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Avaliação do efeito tipo-antidepressivo da aracdonoil serotonina (AA-5HT) no teste do nado forçado / Evaluation of the antidepressant-like effect of arachidonoyl serotonina (AA-5HT) in the forced swim testSilveira, Kennia Moura 04 April 2018 (has links)
A anandamida, um dos principais endocanabinóides estudados, além de se ligar aos receptores CB1, em altas doses, também é capaz de ativar os receptores vanilóides de potencial transitório tipo-1 (TRPV1). Evidências experimentais indicam que a sinalização mediada por CB1 facilita, enquanto TRPV1 prejudica, a resposta de adaptação a situações de estresse, tornando o animal mais susceptível a suas consequências comportamentais. Estudos demonstram que a inibição da enzima amida hidrolase de ácidos graxos (FAAH), responsável pela hidrólise da anandamida, apresenta efeito tipo-antidepressivo, efeito este também observado quando administrado antagonista de TRPV1. Portanto, a ação combinada de inibição da FAAH e bloqueio de TRPV1 poderia ter potencial efeito antidepressivo. Diante destas evidências, o objetivo do presente trabalho foi investigar se a administração sistêmica de AA-5HT, droga que inibe a FAAH e bloqueia TRPV1, em camundongos submetidos ao teste do nado forçado, promove um efeito tipo-antidepressivo; e ainda, se esse comportamento estaria relacionado com a ativação de receptores canabinóides CB1 e com bloqueio dos receptores vanilóides TRPV1. Camundongos Swiss machos receberam injeção intraperitoneal de AA-5HT (0.1, 0.3, e 1 mg/kg), inibidor da FAAH (URB597 - 0.03, 0.1, 0.3, 1, e 3 mg/kg), antagonista TRPV1 (SB366791 - 0.03, 0.1, 0.3, 1 e 3 mg/kg) e antagonista CB1 (AM251 - 1 e 3 mg/kg) ou o veículo correspondente e, 30 minutos depois, os mesmos animais foram submetidos ao teste do campo aberto. Imediatamente após foram submetidos ao teste do nado forçado. O tratamento com AA-5HT na dose de 0.3mg/kg reduziu significativamente o tempo de imobilidade no teste do nado forçado, sem alterar a atividade locomotora. Por outro lado, as doses testadas de URB597, SB366791 e AM251 não reduziram significativamente o tempo de imobilidade quando comparadas ao grupo veículo. E ainda, não foi observada somação de efeito da coadministração de doses equipotentes e subefetivas de SB366791 e URB597 no teste do nado forçado. Por fim, a pré-administração do antagonista CB1 (AM251) não alterou o tempo de imobilidade de AA-5HT. Apesar disso, quando o AA-5HT foi pré-administrado com o veículo utilizado para diluir o AM251, apresentou aumento significativo no tempo de imobilidade quando comparado aos animais pré-tratados com salina, comprometendo assim a investigação sobre a participação dos receptores CB1 no efeito do AA-5HT. Sendo assim, nossos resultados sugerem que a administração sistêmica de AA-5HT produz um efeito tipo-antidepressivo no teste do nado forçado. Entretanto, mais estudos são necessários para avaliar o envolvimento dos receptores CB1 neste comportamento. / Anandamide, one of the most studied endocannabinoids, acts through interaction with CB1 cannabinoids receptors, and, in higher doses, activate TRPV1 receptor. Experimental evidence shows that CB1-mediated signaling improve, while TRPV1-signaling impairs the adaptative response to stressful situations, thus increasing the susceptibility to behavioral consequences. The administration of inhibitors of fatty acid amide hydrolase (FAAH), responsible for anandamide hydrolysis, exerts antidepressant-like effects in preclinical models. The same effect is observed when TRPV1 antagonist is administered. Therefore, the combined blockade of FAAH and TRPV1 could potentially represent an interesting pharmacological tool to induce antidepressant effects. Based on that, the aim of this study was to investigate if AA-5HT, a FAAH inhibitor and TRPV1 blocker, would induce antidepressant-like effect in mice, and to evaluate the participation of TRPV1 and CB1 receptors in this effect. Male Swiss mice received an intraperitoneal injection of AA-5HT (0.1, 0.3, e 1 mg/kg), FAAH inhibitor (URB597 - 0.03, 0.1, 0.3, 1, e 3 mg/kg), TRPV1 antagonist (SB366791 - 0.03, 0.1, 0.3, 1 e 3 mg/kg) and CB1 antagonist (AM251 - 1 e 3 mg/kg) or the corresponding vehicle and, 30 minutes later, they were individually submitted to the open field test. Immediately after this, the same animal was submitted to the forced swimming test. Our results showed that the treatment with AA-5HT at dose 0,3mg/kg significantly reduced the immobility time in the forced swim test without changing the locomotor activity. On the other hand, the tested dose range of URB597, SB366791 e AM251 did not significantly reduced the immobility time when compared to vehicle group. Furthermore, there