<p>Savremeni trendovi na trži&scaron;tu utiču na sve veću potražnju za speltom (Triticum aestivum ssp. spelta), alternativnom, plevičastom formom p&scaron;enice visoke nutritivne vrednosti, koja doprinosi održavanju agroekolo&scaron;kih sistema gajenja. Smatra se da prisustvo plevičastih omotača pruža za&scaron;titu zrna od različitih bolesti i &scaron;tetočina, &scaron;to je od naročitog značaja za organsku proizvodnju gde upotreba hemijske za&scaron;tite nije dozvoljena. Rod Alternaria obuhvata veliki broj izrazito varijabilnih i &scaron;iroko rasprostranjenih saprofitnih i fitopatogenih vrsta. Značaj Alternaria spp. se ogleda ne samo u smanjenju prinosa i naru&scaron;avanju kvaliteta zrna p&scaron;enice, već i u tome &scaron;to mnoge vrste ovog roda produkuju toksične metabolite, koji su &scaron;tetni za zdravlje ljudi i životinja. U cilju preduzimanja blagovremenih i efikasnih mera suzbijanja fitopatogenih vrsta roda Alternaria i monitoringa dominantnih toksigenih vrsta, veoma je značajna njihova pouzdana i prezicna identifikacija.<br />Istraživanja su obuhvatila identifikaciju i molekularnu karakterizaciju Alternaria spp. na zrnu spelte u Republici Srbiji uz analizu intenziteta zaraze posebno plevičastih i olju&scaron;tenih zrna spelte kako bi se ispitala efikasnost plavičastih omotača u za&scaron;titi zrna spelte. Istovremeno je određen sadržaj najznačajnijih Alternaria toksina (alternariol-AOH i alternariol monometil-etar-AME), kao i sveobuhvatni uticaj ovih gljiva na komponente prinosa, zdravstvenu bezbednost i tehnolo&scaron;ki kvalitet spelte. Izolovano je ukupno 25 Alternaria spp. sa zrna spelte roda 2011. god. iz različitih regiona Vojvodine i na osnovu morfolo&scaron;kih, patogenih i molekularnih karakteristika utvrđeno je prisustvo dve vrste: A. tenuissima (22 izolata) i A. infectoria (3 izolata). Dobijeni rezultati predstavljaju ujedno i prvo naučno saop&scaron;tenje od vrstama roda Alternaria na spelti u Srbiji. Ve&scaron;tačkom inokulacijom tri različita genotipa spelte (Nirvana, Austria i Ostro) odabranim Alternaria izolatima u 2011. i 2012. god. uočena je značajna razlika u intenzitetu zaraze Alternaria spp. na zrnima sa plevičastim omotačima gde se intenzitet infekcije kretao od 87-100% dok je na olju&scaron;tenim zrnima iznosio od 16-72% u 2011. god., odnosno od 95-100% na plevičastim zrnima i 42-68% na olju&scaron;tenim zrnima u 2012. god. Efekat hemijske za&scaron;tite fungicidom se pokazao značajan za redukciju Alternaria spp. u obe istraživačke godine kako na plevičastim tako i na olju&scaron;tenim zrnima spelte. Kolorimetrijskim merenjima intenziteta zaraze plevičastih omotača i olju&scaron;tenih zrna inokulisanih biljaka u 2011. i 2012. god. potvrđena su standardna vizuelna fitopatolo&scaron;ka ispitivanja, &scaron;to ukazuje na to da se metoda instrumentale ocene zaraze može koristiti kao efikasna i brza metoda detekcije tamnokličnih zrna, gde uz dodatne verifikacije postoji mogućnost primene i u praksi. AOH i AME detektovani su u proseku četiri puta većoj koncentraciji u plevičastim omotačima nego u olju&scaron;tenim zrnima, &scaron;to potvđuje efikasnost plevičastih omotača u za&scaron;titi zrna spelte, ne samo od prodiranja Alternaria spp. već i od njihovih toksičnih metabolita. Najmanja koncentracija Alternaria toksina zabeležena je na olju&scaron;tenim zrnima bijaka tretiranih fungcidom (AOH - 84 &mu;g/kg i AME - 153 &mu;g/kg). Ispitivanja prometnog i tehnolo&scaron;kog kvaliteta spelte zaražene Alternaria spp. su pokazala da tamnoklična zrna značajno naru&scaron;avaju parametre prometnog i tehnolo&scaron;kog kvaliteta spelte, negativno utičući na nalivanje i sazrevanje zrna kao i sintezu skroba i proteina.<br />Prikazani rezultati ukazuju na to da plevičasti omotači predstavljaju efikasnu barijeru u za&scaron;titi zrna od infekcije vrstama roda Alternaria, &scaron;to ima izuzetan značaj za otpornost spelte naročito u uslovima gajenja u sistemu organske proizvodnje gde upotreba hemijske za&scaron;tite nije dozvoljena. Međutim, uprkos prirodnoj otpornosti i genetskoj predodređenosti spelte za organsku proizvodnju, rezultati efikasne primene fungicida u suzbijanju Alternaria spp. opravdavaju adekvatan hemijski tretman u dobroj poljoprivrednoj praksi i proizvodnji zdravstveno bezbedne hrane. Multidisciplinarni pristup ove doktorske disertacije, ukazuje na neophodnost komplementarnog sagledavanja agronomskih i tehnolo&scaron;kih aspekata u poljoprivrednoj i prehrambenoj industriji, kao jedinstvenog modela koji omogućava praćenje savremenih tendencija u proizvodnji zdravstveno bezbedne hrane visokog nutritivnog kvaliteta.