein production is closely related to μ. So, due to its high relevance in the bioprocess, μ has been estimated by on-line gas analyses or substrate concentration measurements. Biomass and substrate have been straightforwardly obtained solving their corresponding mass balances. The most frequently used cultivation strategy to achieve high cell densities and high heterologous protein production levels with PAOX1-(Mut+)-based system is the fedbatch operation. The standard operational strategies are based on the control of the substrate concentration close to zero (limiting strategies) or keeping the concentration at a constant value (non-limiting strategies). Consequently, the effect of methanol nonlimiting fed-batch (MNLFB) and methanol limited fed-batch (MLFB) operational strategies on ROL production has been studied. These most commonly applied control strategies allow maintaining rather constant key specific rates: cell growth (μ), substrate uptake (qs), and protein production (qp) through the quasi-steady state hypothesis for substrate. Results have been analyzed in order to determine the most suitable operating conditions in terms of yields and productivities. Furthermore, mean specific rates and state variables for various fed-batch cultures, under methanol limited and non-limited conditions were used for modeling. Hence, an unstructured macrokinetic model for heterologous ROL production by a P. pastoris PAOX1 based system has been developed. Then, a comparative meta-analysis of heterologous protein production of various target proteins by P. pastoris under AOX1 promoter has been conducted and a general strategy for improving protein production from process kinetics was developed as a key to bioprocess optimization. Additionally, the characterization of oxygen transfer capacity in different laboratory/pilot scale bioreactors has been studied. The oxygen transfer model was also developed and validated in heterologous ROL production by P. pastoris under AOX1 promoter. Finally, the previous kinetic model for heterologous ROL production and oxygen transfer model have been applied to define alternative operational strategies based on oxygen limited fed-batch operations (OLFB) and have been compared to the standard strategies.

La separación de proteínas de medios complejos como el lactosuero bovino suele representar entre el 50 y el 80 % de los costes de producción, por lo que se precisa de procesos eficientes y sostenibles de separación y purificación de proteínas que permitan su recuperación. La presente tesis doctoral tiene como objetivo desarrollar una técnica innovadora para la recuperación de proteínas denominada reparto en tres fases basado en líquidos iónicos (ILTPP, Ionic Liquid-based Three Phase Partitioning). ILTPP emplea sistemas líquido iónico/sal para acumular la proteína de interés en la interfase líquido-líquido y facilitar así su recuperación. Esta técnica se ha aplicado a la recuperación de lactoferrina, una proteína del lactosuero bovino que destaca por sus propiedades nutracéuticas. Los resultados obtenidos hacen de ILTPP una técnica muy prometedora por cuanto combina altas tasas de recuperación de proteína con selectividades variables que permiten tanto enriquecer proteínas individuales como conjuntos de ellas, empleando para ello sistemas líquido iónico/sal estables y que pueden llegar a reutilizarse en su totalidad. / The separation of proteins from complex mixtures such as bovine whey usually represents between 50 and 80 % of total production costs, so efficient and sustainable processes for separation and purification of proteins that allow their recovery are required. The aim of this PhD thesis is the development of an innovative technique for protein recovery called Ionic Liquid-based Three Phase Partitioning (ILTPP). ILTPP uses ionic liquid/salt systems to accumulate the target protein at the liquid-liquid interface, which makes its recovery easier. This technique has been applied to recover lactoferrin, a bovine whey protein that stands out due to its nutraceutical properties. The results obtained show ILTPP as a promising technique since it combines high protein recoveries with variable selectivities that make it possible to enrich individual proteins or groups of them, using for this purpose stable ionic liquid/salt systems that can be totally recycled.