was no observed effect of the coadministration of equipotent and sub-effective doses of SB366791 and URB597 on forced swim test. Finally, pre-administration of the CB1 antagonist (AM251) did not alter the immobility time of AA-5HT. However, when AA-5HT was pre-administered with the vehicle used to dilute AM251, it showed a significant increase in immobility time when compared to animals pretreated with saline, thus compromising the study about the participation of CB1 receptors in the effect of AA-5HT. Thus, our results suggest systemic administration of AA-5HT produces an antidepressant-like effect on FST. However, further studies are needed to evaluate the involvement of CB1 receptors in this behavior.
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Imunolocalização de supressores (FOXO3a e PTEN) e ativadores (Akt e phospho-Akt) da transição de folículos primordiais e primários em tecido ovariano humano / Immunolocalization of suppressors (FOXO3a and PTEN) and activators (Akt and phospho-Akt) of primordial and primary follicle transition in human ovarian tissueThaís Tiemi Higa 14 July 2017 (has links)
Mulheres com risco de falência ovariana prematura, assim como aquelas diagnosticadas com câncer que desejam preservar sua fertilidade, têm como opção a criopreservação do tecido ovariano. Esse tecido seria destinado, dependendo do caso, ao reimplante posterior ou para o cultivo in vitro de folículos ovarianos isolados do tecido criopreservado. Nesse contexto, os folículos primordiais são uma população importante tanto por serem mais resistentes ao processo de criopreservação, como por representarem cerca de 90% da população total folicular. Porém o uso destes folículos para procedimentos de Reprodução Assistida ainda é bastante limitado, pois os mecanismos responsáveis pelo seu processo de ativação ainda não são completamente conhecidos. A via de sinalização fosfatidilinositol 3- quinase (PI3K) foi recentemente identificada como determinante para o controle da ativação dos folículos primordiais. Portanto o objetivo deste estudo foi identificar e localizar os fatores componentes da via: supressores (FOXO3a e PTEN) e ativadores (Akt e Phospho-Akt). O que ofereceria uma valiosa ferramenta para elucidar os mecanismos envolvidos na ativação do pool de reserva folicular e permitiria o desenvolvimento de sistemas de cultivo folicular que atuassem diretamente nestes mecanismos. Sendo assim, foi realizado um estudo transversal com amostras de tecido ovariano humano, que foram submetidas à reação imunohistoquímica dos fatores previamente citados. Foram incluídas na casuística 40 pacientes, com idade média de 27,7 anos ± 7,26. Foi realizada uma análise comparativa da expressão dessas proteínas entre os folículos primordiais e primários. Foi encontrada diferença significativa para a proteína Akt, (p<0,05) em que os folículos primordiais (oócito e células da granulosa) manifestaram mais expressão da proteína Akt em comparação aos folículos primários. Também foi encontrada diferença significativa para a proteína phospho-Akt, porém apenas nas células da granulosa, em que houve maior expressão em folículos primordiais comparados aos primários. Enquanto ambos os estágios tiveram marcação negativa para o PTEN e FOXO3a na maioria dos folículos analisados. Sendo assim, neste estudo não foi possível identificar dentre as proteínas escolhidas uma que tivesse expressão claramente característica de uma ou de outra fase folicular, não sendo possível inferir que a atividade de qualquer uma das proteínas fosse estritamente ligada à ativação dos folículo primordiais. / Women at risk of premature ovarian failure, as well as those diagnosed with cancer who wish to preserve their fertility, have, as option, the ovarian tissue cryopreservation. This tissue would be destined, depending on the case, to posterior reimplantation, or for the in vitro culture of ovarian follicles isolated from the cryopreserved tissue. In this context, primordial follicles are an important population of cells. As they are more resistant to the cryopreservation process and they represent about 90% of the whole follicular population. However, the use of these follicles for Assisted Reproduction procedures is still quite limited, since the mechanisms responsible for its activation process are not fully understood. The phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) signaling pathway has recently been identified as determinant for the control of primordial follicle activation. Therefore, the aim of this study was to identify and localize the components of this pathway: suppressors (FOXO3a and PTEN) and activators (Akt and phospho-Akt). This would offer a valuable tool to elucidate the mechanisms involved in the activation