In this study, predation efficiency of three guppy ( Poecilia reticulata) size classes was evaluated at various vegetation densities in a series of circular aquaria containing plastic plants closely resembling Ceratophyllum demersum. The effect of vegetation density was most apparent among large fish where predation efficiency greatly diminished from 12.35 mosquito larvae (Aedes aegypti) to 4.68 as vegetation densities rose from 3 to 19 plants/700 cm2. Over that same range of increasing vegetation densities, predation among small fish remained unchanged, whereas among fish of intermediate size predation declined significantly but less precipitously than for large individuals. When presented with a choice between second and fourth mosquito larvae, small fish preferred to prey on second instars, whereas large fish preferred fourth instar larvae. Fish of intermediate size did not show a statistically significant preference. The functional response of fish to increasing prey densities, as measured over a 12-h period, was of Type III.

A interação entre microrganismos endossimbiontes e mosquitos tem sido amplamente estudada. Tais estudos visam encontrar alternativas para o controle biológico de mosquitos vetores. Recentemente foi descrito que Acanthamoeba polyphaga é capaz de infectar Aedes aegypti, mosquito vetor do vírus da dengue. Visando entender melhor sobre esta interação, estudaramse aspectos comportamentais e de desenvolvimento de mosquitos alimentados com A. polyphaga, em condições de laboratório. Além disso, procurou-se localizar os sítios de infecção destas amebas no interior do corpo dos mosquitos, através de cortes histológicos. Nas condições em que os testes foram feitos, as amebas contribuíram para o aumento de produção de ovos de Ae. aegypti. Da mesma forma, não produziram patologias nos insetos, uma vez que não houve morte dos mesmos, durante o desenvolvimento dos bioensaios. Algumas amebas que serviram de alimentação às larvas, escaparam à barreira da membrana peritrófica e à resposta de defesa do mosquito, invadindo outras regiões do corpo das larvas e dos adultos. As amebas são encontradas nas formas de cistos e trofozoítos, indicando que o micro-habitat intestinal e do corpo gorduroso não parecem ser muito lesivos para as mesmas. Os resultados obtidos até a data indicam a importância da continuidade dos estudos. Também é importante estudar outros processos associados à resposta imune dos mosquitos quando as amebas conseguem escapar as barreiras de defesa e invadir outros locais do corpo. / The interaction between endosymbiont microorganisms and mosquitoes have been widely studied. Such studies have the aim to find alternatives for biological control of mosquitoes. Recently it was reported that Acanthamoeba polyphaga is able of infecting Aedes aegypti the vector mosquito of dengue viruses. In order to better understand such interaction, we studied some biological aspects and development of mosquitoes that fed on A. polyphaga, in laboratory conditions. Furthermore, we tried to clarifying the sites of infection of these amoebae inside the mosquitoes body, using histological sections. In conditions where the tests were done, the amoebas contributed to the increased of egg production of Ae. aegypti. Likewise, no pathologies were observed in the insects, since no death was observed, during the development of bioassays. Some amoebas served as food to the larvae escaped the barrier of the peritrophic membrane, as well as the defense response of the mosquito, invading other body regions of larvae and adults. Amoebas are found in the forms of cysts and trophozoites, indicating that the intestinal micro-habitat and body fat did not appear to be especially harmful to them. The results to date indicate the importance of continuing such studies. It is also important to study other processes associated with the immune response of mosquitoes when amoebae escape the defense barriers and invade other body sites.