</p> / <p>There is an increasing market demand for alternative crops such as spelt wheat (Triticum aestivum ssp. spelta), an ancient, hulled with high nutritional values which<br />6<br />encourages agroecogical production systems. Accodrding to literture overview, it is considered that hulls protect kernels aginst different pests and pathogens, which is of great importance in organic production where chemical treatment is forbidden. Alternaria is a ubiquitous fungal genus that includes saprobic, and pathogenic species associated with yield losses and reduction of technological quality of small grains. Moreover, some of Alternaria spp. has high toxigenic potential and can be harmful for human and animal health. In order to conduct efficient disease control and monitoring of toxigenic Alternaria species, precise and reliable identification is highly important issue.<br />This study include identification and molecular characterisation of Alternaria spp. isolated from spelt kernels in the Republic of Serbia, followed by assessing of level of infection of hulled and dehulled kernels, separately. Additionally, the content of the most important Alternaria toxins (alternariol-AOH and alternariol monomethyl-etar-AME) is analysed, as well as the overall impact of infection on yield parameneters, food safety and technological quality of spelt wheat. Out of 25 Alternaria strains isolated from spelte kernels harvested in 2011. from different regions of Vojvodina and according to morphological, pathogenic and molecular characteristics, the most dominant species was A. tenuissima (22 isolates) followed by A. infectoria (3 isolates). This is the first report of Alternaria spp. detected on species level on spelt wheat in Serbia. After artificial inoculation of three different spelt genotypes (Nirvana, Austria i Ostro) with Alternaria isolates in 2011. and 2012., the sighnificant difference in the level of infection on hulled and dehulled kernels is noted. On the hulled kernels infection was in the range of 87-100%, while on the dehulled kernels was from 16 to 72% in 2011., and from 95 to 100% on hulled kernels and from 42 to 68% on dehulled kernels in 2012., respectivelly. Chemical treatment showed positive effect in the reduction of Alternaria disease in both years, on hulled and dehuled kernels as well. Colorimetric measurements of the level of infection proved conventional phytopatholoical analyses, which indicates that such instrumental method can be efficiently used in rapid detection of black point kernels and with additional verifications might be use in practise. AOH and AME were detected in four time higher concetrations in hulls compared to dehulled kernels, which confirms that hulls act as barriers against fungal infection and their toxic metabolities. The minimum concetration was detected on dehulled kernels treated with fungicide (AOH - 84 &mu;g/kg i AME - 153 &mu;g/kg). In the technological quality analysis of infected kernels, it was found that black point disease reduced tecnhnological quality, due to negeative impact of infection on maturation of grains and sinthesis of proteins and starch.<br />Presented results indicate that hulls on spelt kernels act as efficient barrires in the protection of kernels against Alternaria spp. and their toxic metabolities, which is of great importance for the resistance of spelt wheat particulary in the organic farming where chemical treatment is forbidden. Inspite of the fact that spelt is suitable for organic production, adequate fungicide application against Alternaria spp. is justified from the aspect of the good agriculture practise and food safety. Multidisciplinary approach of this doctoral dissertation points to necessity of complementary perception of agronomic and technological aspects in agriculture and food industry, as the unique model that supports contemporary trends in the production of food safety products with high nutritional value.</p>

