Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / Introducción: Las Amelogénesis Imperfecta (AI) son un grupo de desórdenes clínica y genéticamente heterogéneos que afectan el desarrollo del esmalte dental. Los defectos del esmalte se clasifican como hipoplásicos (anormalidades de cantidad o grosor), hipocalcificados y/o hipomaduros (defectos en la estructura o composición química). Basados en la apariencia clínica y en el patrón de herencia se distinguen 15 subtipos de AI, existiendo variantes que se heredan en forma autosómica y ligadas al cromosoma X, ya sea dominantes y/o recesivas. Hasta la fecha, se ha descrito que mutaciones en 12 genes tienen roles causales en la etiología genética de las AI: amelogenina (AMELX), enamelina (ENAM), ameloblastina (AMBN), cadena β-3 de laminina (LAMB3), cadena β-6 de integrina (ITGB6), enamelisina (MMP-20), calicreína 4 (KLK4), proteína 72 con repetidos WD (WDR72), marco de lectura abierto 26 del cromosoma 4 (C4orf26), transportador de solutos 24 A4 (SLC24A4), molécula de interacción estromal 1 (STIM1) y el gen de la familia con similitud de secuencia 83, miembro H (FAM83H). Objetivo General: El propósito de este trabajo fue determinar posibles asociaciones entre la frecuencia de la variante p.Gly557Cys del gen FAM83H y el estatus clínico en 20 familias con diversos tipos de AI y 129 sujetos sanos de la población general. Materiales y Métodos: De las 20 familias analizadas, 8 fueron diagnosticadas con el fenotipo clínico hipoplásico, 8 con hipomaduración y 4 con hipocalcificación. El total de sujetos afectados con AI fue de 34, 14 correspondieron a parientes sanos de los afectados y 129 sujetos a una muestra de la población chilena sana. Para detectar la variante en los tres grupos de sujetos se utilizó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa acoplada a polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (PCR-RFLP). Resultados: La variante p.Gly557Cys se identificó en estado heterocigoto en un único individuo afectado con AI hipocalcificada. La frecuencia de la variante en el grupo de sujetos afectados fue de 2,94 %. La variante no fue detectada en parientes sanos de los afectados ni en los 129 individuos de la población general. Conclusiones: El análisis de los resultados de genotipificación de la variante p.Gly557Cys en los 3 grupos de individuos analizados indica que ésta se asocia al fenotipo clínico de AI hipocalcificada en esta muestra.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Los defectos de desarrollo del esmalte (DDE) son visibles desviaciones cuantitativas (hipoplasia) y cualitativas (hipomineralización) de la apariencia translúcida normal del esmalte dental, resultante de la disfunción del órgano del esmalte. Dentro de los DDE, las Amelogénesis Imperfecta (AI) son desórdenes hereditarios de baja prevalencia (1:700 a 1:14000), que afectan el desarrollo del esmalte dental, provocando anomalías en su estructura y composición. Se pueden clasificar como AI hipoplásicas, hipocalcificadas, hipomaduras e hipomadura/hipoplásica con taurodontismo, pudiendo presentarse en forma combinada y con diversos patrones de herencia. El propósito de este trabajo fue realizar un estudio genético, clínico y radiográfico de una serie de casos con desórdenes del esmalte dental, reclutados en la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile, entre los años 2010 a 2015. La hipótesis de este estudio planteó que los hallazgos clínicos, radiográficos y genéticos serían diferentes y dependerían del fenotipo de AI diagnosticada. Para llevar a cabo el estudio, se realizó examen clínico a varios miembros afectados y no afectados de las familias participantes. El diagnóstico clínico se basó en los criterios de la clasificación de Witkop C. J. y consideró los datos de anamnesis, signos clínicos, hallazgos radiográficos y datos genealógicos de los sujetos examinados. La evaluación realizada permitió determinar que los siete casos analizados