O presente trabalho visou utilizar o perfil polifásico, envolvendo características fenotípicas e genotípicas, na identificação de Fusarium spp. isolados de grãos de trigo como também investigar a presença das principais toxinas: desoxinivalenol e zearalenona nos grãos de trigo de três regiões produtoras de trigo (São Paulo, Paraná e Rio Grande do Sul). Nossos resultados indicaram que os gêneros mais frequentes no trigo foram Alternaria, Fusarium e Epicoccum. A determinação do genótipo por qPCR demonstrou predomínio de 15-ADON seguido por NIV e 3-ADON. A quantificação de DNA demostrou que o perfil 15-ADON foi responsável por 96% de todo DNA quantificado, seguido por NIV com 3.84% e 3-ADON, com somente 0.06%, indicando que 15-ADON, é o principal genótipo de tricoteceno nos grãos de trigo nacional. A toxina desoxinivalenol foi detectada em todas amostras analisadas, com mediana de 323, 466 e 783 µg/kg em SP, PR e RS, respectivamente. A determinação de zearalenona demonstrou contaminação em 100%, 80% e 42% dos grãos dos Estados do RS, PR e SP e medianas de 843, 100 e 14 µg/kg, respectivamente. / The present work aimed to use a polyphasic approach, by phenotypic and genotypic characteristics for the identification of Fusarium strains from wheat grains as well to investigate the presence of deoxynivalenol and zearalenone on wheat grains from three wheat producers States (Parana, Rio Grande do Sul and Sao Paulo). Our results showed that the main genera found were Alternaria, Fusarium and Epicoccum. Genotype detection from qPCR revealed predominance of 15-ADON, followed by NIV and 3-ADON. The qPCR demonstrated that 15-ADON genotype was responsible for 96% of all DNA quantified, followed by NIV with 3.84% and 3-ADON with 0.06%, indicating that 15-ADON is the main trichothecene genotype from Brazilian wheat grains. The toxin deoxynivalenol was detected in all 150 samples analyzed from wheat grains, with medians of 323, 466 and 783 µg/kg in SP, PR and RS, respectively. The zearalenone determination showed contamination on 100%, 80% and 42% of wheat grains from RS, PR and SP State and medians of 843, 100 and 14 µg/kg, respectively.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006- Glenda Ribeiro de Oliveira.pdf: 475801 bytes, checksum: 8ca6884856073fd041daad94f50fca0e (MD5) Previous issue date: 2006-11-24 / The intake of mycotoxin-contamined feeds may lead to nutrient losses and can have adverse effects on animal health and on productivity. The aims of this study were: 1) to determine the mycobiota present in poultry feed samples, obtained from three factories in the region of S?o Jos? do Vale do Rio Preto, RJ, Brazil; 2) to evaluate the natural occurrence of aflatoxin B1 (AFB1), fumonisin B1 (FB1) and zearalenone using the method enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) competitive, commercial kits of Beacon Analytical Systems Inc, USA and 3) to verify the data results by the ELISA to AFB1 and FB1 comparing them with the high precision liquid chromatography methodology (HPLC) Fungal counts were similar between all culture media tested (103 CFU.g-1). Penicillium spp. (41,26%) was the most prevalent genus followed by Aspergillus spp. (33,33%) and Fusarium spp. (20,63%). Aflatoxin B1 was found in 66,27% samples examined by ELISA kits and values ranged between 2 and 21&#956;g.kg-1. Fumonisin B1 was found in 97,87% and levels ranged between 0,3 and 9,1&#956;g.g-1, cooccurring with aflatoxin B1 in 66,7% of the samples. Low concentrations of zearalenone were found (<1 &#956;g.g-1) in 77,1% poultry feed samples. Correlation between the ELISA kits (AFB1 and FB1) and the HPLC analysis was obtained. Values were