A interação entre microrganismos endossimbiontes e mosquitos tem sido amplamente estudada. Tais estudos visam encontrar alternativas para o controle biológico de mosquitos vetores. Recentemente foi descrito que Acanthamoeba polyphaga é capaz de infectar Aedes aegypti, mosquito vetor do vírus da dengue. Visando entender melhor sobre esta interação, estudaramse aspectos comportamentais e de desenvolvimento de mosquitos alimentados com A. polyphaga, em condições de laboratório. Além disso, procurou-se localizar os sítios de infecção destas amebas no interior do corpo dos mosquitos, através de cortes histológicos. Nas condições em que os testes foram feitos, as amebas contribuíram para o aumento de produção de ovos de Ae. aegypti. Da mesma forma, não produziram patologias nos insetos, uma vez que não houve morte dos mesmos, durante o desenvolvimento dos bioensaios. Algumas amebas que serviram de alimentação às larvas, escaparam à barreira da membrana peritrófica e à resposta de defesa do mosquito, invadindo outras regiões do corpo das larvas e dos adultos. As amebas são encontradas nas formas de cistos e trofozoítos, indicando que o micro-habitat intestinal e do corpo gorduroso não parecem ser muito lesivos para as mesmas. Os resultados obtidos até a data indicam a importância da continuidade dos estudos. Também é importante estudar outros processos associados à resposta imune dos mosquitos quando as amebas conseguem escapar as barreiras de defesa e invadir outros locais do corpo. / The interaction between endosymbiont microorganisms and mosquitoes have been widely studied. Such studies have the aim to find alternatives for biological control of mosquitoes. Recently it was reported that Acanthamoeba polyphaga is able of infecting Aedes aegypti the vector mosquito of dengue viruses. In order to better understand such interaction, we studied some biological aspects and development of mosquitoes that fed on A. polyphaga, in laboratory conditions. Furthermore, we tried to clarifying the sites of infection of these amoebae inside the mosquitoes body, using histological sections. In conditions where the tests were done, the amoebas contributed to the increased of egg production of Ae. aegypti. Likewise, no pathologies were observed in the insects, since no death was observed, during the development of bioassays. Some amoebas served as food to the larvae escaped the barrier of the peritrophic membrane, as well as the defense response of the mosquito, invading other body regions of larvae and adults. Amoebas are found in the forms of cysts and trophozoites, indicating that the intestinal micro-habitat and body fat did not appear to be especially harmful to them. The results to date indicate the importance of continuing such studies. It is also important to study other processes associated with the immune response of mosquitoes when amoebae escape the defense barriers and invade other body sites.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:44:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000006.pdf: 936340 bytes, checksum: 0878be8d8a1fa6d47b55bd1be9adbfca (MD5) Previous issue date: 2006 / O objetivo principal deste trabalho foi analisar o polimorfismo genético do gene da esterase e, avaliar o seu papel em possíveis mecanismos de resistência ao temephos em populações de Aedes aegypti. Com este propósito, foram utilizadas duas linhagens de laboratório: a Rockefeller (padrão de susceptibilidade a todas as classes de inseticidas) e a Recife-Resistente (mantida sob forte pressão de seleção pelo temephos durante cinco gerações); e nove populações naturais: oito provenientes da região metropolitana do Recife e uma de Araripe (CE). Elas foram coletadas em forma de ovos, durante os anos de 2004 e 2005. Foram realizados ensaios bioquímicos, eletroforese de isoenzimas, PCR e seqüenciamento de parte do gene, e PCR em Tempo Real para comparar a quantidade de cópias do gene na linhagem resistente e susceptível, e em populações naturais. Testes bioquímicos realizados apenas na linhagem Recife-Resistente demonstraram a presença do mecanismo de resistência metabólica através de uma alta atividade esterásica. O padrão das esterases foi observado em nove populações, em géis de poliacrilamida 6 por cento, corados com substratos