of the follicular reserve pool and would allow the development of in vitro culture protocols that would act directly in these mechanisms. Thus, a cross-sectional study with samples of human ovarian tissue was performed. These samples were submitted to the immunohistochemical reaction of the previously mentioned factors. Forty patients were included in the study, with a mean age of 27.7 ± 7.26. A comparative analysis of the expression of these proteins was performed between primordial and primary follicles. A significant difference was found for the Akt protein (p<0.05) in which the primordial follicles (oocyte and granulosa cells) showed more Akt expression than primary follicles. Another significant difference was found for the phosphor-Akt protein, but only for the granulosa cells, where there was a greater expression in primordial follicles compared to the primary ones. While both stages were negatively stained for PTEN and FOXO3a in most of the follicles analyzed. Thus, in this study it was not possible to identify among the selected proteins one that had clearly characteristic expression of one or the other follicular phase, and it was not possible to infer that the activity of any of the proteins was strictly linked to the activation of the primordial follicles.
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Competição entre recuperação e recristalização em uma liga de alumínio contendo dispersão de precipitados. / Competition between recovery and recrystallization in a dispersion hardened aluminium alloy.Padilha, Angelo Fernando 06 June 1977 (has links)
Através de microscopia ótica utilizando luz polarizada e de metalografia quantitativa, determinou-se a cinética de recristalização a 400 ºC de uma liga de alumínio da série 3000 contendo dispersão de precipitados, para diferentes graus de deformação produzidos por laminação. Mediram-se parâmetros, para vários tempos de recozimento, que permitiram determinar: fração volumétrica recristalizada, quantidade de interfaces por unidade de volume entre regiões recristalizadas e não recristalizadas e, entre regiões recristalizadas, assim como velocidade média de migração de interfaces. Fizeram-se também medidas de microdureza em todas as amostras. Os resultados experimentais mostraram que à medida que se diminui o grau de deformação, a quantidade de interfaces por unidade de volume responsáveis pela recristalização diminui exigindo portanto um crescimento através de distâncias maiores para a recristalização se completar, tornando a cinética de recristalização mais dependente do crescimento. Constatou-se a ocorrência de recuperação, durante a recristalização, das regiões não recristalizadas e consequente diminuição da velocidade média de migração de interfaces com o tempo de recozimento. Com a diminuição da deformação, ocorreram frações não recristalizadas residuais, as quais eram maiores para graus de deformação menores, chegando a atingir mais de 80% para 34,4% de redução em espessura. Os resultados sugerem que, para baixas deformações, a velocidade de crescimento tem um papel importante na cinética de recristalização de ligas com dispersão de precipitados. A comparação entre os resultados de metalografia quantitativa e medidas de microdureza evidenciou algumas limitações desta última técnica para estudo de recristalização. / Using polarized light optical micrsocopy and quantitative metalography, kinetics of recrystallization at 400 ºC of an aluminum alloy of 300 series were determined, for different rolling deformation. Recrystallized volume fraction, amount of interfaces per unit volume, between recrystrallized and unrecrystallized regions and between recrystallized grains, and also mean velocity of interface migration were determined. Microhardness measurements were made in all specimens. The results have shown that with decreading deformation, the amount of interfaces responsible for recrystallization, per unit volume, decreases and so the interfaces must sweep larger distances for complete recrystallization, making kinetics more dependent on growth. Recovery of the unrecrystallized regions was observed, during recrystallization, causing decrease in the average velocity of interface migration with annealing time. With decreasing deformation residual unrecrystallized volumes have been observed, after long time anneals. The fraction of residual unrecrystallized region were large than 80-% for 34,4% thickness reduction. The results suggest that, in alloys with precipitates, the growth velocity has an important role in recrystallization kinetics. Some shortcomings of hardness measurements, as a tool to study recrystallization, were shown by comparison between the quantitative metallography and hardness measurements.