Els residus radioactius procedeixen de gairebé totes les activitats (indústria nuclear i no nuclear, investigació, activitats militars, aplicacions mèdiques) que impliquen la manipulació de materials radioactius. Existeix doncs una clara necessitat de gestionar i confinar aquests residus, de forma que s‘eviti que els radionúclids continguts en ells s‘alliberin a la biosfera en concentracions que puguin representar un risc inacceptable per als éssers humans o el medi ambient. Alguns materials presents entre els residus radioactius són polímers orgànics; altres substàncies orgàniques (per exemple, productes químics orgànics utilitzats a la construcció, materials sellants, tampons) també poden ser-hi presents. És doncs necessari avaluar les reaccions que poden donar-se entre aquests lligands orgànics i els radionúclids, per tal d'estimar les quantitats de radionúclids que poden ser transportats fora del confinament. En aquest sentit, és fonamental conèixer les estabilitats relatives dels compostos i complexos que es poden formar, una informació que sovint s‘obté a través de càlculs d'especiació utilitzant dades termodinàmiques. L'objectiu principal d'aquesta tesi doctoral és obtenir dades termodinàmiques que es puguin aplicar en la predicció quantitativa de les reaccions entre alguns lligands orgànics i radionúclids. S‘han estudiat els lligands gluconat, isosacarinat i EDTA, que representen tres tipus diferents de substàncies orgàniques (additius per a ciment, productes de degradació de cel·lulosa i agents de descontaminació) rellevants en el context dels residus nuclears. El treball experimental s'ha realitzat utilitzant tori (Th(IV)) i urani (U(IV)) naturals. L'estudi s'ha centrat principalment en medis de pH alcalí, tenint en compte el paper clau del ciment tant en matrius de condicionament dels residus com en els materials de construcció i barreres d‘enginyeria dels dipòsits de residus. Per assolir aquest objectiu s'han utilitzat dos tipus diferents d'experiments: experiments de solubilitat i anàlisis espectroscòpiques. Els resultats obtinguts han permès: - obtenir dades termodinàmiques (constants d'estabilitat) en el sistema tori-gluconat; - obtenir dades experimentals en el sistema tori-isosacarinat. Tenint en compte les similituds entre les estructures químiques del gluconat i l‘isosacarinat, l‘analogia entre els dos lligans també s‘ha estudiat; - augmentar el coneixement sobre el paper del calci en els sistemes de tori-gluconat i tori-EDTA en el rang de pH alcalí, i - obtenir dades termodinàmiques en els sistemes d'U(VI)-gluconat i U(VI)-EDTA / Radioactive wastes arise from almost all activities (nuclear and non-nuclear industry, research, military activities, medical applications) involving the handling of radioactive materials. There exists a clear necessity to dispose those wastes in order to avoid the radionuclides contained in the wastes being released to the biosphere in concentrations that could represent an unacceptable hazard to humans or to the environment. Some of the materials present among radioactive wastes are made of organic polymers; other organic substances (e.g. organic chemicals used in construction, buffer, and sealing materials) can also be present. Those organic substances may influence the behaviour of the radionuclides contained in the wastes. It is then necessary to assess the reactions that are likely to occur between radionuclides and those complexing agents, in order to estimate the quantities of radionuclides that can be transported out of the confinement. In order to do that, it is essential to know the relative stabilities of the compounds and complexes that may form under the relevant conditions, an information that is often provided by speciation calculations using chemical thermodynamic data. The main goal of this PhD thesis is to obtain thermodynamic data that can be used to quantitatively predict the reactions between some organic ligands that may be present in a repository and radionuclides. Gluconate, isosaccharinate and EDTA have been studied, because they represent three different types of organic substances (cement additives, cellulose degradation products and decontamination agents) relevant for nuclear wastes. The experimental work has been conducted using natural Th(IV) and natural U(VI). The attention has been focused mainly on the alkaline pH range, taking into account the key role of cement in conditioning matrices, engineered barriers and construction materials of waste repositories. Two different type of experiments have been used to fulfil this objective: macroscopic solubility experiments and spectroscopic analyses The results obtained have allowed to: - obtain thermodynamic data (stability constants) in the thorium-gluconate system; - obtain experimental data in the thorium-isosaccharinate system. Taking into account the similarities between the chemical structure of gluconate and isosaccharinate, the analogy between both ligands has also been investigated; - increase the knowledge regarding the role of calcium in the thorium-gluconate and thorium-EDTA systems under the alkaline range; and - obtain data in the U(VI)-gluconate and U(VI)-EDTA systems.

Dada la ineficiencia de las plantas de tratamiento de aguas residuales para eliminar completamente los contaminantes orgánicos, los lodos en ellas producidos constituyen una importante fuente de agentes tóxicos. Consecuentemente, la cada vez más popular práctica de aplicar lodos in tierras de uso agrícola resulta en la diseminación de estos microcontaminantes en el ambiente. El presente trabajo describe el desarrollo de una estrategia biotecnológica para la eliminación de contaminantes emergentes en lodos de depuradora, con particular énfasis en compuestos farmacéuticos, y basado en la aplicación de un hongo de la podredumbre blanca (white-rot fungus), Trametes versicolor. Este hongo es conocido por su amplia capacidad degradativa de organocontaminantes. La primera etapa de la investigación describe la evaluación preliminar de la colonización de sistemas de lodos estériles por parte del hongo (fase sólida y suspensión o “slurry”) y la capacidad de degradación