específicos para as enzimas alfa e beta-esterase. Os valores de heterozigosidade observada (Ho) variaram de 0,278 a 0,533 em 2004, e em 2005, de 0,388 a 0,608. Estes géis ainda apresentaram um loco de alta atividade esterásica, denominado de loco 1. Neste loco, o alelo responsável pela maior atividade esterásica foi chamado de 3. Sua freqüência variou em 2004 de 0,100 em Dois Irmãos a 0,191 em Alto José do Pinho, e em 2005, caiu para 0,071 e 0,107 respectivamente. Na linhagem Recife-Resistente, a freqüência deste alelo foi de 0,214. O seqüenciamento de parte do exon 4 do gene da alfa-esterase, mostrou que o fragmento analisado, de aproximadamente 180 pb, é relativamente conservado, apresentando somente quatro sítios polimórficos em seis populações estudadas. Os resultados da PCR em Tempo Real indicaram que as populações estudadas não apresentam amplificação gênica para o gene da alfa-esterase, quando comparadas à linhagem Rockefeller, com exceção das populações de Engenho do Meio e Araripe. [...] estes resultados ainda precisam de maiores comprovações a fim de se assegurar que a superexpressão dos genes é a possível causa da resistência. A freqüência do alelo superexpresso pode ser monitorada ao longo do tempo e auxiliar no manejo da resistência ao inseticida químico em populações tratadas

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:40:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) luana_ferreira_ioc_mest_2009.pdf: 2254702 bytes, checksum: 40f4b71b46737ba469bce20ef19d9181 (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Várias populações de Aedes aegypti, vetor da dengue e da febre amarela urbana, apresentaram resistência aos inseticidas clássicos utilizados em seu controle. Sendo assim, torna-se imperativo o estabelecimento de estratégias alternativas. Nesse sentido, a biossíntese de quitina é um alvo potencial. Em artrópodes, a quitina é considerada o principal constituinte da cutícula (ou exoesqueleto). A quitina Sintase (do inglês Chitin Synthase, CHS) é uma enzima-chave na biossíntese desta molécula, e os compostos benzoil-fenil-uréias (BPUs) possuem atividade inibidora da síntese de quitina, interferindo na formação da cutícula em diversas espécies de insetos. Novaluron é um BPU recentemente recomendado pela WHO para uso em água potável, o que o qualifica como uma alternativa viável para o controle de larvas do vetor da dengue. Neste trabalho investigamos, durante o desenvolvimento larvar de Ae. aegypti, a influência de novaluron sobre: 1) o conteúdo de quitina; 2) a expressão do gene AaCHS1, evidenciada por seus transcritos alternativos AaCHS1a e AaCHS1b e, 3) a estrutura do exoesqueleto e da membrana peritrófica. Para tanto, inicialmente foi necessário observar os momentos das ecdises larvais. Os pontos definidos para a coleta das amostras levaram em conta o processo de síntese de cutícula a cada instar larvar. Foram escolhidos pontos tentativamente representativos do início (i), meio (int) e fim (f) do terceiro (L3) e do quarto (L4) instares. Os pontos de L3i, L3int, L3f, L4i, L4int e L4f foram definidos como 53, 59,5, 68, 75, 92,5 e 98 horas após a eclosão (HAE), respectivamente. Novaluron foi então administrado continuamente a larvas L3, a partir de 51 HAE, em concentrações definidas em relação ao seu percentual de inibição de emergência do adulto (IE): IE20, IE50 e IE99. Foi observado um aumento significativo no conteúdo de quitina de larvas controle, desde L3i até L4f. Novaluron afetou significativamente a produção de quitina de forma dose-dependente, ao longo do desenvolvimento larvar. A abundância relativa de mRNA dos transcritos AaCHS1a e AaCHS1b foi avaliada por PRC quantitativo em tempo real, de L3i e L4f, em larvas controle e tratadas com dose de IE99. O perfil de expressão dos transcritos AaCHS1a e AaCHS1b é similar em larvas controle, ainda que a variação temporal de AaCHS1b seja maior. O BPU parece ter um efeito mais proeminente sobre o perfil de expressão de AaCHS1b, que se acentua nas primeiras horas após tratamento. Com base nos resultados obtidos, duas hipóteses são discutidas: mecanismo de feedback positivo ou atraso fisiológico do desenvolvimento. Ensaios histológicos preliminares validaram a metodologia utilizada para preparo e observação da morfologia de larvas