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Eficácia do soro do látex natural da seringueira Hevea brasiliensis na cicatrização de escoriações cutâneas em ratos / Efficacy of natural rubber latex serum from Hevea brasiliensis in skin abrasion healing in rats

Leite, Marcel Nani 29 August 2016 (has links)
Quando as escoriações ocorrem é esperada uma cicatrização sem complicações, utilizando produtos para prevenção de infecções e que proporcionam ambiente que otimiza rápida cicatrização com cicatrizes mínimas. Tratamentos com antissépticos tópicos e produtos cicatrizantes são os mais utilizados. Vários relatos demonstram que o soro do látex (SLX) da seringueira Hevea brasiliensis tem propriedades cicatrizantes para úlceras cutâneas. O objetivo deste trabalho foi avaliar citotoxicidade e potencial proliferativo do SLX em ensaios in vitro e sua eficácia em escoriações cutâneas no dorso de ratos. A citotoxicidade do SLX (10%, 1% e 0,1%) foi avaliada em culturas de fibroblastos 3T3 pela determinação da viabilidade celular. A proliferação/migração celular com queratinócitos humanos foi avaliada pelo método scratch assay nas concentrações (1%, 0,1%, 0,01%, 0,001%, 0,0001% e 0,00001%). Para a atividade cicatrizante utilizou-se 72 ratos Wistar submetidos à escoriação no dorso por dermoabrasão, e 3 grupos foram estabelecidos: soro fisiológico (SF), antisséptico (AS-Merthiolate®) e soro do látex (SLX-Regederm®), aplicado diariamente por 10 dias. As lesões foram fotografadas e avaliadas por análise de imagem nos dias 2, 7 e 10 póslesão e calculados os índices de cicatrização das escoriações (ICE) para medir reepitelização. Nos dias 2, 7 e 10 foram sacrificados 8 animais de cada grupo e coletadas amostras para dosagem bioquímica da mieloperoxidase (MPO) e no 10º dia uma parte das biópsias foram separadas para análise histológica da epiderme e crosta. O SLX não apresentou toxicidade aos fibroblastos nas concentrações menores ou iguais à 1%, sendo inviável na concentração de 10%. Pelo scratch assay o SLX apresentou atividade proliferativa sobre queratinócitos humanos principalmente na concentração de 0,01% (89%). O SLX promoveu melhor reepitelização no modelo de escoriação, principalmente no 7º dia, diferente dos demais grupos que tinham atraso na reepitelização. Além disso, quanto às diferenças de espessura da crosta e da epiderme, o grupo SLX promoveu um aumento no número de camadas epidérmicas e menor espessura das crostas. Os grupos SLX e AS apresentaram aumento da enzima MPO no 2º dia, porém com redução significante a partir do 7º dia, diminuindo assim a inflamação e acelerando consequentemente a reepitelização. Os resultados evidenciaram que a aplicação do soro do látex é segura pela não toxicidade e comprova sua eficácia perante a outros produtos, pela propriedade proliferativa para queratinócitos e pela aceleração da cicatrização em modelos de exulcerações cutâneas. / When abrasions occur is expected to heal without complications, using products to prevent infections and provide environment that optimizes rapid healing with minimal scarring. Treatments with topical antiseptics and healing products are the most used. Several reports show that the latex serum (LXS) from Hevea brasiliensis has healing properties for skin ulcers. The objective was to evaluate the cytotoxic and proliferative potential of LXS in vitro assays and their efficacy to heal skin abrasions on the back of rats. LXS cytotoxicity (10, 1 and 0.1%) was evaluated in 3T3 fibroblast cultures by cell viability. The cell proliferation/migration in human keratinocytes was evaluated by the scratch assay method using 1%, 0.1%, 0.01%, 0.001%, 0.0001% and 0.00001% concentrations. For healing activity, 72 Wistar rats were underwent to dermoabrasion on the back and 3 groups were stablished: saline (S), antiseptic (AS-Merthiolate®) and rubber latex serum (LXS-Regederm®). The different products were applied daily for 10 days. The lesions were photographed and evaluated by image analysis on days 2, 7 and 10 post-injury and the abrasion healing rate (AHR) were calculated for evaluation of the re-epithelialization. On days 2, 7 and 10, 8 animals from each group were sacrificed, and samples were taken for biochemical determination of myeloperoxidase (MPO) After that, on day 10, a part of the biopsies was separated for histological analysis of the epidermis and crust. The LXS showed no toxicity to fibroblasts at concentrations less than or equal 1%, being impractical at a concentration of 10%. By the scratch assay, the LXS showed proliferative activity on human keratinocytes, particularly at a concentration of 0.01% (89%). The LXS produced better re-epithelialization in the excoriation model, especially on the 7th day, unlike other groups, in which the re-epithelialization was delayed. Furthermore, it showed significant differences regarding the amount of epidermis and crust. The Regederm group presented an increase in the number of epidermal layers and thinner thickness of their crusts. The LXS and AS groups showed an increase of MPO enzyme on the 2nd day, however, with a significant decrease from the 7th day, thus reducing inflammation and consequently accelerating re-epithelialization. The results showed that the application of the rubber latex serum is safe due its non-toxicity and prove its efficacy comparing to other products, because of its proliferative property for keratinocytes and acceleration of healing in cutaneous exulceration models.
