Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv., 2006. / Härtill 4 uppsatser.

Thesis (honors)--Georgia State University, 2007. / Title from file title page. Under the direction of Dabney White Dixon. Electronic text (88 p. : col. ill.) : digital, PDF file. Description based on contents viewed Sept. 30, 2008. Includes bibliographical references (p. 46-47).

Thesis (Ph.D.)--University of Tennessee Health Science Center, 2008. / Title from title page screen (viewed on January 7, 2009). Research advisor: John D. Schuetz, Ph.D. Document formatted into pages (xi, 113 p. : ill.). Vita. Abstract. Includes bibliographical references (p. 92-113).

Zugl.: Leipzig, Univ., Diss., 2009

Thesis (M.S.) -- University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas, 2005. / Embargoed. Vita. Bibliography: 29-34.

Universiẗat, Diss., 2006--Giessen.

Os nucleotídeos extracelulares são importantes moléculas sinalizadoras, sendo essenciais para o início e manutenção de reações inflamatórias. Estão envolvidos no recrutamento de leucócitos e mastócitos ao sítio inflamatório, na ativação da vasculatura e no prolongamento da ativação inflamatória. Durante o processo inflamatório, o ATP exerce uma série de efeitos. Está envolvido no desenvolvimento da inflamação por um conjunto de ações combinadas: liberação de histaminas de mastócitos, provocando produção de prostaglandinas e produção e liberação de citocinas de células do sistema imune. A adenosina é um potente mensageiro extracelular e tem sido demonstrado que sua produção é aumentada em condições metabólicas desfavoráveis. Os nucleotídeos extracelulares podem ser hidrolisados por uma variedade de enzimas localizadas nas membranas celulares ou presentes na forma solúvel no meio intracelular e/ou extracelular. Assim, as ectonucleotidases desempenham um importante papel no controle da homeostasia dos níveis de nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares. Estas enzimas estão ancoradas na membrana plasmática e possuem seu sítio catalítico voltado para o meio extracelular. Entre elas, pode-se destacar a família das ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPases), a família das ecto-pirofosfatase/fosfodiesterase (E-NPP) e a ecto-5´- nucleotidase. Considerando-se o papel pró-inflamatório do ATP e que a adenosina pode atuar como um imunomodulador, neste estudo foi avaliado o efeito in vitro e in vivo do lipopolissacarídeo sobre as ectonucleotidases de linfócitos e plaquetas e as formas solúveis presentes em soro. Nos resultados in vitro, observamos um aumento na hidrólise dos nucleotídeos em linfócitos e na hidrólise de ADP e AMP em plaquetas. Em soro, ocorreu uma diminuição da atividade da NPP. In vivo, observamos um aumento na hidrólise dos nucleotídeos em linfócitos e um decréscimo na hidrólise de todos os nucleotídeos testados em soro. Esses resultados nos permitem observar que as ectonucleotidases apresentam suas atividades diferentemente alteradas in vitro e após a indução de endotoxemia pela administração de LPS. As alterações observadas sugerem que estas enzimas podem atuar na regulação dos níveis extracelulares de nucleotídeos e nucleosídeos em um modelo capaz de desencadear processos inflamatórios. / Extracellular nucleotides are important signalling molecules, which are essential for the beginning and maintenance of inflammatory reactions. They are involved on leukocytes and mastocytes recruitment to the inflammatory site, vascular activation and in the maintenance of inflammatory activation. During the inflammatory process, ATP exerts a number of actions. It has been involved in the inflammation development by a conjunct of actions: release of histamines from mastocytes, triggering prostraglandine production and release of cytokines from immune cells. Adenosine is a potent extracellular messenger and it has been shown that its production is increased under adverse metabolic conditions. Extracellular nucleotides can be hydrolyzed by a variety of extracellular enzymes located on cell membranes or present in soluble forms on the extra and/or intracellular milieu. Thus, ectonucleotidases play an important role in the control of homeostasis on nucleotide and nucleoside levels. These enzymes are anchored in the plasmatic membrane and their catalytic site is faced to the extracellular milieu. These enzymes comprise the ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolyse family (NTPDases), the ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family (ENPP) and the ecto-5´- nucleotidase. Considering the proinflammatory role of ATP and that adenosine can exert immunomodulatory actions, here we evaluate the in vitro and in vivo effect of lipopolysaccharyde on the ectonucleotidases from lymphocytes, platelets and blood serum of rats. In vitro results have shown an increase on nucleotide hydrolysis in lymphocytes and on ADP and AMP hydrolysis in platelets. In serum, it has been demonstrated a decrease on NPP activity. In vivo, we observed an increase on nucleotide hydrolysis in lymphocytes and a decrease in the hydrolysis of all nucleotides tested in serum. These results suggest that the ectonucleotidases present their activities differentially altered in vitro and after the induction of endotoxemia by LPS administration. The changes observed suggest that these enzymes can act in the regulation of extracellular nucleosides and nucleotides in a model able to trigger inflammatory process.