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Cinética de amolecimento da liga de alumínio AA 7075 durante recozimento após laminação a frio. / Softening behavior during annealing of col-rolled aluminium alloy 7075.Souza, Saul Hissaci de 06 February 2018 (has links)
O presente trabalho apresenta um estudo sobre o amolecimento após laminação e recozimento da AA 7075, uma liga de alumínio endurecível por precipitação . As amostras recebidas no estado T6 foram caracterizadas com auxílio das técnicas de microscopia óptica de luz polarizada, microscopia eletrônica de varredura, espectroscopia de raios X por dispersão de energia, difração de raios X, condutividade elétrica e dureza Vickers . As amostras foram então separadas em dois grupos. O primeiro sofreu um tratamento térmico de solubilização (485°C por 5 horas) enquanto o segundo foi submetido a um tratamento de superenvelhecimento (300°C por 5 horas) e, em seguida, ambos os grupos de amostras tratadas foram novamente caracterizadas pelas técnicas descritas anteriormente (exceto microscopia óptica) e laminadas a frio. Durante a etapa de laminação, constatou-se a dificuldade em causar deformação plástica na amostra solubilizada. Optou-se em conduzir o estudo com as amostras superenvelhecidas, que foram laminadas com reduções de 45%, 75% e 90% em espessura. A seguir, estas foram submetidas a tratamentos isotérmicos e isócronos com o objetivo de estudar a cinética de amolecimento das amostras deformadas a frio. As amostras superenvelhecidas e deformadas em 45% em redução de espessura, apresentaram somente indícios de início de recristalização (nas amostras tratadas a partir de 250°C por 1 hora) via EBSD, sendo que a maior parte do amolecimento pode ser explicada pelo mecanismo de recuperação. Além disso, a cinética de amolecimento das amostras recozidas nesse grupo apresentaram boa concordância com a lei logarítmica proposta por Kulhmann (1948) e (coincidentemente) também com o consolidado modelo JMAK. As amostras superenvelhecidas e deformadas em 75% e 90% apresentaram comportamento similar (isso é, principalmente recuperação) para recozimentos realizados em temperaturas de até 350°C por uma hora. Recozimentos realizados a 400°C promoveram a recristalização total das amostras desse grupo para tempos inferiores a 15 minutos. Dessa forma, não foi possível estudar a cinética de recristalização para esse segundo grupo de amostras. / This work presents a study about the softening after cold rolling and annealing of aluminium alloy AA 7075. Firstly, polarized light optical microscopy, scanning electron microscopy, energy dispersive X-ray spectroscopy, X-ray diffraction, electrical conductivity and Vickers hardness have been used at the starting material (T6). The samples were then separated in two groups. The former underwent a solubilization heat treatment (485°C for 5 hours) whilst the latter underwent an overaging treatment to grow up the existing precipitates (300°C for 5 hours). Both groups of treated samples were again characterized by the techniques described above (except optical microscopy). In the rolling stage, the difficulty in straining the solubilized sample and the relative ease for doing so to the overaged sample was verified. It was therefore decided to conduct the study with the samples of the second group, which were 45%, 75% and 90% rolled in thickness reduction. Then, they underwent isothermal and isochronous treatments in order to study its softening kinetics by Vickers hardness measurements, polarized light optic microscopy and EBSD. The overaged and rolled samples (45% in thickness reduction) didn\'t present evidences of recrystallization except by very few grains found via EBSD (in samples treated from 250 ° C for 1 hour). So, most of the observed softening can be explained by recovery. In addition, the softening kinetics of the annealed samples in this group showed good agreement with the logarithmic law proposed by Kulhmann (1948) and (coincidentally) also with the consolidated JMAK model. The overaged samples that underwent thickness reduction of 75% and 90% showed a similar behavior (that is, mainly recovery) for annealing at temperatures up to 350 ° C. Annealing at 400 ° C promoted total recrystallization of the samples from this group (75% and 90% in thickness reduction) in less than 15 minutes. Thus, it was not possible to study the kinetics of recrystallization for this second group of samples.
