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Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-09-11T19:15:51Z No. of bitstreams: 1 2008_IveniseLealBraga.pdf: 861088 bytes, checksum: 37a6ed21981d73efe67c491d254e0dcc (MD5) / Approved for entry into archive by Luis Felipe Souza Silva(luis@bce.unb.br) on 2009-09-14T16:11:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_IveniseLealBraga.pdf: 861088 bytes, checksum: 37a6ed21981d73efe67c491d254e0dcc (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-14T16:11:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_IveniseLealBraga.pdf: 861088 bytes, checksum: 37a6ed21981d73efe67c491d254e0dcc (MD5) Previous issue date: 2008-12-11 / Introdução: O dengue tem se destacado como uma das mais importantes doenças reemergentes no mundo, atualmente mais da metade da população mundial vive em áreas de risco. No Brasil, apesar dos esforços que vem sendo empreendidos no país para o controle do vetor, cerca de 70% dos municípios brasileiros estão infestados pelo vetor Aedes aegypti, que é um mosquito de hábitos domésticos sendo portanto fundamental a participação da comunidade e conseqüentes mudanças de comportamento da população para seu controle. No Brasil, em 2004, foram implantados projetos-piloto utilizando a metodologia de mobilização social denominada Combi (Communication and Marketing Integrated for Behaviour Impact) visando promover a participação ativa da população utilizando suas próprias soluções e, a conseqüente mudança de comportamento necessárias ao controle do vetor. Essa dissertação teve como objetivo principal avaliar a efetividade da estratégia Combi sobre a implantação de medidas de controle do vetor nas áreas onde foram implantadas em Ibirité/MG e São Luís/MA e em comparação com populações não expostas à intervenção e como objetivos específicos a) verificar os conhecimentos adquiridos pela população sobre a transmissão da dengue e das atitudes relativas à prevenção e controle dessa doença em cada uma das áreas, b) medir a infestação predial de Ae. aegypti em cada um dos municípios antes e depois da intervenção e c) quantificar as mudanças de comportamento relevantes adotadas pela população para a redução da proliferação de mosquitos definidas pela metodologia Combi na área de intervenção e nos grupos de comparação. Resultados: Em Ibirité, verificou-se uma queda significativa da infestação por Aedes aegypti em Vila Ideal (área de intervenção) quando comparados os anos de 2004 e 2006 (p=0,0374). Entretanto, o impacto sobre a positividade de caixas d’água até 2006 não foi mantido e a análise dos resultados dos dados entomológicos coletados em 2008 demonstra que não existe mais diferença significativa entre a área de intervenção e a área de comparação quanto a este aspecto e com relação à manutenção de caixas d’água tampadas adequadamente. Em São Luís uma diferença significativa é verificada quando se analisa a positividade em relação a pupas nos tanques. Isso demonstra que a atividade lavagem de tanque continua a ser realizada e como previsto só impacta sobre a densidade de pupas, já que o desenvolvimento desde o primeiro estádio larval até pupa ocorre em aproximadamente uma semana (p=0,0000). Verificou-se tanto em Ibirité quanto em São Luís um amplo conhecimento em relação aos hábitos do vetor, seus criadouros e os sintomas de dengue. 9 Conclusões: A ação preconizada pela metodologia Combi, em Vila Ideal, foi realizada de forma pontual (tampar caixas d’água) e nenhuma atividade de manutenção foi executada pelos moradores. Em São Luís a ação preconizada para os moradores da localidade Cohab Anil I (lavagem dos tanques utilizando os sete passos) foi mantida pelos moradores e houve adesão de outros moradores da localidade que atualmente também realizam esta atividade. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introdution: Dengue is nowadays one of the most important re-emerging diseases in the world and more than fifty percent of world’s population is now at risk from dengue. In Brazil, although the effort undertook in the country, at present, around 70% of the Brazilian municipalities are infested by the dengue vector, Aedes aegypti ( a domestic mosquito) and to control it is fundamental the community involvement and changes in the population’s behavior. In Brazil, in 2004, was introduced the methodology denominated COMBI (Communication for Behavioral Impact) to motivate the population to participate using her own solutions, to change and maintain behaviors for vector control. The principal objective of this dissertation was evaluate the effectiveness of Combi’s strategy over the adoption of vector control actions in the areas where this was introduced in the municipalities of Ibirité ( Minas Gerais state) an São Luís (Maranhão state) compared with no exposed populations. The specifi objectives were a) evaluate the knowledge of the population about dengue transmission and behaviors related to prevention and control of this disease; b) measure