r2= 0,9922 and r2=0,9823, respectively. In general, the highest mycotoxin levels were found during the hottest month of sampling. The present study shows the simultaneous occurrence of two carcinogenic mycotoxins, aflatoxin B1 and fumonisin B1 together with another Fusarium mycotoxin (zearalenone) in feed intended for poultry consumption. Many samples contained AFB1 levels near the maximum permissible and it could affect young animals. A synergistic toxic response is possible in animals under simultaneous exposure. / A ingest?o de ra??es contaminadas por micotoxinas pode acarretar perdas no seu valor nutritivo e causar efeitos adversos ? sa?de animal e ? produtividade. Os objetivos desse estudo foram: 1)estabelecer a freq??ncia e a preval?ncia da micobiota presente em amostras de ra??es de frangos de corte provenientes de tr?s f?bricas em S?o Jos? do Vale do Rio Preto-RJ, 2)verificar a ocorr?ncia natural de aflatoxina B1 (AFB1), fumonisina B1 (FB1) e zearalenona (ZEA), utilizando a t?cnica biol?gica de imunoensaios-ELISA competitivo, com kits comerciais (Beacon Analytical Systems Inc, USA) e 3)verificar os resultados obtidos pelo m?todo de ELISA, comparando-os com a t?cnica de Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (CLAE) para AFB1 e FB1. A contagem dos prop?gulos f?ngicos foi similar entre todos os meios de cultura testados (103 UFC g-1). Penicillium spp (41,26%) foi o g?nero de maior preval?ncia seguido por Aspergillus spp (33,33%) e Fusarium spp. (20,63%). Aflatoxina B1 foi encontrada em 66,27% das amostras analisadas pelos kits de ELISA,com valores variando entre 2 e 21&#956;g.kg-1. Fumonisina B1 foi encontrada em 97,87% e os valores variaram entre 0,3 e 9,1&#956;g.g-1, co-ocorrendo com aflatoxinaB1 em 66,7% das amostras. Baixas concentra??es de zearalenona foram encontradas (< 1&#956;g.g-1)em 77,1% das amostras de ra??o. Foi obtida correla??o entre os kits de ELISA (AFB1 e FB1) e as an?lises em CLAE, com valores de r2= 0,9922 e 0,9823, respectivamente. Em geral, os maiores n?veis de micotoxinas foram encontrados durante os meses mais quentes do ano. O presente estudo mostra a ocorr?ncia simult?nea de duas micotoxinas carcinog?nicas, AFB1 e FB1, juntamente com outra Fusarium micotoxina (zearalenona) em ra??es destinadas ao consumo de frangos. Algumas amostras apresentaram n?veis de AFB1 pr?ximos ao m?ximo permitido, o que poderia afetar aves jovens. Uma resposta t?xica sin?rgica ? poss?vel em animais sob exposi??o simult?nea.

Dentre os desafios do cultivo de trigo, encontram-se as doenças fúngicas e a presença de micotoxinas. Estima-se que as perdas anuais nesse setor sejam bilionárias. Além dos prejuízos econômicos, há preocupações quanto a segurança alimentar humana e animal. Com o objetivo de avaliar a micobiota e a ocorrência de micotoxinas em diferentes estádios de maturação do trigo foram realizados estudos morfológicos, utilizando métodos morfológicos clássicos e moleculares, identificação do perfil genotípico dos fungos produtores de tricotecenos, por PCR em tempo real e determinação de deoxinivalenol (DON) e zearalenona (ZEA), utilizando a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas (LC-MS/MS). Os dados obtidos também foram correlacionados com os fatores climatológicos. Os resultados revelaram a predominância do gênero Fusarium nas amostras das duas safras, seguido de Alternaria e Epicoccum. A atividade de água média para os dois anos foram, 0,608 e 0,886, consecutivamente. Dentro do gênero Fusarium constatou-se predomínio do complexo de espécies Fusarium graminearum (CEFG), identificando F. graminearum sensu stricto, F. meridionale, F. cortaderiae e F. austroamericanum. Os