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Vliv stresových faktorů na růst intaktních rostlin podnoží révy vinné in vitroDvořáková, Vladimíra January 2016 (has links)
This thesis deals with the effects of water scarcity and excess lime in the soil to grow rooted grapevine rootstocks. The theoretical part provides summary information on the structure and main functions of the root system with increased attention on the production of phytohormones. The following chapter discusses the physiology of stress in plants, focusing on stress signals and detailed description. Literary part of the closing chapter on the effects of stress on photosynthesis and respiration and the impact of excess lime in the soil to grow grapevine rootstocks. Experimental part follows the results of the bachelor thesis, when being monitored by simulation of stress in vitro only unrooted rootstocks Kober 125 AA when the measured responses of plants to plant growth (length and weight) and their physiological response (quantum yield of photosynthesis, the production of ethylene, ethane, CO2 content and photosynthetically active pigments). These results are in the thesis completed by the determination of the abscisic acid in the above - ground parts of plants. In this thesis, the experiment was performed with the stage of the plant - unrooted nodal segments rootstock Börner shoots and rooted rootstock Börner and Kober 125 AA.
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Cinética de amolecimento da liga de alumínio AA 7075 durante recozimento após laminação a frio. / Softening behavior during annealing of col-rolled aluminium alloy 7075.Saul Hissaci de Souza 06 February 2018 (has links)
O presente trabalho apresenta um estudo sobre o amolecimento após laminação e recozimento da AA 7075, uma liga de alumínio endurecível por precipitação . As amostras recebidas no estado T6 foram caracterizadas com auxílio das técnicas de microscopia óptica de luz polarizada, microscopia eletrônica de varredura, espectroscopia de raios X por dispersão de energia, difração de raios X, condutividade elétrica e dureza Vickers . As amostras foram então separadas em dois grupos. O primeiro sofreu um tratamento térmico de solubilização (485°C por 5 horas) enquanto o segundo foi submetido a um tratamento de superenvelhecimento (300°C por 5 horas) e, em seguida, ambos os grupos de amostras tratadas foram novamente caracterizadas pelas técnicas descritas anteriormente (exceto microscopia óptica) e laminadas a frio. Durante a etapa de laminação, constatou-se a dificuldade em causar deformação plástica na amostra solubilizada. Optou-se em conduzir o estudo com as amostras superenvelhecidas, que foram laminadas com reduções de 45%, 75% e 90% em espessura. A seguir, estas foram submetidas a tratamentos isotérmicos e isócronos com o objetivo de estudar a cinética de amolecimento das amostras deformadas a frio. As amostras superenvelhecidas e deformadas em 45% em redução de espessura, apresentaram somente indícios de início de recristalização (nas amostras tratadas a partir de 250°C por 1 hora) via EBSD, sendo que a maior parte do amolecimento pode ser explicada pelo mecanismo de recuperação. Além disso, a cinética de amolecimento das amostras recozidas nesse grupo apresentaram boa concordância com a lei logarítmica proposta por Kulhmann (1948) e (coincidentemente) também com o consolidado modelo JMAK. As amostras superenvelhecidas e deformadas em 75% e 90% apresentaram comportamento similar (isso é, principalmente recuperação) para recozimentos realizados em temperaturas de até 350°C por uma hora. Recozimentos realizados a 400°C promoveram a recristalização total das amostras desse grupo para tempos inferiores a 15 minutos. Dessa forma, não foi possível estudar a cinética de recristalização para esse segundo grupo de amostras. / This work presents a study about the softening after cold rolling and annealing of aluminium alloy AA 7075. Firstly, polarized light optical microscopy, scanning electron microscopy, energy dispersive X-ray spectroscopy, X-ray diffraction, electrical conductivity and Vickers hardness have been used at the starting material (T6). The samples were then separated in two groups. The former underwent a solubilization heat treatment (485°C for 5 hours) whilst the latter underwent an overaging treatment to grow up the existing precipitates (300°C for 5 hours). Both groups of treated samples were again characterized by the techniques described above (except optical microscopy). In the rolling stage, the difficulty in straining the solubilized sample and the relative ease for doing so to the overaged sample was verified. It was therefore decided to conduct the study with the samples of the second group, which were 45%, 75% and 90% rolled in thickness reduction. Then, they underwent isothermal and isochronous treatments in order to study its softening kinetics by Vickers hardness measurements, polarized light optic microscopy and EBSD. The overaged and rolled samples (45% in thickness reduction) didn\'t present evidences of recrystallization except by very few grains found via EBSD (in samples treated from 250 ° C for 1 hour). So, most of the observed softening can be explained by recovery. In addition, the softening kinetics of the annealed samples in this group showed good agreement with the logarithmic law proposed by Kulhmann (1948) and (coincidentally) also with the consolidated JMAK model. The overaged samples that underwent thickness reduction of 75% and 90% showed a similar behavior (that is, mainly recovery) for annealing at temperatures up to 350 ° C. Annealing at 400 ° C promoted total recrystallization of the samples from this group (75% and 90% in thickness reduction) in less than 15 minutes. Thus, it was not possible to study the kinetics of recrystallization for this second group of samples.