the Aedes aegypti infestation in the municipalities before and after the intervention and c) quantify the important changes of behavior adopted by the population to reduce the mosquito infestation defined by the methodology Combi in the intervention and confrontation. Results: In Ibirité an significant reduction in the Aedes aegypti infestation was verified in Vila Ideal (intervention area) when the years of 2004 and 2006 were compared (p=0,0374). However, the impact over water tanks was not carried out. In 2008, the analysis of entomologic data showed no more significant difference between the areas relative to infestation by Aedes aegypti and covered water tanks. In São Luís a significant difference was verified in the pupae positivity in water reservoirs. This showed that the activity of wash reservoirs continues nowadays and as was predictable only impact over pupae density because of the time of development from egg to pupae (a week) (p= 0,0000). In both municipalities was verified a widely knowledge about the vector, breeding sites and dengue symptoms’. Conclusion: The activity defined by Combi methodology’s in Vila Ideal/Ibirité was punctual was not maintained by the inhabitants. In São Luis, the activity defined for the inhabitants of Cohab Anil I was maintained and nowadays more inhabitants realize the activity.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:35:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_2440_Eduardo Roberto Cole.pdf: 824296 bytes, checksum: 4e07ddc64143283e79dda5885925fe74 (MD5) Previous issue date: 2008-03-07 / O dengue é considerado a mais importante das arboviroses humanas, constituindo atualmente um dos principais problemas de Saúde Pública no mundo. A doença é causada por um vírus do gênero Flavivirus, com quatro diferentes sorotipos, transmitidos por mosquitos do gênero Aedes, sendo o Aedes aegypti seu principal vetor. O controle do vetor por meio de inseticidas sintéticos figura como a principal medida adotada no combate a doença, uma vez que não existem vacinas efetivas contra os diferentes sorotipos do vírus. Os inseticidas, apesar de eficazes, apresentam sérios problemas relacionados ao seu uso, dentre os quais podem ser destacados os danos ambientais, a toxicidade para uso humano e o risco de desenvolvimento de larvas e adultos resistentes.

Submitted by Rafael Santana (rafael.silvasantana@ufpe.br) on 2018-01-30T19:47:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Larissa Gonçalves Maciel dQF UFPE.pdf: 3957238 bytes, checksum: 1d2fc6e52d8c1c39483b14245030f062 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-30T19:47:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Larissa Gonçalves Maciel dQF UFPE.pdf: 3957238 bytes, checksum: 1d2fc6e52d8c1c39483b14245030f062 (MD5) Previous issue date: 2016-04-11 / CNPQ / A busca por novos métodos de controle do vetor Aedes aegypti tem sido amplamente realizada para diminuir a transmissão de arboviroses como Zika e Chikungunya que têm um grande impacto em saúde pública atualmente. Macromoléculas envolvidas em vias metabólicas essenciais para a sobrevida do mosquito tornam-se alvos moleculares importantes para o controle desses vetores. Uma das vias de detoxificação desta espécie é a via das quinureninas, que em uma das etapas, converte 3-hidroxiquinurenina (3-HK - espécie reativa de oxigênio e nitrogênio) em ácido xanturênico (substância atóxica) por meio da 3hidroxiquinurenina transaminase (HKT). A proposta deste trabalho é desenvolver larvicidas que atuam como inibidores da atividade enzimática da HKT, causando morte do inseto. Os inibidores sintetizados foram planejados após resultados de Docking Molecular obtidos por nosso grupo com a HKT ortóloga de Anopheles gambiae. Esses compostos são inéditos e foram bem caracterizados, exibindo alto grau de pureza. A síntese foi realizada em três etapas e com rápida purificação, fatores facilitadores para a produção em larga escala. A proteína HKT recombinante fusionada à Glutationa-S-transferase (HKT/GST) foi produzida em Escherichia coli para avaliação da inibição dos compostos sintetizados. A HKT/GST purificada e dialisada apresentou um padrão de migração de aproximadamente 62 kDa e exibiu atividade em avaliação funcional através de ensaio enzimático desenvolvido para análise em HPLC com detector UV. Os 12 compostos testados mostraram inibição parcial da HKT/GST, sendo os compostos com o anel aromático com substituição para-anisoíla e sem substituição os melhores inibidores, com valores de razão da área do pico de 3-HK na reação sem inibidor e após a inibição que são 0,69 e 0,64 respectivamente. Isso significa em relação à razão das áreas do pico do 3-HK, quanto mais próxima de zero, mais diferentes são as áreas e consequentemente maior o acúmulo do substrato. Esses resultados corroboram com a hipótese de que os sais sintetizados são inibidores da HKT e servirão como molde para o desenvolvimento de inibidores mais potentes. / The search for new methods of control