Orientador: Lucia Maria Valente Soares / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-15T09:59:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marochi_MariaAngelica_M.pdf: 2637272 bytes, checksum: 420fbf7b449c8f8ffb208eb34d41ade3 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: Surtos de fusariose em animais são regularmente relatados no sul do país, importante centro produtor de grãos. Paralelamente o Brasil importa cereais de países em que, reconhecidamente, existem prob1emas com tricotecenos e zearalenona. Com a falta de procedimentos analíticos simples e de baixo custo, levantamentos da incidência destas micotoxinas e sua fiscalização não têm sido possível em nosso país até a presente data. Para suprir esta lacuna, foi desenvolvido um procedimento analítico para determinação de toxina T2, diacetoxiscirpenol, roridina A, verrucarina A e zearaleona em milho, feijão, soja e arroz. Um outro procedimento, variante do primeiro, foi desenvolvido para determinação de toxina T2, diacetoxiscirpenol, roridina A, verrucarina A em trigo. Os coeficientes de variação obtidos, de 12% e 16%, respectivamente com amostra contaminada por inoculação de cepas toxigênicas de Fusarium e com amostras artificialmente contaminadas, e a recuperação média de 101%, demonstram a repetibilidade e a exatidão da metodologia proposta. Os limites de detecção conseguidos mostraram a sua adequação para trabalhos com amostra contendo teores médios e altos de contaminação (zearalenona - 154 ?g/kg; diacetoxiscirpenol - 900 a 1500 ?g/kg; toxina T2 - 550 a 1100 ?g/kg; roridina A - 790 ?g/kg; verrucarina A - 900 a 1500?/kg). Um sistema para confirmação de tricotecenos, em camada delgada, é proposto visando permitir uma maior segurança nos resultados dos laboratórios sem acesso a espectrometria de massa. Cinco reveladores, três sistemas solventes em conjunto com uma reação de acetilação, realizada diretamente em placa, são empregados / Abstract: Outbreaks of fusariotoxicoses in animals have been regularly reported in the Southern Brazil, important grain production center. On the other hand, Brazil imports cereals from countries known to have problems with trichothecenes and zearalenone in their products. Lacking simple and 16w cost analytical methods, surveys of the incidence of these mycotoxins, as well as their control, have not been possible to date in this country. In answer to this need, an analytical method was developed to determine T2 toxin, diacetoxysctrpenol, roridin A, verrucarin A and zearalenone in maize, beans, soybeans and rice. Avariation of the above procedure was tested in wheat to determine T2 toxin, diacetoxys cirpenol, roridin A and verrucarin A. Coeficients of variation of 12% and 16%, were obtained in samples contaminated with toxigenic strains of Fusarium and samples artificially contaminated. Detection limits were: zearalenone: 154 ?g/kg; diacetoxyscirpenol: 900- 1500 ? /kg; T2 toxin: 550-1100?/kg; roridin A: 790J?g/kg and verrucartn A: 900-1500 ?/kg, showing the adequacy of the method for medium and highly contaminated samples. A system for confirmation of trichothecenes in TLC also has been developed and proposed in order to assure more reliable results in laboratories with no access to mass spectrometry. Three solvent systems, five color developing sprays in conjunction with an acetylation reaction performed directly on the TLC plate, are employed / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Lucia Maria Valente Soares / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T02:02:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Furlong_ElianaBadiale_D.pdf: 4071112 bytes, checksum: af0b0f54b87061f45a4f10c14da0b6c0 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Tricotecenos tem sido encontrados em grãos diversos em todo o mundo. Intoxicações em animais que consumiram rações contaminados cora Ftisarium são frequentemente relatadas no sul do Brasil Nd entanto, não existem dados sobre a incidência de tricotecenos em alimentos durações no pais. Uma das razões desta lacuna pode ser a falta de métodos analíticos adaptáreis ás condições dos laboratórios nacionais No presente trabalho foi desenvolvido e avaliado, um método para determinação e confirmação de sete tricotecenos (deoxinívalenol, nivalenol, diacetoniseirpenol, toxinas T2 e HT2, TS triol e TE tetraol) em trigo. A etapa de extração emprega metanol/ KC1 4*/ (9+1). A limpeza é otida através de uma clarificação com sulfato de amónia (30%), seguida de partição para clorofórmio e uma passagem através de uma coluna de carvão ativo/cslite/alum 1-na (7:3.5>. Derivação com heptafluorobutirilimidazol ê realizada previamente à separação das toxinas por cromatografia gasosa