genótipos dos isolados foram, na sua maioria, 15-ADON para F. graminearum s.s, seguido de NIV para as espécies F. meridionale, F. cortaderiae e F. austroamericanum e 3-ADON para as duas últimas. Por PCR em tempo real, a determinação do genótipo nos grãos de trigo nas safras 2014/15 e 2015/16 demonstraram predomínio de 100% e 93% para 15-ADON, respectivamente. A quantificação de DNA dos isolados do CEFG demostrou que o perfil 15-ADON foi responsável por mais de 95% nas duas safras, com valores irrisórios, menores que 3% para 3-ADON e NIV. Os níveis de contaminação pela micotoxina DON nas amostras foi de 100% nas duas safras, com valores variando entre 24,3 a 5530 &#956g/kg. Para ZEA os valores foram 30% e 96%, nas duas coletas consecutivas, variação entre 26,0 a 4360 &#956g/kg. Ambas as micotoxinas foram detectadas em concentrações acima do limite estabelecido pela legislação brasileira, 3000 &#956g/kg para DON e 400 &#956g/kg para ZEA. Os fatores climáticos obtiveram uma correlação positiva tanto na contaminação fúngica quanto no acúmulo de micotoxinas. Este estudo forneceu novas informações sobre a micobiota natural do trigo brasileiro, em diferentes etapas do cultivo, demonstrando a contaminação por DON e alta frequência de ZEA em amostras do provindas do Paraná. / The fungal diseases and the presence of mycotoxins in cereals cause annually, billionaire losses. In addition, there are concerns about human and animal food safety. Due to the wheat culture relevance in feed and foodstuff, the present work aimed to evaluate mycobiota and the occurrence of mycotoxins in different wheat maturation stages. In order to achieve these objectives, morphologic studies using classic and molecular methods, genotype profile and DNA quantification from trichothecene producers, by real-time PCR and determination of deoxynivalenol (DON) and zearalenone (ZEA), using High Performance Liquid Chromatography coupled to Mass Spectrometry (LC-MS/MS), were done. The obtained data were also correlated with the climatic factors. The results showed the predominance of the genus Fusarium followed by Alternaria and Epicoccum. The average water activity over two years were 0.608 and 0.886, consecutively. Within the genus Fusarium, it was identified a predominance of the Fusarium graminearum species complex (FGSC), identifying F. graminearum sensu stricto, F. meridionale, F. cortaderiae and F. austroamericanum. The genotypes of the isolates were 15-ADON for F. graminearum s.s, followed by NIV for the F. meridionale, F. cortaderiae and F. austroamericanum and 3-ADON for F. cortaderiae and F. austroamericanum. In real-time PCR, the determination of genotype in wheat grains in the 2014/15 and 2015/16 harvests showed a predominance of 100% and 93% for 15-ADON, respectively. The DNA quantification of the FGSC isolates showed that the 15-ADON profile was responsible for more than 95% in both harvests. The levels of DON mycotoxin contamination in the samples were 100%, with values ranging from 24.3 to 5530 &#956g/kg. For ZEA the values were 30% and 96%, in the two consecutive collections, ranging from 26,0 to 4360 &#956g/kg. Both mycotoxins were detected in concentrations above the limit established by Brazilian legislation, 3000 &#956g / kg for DON and 400 &#956g/kg for ZEA. The climatic factors obtained a positive correlation both in the fungal contamination and in the accumulation of mycotoxins. This study provided new information on the Brazilian native mycobiota to different stages of cultivation, demonstrating contamination by DON and high frequency of ZEA in samples from Paraná.