of Aedes aegypti has been widely performed to reduce the transmission of arboviruses as Zika and Chikungunya that have a major impact on public health today. Macromolecules involved in essential metabolic pathways for the mosquito survival become important molecular targets for the control of these vectors. One of the detoxification pathways of this species is the kynurenine pathway that in one of the steps, converts 3-hydroxykynurenine (3-HK - reactive oxygen and nitrogen species) in xanturenic acid (non-toxic substance) by 3-hydroxykynurenine transaminase (HKT). The purpose of this work is to develop larvicides that act as inhibitors of the enzymatic activity of HKT, causing insect death. The synthesized inhibitors were planned after results of Molecular Docking obtained by our group with HKT ortholog of Anopheles gambiae. These compounds are unpublished and were well characterized, exhibiting high purity. The synthesis was carried out in three stages and rapid purification, facilitating factors for large-scale production. Recombinant HKT protein fused to the Glutathione S-transferase (HKT/GST) was produced in Escherichia coli for evaluation of inhibition of the synthesized compounds. The HKT/GST purified and dialyzed showed a pattern of migration of approximately 62 kDa and exhibited activity in functional assessment by enzymatic assay developed for analysis on HPLC with UV detector. The 12 tested compounds showed partial inhibition of HKT/GST, which compounds with the aromatic ring substitution para-anisole and without substituent the best inhibitors with ratio values of the peak area of 3-HK in no inhibitor reaction and after inhibition which are 0.69 and 0.64, respectively. This means in relation to the peak area ratio of 3-HK, the nearer to zero, the different between the areas are higher and therefore there is more accumulation of the substrate. These results corroborate the hypothesis that the salts synthesized are HKT inhibitors and serve as a template for the development of more potent inhibitors.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-12T21:08:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Ana Patricia Silva de Oliveira.pdf: 5111129 bytes, checksum: af79056aff11b9b98d1feb7c14777b44 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-17T20:07:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Ana Patricia Silva de Oliveira.pdf: 5111129 bytes, checksum: af79056aff11b9b98d1feb7c14777b44 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-17T20:07:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Ana Patricia Silva de Oliveira.pdf: 5111129 bytes, checksum: af79056aff11b9b98d1feb7c14777b44 (MD5) Previous issue date: 2016-07-27 / FACEPE / Sementes de Moringa oleifera contêm lectina solúvel em água (WSMoL) que possui atividades larvicida, ovicida e estimulante de oviposição sobre Aedes aegypti e atividade termiticida contra Nasutitermes corniger. Esta tese descreve a purificação e caracterização da lectina WSMoLᴄ a partir de extrato aquoso de torta de moringa, co-produto obtido após extração do óleo, seus efeitos na sobrevivência de larvas, ovos e na oviposição de A. aegypti, a atividade inseticida sobre N. corniger e os efeitos de extratos, WSMoL e WSMoLC na sobrevivência e nutrição de insetos Sitophilus zeamais. WSMoLᴄ foi extraída em água destilada, fracionamento com sulfato de amônio e cromatografia em coluna de quitina. A lectina foi avaliada quanto à especificidade a carboidratos, por SDS-PAGE seguida de espectrometria de massas e estabilidade estrutural. Atividade larvicida contra A. aegypti foi determinada incubando larvas L4 por 24 h com o extrato ou WSMoLᴄ. A resistência da lectina à degradação por proteases digestivas foi determinada. Atividade ovicida de WSMoLᴄ foi avaliada incubando ovos com a lectina por 72 h e o efeito na oviposição foi realizado com fêmeas grávidas postas por 14 h em gaiolas contendo recipientes com água destilada e outro com lectina. Atividade termiticida foi avaliada em placas de Petri contendo discos de papel de filtro impregnados com WSMoLᴄ. Para avaliar a atividade inseticida contra S. zeamais, os insetos foram incubados por 7 dias em placas de Petri contendo dieta suplementada com extrato de sementes íntegras, extrato da torta, WSMoL ou WSMoLᴄ. A sobrevivência e parâmetros nutricionais foram avaliados. A interação de WSMoLᴄ com enzimas digestivas dos insetos também foi avaliada. WSMoLᴄ é uma proteína formada por α-hélices e apresentou duas bandas polipeptídicas (15 e 20 kDa) em SDS-PAGE. Análise por espectrometria de massas revelou similaridades com outras proteínas de sementes de moringa. A atividade hemaglutinante de WSMoLᴄ foi inibida por frutose, glicose, manose, N-acetilglucosamina e galactose. A lectina manteve sua estrutura secundária e terciária quando incubada em até 4 M de uréia, aquecida até 65ºC ou submetida a pressões menores que 2,7 kbar. Com relação aos efeitos sobre A. aegypti, a lectina apresentou atividades larvicida (CL₅₀ de 0,89 mg/mL) e ovicida (CE₅₀ de 0,13 mg/mL) e efeito estimulante de oviposição (0,1 mg/mL). WSMoLC mostrou-se resistente à degradação por proteases larvais e teve efeito estimulatório nas atividades de α-amilase e proteases totais e inibitório na atividade de tripsina. A lectina apresentou atividade termiticida para soldados (CL₅₀ de 0,629 mg/mL, 7 dias) e operários (CL₅₀ de 0,361 mg/mL, 6 dias) de N. corniger, e inibiu a atividade de endoglucanase, exoglucanase e α-amilase em extratos de intestino dos cupins. O extrato da torta não causou mortalidade significativa de S. zeamais, diferentemente do extrato obtido a partir das sementes íntegras (CL₅₀ de 214,6 mg/g) que apresentou ação deterrente moderada a forte. WSMoL e WSMoLᴄ causaram mortalidade significativa de S. zeamais, porém apenas WSMoLᴄ foi deterrente. Ambas lectinas apresentaram efeito estimulatório sobre a atividade de tripsina. Como conclusão, lectina com valor biotecnológico como agente inseticida pode ser recuperada a partir da torta de moringa. / Moringa oleifera seeds contain a water-soluble lectin (WSMoL) which showed larvicidal, ovicidal and oviposition-stimulant activities on Aedes aegypti and termiticidal activity against Nasutitermes corniger. This thesis describes the purification and characterization of lectin WSMoLᴄ from aqueous extract of moringa seed cake, by-product resulting after oil extraction, your effects on the survival of larvae, eggs and on the oviposition of A. aegypti, the insecticidal activity on N. corniger and the effects of extracts, WSMoL and WSMoLᴄ on survival and nutrition of Sitophilus zeamais adults. WSMoLᴄ was extracted in distilled water, fractionation with ammonium sulphate and chitin chromatography column. The lectin was evaluated for carbohydrate specificity, by SDS-PAGE followed by mass spectrometry, and structural stability. Larvicidal activity against A. aegypti was determined incubating L4 larvae for 24 h with extract or WSMoLᴄ. The resistance of the lectin to degradation by digestive proteases was determined. WSMoLᴄ ovicidal activity was evaluated incubating eggs with lectin for 72 h and the effect on oviposition was performed with females were put in cages for 14 h with a vessel containing distilled water and other with lectin. Termiticidal activity was evaluated in Petri plates containing filter paper discs impregnated with WSMoLᴄ. To assess insecticidal activity against S. zeamais, the insects were incubated for 7 days in Petri dishes containing diet supplemented with extract from whole seeds, cake extract, WSMoL or WSMoLᴄ. Survival rates and nutritional parameters were evaluated. The interaction of WSMoLC with digestive enzymes of the insects was also evaluated. WSMoLᴄ is a protein formed by α-helices and showed two polypeptide bands (15 and 20kDa) on SDS-PAGE. Analysis by mass spectrometry revealed similarities with other proteins from moringa seeds. The hemagglutinating activity of WSMoLᴄ was inhibited by fructose, glucose, mannose, N-acetylglucosamine and galactose. The lectin maintained its secondary and tertiary structures when incubated up to 4 M of urea, heated to 65°C or subjected to pressures lower than 2.7 kbar. With respect to effects on A. aegypti, the lectin presented larvicidal (LC₅₀ of 0.89 mg/mL) and ovicidal (EC₅₀ of 0.13 mg/mL) activities and oviposition-stimulant effect (0.1 mg/mL). WSMoLᴄ was resistant to degradation by larval proteases and had a stimulatory effect on α-amylase and total protease activities larvae and inhibitory on trypsin activity. The lectin presented termiticidal activity on soldiers (LC₅₀ of 0.629 mg/mL, 7 days) and workers (LC₅₀ of 0.361 mg/mL, 6 days) of N. corniger and inhibited endoglucanase, exoglucanase and α-amylase activities from termite gut extracts. The extract from seed cake did not cause significant mortality of S. zeamais, unlike the extract obtained from the whole seeds (LC₅₀ 214.6 mg/g) that showed moderate to strong deterrent action. WSMoL and WSMoLᴄ caused significant mortality of S. zeamais, only WSMoLᴄ exerted deterrent action. Both lectins showed stimulatory effect on trypsin activity. In conclusion, a lectin with biotechnological value as an insecticide agent can be recovered from the moringa seed cake.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-14T17:35:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Thamara Figueiredo Procopio Vasconcelos.pdf: 14655260 bytes, checksum: be724ca76d40ee28f90483937f47d844 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-14T17:35:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Thamara Figueiredo Procopio Vasconcelos.pdf: 14655260 bytes, checksum: be724ca76d40ee28f90483937f47d844 (MD5) Previous issue date: 2014-09-08 / CNPQ / O mosquito Aedes aegypti é o vetor da dengue, doença que acometeu cerca de 2,3 milhões de pessoas em 2013 somente nas Américas. O controle da população do vetor é a principal medida profilática no combate a essa doença, contudo os inseticidas sintéticos atualmente