tratadas e controle. Cortes longitudinais evidenciaram a preservação de estruturas internas, inclusive as quitinosas, o que abre a perspectiva de ensaios futuros de marcação específica para quitina / Several populations of Aedes aegypti , vector of dengue and urban yellow fever, exhibit resistance to insecticides used on their control. T herefore, the establishment of alternative strategi es becomes imperative. In this regard, chitin biosynth esis is a potential target. In arthropods, chitin i s considered the main constituent of the cuticle (or exoskeleton). Chitin Synthase (CHS) is a key enzyme in the biosynthesis of this molecule and, Be nzoyl-phenyl-urea (BPU) compounds inhibit chitin synthesis, interfering with cuticle formation in se veral insect species. Novaluron was recently recommended by WHO for use in potable water, which qualifies this BPU as a viable alternative to the control of the dengue vector larvae. In the present work we investigated the influence of novaluron, during larval development of Ae. aegypti , on the: 1) chitin content, 2) AaCHS1 gene expression, through its alternative spliced forms AaCHS1a and AaCHS1b , and 3) exoskeleton and peritrophic membrane structure. For this purpose, it was first necessary to observe the timing of larval ecdysis. The time points selected for sampling took into acc ount the process of cuticle synthesis at each larva l instar. Tentative initial (i), intermediary (int) a nd final (f) representative time points were chosen for the third (L3) and fourth (L4) larval instars. The poin ts of L3i, L3int, L3f, L4i, L4int and L4f were defi ned as 53, 59.5, 68, 75, 92.5 and 98 hours after hatching (HAH), respectively. Novaluron was continuously administered to L3 larvae, from 51 HAH on at concen trations defined with respect to the percentage of adult emergence inhibition (EI): EI 20 , EI 50 and EI 99 . In control larvae, a significant increase of the chitin content, from L3i until L4f, was observed. Novaluro n significantly affected chitin production in a dos e dependent manner, during larval development. The re lative abundance of AaCHS1a and AaCHS1b transcripts was evaluated by quantitative real time PCR, from L3i to L4f, on both control and novaluro n IE 99 larvae. The expression of AaCHS1a the treated larvae were similar to control. The ex pression profile of both AaCHS1a and AaCHS1b transcripts is similar in control larvae, even if variations in AaCHS1b are higher. BPU treatment effect seems more pronou nced on AaCHS1b expression profile, that is activated in the first hours immediately fo llowing treatment. Two hypotheses are raised: a positive feedback mechanism or a physiological deve lopment delay. Preliminary histological observations validated the methodology employed for preparing and observing control and treated larvae morphology. Longitudinal sections put in evi dence the preservation of internal structures, including chitinized ones, opening the perspective of future assays for specific chitin.

Made available in DSpace on 2016-06-21T13:43:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 985.pdf: 1940501 bytes, checksum: 018fcc4969f375effb75a13c7d6c7974 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:16:55Z (GMT). No. of bitstreams: 3 985.pdf.txt: 141267 bytes, checksum: a925e4eaf511d9977eb6efbe2cc45af4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 985.pdf: 1940501 bytes, checksum: 018fcc4969f375effb75a13c7d6c7974 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / O sucesso dos insetos em explorar diversos ambientes é devido, em grande parte, à habilidade em se defender contra patógenos e parasitas. Nos insetos, os principais mecanismos de defesa são desempenhados pelos hemócitos. A classificação dos tipos de hemócitos presentes na hemolinfa ainda é bastante controversa. A biodiversidade desses organismos tem proporcionado modelos importantes para o estudo de suas estratégias antimicrobianas, as quais podem fornecer informações relevantes para o combate a diversas doenças, bem como para o estudo da imunologia geral. O objetivo do presente estudo foi caracterizar a resposta imune celular de Aedes aegypti sob o ponto de vista morfológico, funcional e ultra-estrutural através da microscopia óptica e eletrônica de transmissão. Em nossos