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AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA DAS ABRASÕES GENGIVAIS PROMOVIDAS POR ESCOVAÇÃO NO CÃO / HISTOLOGICAL EVALUATION OF GINGIVAL ABRASIONS ASSOCIATED WITH TOOTHBRUSHING IN THE DOG

Oliveira, Sara Cioccari 02 March 2010 (has links)
Gingival abrasions are associated with toothbrushing. Little is known on the histological nature of these lesions. Objective: To evaluate the histological changes in the gingiva present immediately, 4, 8 and 24 hours after a single toothbrushing episode. Methods: Three healthy mongrel female dogs were initially treated with a full dental prophylaxis. One week later, toothbrushing using a modified single tufted brush were performed for 30s involving the buccal area of the second premolars. Biopsies were obtained by means of full thickness flaps. After regular histological processing, specimens were included in paraffin and three 4um sections of the central area of the corresponding lesions and one section adjacent as a control, were stained with hematoxilyn and eosin. The images were captured in the Image-Pro Plus 5.1® program and examined with a x100 objective. The thickness of the epithelium was measured in 5 different sites along the abraded area. Similar measurements were taken in control areas not involved by brushing contiguous to the lesions. The sum of the vascular area was calculated adding the individual areas of vases present in the connective tissue of each section. The means for the thickness of the epithelium and the percentage of vascular area observed at the different time intervals were compared with ANOVA whereas differences between tests and corresponding controls at each time interval were compared using the t-test (p<0.05). Results: The thickness of the epithelium at the abraded areas was 922,7μm immediately after brushing, 1301,9μm after 4 hours, 1271,1μm after 8 hours and 1280,3μm after 24 hours. The control areas means were 1925,9μm, 2246,5μm, 2069,5μm, 1473,1μm for the same observation intervals. Epithelium thickness was significantly reduced at all time intervals as compared to their controls, except in 24 hours. In the intragroup analysis there weren t observed statistically significant differences for tests, neither for controls. The percentage of vascular area in relation to the connective tissue area was 5,14% immediately after, gradually reduced to 1,25% up to 8 hours with a small increase to 2.3% at 24 hours. Conclusion: Gingival abrasions associated with a single brushing episode are mostly epithelium lesions with a significant reduction in thickness showing a tendency to recovery after 8 hours of observation. / Abrasões gengivais estão associadas com o hábito de escovar os dentes. Pouco se sabe sobre a natureza histológica destas lesões. Objetivo: Avaliar histologicamente as mudanças ocorridas na gengiva imediatamente, 4, 8 e 24 horas após um único episódio de escovação. Metodologia: Três cães, sexo feminino, de raça desconhecida receberam tratamento veterinário e remoção de cálculo dental previamente. Após uma semana, escovações foram realizadas por 30s com o auxílio de uma escova unitufo modificada na região vestibular da gengiva dos segundos pré-molares. Biópsias de tecido mole foram obtidas através de retalho total. Após processamento histológico de rotina, os espécimes foram embebidos em parafina e três cortes histológicos seriados com espessura de 4μm, referentes à área central da lesão, e um corte referente ao controle, foram corados em hematoxilina e eosina. As imagens foram capturadas com o Image-Pro Plus 5.1® e examinadas sob um aumento de 100x. A espessura epitelial foi medida em 5 pontos ao longo da lesão e também na área contígua a esta, correspondente ao controle, não envolvida pela escovação. As médias para espessura epitelial e percentual de leito vascular observados nos diferentes tempos experimentais foram comparadas com ANOVA, e as diferenças entre os grupos teste e controle em cada tempo foram comparadas com o teste t (p<0.05). Resultados: A espessura epitelial nas áreas de abrasão foi de 922,7μm imediatamente após a escovação, 1301,9μm após 4 horas, 1271,1μm após 8 horas e 1280,3μm após 24 horas. Os valores das áreas correspondentes aos controles foram 1925,9μm, 2246,5μm, 2069,5μm, 1473,1μm para os respectivos tempos experimentais. A espessura epitelial foi significativamente reduzida em todos os tempos experimentais, exceto às 24 horas, quando comparada aos controles. Na análise intragrupo não foram observadas diferenças estatísticas significativas tanto para teste quanto para controle. O percentual da área de leito vascular em relação à área de tecido conjuntivo foi 5,14% imediatamente após a escovação, gradualmente reduzido para 1,25% às 8 horas com um leve aumento para 2,35% às 24 horas. Conclusão: Abrasões gengivais associadas a um episódio de escovação são principalmente lesões epiteliais com uma redução significativa da espessura epitelial, demonstrando uma tendência à recuperação após 8 horas de observação.