utilizados apresentam toxicidade não seletiva e são persistentes no ambiente. Ainda, tem crescido o número de populações do inseto resistentes a esses compostos. Todos esses fatores têm estimulado a procura por inseticidas de origem vegetal para uso no controle do A. aegypti. Schinus terebinthifolius (aroeira da praia) é uma árvore da família Anacardiaceae, nativa das Américas Central e do Sul e amplamente encontrada no Brasil. No presente estudo, o extrato de folhas de S. terebinthifolius foi avaliado quanto ao efeito na sobrevivência e desenvolvimento de larvas de A. aegypti no quarto estágio larval (L4), bem como quanto à toxicidade sobre Artemia salina. Adicionalmente, foram realizados: 1) avaliação do efeito do extrato no intestino médio das larvas, através de análises histológicas, microscopia eletrônica e técnicas de marcação celular; 2) separação dos metabólitos secundários presentes no extrato por extração em fase sólida; e 3) avaliação do efeito das frações contendo os metabólitos separados sobre a sobrevivência e desenvolvimento das larvas L4. O extrato de folhas foi obtido usando NaCl 0,15 M e avaliado quanto à composição fitoquímica (por cromatografia de camada delgada, CCD) e presença de lectina (atividade hemaglutinante). Larvas L4 foram incubadas com o extrato (0,3–1,35%, p/v) por 8 dias, na presença ou ausência de alimento. Proantocianidinas poliméricas, taninos hidrolisáveis, flavonoides heterosídeos e agliconas, derivados de ácido cinâmico, traços de esteroides e atividade lectínica foram detectados no extrato, o qual matou as larvas com CL50 de 0,62% (larvas não alimentadas) e 1,03% (larvas alimentadas). As larvas incubadas com o extrato reagiram eliminando o conteúdo alimentar do intestino. Quanto ao efeito no desenvolvimento, as larvas (alimentadas) não alcançaram o estágio de pupa nos tratamentos com concentrações entre 0,5% e 1,35%, enquanto que no controle 61,7% dos indivíduos emergiram como adultos. O extrato (1,0%) promoveu intensa desorganização no epitélio do intestino médio das larvas, incluindo deformação e hipertrofia de células, rompimento de microvilosidades e vacuolização do citoplasma, afetando células digestivas, enteroendócrinas, regenerativas e proliferativas; além disso, células com fragmentação de DNA foram observadas. Separação dos componentes do extrato por extração em fase sólida resultou em duas frações com atividade larvicida contendo derivados de ácido cinâmico (F1) e flavonoides (F2). Os derivados cinâmicos constituem agentes larvicidas mais eficientes, uma vez que F1 causou mortalidade em um período mais curto que F2. A lectina presente no extrato foi isolada, mas não mostrou nenhum efeito deletério sobre as larvas. O extrato e a fração contendo os derivados de ácido cinâmico (F1) foram tóxicos para náuplios de A. salina, enquanto que a fração contendo flavonoides (F2) mostrou baixa toxicidade. Em conclusão, extrato de folhas de S. terebinthifolius causou danos ao intestino médio de larva de A. aegypti, interferindo na sobrevivência e desenvolvimento desse inseto. O efeito larvicida do extrato pode ser atribuído a derivados de ácido cinâmico e flavonoides. Os dados obtidos utilizando A. salina indicam que é necessário cuidado no emprego desse extrato como agente larvicida, sendo o efeito artemicida ligado à presença dos derivados cinâmicos. / The mosquito Aedes aegypti is the vector of dengue fever, disease that affected about 2.3 million of people in 2013 only in America. The control of vector population is the main prophylactic measure in the combat to this disease but the synthetic insecticides currently used show unselective toxicity and are persistent in the environment. Also, the number of insect population resistant to these compounds has increased. All these factors have stimulated the search for insecticides from plant origin for use in control of A. aegypti. Schinus terebinthifolius (Brazilian pepper tree) is a tree from Anacardiaceae family, native from Central and South America and broadly distributed in Brazil. In the present study, a leaf extract from Schinus terebinthifolius was evaluated for effects on survival and development of A. aegypti fourth instar larvae (L4), as well as for toxicity to Artemia salina. In addition, it was performed: 1) evaluation of extract effects on midgut of larvae through histological analysis, electron microscopy and cell labeling techniques; 2) separation of secondary metabolites present in the extract by solid phase extraction; and 3) evaluation of the effect of fractions containing the separate metabolites on survival and development of L4 larvae. Leaf extract was obtained using 0.15 M NaCl and evaluated for phytochemical composition and lectin activity (hemagglutinating activity). Early L4 larvae were incubated with the extract (0.3–1.35%, w/v) for 8 days, in presence or absence of food. Polymeric proanthocyanidins, hydrolysable tannins, heterosid and aglycone flavonoids, cinnamic acid derivatives, traces of steroids, and