estudos identificamos seis tipos morfológicos de hemócitos circulantes na hemolinfa de Ae. aegypti através da microscopia de luz, eletrônica de transmissão e contraste de interferência diferencial, são eles: prohemócitos, adipohemócitos, granulócitos, plasmatócitos, oenocitóides e trombocitóides. Os prohemócitos foram as menores células encontradas na hemolinfa. Sua principal característica é a presença de um citoplasma ocupando uma pequena área em torno do núcleo. Os adipohemócitos foram os mais abundantes tipos celulares presentes e exibiam grandes inclusões lipídicas preenchendo praticamente todo o citoplasma. Os granulócitos possuem um citoplasma contendo diversos grânulos elétron-densos. Os plasmatócitos exibiram morfologia bastante polimórfica e diversos filopódios e pseudópodes. Os oenocitóides possuem citoplasma homogêneo com poucas organelas. Os trombocitóides são raros e possuem características similares aos oenocitóides com organelas pouco desenvolvidas. Os hemócitos responsáveis pela resposta imune contra partículas de látex conjugadas a FITC foram identificados através da microscopia laser confocal, assim como as lectinas que marcam os hemócitos. Os granulócitos foram as únicas células envolvidas na fagocitose de alvos abióticos in vitro e in vivo. As lectinas BSI, ConA, HPA, LCA, PNA, UEA e WGA marcaram os hemócitos com variações na intensidade. A WFA e LPL não marcaram hemócitos de Ae. aegypti (AU).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-13Bitstream added on 2014-06-13T18:42:54Z : No. of bitstreams: 1 parreira_rs_dr_aut_jabo.pdf: 12181484 bytes, checksum: d3c7189aca53e95b8462baf4ac50da85 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivou-se avaliar o diâmetro e a uniformidade de gotas produzidas por pulverizadores, com concentrações de água e de óleo com e sem adjuvante para controle de Aedes aegypti. Os experimentos foram realizados no Depto. Fitossanidade, UNESP - Jaboticabal. Foram analisados diâmetros, uniformidades e porcentagem gotas 15 μm de aerossóis MULT, MAFÚ, SBP, DETEFON, RAID, RODA. (E.B), e RODA. (A.T) e de pulverizadores de bico rotativo e de bico pneumático, com as caldas água + malathion 500 CE (1mL/L) + óleo (0; 6,25; 12,5; 25; 50 e 100%). Mais tarde avaliou-se com e sem 1 mL do adjuvante Iharaguen-S/500 mL de calda e ainda água + malathion + 5, 10, 15 e 20% de óleo na calda. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey (p<0,05) em delineamento inteiramente casualizado. Noutro experimento, fez-se a aplicação numa sala, com mosquitos retidos em gaiolas. As avaliações foram realizadas logo após aplicação e 24 horas após. Os resultados de mortalidade foram comparados pelo teste de Tukey (p < 0,05) e a eficiência das misturas pela fórmula de Abbott. Os aerossóis DETEFON, RODA. (E.B), RAID e ROD. (A.T) apresentaram DMV adequados. Todos os aerossóis possuem porcentagem segura de gotas com diâmetro 15 μm. RAID apresentou menor uniformidade de gotas. O bico pneumático resultou em maior uniformidade de gotas. A concentração de 20% foi considerada adequada ao coeficiente de uniformidade. A adição do adjuvante aumentou a uniformidade de gotas do bico rotativo. Ambos os pulverizadores apresentaram DMV adequados. O equipamento pneumático apresentou, no geral, maior eficiência na mortalidade de A. aegypti em relação ao rotativo / The objective was to assess the diameter and uniformity of droplets produced by sprays, with concentrations of water and oil with and without adjuvant for control of Aedes aegypti. The experiments were carried out on Department. Plant Health, UNESP - Jaboticabal. We analyzed diameters, uniformity and percentagen drop 15 μm of aerosol MULT, MAFÚ, SBP, DETEFON, RAID, RODA, (E.B), e RODA. (A.T) nozzle and spray nozzle and rotary pneumatic grout with water + Malathion 500 EC (1 ml / L) + Oil (0, 6.25, 12.5, 25, 50 and 100%). Later it was evaluated with and without 1 mL of the adjuvant Iharaguen-S/500 mL of syrup and still water + malathion + 5, 10, 15 and 20% of oil in the sauce. Means were compared by Tukey test (p <0.05) in a completely randomized design. In another experiment, application made to a room with mosquitoes held in cages. Evaluations were performed immediately after and 24 hours after application. The mortality outcomes were compared by Tukey test (p <0.05) and efficiency of mixing the formula of Abbott. Aerosols DETEFON, RODA. (E.B), RAID and RODA. (A.T) had adequate VMD. All aerosols are safe percentagen of droplets 15 micrometers. RAID showed less uniformity of drops. The pneumatic nozzle resulted in greater uniformity of drops. The concentration of 20% was considered appropriate to the coefficient of uniformity. The addition of the adjuvant increased the uniformity of droplets from the nozzle rotation. Both sprays had adequate VMD. The pneumatic presented, in general, greater efficiency in killing of A. aegypti in relation to the rotary