utilizando uma coluna capilar de sílica fundida de i5m h 0,32mm B8225 e detecção por íonisação em chama. A confirmação envolve aeetilacão, hidrólise ou reducio. Os limites de detecção variam de 6,1 até,5 mg/kg. A recuperação média é de BBH para tricotecenos do grupo A e 9B% para tricotecenos do grupo 8. A repetibilidade para amostras naturalmente contaminadas variaram de £,8)í a 1£,9X, para cada tricoteceno individualmente determinado. Amostras fortificadas mostraram um comportamento semelhante com coeficientes de variação de 4,6 a 11,9. O método proposto foi usado para analise de amostras de duas variedades de trigo (8H146 e IAC24) colhidas em dez localidades do Estado de São Paulo. Deoxinivalenoi (0,47-0,58 mg/kg), nivalenol (0,16-0,40 mg/kg) diacetowiscirpenol (6, ó& mg/kg) e toxina 12 (0,Bê mg/kg) foram detectados em seis amostras. A possibilidade de contaminação com aflatoxinas, B1, B2, G1 e G2 ocratoKina A, zearalenona e esterigmatotistina foi investigada. Três das amostras contendo tricotecenos também apresentaram zeara-lenona (40-208 µg/kg) Correlação entre contaminação e variáveis como, fungos presentes nas amostras, variedade de trigo, condições climáticas durante desenvolvimento e colheita dos grãos e localização geográfica, foram estudadas par análise de regressão múltipla. A presença de fungos toxigênicos e altos índices pluviométricos, durante os estágios susceptíveis a contaminação no desenvolvimento da semente, surgiram como os fatores mais importantes Dezoito amostras de trigo coletadas em elevadores e outros tipos de armazenamento no sul do Estado do Rio Brande do Sul, foram também analisados para as mesmas micotoxinas mencionadas Diacetoxiscirpenol Í0.30 mg/kg), deoxinivalenol (0,40 mg/kg), toxina T2 (0,36 mg/kg), T2 tetraol (1,68 mg/kg) e ocratonína A (40 µg/kg) foram encontrados em duas amostras de trigo argentino e uma amostra de trigo nacional / Abstract: Trichothecenes have been shown to occur in grain crops all over the world. Animal intoxications caused by ingestion of Fusarium infected feed are frequently reported in the south of Brasil. However, data is lacking on the incidence of trichothecenes either in foods or feeds. One of the reasons for this shortage of information may be the need for analytical methods more ammenable to the laboratory conditions prevailing in the country. In the present work a method for deterrainat ion and confirmation of seven trichothecenes (deoKynivalenol, nivalena], diacetoxyscirpenol, toxins T2 and HIS, 12 triol and IE tetraol) in wheat, has been developed and evaluated. Extraction employs met hano1KC1 (9 + i > . The cleanup is accomplished through a clarifying step with ammonium sulfate (3%) followed by partition to chloroform and a passage through a carbon/celite/a1umin a (7:3:5) column, Derivatization with heptafluorobutyrylimidazol is conducted before separation by gas chromatography on a 15m y. &.32mm DBHH5 fused silica capillary column and detection by a flame ionization detect or Confirmation procedures involved scetylation, hydrolysis or reduction. The detection limits varied from 0.1 to 0.5 mg/kg. Average recovery obtained was BBX for group Atrichot hecenes and 92*4 for group B. Repeatability far naturally contaminated samples in terms of relative standard deviation (RSD) , ranged from S. BY, to tB-9% for the individual determinations of trichothecenes. Spiked samples showed a similar trend with RSD spanning from A.6% to ii.9%. The proposed method was used to analyse sampies of two varieties of wheat CBH146 and IAC24) harvested in ten different locations of the state of Sao Paulo. Deoxyn ivalenol < 0. 47-0. 58 mg/kg), nivalenol (0.16-0.40 mg/kg), diacetoxyscirpenol (0.60 mg/kg) and 12 toxin C&.80 mo/kg) were -found in six samples. The possibility of contamination with anatoxins B1, B2, G1 and G2, ochratoxin A, zearalenone and sterigmatocystin was also investigated. Zearalenone (40 - 208 µg/kg) was found in three of the samples containing trichot hecenes Correlations between contamination and variables such as fungi present in the samples, wheat variety, weather conditions during seed development and harvest and geographical location were studied by multiple regression analysis. The presence of toxigenic fungi plus high levels of rain during the susceptible stage of the seed development proved to be the most important factors. Eighteen samples of wheat, collected in grain elevators and other storage facilities in the south of the state of Rio Grande do Sul, were also analysed for the same mycotoxins as above. Diacetonyscirpenol (0.30 mg/kg), deoxynivapenol (0.40 mg/kg), toxin T2 (0.36 mg/kg), T2 tetraol (1.68 mg/kg) and ochratoxin A (40 ug/kg) were found in two