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Competição entre recuperação e recristalização em uma liga de alumínio contendo dispersão de precipitados. / Competition between recovery and recrystallization in a dispersion hardened aluminium alloy.Angelo Fernando Padilha 06 June 1977 (has links)
Através de microscopia ótica utilizando luz polarizada e de metalografia quantitativa, determinou-se a cinética de recristalização a 400 ºC de uma liga de alumínio da série 3000 contendo dispersão de precipitados, para diferentes graus de deformação produzidos por laminação. Mediram-se parâmetros, para vários tempos de recozimento, que permitiram determinar: fração volumétrica recristalizada, quantidade de interfaces por unidade de volume entre regiões recristalizadas e não recristalizadas e, entre regiões recristalizadas, assim como velocidade média de migração de interfaces. Fizeram-se também medidas de microdureza em todas as amostras. Os resultados experimentais mostraram que à medida que se diminui o grau de deformação, a quantidade de interfaces por unidade de volume responsáveis pela recristalização diminui exigindo portanto um crescimento através de distâncias maiores para a recristalização se completar, tornando a cinética de recristalização mais dependente do crescimento. Constatou-se a ocorrência de recuperação, durante a recristalização, das regiões não recristalizadas e consequente diminuição da velocidade média de migração de interfaces com o tempo de recozimento. Com a diminuição da deformação, ocorreram frações não recristalizadas residuais, as quais eram maiores para graus de deformação menores, chegando a atingir mais de 80% para 34,4% de redução em espessura. Os resultados sugerem que, para baixas deformações, a velocidade de crescimento tem um papel importante na cinética de recristalização de ligas com dispersão de precipitados. A comparação entre os resultados de metalografia quantitativa e medidas de microdureza evidenciou algumas limitações desta última técnica para estudo de recristalização. / Using polarized light optical micrsocopy and quantitative metalography, kinetics of recrystallization at 400 ºC of an aluminum alloy of 300 series were determined, for different rolling deformation. Recrystallized volume fraction, amount of interfaces per unit volume, between recrystrallized and unrecrystallized regions and between recrystallized grains, and also mean velocity of interface migration were determined. Microhardness measurements were made in all specimens. The results have shown that with decreading deformation, the amount of interfaces responsible for recrystallization, per unit volume, decreases and so the interfaces must sweep larger distances for complete recrystallization, making kinetics more dependent on growth. Recovery of the unrecrystallized regions was observed, during recrystallization, causing decrease in the average velocity of interface migration with annealing time. With decreasing deformation residual unrecrystallized volumes have been observed, after long time anneals. The fraction of residual unrecrystallized region were large than 80-% for 34,4% thickness reduction. The results suggest that, in alloys with precipitates, the growth velocity has an important role in recrystallization kinetics. Some shortcomings of hardness measurements, as a tool to study recrystallization, were shown by comparison between the quantitative metallography and hardness measurements.