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-21Bitstream added on 2014-06-13T20:43:00Z : No. of bitstreams: 1 paduan_ks_dr_botib.pdf: 813357 bytes, checksum: f3c9241a583eb2b4877a44aae97a66eb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Aedes aegypti é o principal vetor dos vírus dengue e representa cada vez mais um problema de saúde pública. O uso de inseticidas de origem orgânica ou inorgânica é uma das metodologias mais adotadas como parte do controle de vetores, entretanto, processos de resistência têm sido detectados freqüentemente. O desenvolvimento de ferramentas moleculares tem facilitado o entendimento das relações entre o vetor, patógeno e o homem. Os marcadores genéticos mais utilizados em estudos de genética de populações geralmente representam um trabalho laboratorial intenso e, em alguns casos, são limitados pela quantidade de DNA genômico extraído por indivíduo. Recentemente, a tecnologia disponível, permitiu o desenvolvimento dos marcadores SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) que correspondem a diferenças de um único nucleotídeo na seqüência de DNA. Assim, o presente trabalho objetivou desenvolver marcadores SNPs localizados em genes nucleares, do mosquito Ae. aegypti, para aplicação na genotipagem de populações deste vetor no Brasil. Para tanto, foram investigada seqüencias em dezoito genes nucleares de dezesseis populações do Ae. aegypti, e nove destes genes foram selecionados para a presença de SNPs. Os oito marcadores mais polimórficos foram utilizados na caracterização de três populações do mosquito anteriormente analisadas utilizando-se as técnicas de RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) e seqüenciamento de genes mitocondriais. Os resultados obtidos com os SNPs mostraram um alto grau de polimorfismo intra e inter populacional, mais significativo quando comparado com os estudos realizados anteriormente, além da presença de duas diferentes linhagens genéticas entre as populações geográficas estudadas. / Aedes aegypti is the primary vector of dengue fever virus and it represents a major problem of Public Health. The use of insecticides of organic or inorganic origin is one of the more accepted methodologies as part of this control, however, resistance processes have been detected constantly. The development of molecular tools has made possible the understanding of the relationships among vector, pathogen and man. The genetic markers more used in studies of genetics populations usually represent an intense laboratorial work and in some cases they are limited for the amount of genomic DNA extracted by individual. Recently, the available technology, allowed the development of the markers SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) that correspond to differences of a single nucleotide in the sequence of DNA. Thus, this work aims to develop of SNPs markers in nuclear genes of the Ae. aegypti for application in genotyping of populations of this vector in Brazil. For so much, were investigated sequences in eighteen nuclear genes of sixteen populations of Ae. aegypti, and nine of this genes were selected to presence of the SNPs. Eight more polymorphic markers were used in the characterization of three populations of the mosquito previously analyzed using the techniques of RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) and sequencing of mitochondrial genes. Results obtained with the SNPs showed a high degree of polymorphic intra and interpopulations, more significantly when compared with the prior studies, besides the presence of two different genetic lineages distributed among the studied geographical populations.