presentaban algún tipo de AI, con diferentes características clínicas, radiográficas y genealógicas. Tres casos se diagnosticaron como AI hipocalcificada, dos como AI hipomadura, uno como AI hipoplásica y uno como AI hipomadura / hipoplásica con taurodontismo leve. Seis casos presentaron un probable patrón de herencia autosómico recesivo y uno autosómico dominante. Las anomalías dentales más frecuentes fueron esmalte rugoso, mordida abierta anterior, diastemas y agenesia dentaria. Los hallazgos radiográficos más frecuentes fueron disminución del contraste esmalte-dentina, taurodontismo e invaginaciones coronarias de tipo Dens in Dente. Los resultados de este trabajo refuerzan el hecho de que las AI son un grupo de desórdenes hereditarios de manifestación genética heterogénea, y que, a pesar de ser una patología de baja prevalencia, es necesario estudiar porque ocasiona problemas estéticos, funcionales, psicológicos y sociales a los individuos que la portan. / Adscrito a Proyecto Fondecyt No. 1140905.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Las Amelogénesis Imperfecta (AI) constituyen un grupo heterogéneo de desórdenes del desarrollo del esmalte de origen genético. Afectan tanto la estructura como la apariencia del esmalte en diferentes grados, de todos o casi todos los dientes, afectando tanto la dentición temporal como permanente. De acuerdo a la clasificación más ampliamente utilizada, las AI se agrupan en 4 fenotipos clínicos: AI hipoplásicas, hipocalcificadas, hipomaduras e hipomaduras/hipoplásicas con taurodontismo y cuando sobre estos tipos principales se consideran algunos rasgos secundarios específicos del esmalte y además el patrón de herencia se obtienen 15 subtipos diferentes de AI. Hasta la fecha, sólo se han descrito mutaciones causales de AI en 13 genes: amelogenina (AMELX), enamelina (ENAM), ameloblastina (AMBN), cadena β-3 de laminina (LAMB3), cadena β-6 de integrina (ITGB6), enamelisina (MMP20), calicreina 4 (KLK4), proteína 72 con repetidos WD (WDR72), marco de lectura abierto 26 del cromosoma 4 (C4orf26), transportador de solutos 24 A4 (SLC24A), molécula de interacción estromal 1 (STIM1), gen de la familia con similitud de secuencia 83, miembro H (FAM83H) y colágeno 17 (COL17A1). El propósito de este estudio fue comparar los fenotipos clínicos de tres familias chilenas afectadas con AI de tipo hipomadura/ hipomineralizada y dos sujetos control, entre sí y con los datos de la literatura, mediante la realización de un análisis clínico-radiográfico y genético-molecular. Específicamente, se determinó la presencia/ausencia de cinco mutaciones reportadas hasta la fecha en el gen que codifica el miembro A4 de la familia 24 de proteínas transportadoras de solutos (SLC24A4) en tres probandos de tres familias chilenas. Para ello, las familias reclutadas fueron examinadas intra y extra-oralmente y se obtuvieron registros fotográficos, radiográficos y antecedentes genealógicos de los participantes. Mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y secuenciación directa se analizaron las regiones codificantes y secuencias intrónicas adyacentes de los exones en donde se han localizado cada una de las mutaciones reportadas en el gen SLC24 A4. El análisis bioinformático de los resultados de secuenciación reveló que las mutaciones: g.136454C>G, g.169158A>G, g.173757del, g.124552C>A y g.165151T>G, no están presentes en el ADN genómico de los probandos de las tres familias chilenas analizadas. Sin embargo, se detectó dos variantes de secuencia; una fue clasificada como un cambio intrónico (vecindad exón/intrón 11) que estaba presente en un sujeto control y en el probando de la familia FAI19 y la otra, fue una sustitución sinónima que se encontró en la región codificante del mismo exón, en los probandos de las familias FAI23 y FAI30. Dada la naturaleza de las variantes detectadas, es poco probable que estas sean causales de AI en estas familias. Esto sugiere que otros factores genético-etiológicos podrían estar implicados y que las mutaciones descritas en poblaciones de otros orígenes no son frecuentes en la nuestra. / Adscrito a Proyecto Fondecyt No. 1140905.