de dos drogas terapéuticas modelo (carbamazepina y naproxeno) en dichos sistemas. El desarrollo de una prueba de degradación llamada ND24, diseñada para el monitoreo del estatus metabólico de T. versicolor en procesos de biorremediación en fase sólida es también descrita. A continuación, en una segunda etapa, los tratamientos en fase sólida y bioslurry fueron empleados para la degradación de fármacos, a concentraciones preexistentes, en lodos de depuradora estériles. Esta parte del trabajo fue llevada a cabo en condiciones estériles para demostrar que la eliminación se debe al hongo y no a las comunidades microbianas presentes en los lodos. En los sistemas de fase sólida (biopilas), una eliminación importante fue observada para todos los agentes terapéuticos detectados, así como una destacable reducción en la toxicidad. Similarmente, la eliminación de fármacos y otros grupos de contaminantes emergentes fue también conseguida en los reactores en “slurry”. Sin embargo, en términos de toxicidad y eliminación, el tratamiento en fase sólida mostró un mejor rendimiento comparado con el bioslurry, razón por la cual, las biopilas fueron posteriormente empleadas para el tratamiento de lodo no estéril. La tercera etapa consistió en la aplicación de T. versicolor en biopilas no estériles para la eliminación de fármacos preexistentes en lodos. Este proceso de bioaumentación fue comparado con la acción de únicamente los microorganismos autóctonos. Mediante técnicas moleculares se pudo dar monitoreo a la colonización y supervivencia de T. versicolor en el proceso y su efecto sobre las comunidades microbianas, paralelo a la degradación de los agentes terapéuticos. En un intento por obtener mayores detalles en el mecanismo de degradación, la transformación de varias sulfonamidas, usualmente encontradas en los lodos y eliminadas por el hongo, fue estudiada en profundidad. Los resultados incluyen la identificación de productos de transformación y la participación de algunas enzimas. El uso de un reactor de lecho fluidizado con pellets de T. versicolor para la eliminación simultánea de tres sulfonamidas es también descrito. / Given the the inefficiency of sewage treatment facilities to completely remove organic pollutants, the sludge produced in wastewater treatment plants constitutes an important source of contaminants. Subsequently, the increasingly popular practice of applying sludge in agricultural lands results in the spread of these micropollutants in the environment. The present work describes the development of a biotechnological approach based on the application of a white-rot fungus, Trametes versicolor, for the elimination of emerging contaminants, in particular pharmaceuticals, from sewage sludge. This fungus is known for its wide spectrum of degradation ability towards organopollutants. The first stage in the research deals with the preliminary assessment of fungal colonization of sterile sludge systems (solid-phase and slurry) and the capacity of degradation of two model pharmaceuticals (carbamazepine and naproxen) in those systems. The development of a degradation test called ND24, designed to monitor the metabolic status of T. versicolor in solid-phase bioremediation process is also described. Afterwards, in a second stage, the solid-phase and the biosurry treatments were employed for the degradation of pharmaceuticals at pre-existent concentrations from sterile sewage sludge. Work was undergone in sterile conditions in order to demonstrate that removal was due to the fungus and not to the microbial communities present in the sludge. In the solid-phase biopiles an important removal was observed for all the drugs detected, together with a remarkable reduction in the global toxicity. Similarly, elimination of pharmaceuticals and other groups of emerging pollutants was achieved in the slurry bioreactor. However, in terms of toxicological and removal values, the solid-phase biopiles showed an enhanced performance compared to the slurry, reason why the current were further employed for the treatment of non-sterile sludge. The third stage consisted in the application of T. versicolor in non-sterile biopiles for the elimination of pre-existent pharmaceuticals from sludge. This bioaugmentation process was compared with the action of solely the autochthonous microbiota. Molecular techniques permitted to monitor the colonization and survival of T. versicolor in the process and its effect over the microbial communities, parallel to the removal of the therapeutic drugs. In an attempt to obtain further insights in the mechanism of degradation, the transformation of several sulfonamides, usually found in the sludge and removed by the fungus, was studied in detail. Results include the identification of transformation products and the participation of some enzymes. The use of a continuous fluidized bed reactor with fungal pellets for the simultaneous removal of three sulfonamides is also described.

This thesis is focused on the search of alternatives to fungicides conventionally used in the tanning industry. These chemicals must be effective against a large number of fungi less toxic, more environmentally friendly and economically attractive. The main objective is to evaluate the fungicidal capacity of selected alternative compounds (Directive 98/8/CE); diiodometil p-tolylsulfone (DIMPTS), 3-Iodo-2-propynyl butylcarbamate (IPBC), thiabendazole (TBZ) and dodicine clorhydrate (TEGO) versus different types of fungi. The strains used belong to the most common species in tanneries: Aspergillus brasilensis, Trichoderma harzianum, Alternaria alternata i Penicillium funiculosum. In addition, different fungi from real pollution tannery have been isolated from the industry; these are species more resistant to common antifungal chemicals. The antifungal capacity has been compared with selected fungicides normally used in tanneries, such as 2-(thiocianometilthio)-1,3-benzothiazole (TCMTB) and the mixture of phenolic compounds, p-chloro-m-cresol (PCMC) and o-phenylphenol (OPP). First, the Minnimum Inhibition Concentration (MIC) of molecules has been determine against the selected fungi. Subsequently, the