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this document was to realize two studies to evaluate the digestibility of diets and metabolism of pigs fed with diets containing mycotoxins and organoaluminosilicate. In the first study it evaluated the diets and metabolic balance of piglets fed with diets containing 800 μg kg-1 of aflatoxins (AFLs). The experimental design utilized was completely randomized whit two treatments (control diet and control + 800 μg kg-1 AFLs), with four replications each, the animal was the experimental unit. The experimental period was 10 days. The digestibility coefficient of dry matter, protein and crude energy were not affected (P>0.05) by inclusion of 800 μg kg-1AFLs. The energy metabolization decreased 6% (P<0.05) on animals fed with diet containing aflatoxins. In N balance the N losses in urine increased 52% and the retention in relation the absorption reduced in 31% on animals fed with diet containing aflatoxins. Concerning the energy balance, the gross energy intake was not influenced (P>0.05) by the addition of AFLs in the diet. Energy losses in urine increased (P<0.05) 52% in the pigs fed diets containing aflatoxins. The presence of 800 μg kg-1 of AFLs in the diet did not affect the digestibility, but it altered the protein and energy metabolism of weaned piglets. In the second study it evaluated the digestibility of diets and metabolism of piglets fed with diets containing zearalenone (ZEA) with or without addition of organoaluminosilicate (OA). A completely randomized design was utilized whit three treatments (control, control + 2 mg kg-1 ZEA and control + 2 mg kg-1 ZEA with addition of 0,3% OA in diet), and four replications, the animal was the experimental unit. The experimental period was 16 days. The ZEA and the OA did not affect (P>0.05) the dry matter intake, dry matter and gross energy digestibility, metabolizable energy, energy and protein digestible. The N balance was not modified (P>0.05) by ZEA and organoaluminosilicate. However, it influenced (P<0.05) the fecal excretion of phosphorus. In diets containing ZEA and ZEA+OA the fecal excretion of P decreased 15 and 10% than control group. The ZEA and the OA did not affect (P>0.05) the P absorption in relation to the ingestion. The intake of 2 mg kg-1 of ZEA with or without addition of 0,3% OA in diet does not affect the diets digestibility and the pigs metabolism. / O objetivo desta dissertação foi realizar dois estudos para avaliar a digestibilidade de dietas e metabolismo de suínos alimentados com dietas contendo micotoxinas e organoaluminosilicato. No primeiro foram avaliados a digestibilidade de dietas e balanços metabólicos de leitões alimentados com dietas contendo 800 μg kg-1 de aflatoxinas (AFLs). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com dois tratamentos (dieta controle e controle + 800 μg kg-1 de AFLs) e quatro repetições, sendo o animal a unidade experimental. O período experimental foi de 10 dias. Os coeficientes de digestibilidade da matéria seca, proteína e energia bruta não foram influenciados (P>0,05) pela adição de 800 μg kg-1 de AFLs na dieta. A metabolização da energia bruta reduziu 6% (P<0,05) nos animais alimentados com dietas contendo aflatoxinas. A excreção urinária de N aumentou (P<0,05) em 52% e a retenção relativa à absorção diminuiu (P<0,05) em 31% nos animais alimentados com a dieta contendo aflatoxinas. No balanço energético, a energia bruta ingerida não foi influenciada (P>0,05) pela adição de aflatoxinas. A excreção urinária de energia aumentou (P<0,05) 52% nos animais alimentados com a dieta contendo aflatoxinas. Conclui-se que a presença de 800 μg kg-1 de AFLs na dieta não afeta a digestibilidade, mas altera o metabolismo