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Eficácia do soro do látex natural da seringueira Hevea brasiliensis na cicatrização de escoriações cutâneas em ratos / Efficacy of natural rubber latex serum from Hevea brasiliensis in skin abrasion healing in rats

Marcel Nani Leite 29 August 2016 (has links)
Quando as escoriações ocorrem é esperada uma cicatrização sem complicações, utilizando produtos para prevenção de infecções e que proporcionam ambiente que otimiza rápida cicatrização com cicatrizes mínimas. Tratamentos com antissépticos tópicos e produtos cicatrizantes são os mais utilizados. Vários relatos demonstram que o soro do látex (SLX) da seringueira Hevea brasiliensis tem propriedades cicatrizantes para úlceras cutâneas. O objetivo deste trabalho foi avaliar citotoxicidade e potencial proliferativo do SLX em ensaios in vitro e sua eficácia em escoriações cutâneas no dorso de ratos. A citotoxicidade do SLX (10%, 1% e 0,1%) foi avaliada em culturas de fibroblastos 3T3 pela determinação da viabilidade celular. A proliferação/migração celular com queratinócitos humanos foi avaliada pelo método scratch assay nas concentrações (1%, 0,1%, 0,01%, 0,001%, 0,0001% e 0,00001%). Para a atividade cicatrizante utilizou-se 72 ratos Wistar submetidos à escoriação no dorso por dermoabrasão, e 3 grupos foram estabelecidos: soro fisiológico (SF), antisséptico (AS-Merthiolate®) e soro do látex (SLX-Regederm®), aplicado diariamente por 10 dias. As lesões foram fotografadas e avaliadas por análise de imagem nos dias 2, 7 e 10 póslesão e calculados os índices de cicatrização das escoriações (ICE) para medir reepitelização. Nos dias 2, 7 e 10 foram sacrificados 8 animais de cada grupo e coletadas amostras para dosagem bioquímica da mieloperoxidase (MPO) e no 10º dia uma parte das biópsias foram separadas para análise histológica da epiderme e crosta. O SLX não apresentou toxicidade aos fibroblastos nas concentrações menores ou iguais à 1%, sendo inviável na concentração de 10%. Pelo scratch assay o SLX apresentou atividade proliferativa sobre queratinócitos humanos principalmente na concentração de 0,01% (89%). O SLX promoveu melhor reepitelização no modelo de escoriação, principalmente no 7º dia, diferente dos demais grupos que tinham atraso na reepitelização. Além disso, quanto às diferenças de espessura da crosta e da epiderme, o grupo SLX promoveu um aumento no número de camadas epidérmicas e menor espessura das crostas. Os grupos SLX e AS apresentaram aumento da enzima MPO no 2º dia, porém com redução significante a partir do 7º dia, diminuindo assim a inflamação e acelerando consequentemente a reepitelização. Os resultados evidenciaram que a aplicação do soro do látex é segura pela não toxicidade e comprova sua eficácia perante a outros produtos, pela propriedade proliferativa para queratinócitos e pela aceleração da cicatrização em modelos de exulcerações cutâneas. / When abrasions occur is expected to heal without complications, using products to prevent infections and provide environment that optimizes rapid healing with minimal scarring. Treatments with topical antiseptics and healing products are the most used. Several reports show that the latex serum (LXS) from Hevea brasiliensis has healing properties for skin ulcers. The objective was to evaluate the cytotoxic and proliferative potential of LXS in vitro assays and their efficacy to heal skin abrasions on the back of rats. LXS cytotoxicity (10, 1 and 0.1%) was evaluated in 3T3 fibroblast cultures by cell viability. The cell proliferation/migration in human keratinocytes was evaluated by the scratch assay method using 1%, 0.1%, 0.01%, 0.001%, 0.0001% and 0.00001% concentrations. For healing activity, 72 Wistar rats were underwent to dermoabrasion on the back and 3 groups were stablished: saline (S), antiseptic (AS-Merthiolate®) and rubber latex serum (LXS-Regederm®). The different products were applied daily for 10 days. The lesions were photographed and evaluated by image analysis on days 2, 7 and 10 post-injury and the abrasion healing rate (AHR) were calculated for evaluation of the re-epithelialization. On days 2, 7 and 10, 8 animals from each group were sacrificed, and samples were taken for biochemical determination of myeloperoxidase (MPO) After that, on day 10, a part of the biopsies was separated for histological analysis of the epidermis and crust. The LXS showed no toxicity to fibroblasts at concentrations less than or equal 1%, being impractical at a concentration of 10%. By the scratch assay, the LXS showed proliferative activity on human keratinocytes, particularly at a concentration of 0.01% (89%). The LXS produced better re-epithelialization in the excoriation model, especially on the 7th day, unlike other groups, in which the re-epithelialization was delayed. Furthermore, it showed significant differences regarding the amount of epidermis and crust. The Regederm group presented an increase in the number of epidermal layers and thinner thickness of their crusts. The LXS and AS groups showed an increase of MPO enzyme on the 2nd day, however, with a significant decrease from the 7th day, thus reducing inflammation and consequently accelerating re-epithelialization. The results showed that the application of the rubber latex serum is safe due its non-toxicity and prove its efficacy comparing to other products, because of its proliferative property for keratinocytes and acceleration of healing in cutaneous exulceration models.

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