Orientador : Prof. Dr. Mário Antônio Navarro da Silva / Coorientador : Dr. Ademir de Jesus Martins Junior / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas (Entomologia). Defesa: Curitiba, 17/11/2016 / Inclui referências: f. 81-98 / Área de concentração : Entomologia / Resumo: O canal de sódio voltagem-dependente (NaV) é fundamental para a sinalização elétrica no sistema nervoso e é o sítio-alvo para Piretróides (PY) e DDT. A resistência knockdown (kdr), causada por alterações no NaV, é portanto, um dos mecanismos que confere resistência a estes inseticidas. Pelo menos 12 mutações não sinônimas foram relatadas em nove códons diferentes no gene do NaV em Aedes aegypti, a maioria delas nos segmentos IIS6 e IIIS6. A mutação kdr Phe1534Cys no segmento IIIS6 é a mais prevalente em todo o mundo, e também foi encontrada em populações asiáticas de Aedes albopictus resistente aos PY. Aqui foi investigada a ocorrência, frequência e distribuição de mutações kdr presentes nos segmentos IIS6 e IIIS6 do NaV em populações naturais de A. aegypti da Colômbia e Brasil e de A. albopictus do Brasil. O DNA de 13 populações de A. aegypti da Colômbia (quatro) e Brasil (nove) e nove de A.albopictus do Brasil foram individualmente extraídos e agrupados por Estado (A.aegypti) e localidade (A. albopictus), amplificados, clonados e sequenciados para os correspondentes segmentos IIS6 e IIIS6 do NaV. Adicionalmente, os indivíduos de cada espécie, para cada localidade foram individualmente genotipados via PCR alelo específica (AS-PCR) para se obter as frequências genotípicas e alélicas para os sítios kdr 1016 e 1534 para A. aegypti, e 1534 para A. albopictus. A área urbana de Foz do Iguaçu foi dividida por estratos, de forma que as frequências genotípicas e alélicas foram então analisadas separadamente e, em seguida, como uma unidade. Nas populações de A. aegypti de ambos os países foram detectados três polimorfismos não sinônimos no NaV (Ile1011Met, Val1016Ile no segmento IIS6 e Phe1534Cys no IIIS6). Já em A. albopictus apenas a mutação Phe1534Cys foi evidenciada em populações brasileiras dos Estados de Paraná (PR) e Rondônia (RO). Substituições restritas ao sítio 1534 (NaV R1) e substituições simultâneas em ambos os sítios 1016 e 1534 (NaV R2) foram observadas em todas as populações de A. aegypti da Colômbia e Brasil. O alelo kdr NaV R1 foi detectado em todas as localidades da Colômbia e Brasil. No Brasil, o alelo kdr NaV R2 foi mais frequente nas localidades da região Sul e Centro-Oeste. Em Foz do Iguaçu, o alelo kdr NaV R2 estava distribuido nos estratos em frequências ?55%, com exceção do estrato 1. Por sua parte, em A. albopictus, o alelo 1534Cyskdr variou entre 3% (Marilena/PR e Porto Velho/RO) e 10% (Foz do Iguaçu/PR). Esta é a primeira evidencia de ocorrência e distribuição de uma mutação kdr em A. albopictus para América do Sul. Os resultados aqui apresentados sugerem a necessidade de um uso integrado apropriado de inseticidas na Colômbia e no Brasil, assim como a inclusão de A. albopictus no monitoramento da resistência aos inseticidas, a fim de manter os compostos químicos como uma ferramenta de controle de vetores quando necessário. Palavras-chave: chikungunya, dengue, piretróides, controle vetorial, canal de sódio voltagem-dependente, Zika. / Abstract: The voltage-gated sodium channel (NaV) is critical for electrical signaling in the nervous system and is the target site for Pyrethroids (PY) and DDT. The knockdown resistance (kdr) caused by changes in NaV, is one of the mechanisms that confers resistance to those insecticides. At least 12 non-synonymous mutations were reported at nine different codons in the NaV gene in Aedes aegypti, most of them in the segments IIS6 and IIIS6. The kdr mutation Phe1534Cys in IIIS6 NaV segment is the most prevalent throughout the world, and has also been found in Asian Aedes albopictus populations resistant to PY. Here, we studied the occurrence, frequency and distribution of kdr mutations present in the IIS6 and IIIS6 NaV segments in natural populations of A.aegypti from Colombia and Brazil and A. albopictus from Brazil. The DNA from 13 