effectiveness of different offers of chemicals has been compared using wet blue leather. To complete the tests, selected fungicides have been applied in three different processes: a chrome tanning process, a preservative pickling process and a fatliquoring process of hides tanned with vegetable extracts. Further studies consisted of a microbiological control of samples inoculated with fungi common in tannery, determination of the minimum effective amount of chemical and determination of the fungicide content on the different layers of the hide. The evaluation of the toxicity of process wastewaters associated with their application and the economic viability of the proposed alternatives complemented the studies. The higher antifungal capacity of two of the four fungicides proposed, DIMPTS and IPBC, employed in different processes confirms that are good candidates to be used in the leather sector. Hides obtained using alternative fungicides showed good characteristics, and, from the environmental impact point of view, toxicity from wastewaters was lower for the alternative chemicals against those commonly used. / Aquesta tesi es basa en la recerca d’alternatives als fungicides convencionalment utilitzats en la indústria adobera. Aquests productes han de ser eficaços enfront un alt nombre de fongs, menys tòxics, més acceptables mediambientalment i atractius econòmicament. El principal objectiu és avaluar la capacitat antifúngica dels compostos seleccionats (registrats en la Directiva 98/8/CE); diiodometil-p-tolilsulfona, DIMPTS, 3-iodo-2-propinil-Nbutilcarbamat, IPBC, tiabendazol, TBZ, i la sal sòdica de dodecil-di(aminoetil)-glicina, TEGO, davant diferents tipus de fongs. Les soques utilitzades formen part de les espècies més comuns en les adoberies: Aspergillus brasilensis, Trichoderma harzianum, Alternaria alternata i Penicillium funiculosum. A part, s’han aïllat tres fongs diferents d’indústries adoberes per poder treballar amb contaminacions reals, espècies més resistents als productes antifúngics habituals. La capacitat antifúngica dels compostos seleccionats s’ha comparat amb els fungicides usats normalment en les adoberies: el 2-(tiocianometiltio)-1,3-benzotiazol, TCMTB, i una barreja de compostos fenòlics (p-cloro-m-cresol, PCMC, i o-fenilfenol, OPP). Primer s’ha determinat la Concentració Mínima d’Inhibició (CMI) de les molècules seleccionades davant els fongs descrits. Posteriorment, utilitzant pell wet blue per l’estudi, s’ha comparat l’eficàcia dels productes amb diferents ofertes de cadascun d’ells. Per completar els assajos, s’han aplicat els fungicides escollits en tres processos diferents: un adobament al crom, un píquel de conservació i un greixatge de pell adobada amb extractes vegetals. Sobre la pell obtinguda en cada procés s’han realitzat diverses proves de control de creixement de fongs per avaluar l’eficàcia dels productes, la determinació de la mínima quantitat de producte efectiva i la determinació del fungicida que resta en les diferents capes de la pell. L’avaluació de la toxicitat dels productes associada amb la seva aplicació i la viabilitat econòmica de les alternatives proposades complementen els estudis. L'elevada capacitat antifúngica demostrada utilitzant dos dels quatre fungicides proposats, el DIMPTS i el IPBC confirmen que són bons candidats per utilitzar-se com a fungicides alternatius en la indústria de la pell. Les pells obtingudes utilitzant aquests dos productes presenten bones característiques i l’impacte mediambiental és menor ja que la toxicitat de les aigües residuals obtingudes és més baixa que la toxicitat causada per l’aplicació dels productes convencionals.

Specialty chemicals industry relies on batch manufacturing, since it requires the frequent adaptation of production systems to market fluctuations. To be first in the market, batch industry requires decision-support systems for the rapid development and implementation of chemical processes. Moreover, the processes should be competitive to ensure their long-term viability. General-purpose and flexible plants and the consideration of physicochemical insights to define an efficient operation are also cornerstones for the success of specialty chemical industries. Precisely, this thesis tackles the systematic development of batch processes that are efficient, economically competitive, and environmentally friendly, to assist their agile introduction into production systems in grassroots and retrofit scenarios. Synthesis of conceptual processing schemes and plant allocation subproblems are solved simultaneously, taking into account the plant design. With this purpose, an optimization-based approach is proposed, where all structural alternatives are represented in a State-Equipment Network (SEN) superstructure, following formulated into a Mixed-Logic Dynamic Optimization (MLDO) problem which is later solved to minimize an objective function. Essentially, the strength of the proposed methodology lies in the modeling strategy which combines the different kinds of decisions of the integrated problem in a unique optimization model. Accordingly, it considers: (i) synthesis and allocation alternatives combination, (ii) dynamic process performance models and dynamic control variable profiles, (iii) discrete events associated to transitions of batch phases and operations, (iv) quantitative and qualitative information, (v) material transference synchronization to ensure batch integrity between unit procedures, and (vi) batch and semicontinuous processing elements. Different strategies can be used to solve the resulting MLDO problem. A deterministic direct-simultaneous approach is first proposed. The mixed-logic problem is reformulated into a mixed-integer one, which is fully-discretized to provide a Mixed-Integer Non-Linear Programming (MINLP) that is optimized using conventional solvers. Then, a Differential Genetic Algorithm (DGA) and a hybrid approach are presented. The purpose of these evolutionary strategies is to pose solution alternatives that keep solution goodness while seek for the improvement of computational efficiency to handle industrial-size problems. The