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A phage display study of interacting peptide binding partners of malarial S-Adenosylmethionine decarboxylase/Ornithine decarboxylaseNiemand, Jandeli 24 April 2008 (has links)
Due to the increasing resistance against the currently used antimalarial drugs, novel chemotherapeutic agents that target new metabolic pathways for the treatment of malarial infections are urgently needed. One approach to the drug discovery process is to use interaction analysis to find proteins that are involved in a specific metabolic pathway that has been identified as a drug target. Protein-protein interactions in such a pathway can be preferential targets since a) there is often greater structural variability in protein-protein interfaces, which can lead to more effective differentiation between the parasite and host proteins; and b) the important amino acids in a protein-protein interface are often conserved and even one amino acid mutation can lead to the dissociation of the complex, implying that resistance should be slower to appear. Since polyamines and their biosynthetic enzymes occur in increased concentrations in rapidly proliferating cells, the inhibition of polyamine metabolism is a rational approach for the development of antiparasitic drugs. Polyamine synthesis in P. falciparum is uniquely facilitated by a single open reading frame that encodes both rate-limiting enzymes in the pathway, namely ornithine decarboxylase (ODC) and S-adenosylmethionine decarboxylase (AdoMetDC). The AdoMetDC/ODC domains are assembled in a heterotetrameric bifunctional protein complex of ~330 kDa. Inhibition of both decarboxylase activities is curative of murine malaria and indicates the viability of such strategies in malaria control. It was hypothesized that protein ligands to this enzyme can be utilized in targeting the polyamine biosynthetic pathway in a novel approach. The bifunctional PfAdoMetDC/ODC was recombinantly expressed with a C-terminal Strep-tag-II to allow affinity purification. Subsequent gel electrophoresis analysis showed the presence of 3 contaminating proteins (~60 kDa, ~70 kDa and ~112 kDa) that co-elute with the ~330 kDa AdoMetDC/ODC. Efforts to purify the bifunctional protein to homogeneity included subcloning into a double-tagged vector for tandem affinity purification as well as size-exclusion HPLC. SDS-PAGE analysis of these indicated that separation of the four proteins was not successful, implicating the presence of strong protein-protein interactions. Western blot analysis showed that the ~112 kDa and ~70 kDa peptides were recombinantly produced with a C-terminal Strep-tag, indicating their heterologous origin. The ~60 kDa fragment was however not recognised by the tag-specific antibodies. This implies that this fragment is of E. coli origin. MS-analysis of the contaminating bands showed that the ~112 kDa peptide is an N-terminally truncated form of the full-length protein, the ~70 kDa peptide is a mixture of N-terminally truncated recombinant protein and E. coli DnaK and the ~60 kDa peptide is E. coli GroEL. A P. falciparum cDNA phage display library was used to identify peptide ligands to PfAdoMetDC/ODC. Of the peptides isolated through the biopanning process, only one was shown to occur in vivo. It could however not be conclusively shown that the isolated peptides bind to PfAdoMetDC/ODC and not to the co-eluting E. coli proteins. It is thought that while it is extremely likely that interacting protein partners to PfAdoMetDC/DOC exist, the available technologies are not sufficient to lead to the identification of such partners. / Dissertation (MSc (Biochemistry))--University of Pretoria, 2008. / Biochemistry / unrestricted
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An Investigation Of Student Success Between Associate Of Arts And Non Associate Of Arts Transfer StudentsDavis, LeeAnn 01 January 2005 (has links)
This dissertation investigates the possible association between admission with an Associate of Arts (AA) degree or no-AA degree, gender, and ethnicity with graduation GPA, probation, and persistence of community college transfer students admitted to the University of Central Florida in the 2001-2002 academic year (N = 5283). The literature review found that the majority of studies related to transfer student success compared transfer students to native university students. Little evidence of an association between success rates of transfer students as compared to native university students was indicated in the literature. The literature also did not indicate an association between gender and success rates or ethnic group and success rates. The results of this study suggest that admission degree, gender and ethnicity all had little to no impact on the success rates of the transfer students in the sample. The data for the students in the AA admission group indicated that receipt of an AA degree is related to student persistence. However, the test results indicated that this relationship was very weak. Due to the ever-increasing numbers of transfer students in this country, this study can be an informational tool for administrators at community colleges and universities in relation to transfer student success.
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Characterization of Friction-stir Riveting AA5754Wang, Zixi January 2014 (has links)
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