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: Las Amelogénesis Imperfectas (AI) son un grupo heterogéneo de defectos hereditarios que afectan la formación del esmalte dental en calidad y cantidad, pudiendo presentarse en dentición primaria como permanente. Es una condición de baja prevalencia (1 en 700 a 1 en 14000), pero con grandes complicaciones para quienes la padecen en sus formas más severas. Clínicamente se pueden distinguir tres tipos principales: AI hipoplásica, hipocalcificada e hipomadura, cada una relacionadas con una etapa del desarrollo del esmalte. También se ha descrito la existencia de familias que presentan fenotipos combinados. Esta patología se transmite en forma autosómica dominante, autosómica recesiva, ligada al cromosoma X o como casos esporádicos. Actualmente, se conoce la existencia de mutaciones en 5 genes que participan en la etiología genética de AI hipomadura: enamelisina (MMP-20), calicreína 4 (KLK4), proteína 72 con repetidos WD (WDR72), transportador de solutos 24 A4 (SLC24A4) y molécula de interacción estromal 1 (STIM1). Objetivo General: El propósito de este trabajo fue analizar clínico-radiográfica y genético-molecularmente probandos de familias chilenas afectadas con AI de tipo hipomadura y determinar la presencia/ausencia de las mutaciones g.7143G>A y g.6930delG reportadas en el gen calicreina-4 (KLK4). Materiales y métodos: Se realizó el análisis clínico y radiográfico de 6 familias que fueron diagnosticadas con AI hipomadura y se analizó molecularmente el ADN de 6 probandos, utilizando las técnicas de PCR, secuenciación directa (Sanger) y análisis bioinformático de las secuencias con programas computacionales. Resultados: No se detectó ninguna de las mutaciones estudiadas en los 6 probandos analizados de las familias chilenas. Conclusiones: Se refuerza el carácter heterogéneo de esta patología, descartando la presencia de mutaciones descritas en otras poblaciones en el exón 3 de KLK4 en nuestras familias, pero no se descarta la posibilidad de encontrar mutaciones en otras zonas del gen o en otros genes implicados en AI. / Adscrito a Proyecto Fondecyt No. 1140905

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / Introducción: La odontogénesis es un proceso complejo, secuencial y altamente regulado en el que se forman estructuras calcificadas. Alteraciones en este proceso podrían dar lugar a diferentes tipos de enfermedades como alteraciones en el número de dientes y en la formación de esmalte, dentina y cemento. Otras lesiones que se pueden generar a partir de los tejidos remanentes de la odontogénesis son los tumores odontogénicos que derivan de tejido epitelial, ectomesenquimático y/o mesequimático presentando algunos de ellos matrices calcificadas. El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia y distribución de amelogenina, citoqueratina AE1/AE3 (pan citoqueratina) y citoqueratina 14 en tumores odontogénicos, dientes con amelogénesis imperfecta hipocalcificada y gérmenes dentarios. Materiales y métodos: Con técnicas inmunohistoquímica se examinó la presencia y distribución de amelogenina, citoqueratina AE1/AE3 y citoqueratina 14 en: 11 odontomas, 11 tumores odontogénicos adenomatoides (TOA), tres tumores odontogénicos quístico calcificante (TOQC), 2 tumores odontogénicos epitelial calcificante (TOEC), 2 dientes con amelogénesis imperfecta hipocalcificada (AIHC) y 3 gérmenes dentarios en desarrollo. Los tumores odontogénicos fueron obtenidos del Instituto de Referencia de Patología Oral (IREPO) de la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile entre los años 1988 y 2008. Resultados: Se detectó amelogenina en la matriz de esmalte de odontomas, de dientes con AIHC y de gérmenes dentarios. Esto también fue observado en matrices calcificadas rodeadas por epitelio en TOA y TOQC y en células fantasmas presentes en odontomas y TOQC. Las citoqueratinas fueron detectadas en las células epiteliales de gérmenes dentarios y tumores odontogénicos estudiados. No se observó la presencia de citoqueratinas en dientes con AIHC. Conclusiones: Las proteínas amelogenina, citoqueratina AE1/AE3 y citoqueratina 14 son identificables a través de técnicas inmunohistoquímicas en algunos tumores odontogénicos que forman matrices tipo esmalte originadas por epitelio odontogénico y en gérmenes dentarios en desarrollo