optimization-based approach is applied in retrofit scenarios to solve the simultaneous process synthesis and plant allocation, taking into account the physical restrictions of existing plant elements. The production of specialty chemicals based on a competitive reactions system in an existing reactor network is first defined through process development and improvement according to different economic scenarios, decision criteria, and plant modifications. Additionally, a photo-Fenton process is optimized to eliminate an emergent wastewater pollutant in a given pilot plant, pursuing the minimization of processing time and cost. Batch process development in grassroots scenarios is also proven to be a problem of utmost importance to deal with uncertainty in future markets. Seeking for plant flexibility in several demand scenarios, the expected profit is maximized through a two-stage stochastic formulation that includes simultaneous plant design, process synthesis, and plant allocation decisions. A heuristic solution algorithm is used to handle the problem complexity. A grassroots plant design is defined to implement the previous competitive reaction system, where decisions like the feed-forward trajectories or operating modes allow the adaptation of master recipes to different demands. Finally, an acrylic fiber production example is presented to illustrate process development decisions like the selection of tasks, technological alternatives, chemicals, and solvent reuse. / La indústria de productes químics especials es basa en la fabricació discontinua, ja que permet adaptar de forma freqüent els sistemes de producció en funció de les fluctuacions de mercat. Per ser líder al sector, són necessàries eines de suport a la decisió que ajudin a l’àgil desenvolupament i implementació de nous processos. A més, aquests han de ser competitius per garantir la seva viabilitat a llarg termini. Altres peces clau per una operació eficient són l’ús de plantes flexibles així com l’estudi dels fenòmens fisicoquímics. Aquesta tesis aborda justament el desenvolupament sistemàtic de processos químics discontinus que siguin eficients, econòmicament competitius i ecològics, per contribuir a la seva ràpida introducció en els sistemes de producció, tant en escenaris de plantes existents com des de les bases. En concret, es planteja la resolució simultània de la síntesi conceptual d’esquemes de procés i l’assignació d’equips, tenint en compte el disseny de la planta. Amb aquest objectiu, es proposa una metodologia de solució basada en optimització, on les alternatives estructurals es representen en una Xarxa d’Estats i Equips (SEN per les sigles en anglès) que es formula mitjançant un problema d’Optimització Dinàmica Mixta-Lògica (MLDO per les sigles en anglès) que es resol minimitzant una funció objectiu. La solidesa de la metodologia proposada rau en la estratègia de modelat del problema MLDO, que integra els diferents tipus de decisions en un sol model d’optimització. En concret, es consideren: (i) la combinació d’alternatives de síntesi i assignació d’equips, (ii) models de procés i trajectòries de control dinàmics, (iii) esdeveniments discrets associats al canvi de fase i operació, (iv) informació quantitativa i qualitativa, (v) sincronització de transferències de material en tasques consecutives, i (vi) elements de processat discontinus i semi-continus. Existeixen diverses estratègies per resoldre el problema MLDO resultant. En aquesta tesi es proposa en primer lloc un mètode determinístic directe-simultani, on el model mixt-lògic es transforma en un mixt-enter. Aquest es discretitza al seu torn de forma completa per obtenir un problema de Programació No-Lineal Mixta-Entera (MINLP per les sigles en anglès) el qual es pot resoldre utilitzant algoritmes d’optimització convencionals. A més, es presenten un Algoritme Genètic Diferencial (DGA per les sigles en anglès) i un mètode híbrid. Totes dues estratègies esdevenen alternatives de cerca amb l’objectiu de mantenir la bondat de la solució i millorar l’eficàcia de computació per tractar problemes de dimensió industrial. La metodologia de solució proposada s’aplica al desenvolupament de processos discontinus en escenaris de plantes existents, tenint en compte les restriccions físiques dels equips. Un primer exemple aborda la manufactura de productes químics basada en un sistema de reaccions competitives. Concretament, es desenvolupa i millora el procés de producció implementat en una xarxa de reactors considerant diferents escenaris econòmics, criteris de decisió, i modificacions de planta. En un segon exemple, s’optimitza el procés foto-Fenton per ser executat en una planta pilot per eliminar contaminants emergents. Buscant integrar el desenvolupament de procés i el disseny de plantes flexibles en escenaris de base, es presenta una formulació estocàstica en dues etapes per a optimitzar el benefici esperat d’acord a diversos escenaris de demanda. Per gestionar la complexitat d’aquest problema es proposa la utilització d’una heurística. Com a exemple, es planteja el disseny d’una planta de base on implementar l’anterior sistema de reaccions competitives. Decisions com les trajectòries dinàmiques de control o la configuració d’equips permeten adaptar la recepta màster en funció de la demanda. Un darrer exemple defineix el procés de producció de fibra acrílica, il·lustrant decisions com la selecció de tasques, tecnologia, reactius o reutilització de dissolvents. / La industria productos químicos especiales se basa en la fabricación discontinua, la cual permite la adaptación frecuente de los sistemas de producción en función de las fluctuaciones de mercado. Para ser líder en el sector, son necesarias herramientas de soporte a la decisión que contribuyan al ágil desarrollo e implementación de nuevos procesos. Además, éstos deben ser competitivos para garantizar su viabilidad a largo plazo. Otras piezas clave para una operación eficiente son la utilización de plantas flexibles y el estudio de los fenómenos fisicoquímicos. Esta tesis aborda justamente el desarrollo sistemático de procesos químicos discontinuos que sean eficientes, económicamente