O presente estudo objetivou avaliar a microbiota fúngica e a ocorrência de micotoxinas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas em amostras de grãos de trigo recém-colhidas e armazenadas. Os resultados revelaram a predominância do gênero Alternaria nas amostras de todas as coletas, seguido de Epicoccum (12,6%), Fusarium (8,3%) e mais 16 outros gêneros de fungos filamentosos. As espécies de Fusarium e Alternaria foram identificadas utilizando métodos moleculares, sendo F. graminearum e A. alternata as espécies mais frequentes. De 70 amostras, 69 (98,6%) estavam contaminadas com a toxina DON (210-2910 ppb) e 3 (4,3%) amostras contaminadas com a toxina ZEA (20-30,1 ppb). O nível de contaminação por DON é inferior aos limites estabelecidos recentemente pela legislação brasileira (3000 ppb), porém superam os limites da Comunidade Européia (1750 ppb). É prudente que se realize um monitoramento contínuo de grãos de trigo a fim de avaliar a exposição dos consumidores às contaminações e estabelecer diretrizes de segurança alimentar. / The present study aimed to evaluated the mycoflora and occurrence of mycotoxins by high performance liquid chromatography coupled to tandem mass in freshly harvested and stored wheat samples. The results showed the predominance of genus Alternaria in all samples, followed by Epicoccum (12.6%), Fusarium (8.3%) and over 16 other genera of filamentous fungi. The species of Fusarium and Alternaria were identified using molecular methods, and F. graminearum and A. alternata were the most frequent species. Of 70 samples, 69 (98.6%) were contaminated with toxin DON (210-2910 ppb), and 3 (4.3%) samples contaminated with the toxin ZEA (20-30.1 ppb). The level of DON contamination is below of the limits recently established by Brazilian legislation (3000 ppb), but exceed the limits of the European Community (1750 ppb). It is prudent to perform a continuous monitoring of wheat to assess consumer exposure to contaminants and establish guidelines for food safety.

O presente estudo objetivou avaliar a microbiota fúngica e a ocorrência de micotoxinas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas em amostras de grãos de trigo recém-colhidas e armazenadas. Os resultados revelaram a predominância do gênero Alternaria nas amostras de todas as coletas, seguido de Epicoccum (12,6%), Fusarium (8,3%) e mais 16 outros gêneros de fungos filamentosos. As espécies de Fusarium e Alternaria foram identificadas utilizando métodos moleculares, sendo F. graminearum e A. alternata as espécies mais frequentes. De 70 amostras, 69 (98,6%) estavam contaminadas com a toxina DON (210-2910 ppb) e 3 (4,3%) amostras contaminadas com a toxina ZEA (20-30,1 ppb). O nível de contaminação por DON é inferior aos limites estabelecidos recentemente pela legislação brasileira (3000 ppb), porém superam os limites da Comunidade Européia (1750 ppb). É prudente que se realize um monitoramento contínuo de grãos de trigo a fim de avaliar a exposição dos consumidores às contaminações e estabelecer diretrizes de segurança alimentar. / The present study aimed to evaluated the mycoflora and occurrence of mycotoxins by high performance liquid chromatography coupled to tandem mass in freshly harvested and stored wheat samples. The results showed the predominance of genus Alternaria in all samples, followed by Epicoccum (12.6%), Fusarium (8.3%) and over 16 other genera of filamentous fungi. The species of Fusarium and Alternaria were identified using molecular methods, and F. graminearum and A. alternata were the most frequent species. Of 70 samples, 69 (98.6%) were contaminated with toxin DON (210-2910 ppb), and 3 (4.3%) samples contaminated with the toxin ZEA (20-30.1 ppb). The level of DON contamination is below of the limits recently established by Brazilian legislation (3000 ppb), but exceed the limits of the European Community (1750 ppb). It is prudent to perform a continuous monitoring of wheat to assess consumer exposure to contaminants and establish guidelines for food safety.