lectin activity were detected in the extract, which killed the larvae at an LC50 of 0.62% (unfed larvae) and 1.03% (fed larvae). The larvae incubated with the extract reacted by eliminating the gut content. In regard to effect on developmente, no larvae reached the pupal stage in treatments at concentrations between 0.5% and 1.35%, while in the control (fed larvae), 61.7% of individuals emerged as adults. The extract (1.0%) promoted intense disorganization of larval midgut epithelium, including deformation and hypertrophy of cells, disruption of microvilli, and vacuolization of cytoplasms, affecting digestive, enteroendocrine, regenerative, and proliferating cells; also, cells with fragmented DNA were observed. Separation of extract components by solid phase extraction resulted in two fractions with larvicidal activity, containing cinnamic acid derivatives (F1) and flavonoids (F2). The cinnamic acid derivatives constitute more effective larvicides since F1 caused mortality in a short time than F2. The lectin present in the extract was isolated, but did not show deleterious effects on larvae. The extract and the fraction with cinnamic acid derivatives (F1) were toxic to A. salina nauplii, while the flavonoids fraction (F2) showed low toxicity. In conclusion, S. terebinthifolius leaf extract caused damage to the midgut of A. aegypti larvae, interfering with survival and development. The larvicidal effect of the extract can be attributed to cinnamic acid derivatives and flavonoids. The data obtained using A. salina indicates that caution should be used when employing this extract as a larvicidal agent, being the artemicidal effect linked to the presence of cinnamic derivatives.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-18T19:08:02Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Nataly Diniz de Lima Santos.pdf: 10292410 bytes, checksum: 26c8d3a16e9515dbf18fb5acfd5d739d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T19:08:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Nataly Diniz de Lima Santos.pdf: 10292410 bytes, checksum: 26c8d3a16e9515dbf18fb5acfd5d739d (MD5) Previous issue date: 2013-05-29 / FACEPE / O mosquito Aedes aegypti é o vetor de três arboviroses denominadas febre Chikungunya, febre amarela e dengue. Esta última é uma das doenças infecciosas mais importantes mudialmente e epidemias de dengue vêm ressurgindo em países tropicais e subtropicais. O controle do vetor é a melhor estratégia de combate à doença. Os inseticidas químicos atualmente utilizados são tóxicos para o meio ambiente e seu uso excessivo tem levado ao desenvolvimento de populações resistentes. Neste cenário, tem aumentado a busca por inseticidas naturais para controle de populações de A. aegypti. Lectinas, proteínas que reconhecem carboidratos, isoladas de plantas apresentam atividade inseticida. A lectina solúvel em água isolada de sementes de Moringa oleifera (WSMoL) promoveu mortalidade (CL50 de 0,197 mg/mL) contra larvas de A. aegypti no quarto estágio (L4) e extrato das sementes contendo WSMoL retardou o desenvolvimento larval. Uma vez conhecidos os efeitos deletérios de WSMoL sobre as larvas dessa espécie de mosquito, o presente trabalho investigou: 1) o efeito de WSMoL sobre a oviposição de fêmeas grávidas de A. aegypti em condições de laboratório e utilizando ovitrampas (armadilhas para captura de ovos) em ensaios de campo simulado; 2) a eficácia de WSMoL em aumentar a eficiência de armadilhas para captura de fêmeas (MosquiTRAPTM); 3) a atividade ovicida de WSMoL sobre ovos de A. aegypti frescos e estocados; 4) o envolvimento de sensores olfatórios das fêmeas na resposta de oviposição frente a WSMoL; 5) a influência de diferentes doses de radiação gama nos efeitos da lectina sobre larvas, ovos e oviposição. A lectina foi isolada através de protocolo previamente estabelecido. Ensaio de oviposição em laboratório foi realizado em gaiolas (33 x 21 x 30 cm) contendo um par de recipientes de vidro, sendo um deles preenchido com 50 mL do extrato de sementes, fração proteica 0-60% ou WSMoL isolada (concentração final: 0,1 mg/mL de proteínas) e o outro com 50 mL de água destilada (controle negativo). Cada recipiente continha uma peça de papel de filtro como suporte para oviposição. As fêmeas grávidas (25) foram liberadas no interior das gaiolas e após 16 h o número de ovos foi determinado. A eclodibilidade dos ovos depositados pelas fêmeas foi também avaliada. Para isso, 50 ovos foram selecionados e imersos na mesma solução em que foram depositados. Após 144 h, o número de larvas foi registrado. A resposta de oviposição das fêmeas grávidas em condições de campo simulado foi avaliada em uma área experimental localizada no campus da Universidade Federal de Minas Gerais contendo grandes gaiolas (2,5 x 2,5 x 2 m) em seu interior. Em cada gaiola foram colocadas duas ovitrampas contendo palhetas de madeira, uma preenchida com WSMoL (0,1 mg/mL) e outra com água de torneira (controle negativo). Em seguida, 40 fêmeas