protéico e energético de leitões. No segundo estudo foram avaliados a digestibilidade de dietas e balanços metabólicos de leitoas alimentados com dietas contendo zearalenona (ZEA) com ou sem adição de organoaluminosilicato (OA). O delineamento foi inteiramente casualizado, com três tratamentos (controle, controle + 2 mg kg-1 de ZEA e controle + 2 mg kg-1 de ZEA com adição de 0,3% de OA na dieta) e quatro repetições, em que o animal foi a unidade experimental. O período experimental foi de 16 dias. A ZEA e o OA não influenciaram (P>0,05) o consumo de matéria seca, a digestibilidade da matéria seca e energia bruta, metabolização da energia, proteína digestível e energias digestível e metabolizável das dietas. O balanço do N não foi alterado (P>0,05) pela ZEA e o organoaluminosilicato. No entanto, modificaram (P>0,05) a excreção fecal de fósforo. Nas dietas contendo ZEA e ZEA+OA os animais excretaram 15 e 10% menos P nas fezes comparado ao grupo controle. A ZEA e o OA não alteraram (P>0,05) a absorção de P em função da ingestão. O consumo de 2 mg kg-1 de ZEA com ou sem adição de 0,3% de OA não interfere na digestibilidade das dietas e no metabolismo dos suínos.O objetivo desta dissertação foi realizar dois estudos para avaliar a digestibilidade de dietas e metabolismo de suínos alimentados com dietas contendo micotoxinas e organoaluminosilicato. No primeiro foram avaliados a digestibilidade de dietas e balanços metabólicos de leitões alimentados com dietas contendo 800 μg kg-1 de aflatoxinas (AFLs). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com dois tratamentos (dieta controle e controle + 800 μg kg-1 de AFLs) e quatro repetições, sendo o animal a unidade experimental. O período experimental foi de 10 dias. Os coeficientes de digestibilidade da matéria seca, proteína e energia bruta não foram influenciados (P>0,05) pela adição de 800 μg kg-1 de AFLs na dieta. A metabolização da energia bruta reduziu 6% (P<0,05) nos animais alimentados com dietas contendo aflatoxinas. A excreção urinária de N aumentou (P<0,05) em 52% e a retenção relativa à absorção diminuiu (P<0,05) em 31% nos animais alimentados com a dieta contendo aflatoxinas. No balanço energético, a energia bruta ingerida não foi influenciada (P>0,05) pela adição de aflatoxinas. A excreção urinária de energia aumentou (P<0,05) 52% nos animais alimentados com a dieta contendo aflatoxinas. Conclui-se que a presença de 800 μg kg-1 de AFLs na dieta não afeta a digestibilidade, mas altera o metabolismo protéico e energético de leitões. No segundo estudo foram avaliados a digestibilidade de dietas e balanços metabólicos de leitoas alimentados com dietas contendo zearalenona (ZEA) com ou sem adição de organoaluminosilicato (OA). O delineamento foi inteiramente casualizado, com três tratamentos (controle, controle + 2 mg kg-1 de ZEA e controle + 2 mg kg-1 de ZEA com adição de 0,3% de OA na dieta) e quatro repetições, em que o animal foi a unidade experimental. O período experimental foi de 16 dias. A ZEA e o OA não influenciaram (P>0,05) o consumo de matéria seca, a digestibilidade da matéria seca e energia bruta, metabolização da energia, proteína digestível e energias digestível e metabolizável das dietas. O balanço do N não foi alterado (P>0,05) pela ZEA e o organoaluminosilicato. No entanto, modificaram (P>0,05) a excreção fecal de fósforo. Nas dietas contendo ZEA e ZEA+OA os animais excretaram 15 e 10% menos P nas fezes comparado ao grupo controle. A ZEA e o OA não alteraram (P>0,05) a absorção de P em função da ingestão. O consumo de 2 mg kg-1 de ZEA com ou sem adição de 0,3% de OA não interfere na digestibilidade das dietas e no metabolismo dos suínos.