Os nucleotídeos extracelulares são importantes moléculas sinalizadoras, sendo essenciais para o início e manutenção de reações inflamatórias. Estão envolvidos no recrutamento de leucócitos e mastócitos ao sítio inflamatório, na ativação da vasculatura e no prolongamento da ativação inflamatória. Durante o processo inflamatório, o ATP exerce uma série de efeitos. Está envolvido no desenvolvimento da inflamação por um conjunto de ações combinadas: liberação de histaminas de mastócitos, provocando produção de prostaglandinas e produção e liberação de citocinas de células do sistema imune. A adenosina é um potente mensageiro extracelular e tem sido demonstrado que sua produção é aumentada em condições metabólicas desfavoráveis. Os nucleotídeos extracelulares podem ser hidrolisados por uma variedade de enzimas localizadas nas membranas celulares ou presentes na forma solúvel no meio intracelular e/ou extracelular. Assim, as ectonucleotidases desempenham um importante papel no controle da homeostasia dos níveis de nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares. Estas enzimas estão ancoradas na membrana plasmática e possuem seu sítio catalítico voltado para o meio extracelular. Entre elas, pode-se destacar a família das ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPases), a família das ecto-pirofosfatase/fosfodiesterase (E-NPP) e a ecto-5´- nucleotidase. Considerando-se o papel pró-inflamatório do ATP e que a adenosina pode atuar como um imunomodulador, neste estudo foi avaliado o efeito in vitro e in vivo do lipopolissacarídeo sobre as ectonucleotidases de linfócitos e plaquetas e as formas solúveis presentes em soro. Nos resultados in vitro, observamos um aumento na hidrólise dos nucleotídeos em linfócitos e na hidrólise de ADP e AMP em plaquetas. Em soro, ocorreu uma diminuição da atividade da NPP. In vivo, observamos um aumento na hidrólise dos nucleotídeos em linfócitos e um decréscimo na hidrólise de todos os nucleotídeos testados em soro. Esses resultados nos permitem observar que as ectonucleotidases apresentam suas atividades diferentemente alteradas in vitro e após a indução de endotoxemia pela administração de LPS. As alterações observadas sugerem que estas enzimas podem atuar na regulação dos níveis extracelulares de nucleotídeos e nucleosídeos em um modelo capaz de desencadear processos inflamatórios. / Extracellular nucleotides are important signalling molecules, which are essential for the beginning and maintenance of inflammatory reactions. They are involved on leukocytes and mastocytes recruitment to the inflammatory site, vascular activation and in the maintenance of inflammatory activation. During the inflammatory process, ATP exerts a number of actions. It has been involved in the inflammation development by a conjunct of actions: release of histamines from mastocytes, triggering prostraglandine production and release of cytokines from immune cells. Adenosine is a potent extracellular messenger and it has been shown that its production is increased under adverse metabolic conditions. Extracellular nucleotides can be hydrolyzed by a variety of extracellular enzymes located on cell membranes or present in soluble forms on the extra and/or intracellular milieu. Thus, ectonucleotidases play an important role in the control of homeostasis on nucleotide and nucleoside levels. These enzymes are anchored in the plasmatic membrane and their catalytic site is faced to the extracellular milieu. These enzymes comprise the ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolyse family (NTPDases), the ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family (ENPP) and the ecto-5´- nucleotidase. Considering the proinflammatory role of ATP and that adenosine can exert immunomodulatory actions, here we evaluate the in vitro and in vivo effect of lipopolysaccharyde on the ectonucleotidases from lymphocytes, platelets and blood serum of rats. In vitro results have shown an increase on nucleotide hydrolysis in lymphocytes and on ADP and AMP hydrolysis in platelets. In serum, it has been demonstrated a decrease on NPP activity. In vivo, we observed an increase on nucleotide hydrolysis in lymphocytes and a decrease in the hydrolysis of all nucleotides tested in serum. These results suggest that the ectonucleotidases present their activities differentially altered in vitro and after the induction of endotoxemia by LPS administration. The changes observed suggest that these enzymes can act in the regulation of extracellular nucleosides and nucleotides in a model able to trigger inflammatory process.