A ceratite fúngica (CF) é uma micose ocular oportunística, que tem como sítio de infecção a córnea. Não é uma enfermidade de risco de vida, mas de extremo comprometimento visual e dificuldade terapêutica e, em casos graves, podendo levar à cegueira total ou mesmo a perda do globo ocular. O trabalho objetivou identificar os agentes etiológicos causadores da CF, e descrever os critérios terapêuticos empregados. No período de 1998 a 2011 foram estudados 23 casos de CF diagnosticados no Laboratório de Micologia da Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de Porto Alegre / RS. Foram analisados os aspectos demográficos, as doenças de base e os fatores associados ao desenvolvimento da doença, assim como os critérios terapêuticos. No presente estudo, a mediana de idade foi 45 anos, com variação entre 15 e 76 anos, com predomínio do gênero masculino. Os fungos filamentosos figuraram em 78% (18/23) dos casos analisados, sendo o gênero Fusarium spp. o agente etiológico de maior frequência. Concluiu-se que uma compreensão epidemiológica local e a identificação dos fatores de risco, agregados ao diagnóstico micológico precoce e eficaz, são fundamentais na prevenção e correta conduta terapêutica da CF no Rio Grande do Sul, sendo que estas práticas evitarão complicações de perda do globo ocular, melhorando o prognóstico oftalmológico do paciente. / The fungal keratitis is an ocular opportunistic mycosis, which has the cornea as site of infection. Isn’t a life-threatening disease, but with extreme visual impairment and therapeutic difficulty, which can lead to total blindness or even loss of the eyeball, in severe cases. The study aimed to identify the etiologic agents causing fungal keratitis, and describe the therapeutic criteria used. In the period 1998 to 2011 were retrospectively studied 23 cases of fungal keratitis diagnosed at the Mycology Laboratory of Irmandade Santa Casa de Misericórdia Hospital of Porto Alegre / RS. We analyzed the demographics, underlying diseases and the factors associated with disease development, as well as therapeutic criteria. In this study, the median age was 45 years old, ranging between 15 to 76 years old, predominantly male. The filamentous fungus corresponded to 78% (18/23) of the cases analyzed, and Fusarium spp. has been the etiologic agent of highest frequency. It was concluded that an understanding of local epidemiological and identification of risk factors, added to the early and effective mycological diagnosis are essential to prevent and correct therapeutic approach for fungal keratitis in Rio Grande do Sul. These practices will prevent complications of loss of the eyeball, improving the ophthalmological prognosis of the patient.