samples of Argentinian wheat and one sample of Brasilian wheat / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Neste estudo, 144 amostras de sementes de arroz oriundas de áreas de produção de sementes dos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina e Goiás, cultivadas em três safras, foram analisadas quanto a presença de Fusarium. Colônias de espécies do complexo Fusarium graminearum (FGSC) foram identificadas em 43% das 110 amostras da safra 2011/12 com incidência média de 0,7% e colônias de outras espécies do gênero em 77% das amostras com incidência média de 3,6%. Quinze amostras com variada incidência de Fusarium, apresentaram concentração média da micotoxina deoxinivalenol (DON) de 5.750 μg/kg. Em uma coleção de 144 isolados purificados de Fusarium obtidos das sementes de arroz infectadas, foram identificadas, por métodos moleculares (genotipagem multilocus e similaridade com sequencias do gene TEF1-alfa), quatro complexos de espécies: F. fujikuroi (FFSC) F. chlamydosporum (FCSC), F. graminearum (FGSC) e F. incarnatum-equiseti (FIESC). Dentre os 96 isolados do FGSC, a espécie-genótipo tricoteceno predominante foi F. asiaticum-NIV (68/96), seguido de F. graminearum-15-ADON (14/96), F. cortaderiae-NIV (13/96) e um F. meridionale-NIV. Isolados de F. asiaticum oriundos do arroz e F. graminearum oriundos do trigo, quando cultivados em grãos de arroz, produziram a micotoxina predita pela genotipagem, NIV e 15-ADON, respectivamente No entanto os isolados de F. asiaticum do trigo produziram DON e seus acetilados, discordando da genotipagem (NIV). Nos ensaios de patogenicidade em plantas de arroz, o isolados de F. asiaticum do arroz mostraram-se mais agressivos do que F. asiaticum e F. graminearum do trigo. Já no trigo, os isolados F. asiaticum do arroz foram os menos agressivos. Esses resultados suportam a hipótese que adaptação ao hospedeiro pode influenciar na distribuição das espécies do complexo. Na análise de tricotecenos nas sementes dos ensaios de patogenicidade no arroz, somente os isolados de F. chlamydosporum produziram DON (800 a 900 μg/kg). Nas inoculações em trigo, somente os isolados F. asiaticum oriundo do trigo produziram a micotoxina nivalenol. Os resultados deste estudo contribuem para o aumento do conhecimento sobre a diversidade de espécies de Fusarium em arroz e alertam sobre a alta contaminação com tricotecenos por um complexo de espécies toxigênicas. / In this study, 144 samples of rice seeds obtained from seed-growing areas of the states of Rio Grande do Sul, Santa Catarina and Goiás, during three seasons, were assessed for the presence of Fusarium. Fungal colonies resembling species of the Fusarium graminearum species complex (FGSC) were identified in 43% of 110 samples from the 2011/12 season with mean incidence of 0,7%. Also, colonies of other species of the genus were found in 77% of the samples with mean incidence of 3,6%. Fifteen seed samples that showed various Fusarium incidence levels had high levels of deoxynivalenol (DON) mycotoxin (mean = 5.750 μg/kg) and its acetylates. In a collection of 144 purified isolates obtained from the infected seeds, 19 species grouped in four species complexes were identified using molecular analysis (multilocus genotyping targeting FGSC and sequences of TEF1-alfa): F. fujikuroi species complex (FFSC), F. chlamydosporum species complex (FCSC), F. graminearum species complex (FGSC) and F. incarnatum-equiseti species complex (FIESC). Among the four phylogenetic species-trichothecene genotype within the FGSC, F. asiaticum-NIV was the most prevalent (68/96), followed by F. graminearum-15-ADON (14/96), F. cortaderiae-NIV (13/96) and one F. meridionale-NIV. F. asiaticum isolates from rice and F. graminearum from wheat produced the same trichothecene predicted by the PCR assay, NIV and 15-ADON, respectively Nevertheless, F. asiaticum isolates from wheat did not produce NIV as predicted by the genotyping. In the pathogenicity assay in rice, F. asiaticum isolates from rice were more aggressive than F. asiaticum and F. graminearum isolates from wheat. In wheat, F. asiaticum from rice were the least aggressive isolates. The trichothecene analysis in seeds from the pathogenicity assays showed that only isolates of the FCSC produced DON (800 a 900 μg/kg). In wheat, only F. asiaticum from wheat produced NIV. Results of this study contributes to expand the knowledge on the diversity of Fusarium affecting rice seeds and raise concern about the high contamination of rice with trichothecenes possibly produced by a complex of toxigenic species. Also, it corroborates with the hypothesis that host preference possibly regulates distribution of species within the FGSC complex.