competitivos y ecológicos, para contribuir a su rápida introducción en los sistemas de producción, ya sea en escenarios de plantas existentes o desde las bases. En particular, se plantea la resoluciónsimultánea de la síntesis conceptual de esquemas de proceso y la asignación de equipos, teniendo en cuenta además el diseño de planta.Con este fin, se propone una metodología de solución basada en optimización, donde todas las alternativas estructurales se representan en una Red de Estados y Equipos (SENpor sus siglas en inglés) que se formula mediante un problema de Optimización Dinámica Mixta-Lógica (MLDO por sus siglas en inglés) que se resuelve minimizando una función objetivo. La solidez de la metodología propuesta reside en la estrategia de modelado delproblema MLDO, que integra los diferentes tipos de decisiones en un solo modelo de optimización. En concreto, se consideran: (i) la combinación de alternativas de síntesis y asignación de equipos, (ii) modelos de proceso y trayectorias de control dinámicos, (iii)eventos discretos asociados al cambio de fase y operación, (iv) información cuantitativa y cualitativa, (v) sincronización de la transferencia de material en tareas consecutivas, y(vi) elementos de procesado discontinuos y semicontinuos.Existen diversas estrategias para resolver el problema MLDO resultante. En esta tesis se propone en primer lugar un método determinístico directo-simultáneo, donde el problema mixto-lógico se reformula en un mixto-entero. A su vez, éste se discretiza de formacompleta para obtener un problema de Programación No-Lineal Mixta-Entera (MINLP por sus siglas en inglés) el cual se puede resolver mediante algoritmos de optimización convencionales. Además, se presentan un Algoritmo Genético Diferencial (DGA por sussiglas en inglés) y un método híbrido. Ambas estrategias se plantean como alternativas de búsqueda con objeto de mantener la bondad de la solución y mejorar la eficacia de computación para tratar problemas de dimensión industrial.La metodología de solución propuesta se aplica al desarrollo de procesos discontinuos en escenarios con plantas existentes, teniendo en cuenta las restricciones físicas de los equipos. Un primer ejemplo aborda la fabricación de productos químicos basada en un sistema de reacciones competitivas. En concreto, se desarrolla y mejora el proceso de producción a implementar en una red de reactores considerando diferentes escenarios económicos, criterios de decisión, y modificaciones de planta. En un segundo ejemplo,se optimiza el proceso foto-Fenton a ser ejecutado en una planta piloto para eliminar contaminantes emergentes.Persiguiendo la integración del desarrollo de proceso con el diseño de plantas flexi-bles en escenarios base, se presenta asimismo una formulación estocástica en dos etapas para optimizar el beneficio esperado de acuerdo a varios escenarios de demanda. Paramanejar la complejidad de dicho problema se propone la utilización de una heurística.Como ejemplo, se plantea el diseño de una planta de base para implementar el anterior sistema de reacciones competitivas, donde decisiones como las trayectorias dinámicas de control o la configuración de equipos permiten adaptar la receta máster en función de lademandas. Por último, se presenta un ejemplo donde se define el proceso de producción de fibra acrílica, ilustrando decisiones como la selección de tareas, alternativas tecnológicas, reactivos químicos o la reutilización de disolventes.

La reacción de metanol a hidrocarburos es una reacción descubierta a finales de los años 70 por investigadores de la compañía Mobil. Esta reacción tiene que ser catalizada mediante catalizadores de tipo zeolítico, principalmente y originalmente la zeolita ZSM-5. La reacción permite mediante dos deshidrataciones consecutivas el paso de metanol a dimetiléter y el paso de este a hidrocarburos, inicialmente a olefinas ligeras. La reacción es un proceso de refinería que presenta un amplio rango de productos que van desde el metano hasta el dureno. Dependiendo de las variables de reacción (temperatura, velocidad espacial, presión parcial de la alimentación, acidez del catalizador.) la selectividad de la reacción de metanol a hidrocarburos se ve modificada dando diferentes subprocesos tales como el MTG (metanol a gasolinas) o el MTO (metanol a olefinas) entre otros.El principal problema de la reacción de metanol a hidrocarburos es la desactivación de los catalizadores zeolíticos por formación de coque desactivante en el interior de los poros del catalizador. Este proceso llega a bloquear los poros y a desactivar los centros activos del catalizador disminuyendo e incluso anulando su actividad.Los fluidos supercríticos presentan una serie de propiedades físicas intermedias entre los líquidos y los gases que los hacen atractivos como medio para realizar una serie de reacciones. Entre estas propiedades se encuentra el aumento de solubilidad con respecto a los gases y el aumento de las propiedades de transferencia de masa en relación con las de los líquidos. Estas propiedades les permiten solubilizar el coque desactivante de reacciones en las que intervienen hidrocarburos entre ellas la isomerización del ciclohexeno, la alquilación de los butenos o la reacción de Fischer-Tropsch.En este trabajo aplicaremos los fluidos supercríticos en la reacción de metanol a hidrocarburos utilizando como catalizador la zeolita ZSM-5. Con tal objetivo se ha construido un sistema que permite la realización de la reacción a altas temperaturas (hasta 450 oC ) y a altas presiones (hasta 140 bar) y se estableció una metodología de análisis mediante cromatografía de gases.Los pasos seguidos para realizar este estudio han sido primero el estudio de la influencia de la presión sobre diferentes equilibrios termodinámicos, encontrándose que la presión no altera las conversiones teóricas de una manera significativa. El siguiente paso fue intentar encontrar un disolvente para rebajar los puntos críticos. Sin embargo no se encontró ninguno que fuera inerte a las condiciones de la reacción.En consecuencia se tuvo que trabajar mediante una alimentación de metanol puro, y debido a que en primer lugar este