Made available in DSpace on 2016-06-02T19:02:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6426.pdf: 2868015 bytes, checksum: e3bf13cc85e7606dc2d0f7dbb387ebaa (MD5) Previous issue date: 2014-11-24 / Financiadora de Estudos e Projetos / The evaluation of new materials and biomaterials modified with silver nanoparticles is a line of research that has been gaining strength in various knowledge areas including dentistry. Even considering international scientific publications, however, there are still few studies evaluating dental restoration materials that are modified with silver nanoparticles. Proposal: this study aimed to compare a photopolymerizable composite resin modified with an antimicrobial silver nanoparticle additive (an experimental resin), with the photopolymerizable composite resin in its unmodified form (a commercially available dental restoration material), by evaluating the in vitro antibacterial properties and also some of the primary physical properties of the resin. Methodology: composite resin disks were made for three experimental groups: unmodified resin (control group) and modified resin with different silver nanoparticle concentrations: 0.3% and 0.6% wt (groups 1 and 2). The antibacterial activity on the surface of the samples was evaluated by in vitro growth of of Streptococcus mutans and Lactobacillus acidophilus biofilms in a 20% sucrose medium, which is followed by counting the viable cells from the biofilms through serial dilutions after three incubation periods - 1, 4 and 7 days (n = 9). Optical transmittance was tested to measure the percentage of transmittance in the samples (n = 9). The surface roughness was evaluated using Atomic Force Microscopy (n = 9). The colour of the samples and the colour difference between the groups was measured in a colorimetry test according to the CIELab system. The presence of silver in the nanoparticle additive was analysed using X-Ray Fluorescence Spectroscopy. The quality of the dispersion and distribution of silver on the samples was analysed using Transmission Microscopy. The liberation of silver in artificial saliva was also evaluated in vitro after three incubation periods (60, 120 and 210 days) with agitation of the samples, using the Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectroscopy technique. Results: for the three incubation times, the number of viable cells was statistically lower in groups 1 and 2 than in the control group (p < 0.05), and groups 1 and 2 were not statistically different (p > 0.05) for the two bacterial species (ANOVA Two way/Tukey). There was no significant difference in optical transmittance between group 1 and the control (p > 0.05), and group 2 had a lower transmittance value than the other groups (p < 0.05) (ANOVA/Tukey). The analysis of the values of the arithmetic roughness, which was obtained using the NanoScope software, showed that there was no significant difference in surface roughness between the three groups (p > 0.05) (ANOVA/Tukey). From the measurements of the colours, the total colour difference (&#916;E) between all of the groups was higher than 1 (the minimum value that represents a colour alteration perceptible to human vision) and lower than 3,3 (critical &#916;E). The presence of silver in the nanoparticle additive was confirmed in the X-Ray Fluorescence test. Microscopic analysis showed good distribution of silver for groups 1 and 2 (with silver in the four quadrants of the regions analysed). The dispersion was better for group 1 than for group 2 (which showed a higher number of particle clusters). After the three incubation times, silver was not detected in the artificial saliva for the three groups or; if it was present, the concentration was below the limit of detection for this technique (< 0.02 mg/L). Conclusions: the antibacterial property on the surfaces of the experimental resins was verified for the two cariogenic bacteria considered. Furthermore, the addition of silver did not cause negative alterations to the resin modified with the lower concentration