Neste estudo, 144 amostras de sementes de arroz oriundas de áreas de produção de sementes dos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina e Goiás, cultivadas em três safras, foram analisadas quanto a presença de Fusarium. Colônias de espécies do complexo Fusarium graminearum (FGSC) foram identificadas em 43% das 110 amostras da safra 2011/12 com incidência média de 0,7% e colônias de outras espécies do gênero em 77% das amostras com incidência média de 3,6%. Quinze amostras com variada incidência de Fusarium, apresentaram concentração média da micotoxina deoxinivalenol (DON) de 5.750 μg/kg. Em uma coleção de 144 isolados purificados de Fusarium obtidos das sementes de arroz infectadas, foram identificadas, por métodos moleculares (genotipagem multilocus e similaridade com sequencias do gene TEF1-alfa), quatro complexos de espécies: F. fujikuroi (FFSC) F. chlamydosporum (FCSC), F. graminearum (FGSC) e F. incarnatum-equiseti (FIESC). Dentre os 96 isolados do FGSC, a espécie-genótipo tricoteceno predominante foi F. asiaticum-NIV (68/96), seguido de F. graminearum-15-ADON (14/96), F. cortaderiae-NIV (13/96) e um F. meridionale-NIV. Isolados de F. asiaticum oriundos do arroz e F. graminearum oriundos do trigo, quando cultivados em grãos de arroz, produziram a micotoxina predita pela genotipagem, NIV e 15-ADON, respectivamente No entanto os isolados de F. asiaticum do trigo produziram DON e seus acetilados, discordando da genotipagem (NIV). Nos ensaios de patogenicidade em plantas de arroz, o isolados de F. asiaticum do arroz mostraram-se mais agressivos do que F. asiaticum e F. graminearum do trigo. Já no trigo, os isolados F. asiaticum do arroz foram os menos agressivos. Esses resultados suportam a hipótese que adaptação ao hospedeiro pode influenciar na distribuição das espécies do complexo. Na análise de tricotecenos nas sementes dos ensaios de patogenicidade no arroz, somente os isolados de F. chlamydosporum produziram DON (800 a 900 μg/kg). Nas inoculações em trigo, somente os isolados F. asiaticum oriundo do trigo produziram a micotoxina nivalenol. Os resultados deste estudo contribuem para o aumento do conhecimento sobre a diversidade de espécies de Fusarium em arroz e alertam sobre a alta contaminação com tricotecenos por um complexo de espécies toxigênicas. / In this study, 144 samples of rice seeds obtained from seed-growing areas of the states of Rio Grande do Sul, Santa Catarina and Goiás, during three seasons, were assessed for the presence of Fusarium. Fungal colonies resembling species of the Fusarium graminearum species complex (FGSC) were identified in 43% of 110 samples from the 2011/12 season with mean incidence of 0,7%. Also, colonies of other species of the genus were found in 77% of the samples with mean incidence of 3,6%. Fifteen seed samples that showed various Fusarium incidence levels had high levels of deoxynivalenol (DON) mycotoxin (mean = 5.750 μg/kg) and its acetylates. In a collection of 144 purified isolates obtained from the infected seeds, 19 species grouped in four species complexes were identified using molecular analysis (multilocus genotyping targeting FGSC and sequences of TEF1-alfa): F. fujikuroi species complex (FFSC), F. chlamydosporum species complex (FCSC), F. graminearum species complex (FGSC) and F. incarnatum-equiseti species complex (FIESC). Among the four phylogenetic species-trichothecene genotype within the FGSC, F. asiaticum-NIV was the most prevalent (68/96), followed by F. graminearum-15-ADON (14/96), F. cortaderiae-NIV (13/96) and one F. meridionale-NIV. F. asiaticum isolates from rice and F. graminearum from wheat produced the same trichothecene predicted by the PCR assay, NIV and 15-ADON, respectively Nevertheless, F. asiaticum isolates from wheat did not produce NIV as predicted by the genotyping. In the pathogenicity assay in rice, F. asiaticum isolates from rice were more aggressive than F. asiaticum and F. graminearum isolates from wheat. In wheat, F. asiaticum from rice were the least aggressive isolates. The trichothecene analysis in seeds from the pathogenicity assays showed that only isolates of the FCSC produced DON (800 a 900 μg/kg). In wheat, only F. asiaticum from wheat produced NIV. Results of this study contributes to expand the knowledge on the diversity of Fusarium affecting rice seeds and raise concern about the high contamination of rice with trichothecenes possibly produced by a complex of toxigenic species. Also, it corroborates with the hypothesis that host preference possibly regulates distribution of species within the FGSC complex.