grávidas previamente selecionadas em laboratório foram liberadas no centro da gaiola. Após 2 h, as ovitrampas foram retiradas e o número de ovos determinado. Ensaios utilizando par de ovitrampas contendo infusão de Panicum maximum (um eficiente estimulante de oviposição) e água destilada foram realizados como controle positivo. Amostra da lectina foi avaliada quanto à presença de compostos voláteis por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS) e ensaio de olfatometria utilizando olfatômetro horizontal de dupla escolha foi realizado para investigar o envolvimento de sensores olfatórios na resposta das fêmeas frente a WSMoL. MosquiTRAP™ (versão 1.0) foi utilizada para avaliar a eficácia de WSMoL como um atraente para captura de fêmeas de A. aegypti em condições de campo simulado. As armadilhas foram preenchidas com WSMoL (teste), infusão de P. maximum (controle positivo) ou água de torneira (controle negativo). Quarenta fêmeas grávidas foram liberadas no centro de cada gaiola contendo um par de armadilhas. O número de fêmeas capturadas foi avaliado após 180 min. A capacidade do extrato de sementes, fração 0-60% e WSMoL em impedir a eclosão de ovos estocados de A. aegypti foi também avaliada. Por fim, foi determinado o efeito da irradiação gama de WSMoL, nas doses de 10 mGy e 10 Gy, sobre as atividades larvicida, ovicida e efeito na oviposição. As preparações brutas (extrato de sementes e fração proteica 0-60%) não afetaram a oviposição de A. aegypti. Diferentemente, WSMoL apresentou significante (p<0,05) efeito estimulante sobre a oviposição tanto em condições de laboratório (73 ± 2,1%) quanto em condições de campo simulado (65 ± 14%) utilizando ovitrampas. O efeito de WSMoL em condições de campo foi similar ao da infusão de P. maximum (67 ± 11 %). Nas ovitrampas contendo WSMoL, o número de ovos presentes na superfície do líquido foi maior que o de ovos depositados na palheta. A presença de compostos voláteis não foi detectada na solução de WSMoL e os resultados do ensaio de olfatometria revelaram que as fêmeas não foram atraídas por WSMoL através de resposta envolvendo sensores olfativos. A não-volatilidade de WSMoL, a presença da maioria dos ovos na superfície do líquido nas ovitrampas contendo WSMoL e os resultados do ensaio de olfatometria indicam que os mecanismos de percepção de WSMoL pelas fêmeas provavelmente envolvem sensores de contato (gustatórios). WSMoL não interferiu na eficiência da armadilha MosquiTRAPTM para captura de fêmeas grávidas, provavelmente devido ao fato de que nesse tipo de armadilha, as fêmeas não podem entrar em contato com a solução. Extrato de sementes, fração proteica 0-60% e WSMoL reduziram a eclosão dos ovos depositados no ensaio de oviposição em condições de laboratório. Extrato, fração e WSMoL também apresentaram atividade ovicida contra ovos estocados, sendo os valores de CE50 (concentração efetiva de proteínas necessária para reduzir em 50% o número de ovos eclodidos) de 0,28, 0,18 e 0,1 mg/mL de proteínas, respectivamente. Análise por microscopia óptica revelou que WSMoL interferiu no desenvolvimento do embrião em ovos frescos, bem como causou a morte dos embriões presentes nos ovos estocados. A irradiação de WSMoL na dose de 10 mGy potencializou as atividades hemaglutinante, larvicida e ovicida da lectina, enquanto o efeito estimulante de oviposição foi abolido. Em conclusão, o presente trabalho relata, pela primeira vez, os efeitos ovicida e estimulante de oviposição de uma lectina e demonstra a atuação de uma molécula fixa (não volátil) como uma pista química utilizada pelas fêmeas grávidas de A. aegypti para seleção do sítio de oviposição. As atividades estimulante de oviposição, ovicida e larvicida de WSMoL fazem desta lectina uma molécula com excelentes características para controle de A. aegypti. / The mosquito Aedes aegypti is the vector of three arboviruses named Chikungunya fever, yellow fever and dengue. This last is one of the most important infectious diseases worldwide and dengue epidemics are re-emerging in tropical and subtropical countries. The vector control is the best strategy to combat the disease. The chemical insectides currently used are toxic to environment and their excessive use has led to developing of resistant populations. In this scenario, the search for natural insecticides for A. aegypti control has increased. Lectins, carbohydrate-binding proteins, isolated from plants show insecticidal activity. The watersoluble lectin isolated from Moringa oleifera seeds (WSMoL) promoted mortality (LC50 of 0.197 mg/mL) of A. aegypti fourth-stage larvae (L4) and seed extract containing WSMoL delayed larval development. Once known the deleterious effects of WSMoL on larvae of this mosquito species, the present work investigated: 1) the effect of WSMoL on oviposition by A. aegypti gravid females under laboratory conditions and using ovitraps (traps to capture eggs) in assays under semi-field conditions; 2) the efficacy of WSMoL in enhance the efficiency