A. aegypti populations from Colombia (four) and Brazil (nine) and nine from A. albopictus from Brazil were individually extracted and grouped by State (A. aegypti) and location (A. albopictus), amplified, cloned and sequenced to the corresponding IIS6 and IIIS6 NaV segment. In addition, individuals from each location for each species were individually genotyped using PCR specific allele (AS-PCR) for obtaining the genotypic and allelic frequencies for the kdr sites 1016 and 1534 for A. aegypti and 1534 for A.albopictus. The urban area of Foz do Iguaçu was divided by strata, and genotypic and allelic frequencies were analyzed, first by strata and then as a single unit. In A. aegyptipopulations from both countries three non-synonymous polymorphisms (Ile1011Met, Val1016Ile in IIS6 and Phe1534Cys in IIIS6 NaV segment) in the NaV gene were detected. However, in A. albopictus, only the Phe1534Cys kdr mutation was evidenced in Brazilian populations' from the states of Paraná (PR) and Rondônia (RO). Restricted substitutions to 1534 site (NaV R1) and simultaneous substitutions at both 1016 and 1534 sites in (NaV R2) were observed in all A. aegypti populations from Colombia and Brazil. The NaV R1 kdr allele was detected in all locations from Colombia and Brazil. In Brazil, the NaV R2 kdr allele was more frequent in the localities from the South and Central West. In Foz do Iguaçu, the NaV R2 kdr allele was spread in all strata in frequencies ?55%, except for the stratum 1. On the other hand, in A. albopictus, the allele 1534Cyskdr ranged from 3% (Marilena/PR and Porto Velho/RO) 10% (Foz do Iguaçu/PR). This is the first evidence of occurrence and distribution of kdr mutation in A. albopictus from South America. The results presented here suggest the need for an appropriate integrated use of insecticides in Colombia and Brazil, as well as the inclusion of A. albopictus monitoring to insecticides resistance in order to maintain the chemical compounds as an efficient vector control tool when necessary. Keywords: chikungunya, dengue, pyrethroid resistance, vector control, voltage-gated sodium channel, Zika.

Texto sistemático sobre trabalhos de pesquisa no tema de Dengue apresentado ao Instituto de Biociências de Botucatu da Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", como parte dos requisitos para o concurso de Livre- Docência / Resumo: Analisa-se diferentes aspectos da epidemiologia da transmissão da dengue através de modelos matemáticos. Supo˜e-se que o controle vetorial atua como uma taxa de mortalidade adicional em cada fase do ciclo de vida do mosquito Ae. aegypti e estuda-se a eficiência dos diferentes mecanismos utilizados pela Superintendência de Controle de Endemias (SUCEN) no estado de São Paulo para o controle da doença. A modelagem usual de equações diferencias ordinárias (EDO) permite a obtenção de valores limiares para a taxa de oviposição do vetor e para a transmissão da doença, as quais depende das suposições biológicas que geram o modelo, dos parâmetros entomológicos do mosquito, do período de incubação do vírus, e da imunidade e dinâmica vital do homem. Estes limiares dividem o espaço de solução em ausência do vetor, presença do vetor e ausência de transmissão da dengue, e presença do vetor com transmissão da dengue. Estes valores fornecem uma estimativa do esforço de controle necessário para diminuir ou parar a transmissão da dengue. A suposição de população vetorial grande com distribuição espacial homogênea (modelos de equações diferencias ordinárias discutidos anteriormente) é verificada através da modelagem discreta de autômatos celulares (AC). Mostra-se que a heterogeneidade espacial gerada pela distribuição de criadouros facilita a colonização e dispersão do inseto. Como os parâmetros entomológicos do vetor dependem da temperatura, observa-se que no verão o processo de dispersão e colonização do mosquito é facilitado, e que o controle adulticida deve ser aplicado nesta época. Já no inverno deve-se investir no controle das formas imaturas. A viabilidade da técnica de insetos estéries é... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available