of nanoparticles, which makes the continuation of this study possible and valuable. / A avaliação de novos materiais e biomateriais modificados com nanopartículas de prata é uma linha de pesquisa que vem ganhando força em várias áreas do conhecimento, inclusive na área odontológica. Porém, mesmo considerando a publicação científica internacional, ainda há poucas pesquisas que avaliam materiais restauradores dentários modificados desta forma. Proposição: o propósito deste estudo foi comparar a resina composta fotopolimerizável modificada com um aditivo antimicrobiano nanoparticulado de prata (uma resina experimental), com a resina composta fotopolimerizável em sua forma não modificada, um material restaurador dentário disponível comercialmente, avaliando a propriedade antibacteriana, in vitro, e também algumas de suas principais propriedades físicas. Metodologia: foram confeccionados discos de resina composta para 3 grupos experimentais: resina não modificada (grupo controle), e resina modificada com diferentes concentrações de nanopartículas de prata, 0,3 e 0,6% (grupos 1 e 2). A atividade antibacteriana na superfície das amostras foi avaliada pelo crescimento in vitro de biofilme de Streptococcus mutans e Lactobacillus acidophilus em meio de cultura contendo 20% de sacarose, seguido de contagem de células viáveis provenientes dos biofilmes após 3 períodos de incubação, 1, 4 e 7 dias, através de diluições seriadas (n=9). Um ensaio de transmitância óptica foi realizado para medir a porcentagem de transmitância das amostras (n=9). A rugosidade superficial foi avaliada por Microscopia de Força Atômica (n=9). A cor das amostras e a diferença de cor entre os grupos foi medida em um ensaio de colorimetria considerando o sistema CIELab. A presença de prata no aditivo nanoparticulado foi analisada por meio da Espectrometria de Fluorescência de Raios X. A qualidade da dispersão e distribuição da prata nas amostras foi analisada através da Microscopia de Transmissão. Foi também avaliada a liberação de prata em saliva artificial, in vitro, após 3 períodos de incubação das amostras, sob agitação, 60, 120 e 210 dias, através da técnica de Espectrometria de Emissão Óptica por Plasma Acoplado Indutivamente. Resultados: para os 3 tempos de incubação, o número de células viáveis foi estatisticamente mais baixo nos grupos 1 e 2 do que no grupo controle (p < 0,05), e os grupos 1 e 2 não mostraram entre si diferença estatisticamente significante (p > 0,05), para as 2 espécies bacterianas (ANOVA Two way/Tukey). Não houve diferença significante na transmitância óptica entre o grupo 1 e o controle (p > 0,05), já o grupo 2 apresentou um valor de transmitância menor que os demais grupos (p < 0,05) (ANOVA/Tukey). A análise dos valores de rugosidade aritmética, obtidos através do software NanoScope, mostrou que não houve diferença significante na rugosidade superficial entre os 3 grupos (p > 0,05) (ANOVA/Tukey). A partir das medições de cores, a diferença total de cor (&#916;E) entre todos os grupos foi superior a 1 (valor mínimo que representa uma alteração de cor perceptível à visão humana) e inferior a 3,3 (&#916;E crítico). A presença de prata no aditivo nanoparticulado foi confirmada no ensaio de Fluorescência de Raios X. A análise microscópica demonstrou boa distribuição de prata para o grupo 1 e 2 (com prata nos 4 quadrantes das regiões analisadas), e a dispersão foi melhor para o grupo 1 do que para o grupo 2 (que apresentou maior número de aglomerados de partículas). Após os 3 tempos de incubação, não foi detectada a presença de prata na saliva artificial, para os 3 grupos, sendo que, se presente, ela encontrava-se em uma concentração abaixo do limite de detecção da técnica (< 0,02 mg/L). Conclusões: a propriedade antibacteriana foi verificada nas superfícies das resinas experimentais para as duas espécies bacterianas cariogênicas consideradas, e a adição de prata não provocou alterações negativas na resina modificada com a menor concentração de nanopartículas, o que viabiliza a continuidade do estudo.

Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-16T14:30:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Fernanda_Demoliner.pdf: 883689 bytes, checksum: 17b2361f24d2dcbcf6fa64f2b8eb26cc (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-16T20:23:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Fernanda_Demoliner.pdf: 883689 bytes, checksum: 17b2361f24d2dcbcf6fa64f2b8eb26cc (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-16T20:24:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Fernanda_Demoliner.pdf: 883689 bytes, checksum: 17b2361f24d2dcbcf6fa64f2b8eb26cc (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-16T20:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Fernanda_Demoliner.pdf: 883689 bytes, checksum: 17b2361f24d2dcbcf6fa64f2b8eb26cc (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / Sem bolsa / A adesão e formação de biofilmes de micro-organismos a superfícies de equipamentos e utensílios no processamento de alimentos resulta em grave problema para a indústria, pois atua como fonte de contaminação do alimento, por serem mais resistentes a ação de sanitizantes e antimicrobianos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de Pseudomonas spp. e Listeria spp., provenientes de cortes de carnes de frango e de búfalo de frigoríficos e do comércio varejista da região sul do Rio Grande do Sul, de formar biofilmes em superfície de placas de poliestireno e aço inoxidável, bem como verificar a resistência destes a sanificantes e a antimicrobianos. Foram utilizados 69 isolados bacterianos provenientes de cortes de carnes de frango e de búfalo, sendo 19 de espécies de Listeria e 50 de Pseudomonas spp. Os isolados foram avaliados quanto à formação de biofilme em microplacas de poliestireno e em corpos de prova de aço inoxidável. Os isolados formadores de biofilme em aço inoxidável foram testados quanto à ação de sanitizantes: cloro orgânico e quaternário de amônio (200 ppm) e submetidos ao teste de resistência antimicrobiana. A formação biofilme em microplacas de poliestireno foi de 73,7 % para isolados de Listeria spp. e de 32 % para isolados de Pseudomonas spp. Todos os isolados de Listeria spp. e 72% dos isolados de Pseudomonas spp. formaram biofilmes em corpos de prova de aço inoxidável. O quaternário de amônio foi mais eficaz que o cloro orgânico na redução de biofilme de Listeria spp. e Pseudomonas spp. Os isolados pertencentes ao gênero Listeria apresentaram maior resistência à penicilina (94,7 %), à clindamicina (84,2 %), à oxacilina (73,7 %) e à cefepime (57,9 %), sendo que 94,7 % foram resistentes a dois ou mais antimicrobianos. Meropenem foi o antimicrobano menos efetivo para Pseudomonas spp. Também foram encontrados 84% dos isolados de Pseudomonas spp. multirresistentes a antimicrobianos. Conclui-se que os isolados provenientes de cortes de carnes de frango e de bubalino foram formadores de biofilme em poliestireno e aço inoxidável e apresentaram resistência a antimicrobianos, o que confere riscos a saúde do consumidor. / The adhesion and microorganisms biofilm formation on surfaces of equipment and utensilsin food processingresults inserious problem for the industry because it actsas a source of contamination are less resistant to sanitizers and antimicrobial action. The objective of this study was to evaluate the ability of Pseudomonas spp. and Listeria spp. present in chicken and buffalo meat, to form biofilms on the surface of polystyrene plates and stainless steel as well as verify their resistance to sanitizers and antimicrobials. Sixty nine bacterial isolates were used, 19 species of Listeria and 50 species of Pseudomonas spp. The isolates were evaluated to their biofilm formation capacity in polystyrene microplates and stainless steel. Isolated stainless steel biofilm formers were tested for sanitizing action of organic chlorine and quaternary ammonium (200 ppm) and submitted antimicrobial resistance testing. The ability to form biofilmon polystyrene microplates was 73,7 % in isolates of Listeria spp. and 32 % for Pseudomonas spp. All isolates of Listeria spp. and 72 % of Pseudomonas spp. showed the ability to form biofilm on stainless steel specimens. The sanitizing organic chlorine and quaternary ammonium were effective to reduce Listeria spp. and Pseudomonas spp. biofilm formation in stainless steel. Quaternary ammonium was more effective than organic chlorine to reduce Listeria spp. biofilm formation from buffalo meat. Isolates belonging to the Listeria generous showed greater resistance to penicillin (94.7 %), clindamycin (84.2 %), oxacillin (73.7 %) and cefepime (57.9 %), and 94.7 % were resistant to two or more antimicrobial. Meropenem was the less effective antimicroban of or Pseudomonas spp. It was also found that 84 % of isolates of Pseudomonas spp. were multirresistentes to antimicrobianos. The isolates from chicken meat cuts and buffalo were biofilm-forming polystyrene and stainless steel and were resistant to antimicrobials, which gives risk to consumer health.