A ceratite fúngica (CF) é uma micose ocular oportunística, que tem como sítio de infecção a córnea. Não é uma enfermidade de risco de vida, mas de extremo comprometimento visual e dificuldade terapêutica e, em casos graves, podendo levar à cegueira total ou mesmo a perda do globo ocular. O trabalho objetivou identificar os agentes etiológicos causadores da CF, e descrever os critérios terapêuticos empregados. No período de 1998 a 2011 foram estudados 23 casos de CF diagnosticados no Laboratório de Micologia da Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de Porto Alegre / RS. Foram analisados os aspectos demográficos, as doenças de base e os fatores associados ao desenvolvimento da doença, assim como os critérios terapêuticos. No presente estudo, a mediana de idade foi 45 anos, com variação entre 15 e 76 anos, com predomínio do gênero masculino. Os fungos filamentosos figuraram em 78% (18/23) dos casos analisados, sendo o gênero Fusarium spp. o agente etiológico de maior frequência. Concluiu-se que uma compreensão epidemiológica local e a identificação dos fatores de risco, agregados ao diagnóstico micológico precoce e eficaz, são fundamentais na prevenção e correta conduta terapêutica da CF no Rio Grande do Sul, sendo que estas práticas evitarão complicações de perda do globo ocular, melhorando o prognóstico oftalmológico do paciente. / The fungal keratitis is an ocular opportunistic mycosis, which has the cornea as site of infection. Isn’t a life-threatening disease, but with extreme visual impairment and therapeutic difficulty, which can lead to total blindness or even loss of the eyeball, in severe cases. The study aimed to identify the etiologic agents causing fungal keratitis, and describe the therapeutic criteria used. In the period 1998 to 2011 were retrospectively studied 23 cases of fungal keratitis diagnosed at the Mycology Laboratory of Irmandade Santa Casa de Misericórdia Hospital of Porto Alegre / RS. We analyzed the demographics, underlying diseases and the factors associated with disease development, as well as therapeutic criteria. In this study, the median age was 45 years old, ranging between 15 to 76 years old, predominantly male. The filamentous fungus corresponded to 78% (18/23) of the cases analyzed, and Fusarium spp. has been the etiologic agent of highest frequency. It was concluded that an understanding of local epidemiological and identification of risk factors, added to the early and effective mycological diagnosis are essential to prevent and correct therapeutic approach for fungal keratitis in Rio Grande do Sul. These practices will prevent complications of loss of the eyeball, improving the ophthalmological prognosis of the patient.

A ceratite fúngica (CF) é uma micose ocular oportunística, que tem como sítio de infecção a córnea. Não é uma enfermidade de risco de vida, mas de extremo comprometimento visual e dificuldade terapêutica e, em casos graves, podendo levar à cegueira total ou mesmo a perda do globo ocular. O trabalho objetivou identificar os agentes etiológicos causadores da CF, e descrever os critérios terapêuticos empregados. No período de 1998 a 2011 foram estudados 23 casos de CF diagnosticados no Laboratório de Micologia da Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de Porto Alegre / RS. Foram analisados os aspectos demográficos, as doenças de base e os fatores associados ao desenvolvimento da doença, assim como os critérios terapêuticos. No presente estudo, a mediana de idade foi 45 anos, com variação entre 15 e 76 anos, com predomínio do gênero masculino. Os fungos filamentosos figuraram em 78% (18/23) dos casos analisados, sendo o gênero Fusarium spp. o agente etiológico de maior frequência. Concluiu-se que uma compreensão epidemiológica local e a identificação dos fatores de risco, agregados ao diagnóstico micológico precoce e eficaz, são fundamentais na prevenção e correta conduta terapêutica da CF no Rio Grande do Sul, sendo que estas práticas evitarão complicações de perda do globo ocular, melhorando o prognóstico oftalmológico do paciente. / The fungal keratitis is an ocular opportunistic mycosis, which has the cornea as site of infection. Isn’t a life-threatening disease, but with extreme visual impairment and therapeutic difficulty, which can lead to total blindness or even loss of the eyeball, in severe cases. The study aimed to identify the etiologic agents causing fungal keratitis, and describe the therapeutic criteria used. In the period 1998 to 2011 were retrospectively studied 23 cases of fungal keratitis diagnosed at the Mycology Laboratory of Irmandade Santa Casa de Misericórdia Hospital of Porto Alegre / RS. We analyzed the demographics, underlying diseases and the factors associated with disease development, as well as therapeutic criteria. In this study, the median age was 45 years old, ranging between 15 to 76 years old, predominantly male. The filamentous fungus corresponded to 78% (18/23) of the cases analyzed, and Fusarium spp. has been the etiologic agent of highest frequency. It was concluded that an understanding of local epidemiological and identification of risk factors, added to the early and effective mycological diagnosis are essential to prevent and correct therapeutic approach for fungal keratitis in Rio Grande do Sul. These practices will prevent complications of loss of the eyeball, improving the ophthalmological prognosis of the patient.