Orientador: Lucia Maria Valente Soares / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-27T08:21:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AdrianaQueirozde_M.pdf: 4196208 bytes, checksum: 92d5a9097bf404e01a3739a01e11104f (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Os tricotecenos são metabolitos secundarios produzidos por especies de Fusarium, Myrothecium, Cephalosporium, Verticimonosporium, Stachybotrys e trichothecium. Estas micotoxinas podem causar vômitos, angina becrótica, diarreia, anorexia, alterações hematológicas, distúrbios neurológicos, destruição da medula óssea e hemorragias generalizadas, seguidos ou não de morte / Abstract: The trichothecenes are secondary metabolites produced by species of Fusarium, Myrothecium, Cephalosporium, Verticimonosporium, Stachybotrys and Trichothecium. These mycotoxins can cause vomiting, angina becrótica, diarrhea, anorexia, haematological disorders, neurological disorders, destruction of bone marrow and widespread bleeding, followed or not the death / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

O presente trabalho visou utilizar o perfil polifásico, envolvendo características fenotípicas e genotípicas, na identificação de Fusarium spp. isolados de grãos de trigo como também investigar a presença das principais toxinas: desoxinivalenol e zearalenona nos grãos de trigo de três regiões produtoras de trigo (São Paulo, Paraná e Rio Grande do Sul). Nossos resultados indicaram que os gêneros mais frequentes no trigo foram Alternaria, Fusarium e Epicoccum. A determinação do genótipo por qPCR demonstrou predomínio de 15-ADON seguido por NIV e 3-ADON. A quantificação de DNA demostrou que o perfil 15-ADON foi responsável por 96% de todo DNA quantificado, seguido por NIV com 3.84% e 3-ADON, com somente 0.06%, indicando que 15-ADON, é o principal genótipo de tricoteceno nos grãos de trigo nacional. A toxina desoxinivalenol foi detectada em todas amostras analisadas, com mediana de 323, 466 e 783 µg/kg em SP, PR e RS, respectivamente. A determinação de zearalenona demonstrou contaminação em 100%, 80% e 42% dos grãos dos Estados do RS, PR e SP e medianas de 843, 100 e 14 µg/kg, respectivamente. / The present work aimed to use a polyphasic approach, by phenotypic and genotypic characteristics for the identification of Fusarium strains from wheat grains as well to investigate the presence of deoxynivalenol and zearalenone on wheat grains from three wheat producers States (Parana, Rio Grande do Sul and Sao Paulo). Our results showed that the main genera found were Alternaria, Fusarium and Epicoccum. Genotype detection from qPCR revealed predominance of 15-ADON, followed by NIV and 3-ADON. The qPCR demonstrated that 15-ADON genotype was responsible for 96% of all DNA quantified, followed by NIV with 3.84% and 3-ADON with 0.06%, indicating that 15-ADON is the main trichothecene genotype from Brazilian wheat grains. The toxin deoxynivalenol was detected in all 150 samples analyzed from wheat grains, with medians of 323, 466 and 783 µg/kg in SP, PR and RS, respectively. The zearalenone determination showed contamination on 100%, 80% and 42% of wheat grains from RS, PR and SP State and medians of 843, 100 and 14 µg/kg, respectively.