O presente trabalho visou utilizar o perfil polifásico, envolvendo características fenotípicas e genotípicas, na identificação de Fusarium spp. isolados de grãos de trigo como também investigar a presença das principais toxinas: desoxinivalenol e zearalenona nos grãos de trigo de três regiões produtoras de trigo (São Paulo, Paraná e Rio Grande do Sul). Nossos resultados indicaram que os gêneros mais frequentes no trigo foram Alternaria, Fusarium e Epicoccum. A determinação do genótipo por qPCR demonstrou predomínio de 15-ADON seguido por NIV e 3-ADON. A quantificação de DNA demostrou que o perfil 15-ADON foi responsável por 96% de todo DNA quantificado, seguido por NIV com 3.84% e 3-ADON, com somente 0.06%, indicando que 15-ADON, é o principal genótipo de tricoteceno nos grãos de trigo nacional. A toxina desoxinivalenol foi detectada em todas amostras analisadas, com mediana de 323, 466 e 783 µg/kg em SP, PR e RS, respectivamente. A determinação de zearalenona demonstrou contaminação em 100%, 80% e 42% dos grãos dos Estados do RS, PR e SP e medianas de 843, 100 e 14 µg/kg, respectivamente. / The present work aimed to use a polyphasic approach, by phenotypic and genotypic characteristics for the identification of Fusarium strains from wheat grains as well to investigate the presence of deoxynivalenol and zearalenone on wheat grains from three wheat producers States (Parana, Rio Grande do Sul and Sao Paulo). Our results showed that the main genera found were Alternaria, Fusarium and Epicoccum. Genotype detection from qPCR revealed predominance of 15-ADON, followed by NIV and 3-ADON. The qPCR demonstrated that 15-ADON genotype was responsible for 96% of all DNA quantified, followed by NIV with 3.84% and 3-ADON with 0.06%, indicating that 15-ADON is the main trichothecene genotype from Brazilian wheat grains. The toxin deoxynivalenol was detected in all 150 samples analyzed from wheat grains, with medians of 323, 466 and 783 µg/kg in SP, PR and RS, respectively. The zearalenone determination showed contamination on 100%, 80% and 42% of wheat grains from RS, PR and SP State and medians of 843, 100 and 14 µg/kg, respectively.

Zearalenone (ZEA) an estrogenic mycotoxin and, therefore the reproductive system as one of its main targets of toxicity. Besides being a mycotoxin and toxigenic immunosuppressive, the ZEA hematological changes and promotes an imbalance in the oxidative system, especially in antioxidant enzymes. Thus, lycopene, a carotenoid antioxidant potential is considered one of the most potent free radical scavengers and may be used as an alternative therapy to reduce or prevent the toxic effects of ZEA. Male Swiss mice were pretreated with lycopene (20 mg/kg, p.o.) for 10 consecutive days. On the 11th day was held the acute treatment with ZEA (40 mg/kg, p.o.), and after 48 hours was performed euthanasia of animals. We analyzed reproductive, hematological, histological, inflammatory and oxidative stress markers in blood, testes, epididymis, kidneys and livers. ZEA hematotoxicity caused by increased total leukocytes and hemoglobin and hematocrit increased and decreased the number of lymphocytes as well as erythrocytes and platelets. In regard to reproductive and hormonal parameters changes in testicular histology and decreased testosterone levels and sperm motility and count were observed. The activity of GST (Glutathione-S-transferase), GR (Glutathione reductase) and ALA-D (delta aminolevulinic acid dehydratase) was reduced by the action of ZEA in the testes. The glutathione system was amended by ZEA by decreasing the reduced glutathione (GSH) and increased oxidized glutathione (GSSG) and GSH / GSSG. The analyzed pro-inflammatory parameters were increased by the action of mycotoxin. Pretreatment with lycopene prevented the onset of toxic effects induced by ZEA in virtually all parameters and thus, this antioxidant may be used as an alternative to the prevention of damage by ZEA. / A Zearalenona (ZEA) é uma micotoxina estrogênica tendo, portanto, o sistema reprodutivo como um dos seus principais alvos de toxicidade. Além de ser uma micotoxina toxigênica e imunosupressora, a ZEA altera parâmetros hematológicos e promove um desequilíbrio no sistema oxidativo, especialmente nas enzimas antioxidantes. Assim, o licopeno, um carotenóide com potencial antioxidante, é considerado um dos mais potentes scavengers de radicais livres e pode ser utilizado como alternativa terapêutica a fim de reduzir ou impedir os efeitos tóxicos da ZEA. Camundongos Swiss machos foram pré-tratados com licopeno (20 mg/kg, p.o.) por 10 dias consecutivos. No 11° dia foi realizado o tratamento agudo com a ZEA (40 mg/kg, p.o.), e após 48 horas foi realizada a eutanásia dos animais. Analisamos parâmetros reprodutivos, hematológicos, histológicos, inflamatórios e marcadores de estresse oxidativo em amostras de sangue, testículos, epidídimos, rins e fígado dos animais. A ZEA provocou hematotoxicidade através do aumento de leucócitos totais assim como aumento de hemoglobina e hematócrito e diminuiu o número de hemáceas além de linfócitos e plaquetas. Em relação aos parâmetros reprodutivos e hormonais alterações na histologia testicular e diminuição dos níveis de testosterona e da contagem e motilidade espermática foram obervadas. A atividade das enzimas GST (Glutationa-S-transferase), GR (Glutationa Redutase) e ALA-D (Ácido delta aminolevulínico desidratase) foram reduzidas pela ação da ZEA nos testículos. O sistema glutationa foi alterado pela ZEA através da diminuição da glutationa reduzida (GSH) e aumento da glutationa oxidada (GSSG) e da relação GSH/GSSG. Os parâmetros pró-inflamatórios analisados foram aumentados pela ação da micotoxina. O pré-tratamento com o licopeno preveniu o aparecimento dos efeitos tóxicos induzidos pela ZEA em praticamente todos os parâmetros analisados e assim, este antioxidante pode ser utilizado como uma alternativa na prevenção dos danos causados pela ZEA.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this research was to evaluate variability and performance of two maize sampling plans for mycotoxins quantification. Eleven maize lots were sampled using two distinct sampling methods: manual, using a sampling spear, and automatic, using a continuous flow sampling. Total variability and variability from each step of the analysis procedure (sampling, sample preparation, and analysis) for results of aflatoxins, fumonisin, and zearalenone were determined in 8, 11, and 5 lots respectively for each sampling plan. Those variances were compared, for each mycotoxin, between the two sampling plans using a multifactor analysis of variance. Distribution of the quantification results for aflatoxins and zearalenone were compared among four theoretical distribution models. The acceptance/rejection probabilities of a lot with determined aflatoxins or zearalenone concentration were determined using calculated variances and the information on the selected distribution to plot an operation characteristic curve (OC). Sampling and total variances were lower on the automatic sampling plan for aflatoxins, fumonisins, and zearalenone quantification. The OC curve from automatic sampling plan for aflatoxins and zearalenone quantification reduces the consumer end seller risks when compared with the OC curve from the manual sampling plan. The automatic sampling plan is more efficient than the manual one for mycotoxins quantification in maize, reducing lot classification error, and providing more safety in commercial transactions. / O objetivo deste trabalho foi avaliar a variabilidade e o desempenho de dois planos de amostragem de milho para quantificação de micotoxinas. Amostraram-se 11 lotes de milho, através de dois planos de amostragem: o manual, utilizando-se o calador graneleiro e o automático, utilizando-se a amostragem em fluxo contínuo. De cada plano amostral determinaram-se a variabilidade total e as variabilidades das etapas de amostragem, preparação e análise dos resultados de aflatoxinas, fumonisinas e zearalenona em 8, 11 e 5 lotes, respectivamente. Essas variâncias foram comparadas, para cada micotoxina, entre os dois planos de amostragem utilizando a análise de variância multifatorial. As distribuições dos resultados de quantificação das aflatoxinas e zearalenona foram comparadas entre quatro modelos de distribuições teóricas. Determinaram-se as probabilidades de aceitação e rejeição de um lote com determinadas concentrações de aflatoxinas ou zearalenona, utilizando-se a variância e as informações da distribuição selecionada para montar as curvas características de operação (CO). A variância da amostragem e a variância total foram menores no plano de amostragem automático para quantificação de aflatoxinas, fumonisinas e zearalenona. A curva CO do plano de amostragem automático, para quantificação de aflatoxinas e zearalenona reduz os riscos do consumidor e do produtor em relação à curva CO do plano de amostragem manual. O plano de amostragem automático é mais eficiente que o plano de amostragem manual para quantificação de micotoxinas em milho diminuindo, portanto, o erro na classificação de lotes significando, pois, maior segurança nas relações comerciais.