of traps used to capture females (MosquiTRAPTM); 3) the ovicidal activity of WSMoL on fresh and stored A. aegypti eggs; 4) the involvement of female olfactory sensilla in the oviposition response toward WSMoL; 5) the influence of different doses of gamma radiation on the effects of lectin on larvae, eggs and oviposition. Oviposition assay in laboratory was performed in cages (33 x 21 x 30 cm) containing a pair of glass vessels; one filled with 50 mL of seed extract, 0-60% protein fraction or isolated WSMoL (final concentration: 0.1 mg/mL of protein) and the other with 50 mL of distilled water (negative control). Each vessel contained a piece of filter paper as support for oviposition. The gravid females (25) were released inside the cages and after 16 h the number of eggs was determined. The hatchability of the eggs laid by females was also evaluated. For this, 50 eggs were selected and imersed in the same solution at which they were laid. After 144 h, the number of larvae was recorded. The oviposition response by gravid females under semi-field conditions was evaluated in an experimental area located at the campus of the Universidade Federal de Minas Gerais containing wide cages (2.5 x 2.5 x 2 m) inside. In each cage, two ovitraps containing a wood paddle were placed and one was filled with WSMoL (0.1 mg/mL) and another with tap water (control). Next, 40 gravid females previously selected in laboratory were released in the center of the cage. After 2 h, the ovitraps were removed and the number of eggs was determined. Assays using a pair of ovitraps containing Panicum maximum infusion (an effective oviposition-stimulant) and tap water were performed as positive control. Lectin sample was evaluated for presence of volatile compounds by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS) and olfactometry assay using double-choice horizontal olfactometer was performed aiming to investigate the involvement of olfactory sensilla in the response of females toward WSMoL. The MosquiTRAP™ (Version 1.0) was used to evaluate the efficacy of WSMoL as an attractant for capturing A. aegypti females under semi-field conditions. The traps were filled with WSMoL (test), P. maximum infusion (positive control) or tap water (negative control). Forty gravid A. aegypti females were released in the center of each cage containing a pair of traps. The number of captured females was evaluated in the cages after 180 min. The ability of seed extract, 0-60% fraction and WSMoL to impair the hatching of stored A. aegypti eggs was also evaluated. Finally it was determined the effect of gamma irradiation of WSMoL, at doses of 10 mGy and 10 Gy, on the larvicidal and ovicidal activities as well as effect on oviposition. The crude preparations (seed extract and 0-60% fraction) did not affect the A. aegypti oviposition. Differently, WSMoL showed a significant (p<0.05) oviposition-stimulant effect both under laboratory conditions (73 ± 2.1 %) and in ovitraps at field-simulated conditions (65 ± 14 %). The effect at field conditions was similar to that of P. maximum infusion (67 ± 11 %). In ovitraps containing WSMoL, the number of eggs found at liquid suface was higher than that of eggs laid on the paddles. The presence of volatile compounds was not detected in WSMoL solution and the results from olfatometry assay revealed that the females were not attracted by WSMoL through response involving olfactory sensilla. The non-volatilty of WSMoL, the presence of eggs majority at the liquid surface in WSMoL ovitraps and the results from olfatometry assay indicated that the mechanisms of WSMoL perception by females probably involve contact (gustatory) sensilla. WSMoL did not interfere in the efficiency of MosquiTRAPTM in capture gravid females, probably due to the fact that in this type of trap the females cannot have contact with the solution. Seed extract, 0-60% protein fraction and WSMoL reduced the hatching of eggs laid in the oviposition assay under laboratory conditions. Extract, fraction and WSMoL also showed ovicidal activity against stored eggs, being the EC50 (effective protein concentration required to reduce the number of hatched eggs in 50%) values of 0.28, 0.18 and 0.1 mg/mL, respectively. Analysis by optical miscroscopy revealed that WSMoL interfered on embryo developmente in fresh eggs as well as caused the death of the embryos present in stored eggs. The irradiation of WSMoL at 10 mGy dose potencialized the hemagglutinating, larvicidal and ovicidal activities of the lectin while the oviposition-stimulant effect was abolished. In conclusion, the present work reports for the first time the ovicidal and oviposition-stimulant effects of a lectin and demonstrate the acting of a fix (non-volatile) molecule as a chemical cue used by A. aegypti gravid females for selection of the oviposition site. The ovipositionstimulant, ovicidal and larvicidal activities of WSMoL make this lectin a molecule with excellent characteristics for A. aegypti control.