Autor no autoriza el acceso a texto complete de su tesis en el programa de tesis Electrónicas / Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Las Amelogénesis Imperfectas (AI) son desórdenes hereditarios que afectan el desarrollo del esmalte dental, provocando anomalías en su estructura y composición. Clínicamente, se pueden clasificar como AI hipoplásicas, hipocalcificadas e hipomaduras, pudiendo presentarse en forma combinada y con diversos patrones de herencia. Actualmente, se conoce que mutaciones en genes que codifican para proteínas de la matriz del esmalte como amelogenina (AMELX), enamelina (ENAM), calicreína 4 (KLK4), enamelisina (MMP-20), distal-less 3 (DLX3), miembro H de la familia con similitud de secuencia 83 (FAM83H) y proteína 72 con repetidos WD (WDR72) se asocian con varios tipos de AI. Al respecto, el gen ENAM es el candidato más adecuado de estudiar a nivel de secuencia, cuando se analizan molecularmente casos de AI hipoplásicas con patrones de herencia autosómicos dominantes y/o recesivos. El objetivo de este trabajo de tesis fue realizar un estudio clínico-radiográfico y genético molecular de cuatro familias Chilenas afectadas con AI hipoplásica, que presentaron genealogías compatibles con herencia autosómica dominante y/o recesiva. Dado que, en un trabajo anterior se logró descartar la presencia de ocho de las diez mutaciones reportadas hasta la fecha en el gen ENAM, se planteó la siguiente hipótesis: “Los pacientes analizados en este estudio, que se encuentran afectados con Amelogénesis Imperfecta de tipo hipoplásica, presentan las mutaciones g.14917delT o g.12573C>T, recientemente descritas en el exón 10 del gen enamelina (ENAM)”. Para llevar a cabo el estudio, se realizó un examen clínico a varios miembros afectados y no afectados de las familias participantes y a dos sujetos control. El diagnóstico clínico se basó en los criterios de la clasificación de Witkop CJ. y consideró los datos anamnésicos, clínico- radiográficos, histopatológicos y genealógicos de los sujetos examinados. La detección de las dos mutaciones del gen ENAM se realizó, mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) y secuenciación directa de fragmentos de ADN de sujetos afectados de cada familia. 5 Las secuencias obtenidas se compararon con la secuencia de referencia del gen ENAM, usando un programa computacional. El análisis evidenció que no existían alteraciones de bases en relación a la secuencia de referencia del gen, descartándose la presencia de las mutaciones g.14917delT y g.12573C>T en el ADN genómico de los sujetos afectados de las cuatro familias analizadas. Tampoco se detectaron otras variantes de secuencias del gen ENAM en estos individuos. Estos resultados permiten descartar en estas familias, la presencia de todas las mutaciones reportadas hasta la fecha en el gen ENAM. Sin embargo, no se puede descartar la presencia de otras mutaciones en regiones de este gen no analizadas, ya sea codificantes, intrónicas o regulatorias, ni tampoco la presencia de alteraciones en otros genes causales o candidatos, o en genes aún no descritos. Los resultados de este trabajo refuerzan el hecho de que las AI son un grupo de desórdenes hereditarios de manifestación genética heterogénea, y que a pesar de ser una patología de baja prevalencia, es necesario estudiar porque ocasiona problemas estéticos, funcionales, psicológicos y sociales a los individuos que la portan