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-12-13T18:17:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Douglas de Souza Moreira.pdf: 7794967 bytes, checksum: 2d88472031668d7a41792b1f3ad4546e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-13T18:17:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Douglas de Souza Moreira.pdf: 7794967 bytes, checksum: 2d88472031668d7a41792b1f3ad4546e (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou / Transportadores ABC (ATP-binding cassette) abrangem proteínas transmembrana, que utilizam a energia resultante da hidrólise de ATP, para transportar uma variedade de moléculas através de membranas biológicas, incluindo drogas quimioterapêuticas. Alguns membros dessa superfamília ABC estão associados com quimioresistência através da superexpressão de proteínas de resistência a múltiplas drogas (multidrug resistance associated protein – MRP). Uma dessas proteínas é a Pgp (P-glicoproteína), que está relacionada à resistência através da extrusão de compostos tóxicos da célula. O gene MRPA, um transportador da subfamília ABCC, está envolvido na resistência pelo sequestro do conjugado metal-tiol em vesículas próximas da bolsa flagelar da Leishmania. Neste estudo, formas promastigotas de populações sensíveis e resistentes ao antimonial trivalente (SbIII) de quatro espécies de Leishmania, L. (V.) guyanensis, L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensise L. (L.) infantum chagasi, foram analisadas quanto: a localização cromossômica, presença de amplificação extracromossomal e análise da amplificação do gene MRPA; níveis de mRNA dos genes MRPA e MRP; expressão da proteína Pgp e determinação do nível intracelular de SbIII. Ensaios de PFGE indicaram a associação de amplificação cromossomal e extracromossomal do gene MRPA com o fenótipo de resistência à droga nas espécies de Leishmania estudadas. Os resultados obtidos através dee lise alcalina dos parasitos mostraram a presença de amplificação extracromossomal apenas na amostra resistente de L. (V.) braziliensis. Análises de Southern blot com as endonucleases BamHI e HindIII indicaram a presença de polimorfismos na sequência do gene MRPA em algumas amostras de Leishmania analisadas. Adicionalmente, foi observada amplificação desse gene nas populações de Leishmania resistentes ao SbIII. Ensaios de PCR quantitativo em tempo real mostraram aumento dos níveis de mRNA do gene MRPA nas populações resistentes de L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis, comparado com seus respectivos pares sensíveis. Os níveis de mRNA do gene MRP estão aumentados em todas as populações de Leishmania resistentes ao SbIII analisadas neste estudo. Os resultados de Western blot revelaram que a proteína Pgp está mais expressa nas populações resistentes de L. (V.) guyanensis eL. (L.) amazonensis. Os dados obtidos de quantificação dos níveis intracellulares de SbIII por espectrometria de absorção atômica em forno de grafite mostraram uma redução no acúmulo de SbIII, nas populações resistentes de L. (V.) guyanensis,L. (L.) amazonensise L. (V.) braziliensis, quando comparadas às respectivas populações sensíveis. Nossos resultados indicam que os mecanismos de resistência ao antimônio são diferentes entre as espécies de Leishmania analisadas. / ATP-binding cassette (ABC) transporters comprise transmembrane proteins that use energy from ATP hydrolysis to transport a variety of molecules across biological membranes, including chemotherapeutic drugs. Some members of this ABC superfamily are associated with chemoresistance by overexpression of multidrug resistance associated proteins (MRP). One of these proteins is the Pgp (P-glycoprotein), which is associated with resistance by extruding toxic compounds outside the cell. The MRPA gene, a transporter of ABCC subfamily, is