O presente estudo objetivou avaliar a microbiota fúngica e a ocorrência de micotoxinas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas em amostras de grãos de trigo recém-colhidas e armazenadas. Os resultados revelaram a predominância do gênero Alternaria nas amostras de todas as coletas, seguido de Epicoccum (12,6%), Fusarium (8,3%) e mais 16 outros gêneros de fungos filamentosos. As espécies de Fusarium e Alternaria foram identificadas utilizando métodos moleculares, sendo F. graminearum e A. alternata as espécies mais frequentes. De 70 amostras, 69 (98,6%) estavam contaminadas com a toxina DON (210-2910 ppb) e 3 (4,3%) amostras contaminadas com a toxina ZEA (20-30,1 ppb). O nível de contaminação por DON é inferior aos limites estabelecidos recentemente pela legislação brasileira (3000 ppb), porém superam os limites da Comunidade Européia (1750 ppb). É prudente que se realize um monitoramento contínuo de grãos de trigo a fim de avaliar a exposição dos consumidores às contaminações e estabelecer diretrizes de segurança alimentar. / The present study aimed to evaluated the mycoflora and occurrence of mycotoxins by high performance liquid chromatography coupled to tandem mass in freshly harvested and stored wheat samples. The results showed the predominance of genus Alternaria in all samples, followed by Epicoccum (12.6%), Fusarium (8.3%) and over 16 other genera of filamentous fungi. The species of Fusarium and Alternaria were identified using molecular methods, and F. graminearum and A. alternata were the most frequent species. Of 70 samples, 69 (98.6%) were contaminated with toxin DON (210-2910 ppb), and 3 (4.3%) samples contaminated with the toxin ZEA (20-30.1 ppb). The level of DON contamination is below of the limits recently established by Brazilian legislation (3000 ppb), but exceed the limits of the European Community (1750 ppb). It is prudent to perform a continuous monitoring of wheat to assess consumer exposure to contaminants and establish guidelines for food safety.

O presente estudo objetivou avaliar a microbiota fúngica e a ocorrência de micotoxinas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas em amostras de grãos de trigo recém-colhidas e armazenadas. Os resultados revelaram a predominância do gênero Alternaria nas amostras de todas as coletas, seguido de Epicoccum (12,6%), Fusarium (8,3%) e mais 16 outros gêneros de fungos filamentosos. As espécies de Fusarium e Alternaria foram identificadas utilizando métodos moleculares, sendo F. graminearum e A. alternata as espécies mais frequentes. De 70 amostras, 69 (98,6%) estavam contaminadas com a toxina DON (210-2910 ppb) e 3 (4,3%) amostras contaminadas com a toxina ZEA (20-30,1 ppb). O nível de contaminação por DON é inferior aos limites estabelecidos recentemente pela legislação brasileira (3000 ppb), porém superam os limites da Comunidade Européia (1750 ppb). É prudente que se realize um monitoramento contínuo de grãos de trigo a fim de avaliar a exposição dos consumidores às contaminações e estabelecer diretrizes de segurança alimentar. / The present study aimed to evaluated the mycoflora and occurrence of mycotoxins by high performance liquid chromatography coupled to tandem mass in freshly harvested and stored wheat samples. The results showed the predominance of genus Alternaria in all samples, followed by Epicoccum (12.6%), Fusarium (8.3%) and over 16 other genera of filamentous fungi. The species of Fusarium and Alternaria were identified using molecular methods, and F. graminearum and A. alternata were the most frequent species. Of 70 samples, 69 (98.6%) were contaminated with toxin DON (210-2910 ppb), and 3 (4.3%) samples contaminated with the toxin ZEA (20-30.1 ppb). The level of DON contamination is below of the limits recently established by Brazilian legislation (3000 ppb), but exceed the limits of the European Community (1750 ppb). It is prudent to perform a continuous monitoring of wheat to assess consumer exposure to contaminants and establish guidelines for food safety.