Orientador: Clarice Weis Arns / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T13:06:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_RodrigoFranco_D.pdf: 1262824 bytes, checksum: 9c044e92e7146ea5bb090e025e656061 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O herpesvírus eqüino do tipo 1 (EHV-1) é um membro da subfamília Alfaherpesvirinae, implicado no surgimento de distúrbios respiratórios, reprodutivos e nervosos em cavalos. A principal forma de contaminação dos animais é através do contato direto com secreções contaminadas pelo vírus. No eqüino, a disseminação do vírus ocorre pela transposição da infecção respiratória a outros órgãos e sistemas através da corrente sanguínea. Pouco se sabe sobre a ocorrência do EHV-1 no Brasil. Dessa forma, este estudo teve por objetivo o isolamento do EHV-1 a partir de material biológico e produção e análise de dados moleculares de isolados brasileiros de EHV-1. Durante este estudo, foi realizado o isolamento de uma amostra de EHV-1 a partir da inoculação de material clínico em células de derme eqüina (ED). Este isolado foi diagnosticado como EHV-1 através da reação em cadeia da polimerase (PCR) para o gene da timidina quinase (tk). Neste trabalho, foram também realizados os seqüenciamentos de fragmentos de PCR derivados do isolado aqui descrito, de uma outra amostra brasileira de EHV-1 e de duas amostras estrangeiras do vírus para análise filogenética. A análise comparativa entre seqüências permitiu inferências sobre o nível de divergência entre os vírus estudados, além da listagem de seqüências regulatórias para atividade gênica em um sítio do genoma localizado próximo ao gene tk. Na região genômica reportada foram contextualizadas ao menos três genes (ORF 38, ORF 37 e ORF 36). Os dados levantados com o seqüenciamento de amostras de EHV-1 de origens geográficas distintas (Brasil, Europa e América do Norte) não mostraram divergências, o que pode estar associado a um processo seletivo constritivo, que impediria a fixação de novas mutações naquela região. A ausência de divergências também pode estar associada à importância dessa região na regulação gênica do EHV-1. Também é um indicativo para a fidelidade dos mecanismos de replicação envolvidos na síntese do DNA viral, o que sugere a importância da região estudada na regulação da expressão gênica do EHV-1 / Abstract: Equine Herpesvirus Type 1 (EHV-1) is a member of Alphaherpesvirinae subfamily implicated with abortions, respiratory and neurological disturbs in horses. The principal mode of viral transmission is through close contact virus-containing secretions of infected horses. Systemic pathogenesis in which this virus is implicated combines primary respiratory infection and spread of viral particles through the circulatory/lymphatic system. Until today, there are only few studies involving the isolation of this virus in Brazil. Thus, the main goal of this study was the isolation of EHV-1 from biological material and the production and analysis of molecular data derived from Brazilian EHV-1 isolates. Clinical samples were screened by inoculation into Equine Dermis (ED) cells monolayers, searching for the characteristic citopathic effect produced by EHV-1. Inoculation of one tissue sample has presented a suggestive citopathic effect. Re-inoculation of the original tissue homogenate in a second, independent experiment reproduced the same positive result. Following these observations, infection agent diagnostic was done by PCR for thymidine kinase (tk) gene. The results demonstrated that sample was EHV-1 positive. In this work, it was done either the sequencing of PCR fragments derived from two Brazilian and two foreign samples of EHV-1 for filogenetic and genomic analyses purposes. It was assigned at least three Open Reading Frames contexts (ORF 38, ORF 37, ORF 36). The data do not show genetic variation between sequences. The high level of genetic conservation for this region, despite the distinct geographic origins (Brazil, Europe and North America) of EHV-1 samples studied, indicates a strong selection process against the fixation of new mutations. It also highlights a high level of fidelity for DNA replication and strongly suggests the importance of the studied region for EHV-1 gene regulation / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Submitted by Johnny Rodrigues (johnnyrodrigues@ufcg.edu.br) on 2018-09-04T23:45:22Z No. of bitstreams: 1 JOSÉ RÔMULO SOARES DOS SANTOS - TESE PPGMV 2012..pdf: 499950 bytes, checksum: a58df169790a0820def666327bad8f42 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-04T23:45:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JOSÉ RÔMULO SOARES DOS SANTOS - TESE PPGMV 2012..pdf: 499950 bytes, checksum: a58df169790a0820def666327bad8f42 (MD5) Previous issue date: 2012-12-20 / Esta tese inclui uma revisão de literatura e dois artigos. O primeiro capítulo é uma revisão que abrange princípios gerais da teratologia, a epidemiologia, o diagnóstico, a clínica e a patologia das malformações em pequenos ruminantes. No artigo que corresponde ao segundo capítulo, foi estudado a teratogenicidade de Mimosa tenuiflora. Quinze ovelhas, distribuídas em dois grupos foram introduzidas em área invadida pela planta. O Grupo 1, com seis ovelhas prenhes, foi introduzido na área experimental 20 dias após o acasalamento. O Grupo 2, formado por nove ovelhas não prenhes e um carneiro, foi introduzido na área experimental no início do experimento. A cada 15 dias eram realizados exames ultrassonográficos para acompanhamento da gestação. No Grupo 1, três ovelhas abortaram, cada uma um feto sem malformações. Outra ovelha pariu dois cordeiros, um com hiperflexão na articulação interfalangeana proximal no membro torácico direito e outro sem malformações. Outra ovelha pariu um cordeiro com hiperflexão dos dois membros pélvicos na região da articulação tarsometatársica. No grupo 2, uma ovelha abortou um feto sem malformações e cinco pariram cordeiros normais. Três das ovelhas desse grupo não emprenharam durante todo o período experimental, mostrando retornos repetidos ao cio, sugerindo perda embrionária. Concluiu-se que M. tenuiflora, além de causar malformações causa, também, mortalidade embrionária e abortos em ovelhas. No terceiro capitulo, o artigo relata os achados clínicos e patológicos de um caprino com lisencefalia e hipoplasia cerebelar. No exame físico, esse caprino de 30 dias, apresentava incoordenação e incapacidade de ficar em pé, decúbito esternal permanente, ataxia, ausência do reflexo de ameaça, tremores de intenção e nistagmo. Após 11 dias de internamento o caprino foi eutanasiado e necropsiado. Na necropsia, o cérebro não apresentava giros e sulcos e o cerebelo estava reduzido de tamanho. Histologicamente, em todo o córtex cerebral, a substância cinzenta estava mais espessa e a substância branca mais fina que o normal. Os neurônios estavam distribuídos de forma aleatória na substância cinzenta. No cerebelo, as camadas estavam desorganizadas, com localização heterotópica das células. Os achados macroscópicos e histológicos são característicos de lisencefalia e hipoplasia cerebelar. Lisencefalia é uma doença rara na medicina veterinária e não tinha sido descrita em caprinos. / This thesis includes a review and two papers. The first chapter is a review about general principles of teratology and epidemiology, diagnosis, clinical signs and pathology of malformations in small ruminants. The second chapter is a paper that studied the teratogenicity of Mimosa tenuiflora. Fifteen sheep, divided into two groups, were introduced into an area invaded by the plant. Group 1 consisted of six pregnant ewes that were introduced into the experimental area 20 days after mating. Group 2 consisted of nine non pregnant sheep and a ram introduced into the area at the start of the experiment. Every 15 days each sheep was examined by ultrasound to control pregnancy. In Group 1, three sheep aborted single fetuses without malformations. One sheep delivered two lambs, one with hyperflexion of the proximal inter-phalangeal joint of the right forelimb and another without malformations. Another sheep delivered a lamb with a hyperflexion of both hindlimbs in the region of the tarsal-metatarsal joint. Only one sheep delivered a normal lamb. In Group 2, one sheep aborted a fetus without malformations and five delivered normal lambs. Three sheep of this group returned to estrus repeatedly and did not get pregnant during the mating period, suggesting embryonic loss. It is concluded that M. tenuiflora cause malformations, embryonic mortality and abortion in sheep. In the third chapter, the paper relates a case of lissencephaly and cerebellar hypoplasia in a goat. The goat presented sternal recumbence, absent menace response, intention tremors, ataxia, and nystagmus. It was euthanized and necropsied after been hospitalized during eleven days. At necropsy, the surface of the brain was smooth, cerebral sulci and gyri were absent, and the cerebellum was reduced in size. Histologically, in all cerebral cortex, the grey matter was thicker and the white matter was thinner than normal. The neurons were arranged randomly in the grey matter. In the cerebellum, the layers were disorganized and there was heterotopy of the cells. The histologic and gross lesions are characteristic of lissencephaly associated with cerebellar hypoplasia. Lissencephaly is a rare disease in veterinary medicine and had not been reported previously in goats.