involved in the resistance by sequestering metal-thiol conjugate in vesicles close to the flagellar pocket of Leishmaniaparasite. In this study, promastigote forms of susceptible and trivalent antimony (SbIII)-resistant populations of four Leishmaniaspecies, L. (V.) guyanensis, L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensis and L. (L.) infantum chagasi, were analyzed for: chromosomal location, presence of extrachromosomal amplification and analysis of amplification of the MRPA gene; the mRNA levels of MRPA and MRP genes; Pgp protein expression and determination of intracellular SbIII level. PFGE analysis indicated the association of chromosomal and extrachromosomal amplification ofMRPA gene with SbIII-resistance phenotype in Leishmania species studied. The results obtained by alkaline lysis of these Leishmanias amples showed the presence of extrachromosomal amplification only in the SbIII-resistant L. (V.) braziliensis population. Southern blot analysis with the endonucleases BamHI and HindIII indicated the presence of polymorphisms in the sequence of MRPA gene in some Leishmania samples analyzed. Additionally, we observed amplification of thisgene in all SbIII-resistant Leishmania populations analyzed. Real-time quantitative RT-PCR assays showed increased levels of mRNA MRPA gene in SbIII-resistant populations of L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis compared to their respective susceptible counterparts. The levels of mRNA MRP gene are increased in all SbIII-resistant Leishmania populations analyzed in this study. Western blot analysis revealed that Pgp protein is more expressed in SbIII-resistant L. (V.) guyanensisand L. (L.) amazonensispopulations. The intracellular level of SbIII quantified by graphite furnace atomic absorption spectrometry showed a reduction in the accumulation of Sb in SbIII-resistant L. (V.) guyanensis, L. (L.) amazonensisand L. (V.) braziliensis populations when compared to their respective susceptible populations. Our results indicate that the mechanisms of antimony-resistance are different between species of Leishmania analyzed.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-11-04T15:03:55Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 242374 bytes, checksum: e0a0f909b979452d08aa2d7671aa36d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-04T15:03:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 242374 bytes, checksum: e0a0f909b979452d08aa2d7671aa36d4 (MD5) Previous issue date: 2004-06-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Avaliou-se a interferência da caseína, lipídeo, sacarose, Staphylococcus carnosus e esporos de Bacillus subtilis na determinação da bioluminescência. As substâncias orgânicas e os microrganismos em suspensões ou aderidos ao aço inoxidável, AISI 304, n° 4 foram analisados isoladamente e em combinações. A bioluminescência foi determinada em luminômetro comercial, com os resultados expressos em Unidades Relativas de Luz (URL). Em relação às suspensões preparadas com três substâncias orgânicas, houve um aumento (p<0,05) no número de URL com a presença de caseína e lipídeo. A sacarose reduziu a bioluminescência. Neste mesmo tipo de suspensão aderida ao aço inoxidável, o número de URL aumentou (p<0,05) com a presença de caseína e sacarose. O lipídeo reduziu a bioluminescência. Constatou-se um maior (p<0,01) número de URL nas suspensões com 5,4x104 CDM.mL-1 de S. carnosus em relação aquelas com 2,9x104 CDM.mL-1 de esporos de B. subtilis. No que se refere às suspensões de células vegetativas ou esporo bacteriano aderidas ao aço inoxidável, adicionadas ou não das três substâncias orgânicas, a bioluminescência para S. carnosus foi sempre maior (p<0,05) do que para os esporos de B. subtilis, independente da concentração estudada. As três substâncias orgânicas reduziram o número de URL (p<0,05) quando combinadas com 5,4x104 CDM.mL-1 de S. carnosus. Quando se utilizou esporo de B. subtilis, as três substâncias orgânicas não tiveram nenhum efeito significativo (p>0,05) na determinação da bioluminescência. Três resultados diferentes foram observados quando se compararam as suspensões contendo simultaneamente as três substâncias mais célula