Mestre -- Sao Paulo (Estado). Secretaria da Saude. Coordenacao dos Institutos de Pesquisa. Programa de Pos-Graduacao em Ciencias, Sao Paulo, 2004.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Two studies were performed in order to evaluate, through meta-analysis, the relationship of mycotoxins with performance and organ weights in pigs and broilers. The databases totaled 13,196 pigs (85 articles published between 1968 and 2010) and 37,371 broilers (98 articles, between 1980 and 2009). Meta-analysis followed three sequential analyses: graphical, correlation and variance-covariance. Pigs challenged by mycotoxins reduced feed intake by 18% and weight gain by 21% in relation to the control group. Challenged broilers presented a reduction of 12% in feed intake and 14% in weight gain. Mycotoxins with the greatest impact on performance were deoxynivalenol and aflatoxins in pigs, and ochratoxins and aflatoxins in broilers. The mycotoxin concentration in diets and the animal age at challenge were the variables that more improved the coefficient of determination in equations for estimating the mycotoxin effect on weight gain. The mycotoxin effect on growth was greater in younger animals. In addition, the residual analysis demonstrated that the greater part of the variation in weight gain was explained by the variation in the feed intake (87% in pigs and 65% in broilers). The variation in weight gain in challenged animals was also influenced by nutrient ingestion, such as protein and methionine. The mycotoxin effect on growth was greater in male pigs (-19%) compared to females (-15%). Mortality rate and some hematological parameters were also influenced by mycotoxins in broilers. Relative weight of organs increased in challenged pigs (liver, kidneys and heart) and broilers (liver, kidneys, lungs and gizzard). Mycotoxins influence on performance, productive indexes and organ weight in pigs and broilers. However, the magnitude of the effects varies with the type and concentration of mycotoxin, sex and age of the animal, as well as nutritional factors. / Dois trabalhos foram desenvolvidos com o objetivo de estudar, através de meta-análise, a relação das micotoxinas com o desempenho e o peso de órgãos de suínos e frangos de corte. As bases de dados totalizaram 13.196 suínos (85 artigos publicados entre 1968 e 2010) e 37.371 frangos de corte (98 artigos, entre 1980 e 2009). A meta-análise foi realizada através de três análises sequenciais: estudos gráficos, de correlação e de variância-covariância. Suínos desafiados por micotoxinas apresentaram redução de 18% no consumo de ração e de 21% no ganho de peso. Frangos de corte desafiados apresentaram redução de 12% no consumo de ração e 14% no ganho de peso. As micotoxinas com maior impacto sobre o desempenho foram deoxinivalenol e aflatoxinas para os suínos, e ocratoxinas e aflatoxinas para as aves. A concentração de micotoxinas nas dietas e a idade dos animais ao desafio foram as variáveis que mais ajustaram o coeficiente de determinação nas equações para estimar o efeito das micotoxinas sobre o ganho de peso. O efeito das micotoxinas sobre o crescimento foi maior nos animais jovens. Além disso, a análise de resíduos mostrou que a maior parte da variação no ganho de peso foi explicada pela variação no consumo de ração (87% nos suínos e 65% nas aves). A variação no ganho de peso em animais desafiados também foi influenciada pela ingestão de nutrientes, como proteína e metionina. O efeito das micotoxinas sobre o ganho de peso foi maior nos suínos machos (-19%) que nas fêmeas (-15%). A taxa de mortalidade e alguns parâmetros hematológicos também foram influenciados pelas micotoxinas nos frangos de corte. O peso relativo dos órgãos aumentou nos suínos (fígado, rins e coração) e nas aves (fígado, rins, pulmões e moela) desafiadas. As micotoxinas influenciam o desempenho, os índices produtivos e o peso dos órgãos em suínos e frangos de corte. No entanto, a magnitude destes efeitos varia com o tipo e a concentração de micotoxinas, o sexo e a idade do animal, bem como com fatores nutricionais.

O presente trabalho visou utilizar o perfil polifásico, envolvendo características fenotípicas e genotípicas, na identificação de Fusarium spp. isolados de grãos de trigo como também investigar a presença das principais toxinas: desoxinivalenol e zearalenona nos grãos de trigo de três regiões produtoras de trigo (São Paulo, Paraná e Rio Grande do Sul). Nossos resultados indicaram que os gêneros mais frequentes no trigo foram Alternaria, Fusarium e Epicoccum. A determinação do genótipo por qPCR demonstrou predomínio de 15-ADON seguido por NIV e 3-ADON. A quantificação de DNA demostrou que o perfil 15-ADON foi responsável por 96% de todo DNA quantificado, seguido por NIV com 3.84% e 3-ADON, com somente 0.06%, indicando que 15-ADON, é o principal genótipo de tricoteceno nos grãos de trigo nacional. A toxina desoxinivalenol foi detectada em todas amostras analisadas, com mediana de 323, 466 e 783 µg/kg em SP, PR e RS, respectivamente. A determinação de zearalenona demonstrou contaminação em 100%, 80% e 42% dos grãos dos Estados do RS, PR e SP e medianas de 843, 100 e 14 µg/kg, respectivamente. / The present work aimed to use a polyphasic approach, by phenotypic and genotypic characteristics for the identification of Fusarium strains from wheat grains as well to investigate the presence of deoxynivalenol and zearalenone on wheat grains from three wheat producers States (Parana, Rio Grande do Sul and Sao Paulo). Our results showed that the main genera found were Alternaria, Fusarium and Epicoccum. Genotype detection from qPCR revealed predominance of 15-ADON, followed by NIV and 3-ADON. The qPCR demonstrated that 15-ADON genotype was responsible for 96% of all DNA quantified, followed by NIV with 3.84% and 3-ADON with 0.06%, indicating that 15-ADON is the main trichothecene genotype from Brazilian wheat grains. The toxin deoxynivalenol was detected in all 150 samples analyzed from wheat grains, with medians of 323, 466 and 783 µg/kg in SP, PR and RS, respectively. The zearalenone determination showed contamination on 100%, 80% and 42% of wheat grains from RS, PR and SP State and medians of 843, 100 and 14 µg/kg, respectively.