pasa a dimetiléter y agua, se calcularon la temperatura, presión y composición de los puntos críticos de la mezcla mediante la ecuación de estado de Peng-Robinson para permitir encontrar la región cercana al punto crítico.Tras evaluar las condiciones experimentales propicias se realizaron una serie de experimentos para determinar la influencia de la presión y la temperatura sobre la conversión del metanol y del dimetiléter. Encontrándose que a medida que aumenta la presión la energía de activación aumenta y el factor de efectividad disminuye con la presión y aumentan por efecto de la temperatura.Esto implica que la transferencia de masa dentro de los poros del catalizador a altas presiones y temperaturas sobre los 320-3800C esta parcialmente impedida.Para determinar el efecto de la presión sobre el tiempo de vida de la reacción se realizaron experimentos a tiempos largos en condiciones de presión atmosférica y cercana a las condiciones supercríticas. Los resultados mostraron una prolongación del tiempo de vida del 400% en condiciones cercanas a la supercrítica. También se mostró que la cantidad de metano generada es mayor a alta presión que a presión atmosférica.Por último se analizaron mediante análisis de fisisorción, acidez mediante intercambio iónico y análisis elemental los catalizadores utilizados en los experimentos de tiempo de vida en ellos se encontró que el aumento de tiempo de vida observado en condiciones cercanas a las supercríticas provoca una relentización del proceso de coquización que se ve reflejada en una menor disminución del área superficial, del volumen de poro, la acidez de Brönsted del catalizador y una menor cantidad del carbón depositado sobre la superficie del catalizador. / The methanol to hydrocarbons reaction was discovered at the end of the seventies by the Mobil company researchers. This reaction has to be catalysed by zeolitic catalysts, mainly by the ZSM-5 catalyst. The reaction allow converting methanol to hydrocarbons through two consecutive dehydration steps, the first one produces dimethyl ether from the methanol and the second one produces hydrocarbons, initially light olefins, form the dimethyl ether. The reaction is a refinery process, which produces a wide range of hydrocarbons from the methane to the durene. Depending on the reaction parameters (temperature, space velocity, methanol partial pressure, catalyst acidity ...) the reaction can be modified to obtain different processes as the MTG (methanol to gasoline) or the MTO (methanol to olefins).The principal problem of the methanol to hydrocarbons reaction is the zeolitic catalysts deactivation due to the coke formation inside the catalyst pores. This process can lead to the pores total blockage and to deactivate the catalyst active centres until total loss of activity.The supercritical fluids exhibit physical properties intermediate between the liquid and the gas phases, which made them an attractive medium to perform some chemical reactions.Among these properties there are increase of the solubility related to the gas phase and the increase of the mass transfer properties related to the liquid phase that permit solubilize the coke deposited on the catalyst active surface. This phenomena is particularly important in reactions, where the hydrocarbons are present as the cyclohexene isomerisation, the butene alkylation or the Fischer-Tropsch reaction.The application of the supercritical conditions or near-supercritical conditions to the methanol to hydrocarbons reaction is the main objective of this study. On this purpose, an experimental apparatus was set-up and can work at elevated temperatures (up to 400 oC) and high pressures (up to 140 bar). A gas chromatography methodology has also been established in order to analyse the reaction products.This work proceeded by the following stages: the first one was the study of the pressure influence over different thermodynamic equilibria. This influence is demonstrated to be too low to significantly alter the theoretic conversion. The next stage was to try to find a solvent to reduce the methanol critical point conditions. Nevertheless all the solvents chosen were not inert in the reaction conditions.Consequently, the feed was pure methanol. As the first step of the reaction is the methanol conversion to dimethyl ether and water, the critical point parameters of the reaction mixture (temperature, pressure and composition) has to be calculated by the Peng- Robinson equation of state in order to obtain the supercritical phase boundary conditions.After evaluating the appropriate experimental conditions a set of experiments has been perform to determine the pressure and temperature influence over the methanol and dimethyl ether conversion, when a ZSM-5 catalyst is used. As a conclusion, the pressure effect over the dimethyl ether conversion to hydrocarbons exhibits a decrease of the activation energy and the effectiveness factor as the pressure increases. The effectiveness factor increases with higher temperatures. It means that mass transport inside the catalyst pores is partially disabled, when pressure and temperature values are between 55 and 135 bar and 320 and 380oC, respectively.To determine the near critical conditions influence in the catalyst life time some experiments have been carried out with the ZSM-5 zeolite over long reaction times at atmospheric pressure and near critical pressure. The results demonstrate a catalyst lifetime prolongation of 400%, when the feed was in near critical condition related to the catalyst lifetime at atmospheric pressure.Finally, the catalysts used in the life time experiments have been analysed. The elemental analysis shows an increase in the total amount of coke deposited over the catalyst in the atmospheric conditions lifetime sample in comparison to the near-critical lifetime sample.The loss of acidity is bigger in the atmospheric conditions lifetime sample than in the near critical one due to the deposition of coke on the active centres. And the physisorption analysis shows lower decrease in the surface area of the near critical conditions lifetime than in atmospheric conditions one.