vegetativa e aquelas que continham somente o microrganismo, todas aderidas ao aço inoxidável: redução (p<0,05) no número de URL, quando a bactéria estava na concentração de 5,4x103 CDM.cm-2, aumento na bioluminescência (p<0,05) nas suspensões onde S. carnosus estava presente na concentração de 5,4x102 CDM.cm-2 e nenhuma diferença significativa (p>0,05) foi detectada em presença de célula vegetativa na concentração de 5,4x101 CDM.cm-2. Foi detectado um aumento no número de URL nas suspensões de caseína, lipídeo e sacarose adicionadas de 2,9x103 CDM.cm-2 esporos de B. subtilis em relação à suspensão com as três substâncias orgânicas, todas aderidas ao aço inoxidável. Na comparação envolvendo as outras duas concentrações de esporo bacteriano e a suspensão com as três substâncias, percebeu-se uma redução no número de URL. As substâncias orgânicas, os microrganismos e as combinações entre eles, tanto em análises em suspensão quanto aderidos ao aço inoxidável interferiram em maior ou menor grau na técnica de bioluminescência. A determinação de ATP nas superfícies não deve ser a única técnica usada para monitorar a eficiência da higienização em indústrias de alimentos. Ela pode ser utilizada como uma ferramenta complementar da avaliação microbiológica tradicional. Além disso, para a obtenção de informações confiáveis, deve-se entender as limitações dessa técnica. / The casein, lipid, sucrose, Staphylococcus carnosus and Bacillus subtilis spores interference in the bioluminescence measurement was evaluated. The organic substances and the microorganisms, presents in suspensions or adhered to the stainless steel, were analyzed separately and in combinations. A commercial luminometer was used, with the results expressed in Relative Units of Light (RUL). In relation to the suspensions with the three organic substances, there were an increase (p<0,05) in the RUL measurements with the casein and lipid addition. The sucrose reduced the bioluminescence. In this same suspension, adhered to the stainless steel, the RUL measurements were increased (p <0,05) with the casein and sucrose addition. The lipid reduced the bioluminescence. It was verified (p <0,01) a higher RUL measurement in the suspensions with 5,4x104 CDM.mL-1 of S. carnosus in relationship those with 5,4x104 CDM.mL-1 of B. subtilis spores. For the suspensions of vegetative cells or bacterial spores adhered to the stainless steel, added or not of the three organic substances, the RUL measurements for S. carnosus were always higher (p <0,05) than for the B. subtilis spores. The suspension containing the three organic substances decreased (p <0,05) the RUL measurement when added of 5,4x104 CDM.mL-1 of S. carnosus. When the microorganism was B. subtilis spores, the three organics substances did not showed difference (p>0,05) in the bioluminescence measurement. Three different results in the bioluminescence were observed in the comparison among the suspensions containing the three substances added of vegetative cell and those that contained only the microorganism, all of them adhered to the stainless steel: it was a reduction (p <0,05) in the measurement of RUL, when the bacteria were in the concentration of 5,4x105 CDM.mL-1, it was observed an increase in the bioluminescence (p <0,05) in the suspensions when S. carnosus was present in the concentration of 5,4x104 CDM.mL-1 and it was not observed difference (p>0,05) when the vegetative cell was in the concentration of 5,4x103 CDM.mL- . An increase was detected in the RUL measurement in the casein suspensions, lipid and sucrose added of 2,9x10-3 CDM.cm-2 of B. subtilis spores in relation to the suspension with the three organic substances, all adhered to the stainless steel. In the comparison involving the other two concentrations of bacterial spore and the suspension with the three substances, it was observed a decrease in the RUL measurement. The organics substances, microorganisms and their combinations, in suspensions or adhered to stainless steel, showed an interference on ATP bioluminescence measurements. This technique should be used as an auxiliary tool associated to traditional microbiological analysis. / Não foi localizado o cpf do autor.