Orientador: Lucia Maria Valente Soares / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:17:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Milanez_ThaisValeria_D.pdf: 2218554 bytes, checksum: 46e6ca6030ebca6708085a2033758933 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Um bom número de espécies de fungos pode, sob condições especiais, produzir metabólitos secundários tóxicos conhecidos como micotoxinas. Cerca de 20 grupos de toxinas são conhecidos hoje, porém, algumas têm recebido atenção especial devido à sua toxicidade e ampla ocorrência natural: aflatoxinas, zearalenona, ocratoxina A, fumonisinas e tricotecenos. Os tricotecenos constituem um grupo de cerca de mais de uma centena de compostos caracterizados pela presença do sistema 12,13-epoxi-tricotec-9-eno em suas estruturas. A maior parte dos tricotecenos conhecidos foi isolada apenas em laboratório, porém, alguns deles foram obtidos e caracterizados como contaminantes naturais. Dentre estes podem ser citados o desoxinivalenol (DON), o nivalenol (NIV), a toxina T-2 (T2), o diacetoxiscirpenol (DAS) e menos freqüentemente os derivados 3-acetil-desoxinivalenol (3-Ac-DON) e 15-acetildesoxinivalenol (15-Ac-DON), a fusarenona-X (FX) e a toxina HT-2 (HT2). Entre todos, o DON é o de maior ocorrência em alimentos e rações animais, porém é também o menos tóxico. Apesar do milho (Zea Mays) ser um dos substratos mais susceptíveis a este tipo de contaminação, há poucos dados sobre o milho brasileiro. Brasil é o terceiro colocado quanto à produção mundial de milho, colhendo ao redor de 30 milhões de toneladas por ano e, portanto, um cereal com grande impacto na economia brasileira. Estes fatos apontam a necessidade de avaliar a extensão e o tipo de contaminação de tricotecenos em milho nacional. Por outro lado, a similaridade das estruturas químicas dos tricotecenos exige o uso de cromatografia com alto poder de resolução para sua separação como é como é o caso da cromatografia à gás. As diferentes toxicidades para os diversos membros do grupo requer, por sua vez, que a identidade de cada toxina seja confirmada por um sistema de alta confiabilidade como a espectrometria de massas. o presente trabalho visou avaliar a incidência de tricotecenos em milho plantado no estado de São Paulo e em produtos de milho comercializados na cidade de São Paulo. Dentre os tricotecenos, DON e NIV foram escolhidos devido a maior freqüência com que são encontrados em todo o mundo. As toxinas DAS, HT2 e T2 foram incluídas devido às suas maiores toxicidades e ocorrência natural comprovada em alimentos e rações. Para alcançar os objetivos descritos foi inicialmente avaliado método para determinação simultânea destes 5 tricotecenos por cromatografia à gás associada à espectrometria de massas. O método analítico após otimização e avaliação apresentou limites de detecção variando de 20 a 60 ng/g para DON, de 10 a 40 ng/g para NIV, de 20 a 120 nglg para DAS, de 20 a 50 ng/g para HT2 e de 20 a 100 ng/g para T2, de acordo com a as matrizes testadas (milho em grão, milho verde em lata, farinha de milho, canjica, fubá e flocos de milho). Da mesma forma, as recuperações variaram de 83 a 113% para DON, de 84 a 115% para NIV, de 69 a 123% para DAS, de 82 a 155% para HT2 e de 71 a 96% para T2. Foram analisadas 80 amostras de milho produzido em duas cooperativas do estado de São Paulo, tendo sido encontradas 11 amostras contendo NIV e uma com DON em nível de traços. Além disso, cinco amostras apresentaram NIV em níveis variando de 51 a 106 ng/g e uma delas co-contaminada com 71 ng/g de DON. Foram também analisadas 78 amostras de produtos de milho comercializados na cidade de São Paulo, sendo que uma delas, farinha de milho, apresentou traços de DON e NIV e outra, quirera, apresentou 555 ng/g e 767 ng/g de toxinas T2 e HT2, respectivamente. Os resultados obtidos nos levantamentos realizados nos anos de 2000 a 2002, mostram baixa ocorrência de tricotecenos, não havendo risco para a população no consumo destes produtos. Devido à sazonal idade da contaminação por micotoxinas em alimentos, conclusões mais amplas só serão possíveis após vários anos de observação da presença dessas toxinas em milho plantado no estado de