El trabajo se ha desarrollado en el marco del proyecto MELISSA (Micro Ecological LIfe Support System Alternative) de la Agencia Europea del Espacio. Este proyecto se basa en el diseño de un Sistema de Soporte de Vida basado en microorganismos que pretende gestionar la atmósfera a partir de la transformación de los residuos generados en alimento comestible. Uno de las partes del proyecto es un biorreactor de nitrificación biológica, dicha parte es la que se desarrolla en el presente trabajo. Se ha realizado la caracterización de la operación del proceso de nitrificación biológica en forma de biopelícula en reactores de lecho fijo, para lo cual se han utilizado un reactor a escala piloto (de aproximadamente 8 L de volumen total), y tres reactores a escala laboratorio (de 0.65 mL de volumen total) con las bacterias Nitrosomonas europaea (ATCC 19718) y Nitrobacter winogradskyi (ATCC 25391) inmovilizadas sobre cuentas de poliestireno (Biostyr®). Dentro de la parte de desarrollo de los reactores, se implementó la instrumentación básica y se configuró el control de las principales variables biotecnológicas que afectan al proceso de nitrificación biológica en biopelícula: pH, temperatura, oxígeno disuelto, presión, control de nivel, etc. Para profundizar en el conocimiento de este tipo de reactores se realizó una caracterización física en la que principalmente se estudió la mezcla de la fase líquida y la determinación del coeficiente de transferencia de oxígeno de la fase gas a la líquida. Posteriormente se definió y validó un modelo que permite describir la mezcla de la fase líquida en los reactores de lecho fijo que se utilizaron.Con ambos tipos de biorreactores se realizaron experimentos en continuo de nitrificación biológica para determinar el efecto de las principales variables que afectan al proceso: carga amoniacal, temperatura y oxígeno disuelto. A partir del análisis de éstos experimentos se ha definido y validado un modelo dinámico que permite describir satisfactoriamente los resultados experimentales obtenidos e interpretar diferentes aspectos con relación a la nitrificación biológica, como son la respuesta del sistema ante perturbaciones de carga amoniacal ya sea debido a variaciones en el tiempo de residencia hidráulico o variaciones de la concentración de amonio en el alimento. / The present work has been developed in the frame of the MELISSA project (Micro Ecological LIfe Support System Alternative) of the European Space Agency (ESA). The aim of the project is the design of a Life Support System based in microorganisms, to manage the atmosphere from the transformation of the generated wastes into edible matter. A part of the project is a biological nitrifying bioreactor, which is developed in the present work. A complete characterisation of the operation of the biofilm nitrification process in fixed bed reactors has been carried out. To this purpose, a pilot reactor (8 L of total volume) and three bench reactors (0.65 L of total volume) with immobilised biomass (Nitrosomonas europaea, ATCC 19718 and Nitrobacter winogradskyi, ATCC 25391) onto the surface of polystyrene beads (Biostyr®, used as physical support of the bacteria) were used.In the part of reactor development, the basic instrumentation and control configuration of the main biotechnological variables that have direct influence in the biofilm nitrification process were implemented: pH, temperature, dissolved oxygen, pressure, level control, etc. To go deeply into the study of the behaviour of these reactors, a physical characterisation was carried out. Mainly, the liquid phase mixing and the oxygen mass transfer coefficient from the gas to the liquid phase were studied. After this, a mathematical model was defined and validated in order to describe the liquid phase mixing in the fixed bed reactors used.Biological nitrifying experiments operating in continuous mode were carried out using both, pilot and bench reactors, to determine the effect of the main variables that have strong influence on the process: ammonium input load, temperature and dissolved oxygen. From the analysis of the experiments, a dynamic model that allow the proper description and interpretation of the experimental results obtained has been defined and validated. This model provides a suitable description of the system response against perturbations in the ammonium load, due to changes in the residence time used or, on the other hand, after variations in the input ammonium concentration.