Fímbrias do tipo IV estão associadas a diversos fenótipos em bactérias gram-negativas, e o presente estudo consistiu na caracterização da fímbria Pil e investigação de seu papel na adesão bacteriana de isolados de EPEC atípica. Por PCR e RT-PCR foram investigadas a presença e a funcionalidade do operon Pil e os resultados demonstraram que este está sendo transcrito somente nos isolados BA558 e BA956. Os genes pilS e pilV foram clonados em vetor de expressão para obtenção das proteínas Pil recombinantes e produção de anticorpos policlonais. A análise qualitativa dos testes de inibição da adesão utilizando os soros anti-PilS e anti-PilV juntos demonstraram que o isolado BA558 apresentou mudança de fenótipo de adesão. Esses resultados nos permitem concluir que o operon Pil está funcional em BA558 e BA956, e a expressão da fímbria Pil nessas cepas não está relacionada à formação de biofilme e autoagregação, porém a proteína fimbrial PilS juntamente com a adesina PilV parecem exercer uma função acessória importante na interação de BA558 às células HEp-2. / Type IV fimbriae are associated with several phenotypes in gram-negative bacteria. The aim of this study was the characterization of the Pil fimbria and its role in the interaction of atypical EPEC isolates in bacterial adhesion. Using PCR and RT-PCR, we investigated the presence and functionality of the pil operon genes. The results showed that these genes are transcribed only in the BA558 and BA956 isolates. The pilS and pilV genes were cloned into an expression vector for recombinant proteins and polyclonal antibodies production. Qualitative analysis of the adherence inhibition assays using both rabbit sera changed to localized-like the phenotype of BA558 isolate adhesion. Together, these results allow us to conclude that the Pil operon is functional only in the BA558 and BA956 isolates and that the expression of Pil fimbriae in aEPEC is not related to biofilm formation and autoaggregation but, the fimbrial PilS protein together with PilV adhesin seem to play an important accessory function in the interaction between the BA558 and epithelial cells in vitro.

Fímbrias do tipo IV estão associadas a diversos fenótipos em bactérias gram-negativas, e o presente estudo consistiu na caracterização da fímbria Pil e investigação de seu papel na adesão bacteriana de isolados de EPEC atípica. Por PCR e RT-PCR foram investigadas a presença e a funcionalidade do operon Pil e os resultados demonstraram que este está sendo transcrito somente nos isolados BA558 e BA956. Os genes pilS e pilV foram clonados em vetor de expressão para obtenção das proteínas Pil recombinantes e produção de anticorpos policlonais. A análise qualitativa dos testes de inibição da adesão utilizando os soros anti-PilS e anti-PilV juntos demonstraram que o isolado BA558 apresentou mudança de fenótipo de adesão. Esses resultados nos permitem concluir que o operon Pil está funcional em BA558 e BA956, e a expressão da fímbria Pil nessas cepas não está relacionada à formação de biofilme e autoagregação, porém a proteína fimbrial PilS juntamente com a adesina PilV parecem exercer uma função acessória importante na interação de BA558 às células HEp-2. / Type IV fimbriae are associated with several phenotypes in gram-negative bacteria. The aim of this study was the characterization of the Pil fimbria and its role in the interaction of atypical EPEC isolates in bacterial adhesion. Using PCR and RT-PCR, we investigated the presence and functionality of the pil operon genes. The results showed that these genes are transcribed only in the BA558 and BA956 isolates. The pilS and pilV genes were cloned into an expression vector for recombinant proteins and polyclonal antibodies production. Qualitative analysis of the adherence inhibition assays using both rabbit sera changed to localized-like the phenotype of BA558 isolate adhesion. Together, these results allow us to conclude that the Pil operon is functional only in the BA558 and BA956 isolates and that the expression of Pil fimbriae in aEPEC is not related to biofilm formation and autoaggregation but, the fimbrial PilS protein together with PilV adhesin seem to play an important accessory function in the interaction between the BA558 and epithelial cells in vitro.