São Paulo e produtos de milho comercializados na cidade de São Paulo / Abstract: A great number of the fungal species, under specific conditions, can produce toxic secondary metabolites known as mycotoxins. About 20 groups of such toxins are known today but some have received special attention due to their toxicity and widespread natural occurrence: aflatoxins, zearalenone, ochratoxin A, fumonisins and trichothecenes. The trichothecenes constitute a group of more than a hundred compounds characterized by the presence of the system 12,13-epoxy-trichotec-9-en in their structures. However, most of the known trichothecenes have been isolated only in laboratory conditions. Just a few have been isolated and characterized as natural contaminants. Among them, deoxynivalenol (DON), nivalenol (NIV), toxin T-2 (T2) , diacetoxyscirpenol (DAS) and less frequently the derivatives 3-acetyldeoxynivalenol (3-Ac-DON), 15-acetyl-deoxynivalenol (15-Ac-DON), fusarenone X (FX) and the toxin HT-2 (HT2). DON is the trichothecene most frequently found in foods and feeds and it's also the less toxic of this family. Despite the fact that com is one of the substrates more susceptible to this type of contamination, there is little information on the occurrence of trichothecenes in Brazilian com. Brazil ranks third in world production of com, harvesting about 30 million tons annualy, and com is a grain with great impact in Brazilian economy. These facts point to the need to evaluate the extension and the type of trichothecene contamination in national corn. On the other hand, the similarity of the trichothecene chemical structures requires the use of a high resolution gas chromatographic method for their separation, The differing toxicities for the members of this group of toxins requires, by their turn, that the identity of each toxin be confirmed by a system capable of great degree of reliability such as mass spectrometry. The present work aimed at evaluating the occurrence of trichothecenes in com p/anted in the State of São Pau/o and in com products commercialized in the city of São Paulo. DON and NIV were chosen for this investigation due to their worldwide occurrence. DAS, HT2 and T2 were inc/uded due to their high toxicity and their natural occurrence in foods and feeds. In order to reach the objectives of the present work, a gas chromatography/ mass spectrometry method for simultaneous determination of these tive trichothecenes was optimized and evaluated. Afier optimization the method presented detection limits ranging from 20 to 60 ng/g for DON, from 10 to 40 ng/g for NIV, 20 to 120 ng/g for DAS, 20 to 50 for HT2 and from 20 to 100 ng/g for T2, varying according to the tested matrices (dried com, canned sweet com, com grits, com flour, hominy sweet meal, com meal and com flakes). Similarly, the recoveries ranged from 83 to 113% for DON, 84 to 115% for N/V, 69 to 123% for DAS, 82 to 155% for HT2 and 71 to 96% for T2. A survey was conducted in samp/es of com grown in São Paulo State and also in com-based products commercia/ized in the city of São Paulo. Eighty samples of com from two cooperatives located in the State of São Paulo were analysed. E/even samples presented traces of N/V and another sample had traces of DON. Besides that, tive samples showed levels of N/V ranging trom 51 to 106 ng/g and one of them was co-contaminated with 71 ng/g of DON. Seventy-eight samp/es of com-based products commercialized in Sao Paulo city were analyzed. Among these samples, on/y one sample of com flour, presented DON and N/V. Another sample of com grits , had the toxins T2 an HT2 at the leve/s of 555ng/g and 767 ng/g, respectively. The resu/ts of the two surveys during the years 2000 to 2002, indicated a low occurrence of trichothecenes, and as a consequence a low risk for the consumers. Due to the well known variability in mycotoxins contamination of foods from year to year, only after several years of surveyng corn planted in the State of São Paulo and com products commercialized in the city of São Paulo, it will be possible to have a complete picture of the contamination of trichothecenes in com and com products / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos