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Isolamento e caracterização de uma lectina de sementes de Annona coriacea e seu efeito sobre os insetos Callosobruchus maculatus e Anagasta kuehniella

Coelho, Mirela Batista 27 February 2002 (has links)
Orientador : Maria Ligia Rodrigues Macedo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T20:20:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Coelho_MirelaBatista_M.pdf: 5168279 bytes, checksum: 50e08d17632dc403d52ad06800611f20 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As lectinas são (glico) proteínas de origem não imune que interagem especifica e reversivelmente com carboidratos. O atual interesse em lectinas deve-se a sua utilidade como ferramenta em pesquisas biológica e médica, assim como o seu envolvimento na defesa de plantas contra fungos e insetos. Neste trabalho, uma lectina foi purificada de sementes de Annona coriacea (Annonaceae), conhecida comumente por Marolo, usando gel filtração em coluna Sephadex G-75 e em coluna de fase reversa C18 _-Bondapack. Em SDS-PAGE, ACLEC (A. f.oriacea lectin) migrou como duas bandas com massa molecular aparente de 21,6 e 16,0 kDa em condições não reduzidas, e 16,0 e 11,4 kDa em presença de ditiotreitol 1 M. Portanto, a subunidade de 21,6 kDa formada por duas cadeias de 11,0 kDa ligadas covalentemente. A massa molecular relativa de 12 kDa foi estimada por gel de filtração em coluna Superdex 75, indicando que ACLEC comporta-se como um heterodimero. ACLEC aglutinou eritrócito humano (do tipo A, B, AB e O), eritrócitos de bovino, camundongo,carneiro, coelho, caprino, galinha e de rato. A lectina apresentou especificidade a D-manose e D-glicose. Por ensaios fisico-químicos constatamos que ACLEC não foi inibida por ampla faixa de pH, ou afetada por íons divalentes, ou enzimas proteolíticas como pronase. A oxidação com metaperiodato de sódio, ou redução com uréia e ditiotreitol também não afetaram a hemaglutinação. Porém, a hemaglutinação foi inibida por altas temperaturas e por exposição à tripsina e ácido trifluorometanosulfônico. A análise de aminoácidos mostrou uma alta quantidade de resíduos de Arg e Gly, presença de três resíduos de metionina e a ausência de resíduos de fenilalanina. O N-terminal de ACLEC apresentou aproximadamente 50% de homologia com outras lectinas de plantas. ACLEC não agregou plaquetas nem afetou a agregação plaquetária por colágeno ou ristocetina.ACLEC não inibiu o desenvolvimento de fungos e do inseto Callosobruchus maculatus, mas teve alto efeito detrimental sobre o desenvolvimento do inseto Anagasta kuehniella. Estas observações sugerem que esta lectina pode agir seletivamente como um inseticida contra algumas espécies de insetos / Abstract: Lectins are (glyco) proteins with non-immune origin that interact specifically and reversibly with carbohydrates. The current interest in plant lectins reflects their usefulness as tools in biological and medical research and their involvement in plant defense against fungi and insects. In this work, a lectin was purified from the seeds of Annona coriaceae (Annonaceae), commonly known as "Marolo", using gel filtration on Sephadex G-75 and reversed-phase HPLC on a j..l-Bondapack column. In SDS-P AGE, ACLEC (A. ç.oriacea lectin) migrated in two bands with apparent molecular masses of 21.6 kDa and 16.0 kDa in nonreducing conditions, and 16.0 kDa and 11.4 kDa in the presence of 1 M dithiothreitol. Nevertheless, the subunit of 21.6 kDa is formed by two bands covalent-binding of 11.0 kDa. Molecular mass of 12.0 kDa was estimated by gel filtration on Superdex 75, thus indicating that ACLEC exists as a heterodimer. ACLEC agglutinated human type A, B, AB and O erythrocytes, as well as mouse, sheep, rabbit, cow, goat, chicken and rat erythrocytes. The lectin had a higher affinity for D-mannose and D-glucose. The hemagglutinating activity of ACLEC was not inhibited over a wide pH range, or was it afIected by divalent cations or proteolytic enzymes such as pronase. Oxidation with sodium metaperiodate, or reduction with urea and dithiothreitol also did not afIect the hemagglutination. On the other hand, hemagglutination was inhibited at high temperature and by exposure to 1rypsin and trifluoromethanesulfonic acid. Amino acid analysis showed a high content of Arg and Gly, presence of three methionine and the absence of phenylalanine. The N-terminal sequence of ACLEC showed approximately 50% of homology with other plant lectins. ACLEC did not aggregate platelets or afIected platelet aggregation by collagen or ristocetin.ACLEC not inhibited the development of fungi and of the insect Callosobruchus maculatus but it had a high detrimental afIect on the development of the insect Anagasta keuhniella. This observation suggests that this lectin may act selectively as an insecticide against some insect species / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular
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Influencia da alimentação de larvas de Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) (Lepidoptera, Pyralidae) no desenvolvimento de seu parasitoide natural, Bracon hebetor Say 1836 (Hymenoptera, Braconidae) e sua tolerancia a radiação de microondas (2450MHz)

Cabral, Fernanda 02 February 2001 (has links)
Orientador: Mohamed E. M. Habib / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T12:16:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cabral_Fernanda_M.pdf: 12070768 bytes, checksum: 09119c1630e9f23de52c338b4f55039c (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Ao contrário do controle convencional de pragas, cujo objetivo é apenas eliminar o inseto-alvo, o Manejo Integrado de Pragas (MIP) abrange todo o ecossistema, buscando uma utilização consciente de métodos de controle ecologicamente seguros e economicamente viáveis. Neste contexto, toma-se de extrema importância o conhecimento das interaçães entre os agentes de controle empregados em um sistema, bem como da biologia da praga, para garantir maior eficiência na implantação de tais programas. Este trabalho teve como objetivo o estudo comparativo da biologia do piralídeo Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) em três dietas derivadas do trigo (farinha integral, gérmen e farelo); o desenvolvimento de seu ectoparasitóide natural Bracon hebetor (Say, 1836) nas larvas criadas nas três dietas, além da análise do impacto da radiação de microondas (2450 MHz) sobre esta praga e seu parasitóide, oriundos das mesmas três dietas. Assim, o trabalho isou em última instância, a otimização do uso de microondas, associado ao parasitóide natural, como possível componente no manejo deste piralídeo praga em armazéns de subprodutos do trigo. Farinha de trigo infestada por A. kuehniella e B. hebetor foi coletada no moinho Brasway, em Campinas, SP. As colônias de ambos os insetos foram mantidas em sala c1imatizada com condições controladas de temperatura (25 :t 10 C), umidade (70 :t 10%) e fotoperíodo (12 h). Como fonte geradora de radiação usou-se um fomo de microondas da marca Panasonic NN 7954 BH / K, emitindo ondas na freqüência de 2.450 MHz. Constatou-se que a dieta influenciou diretamente o desenvolvimento de Anagasta kuehniella. Tanto o estádio de larva, como os estádios de pré-pupa e pupa apresentaram diferenças na duração em dias das fases, onde larvas criadas em farinha integral e gérmen demonstraram menor duração, que as criadas no fareIo. Em relação à mortalidade larval as dietas de farinha integral e gérmen de trigo apresentaram-se semelhantes e foram inferiores às encontrada para dieta de fareIo. Apesar do período de duração das fases de pré-oviposição, oviposição e pós-oviposição terem sido iguais para as três criações, o número de ovos colocados por fêmeas criadas em farinha integral e gérmen foi superior ao observado para fêmeas criadas em fareIo. A longevidade de machos e fêmeas, tanto não acasalados como acasalados, não sofreu interferência da dieta, sendo os machos sempre mais longevos que as fêmeas. Os adultos não acasalados de A. kuehniella, obtidos nas 3 dietas, tiveram longevidade maior que os acasalados. Apesar deste trabalho ter demonstrado que não existe diferença na localização das larvas criadas nos três subprodutos do trigo, farinha integral, gérmen e fareIo, pelas fêmeas do parasitóide, pode-se constatar que não houve parasitismo por estas fêmeas sobre larvas criadas em fareIo de trigo. A capacidade de oviposição das fêmeas dos parasitóides sobre as larvas das duas dietas, bem como a duração média de todas as fases imaturas, do parasitóide B. hebetor foram totalmente eficazes, com resultados semelhantes para farinha integral e gérmen de trigo. O estágio adulto do parasitóide Bracon hebetor, criado em farinha e gérmen, demonstrou ser bastante tolerante à radiação de microondas, quando comparado com seu hospedeiro natural, A. kuehniella, que apresentou TELso para larvas de terceiro estádio, criadas nas três dietas, menores que os observados para o parasitóide Sendo assim, pode-se concluir que a dieta como recurso energético e nutricional para A. kuehniella influenciou diretamente no desenvolvimento dos estágios imaturos e nas atividades reprodutivas do adulto. Apesar da influência da dieta sobre a sensibilidade de larvas de terceiro estádio de A. kuehniella, pode-se constatar que a radiação de microondas apresentou-se como um método de controle bastante promissor para a praga criada em três subprodutos do trigo, podendo ser empregado em ecossistemas de armazenagem em associação ao ectoparasitóide B. hebetor / Abstract: Unlike the conventional control of pests, whose objective is just to eliminate the target insect, the Integrated Pest Management (IPM) embraces the whole ecosystem, looking for a more conscious use of control methods, ecologically safe and economically viable. In this context, it becomes of extreme importance the knowledge of the interactions among the control agents used in a system, as well as of the biology of the pest, to guarantee larger efficiency in the implantation of such programs. The objective of this study is to compare the biology of the pyralid Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) in three derived diets of the wheat (whole meal fiour, genn and bran); the development ofhis natural ectoparasitoid Bracon hebetor (Say, 1836) in larvae created in that three diets, besides the analysis of the impact of the radiation of microwaves (2450 MHz) on this pest and his parasitoid, originating n-om of the same three diets. Like this, the main objective is the optimization of use of microwaves, associated to the natural parasitoid, as a possible component in the handling of this pyralid pest in stores of wheat by-products. Wheat fiour infested by A. kuehniella and B. hebetor was collected in Brasway mill, in Campinas, SP. The stock creations ofboth insects was maintained in acc1imatized room under controlled conditions oftemperature (25 :J: 1°C), humidity (70:J: 10%) and photo-phase (12 h). A microwave oven, brand Panasonic NN 7954 BHIK, emitting waves in the n-equency of 2.450 MHz, was used as a generating source of radiation. The diet infiuenced directly in Anagasta kuehniella development. The larval stadium, as well as the pro-pupal and pupae stadia presented differences in the duration in days of the phases, where larvas created in whole meal fiour and genn demonstrated smaller duration, in relationship of those created in the bran. About larval mortality the diets of whole meal fiour and wheat genn carne similar and were found inferior than for bran diet. Despite of the period of duration of the pro-oviposition, oviposition and past-oviposition phases, having being the sarne for the three creations, the number of eggs placed by females created in whole meal fIour and genn was superior to the observed for females maids in bran. The longevity of males and females, as much virgins as to have coupled, didn't suffer interference of the diet, the males had alwayas more longevity than females. The virgin adults of A. kuehniella, obtained in the 3 diets, had larger longevity than coupleds. 1n spite of this work to have demonstrated that difference doesn't exist in the location of the larvae created in three by-products of the wheat, whole meal fIour, genn and bran, for the females of the parasitoid, it can be verified that there was not parasitism for these females on larvae created in wheat bran. The capacity of oviposition of the parasitoid females on the larvae of the two diets, as well as the medium duration of all the immature phases, of B. hebetor was totally effective and equal for whole meal fIour and wheat genn. The adult of the parasitoid Bracon hebetor, created in fIour and genn, demonstrated to be quite tolerant to microwaves radiation, when compared with your natural host, A. kuehniella, that presented TELso for larvae of third instar, created in three diets, much smaller than observed them for the parasitoid 1s possible to come to the conc1usion that the diet as energetic and nutricional resource for A. kuehniella infIuenced directly in the development of the immature stages and in the adult's reproductive activities. Despite ofthe infIuence ofthe diet over the sensibility oflarvae of third instar of A. kuehniella, it can be verified that the radiation of microwaves carne as a method of quite promising control for the pest created in three by-products of wheat, and could be used in storage ecosystems in association to the ectoparasitoid B. hebetor / Mestrado / Mestre em Parasitologia
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Desenvolvimento de uma dieta artificial para criação de Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) (Lepidoptera: Pyralidae), hospedeiro alternativo de Trichogramma spp / Development of an artificial diet for the rearing of Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) (Lepidoptera: Pyralidae), factitious host of Trichogramma spp.

Vasconcelos, Cristina Jensen 06 December 2016 (has links)
Este trabalho teve o objetivo de avaliar parâmetros biológicos de A. kuehniella em dietas artificiais com variações de composição, com vistas a otimizar sua criação massal, aumentando a quantidade e, consequentemente, a qualidade dos ovos produzidos para a criação de Trichogramma spp. A pesquisa foi dividida em duas fases. Na primeira fase, foram avaliados parâmetros biológicos de A. kuehniella criada em dietas artificiais compostas por farinha integral de trigo de 6 diferentes variedades (97%) e levedura (3%); as variedades testadas foram Coodetec 150 (testemunha), BRS Parrudo, BRS Guamirim, BRS 327, BRS 328 e BRS 374. Na segunda fase, foram avaliados os mesmos parâmetros sobre dietas compostas por farinhas de trigo integral e de milho amarelo isoladamente (100%), farinha de trigo integral (50%) e farinha de milho amarelo (50%), e diferentes proporções de levedura adicionadas à farinha de trigo (3%, 5% e 8%). Os parâmetros avaliados foram: duração (dias) e viabilidade (%) do período ovo-adulto, peso (mg) de adultos (machos e fêmeas), razão sexual, longevidade (dias) de fêmeas e machos, ritmo diário de oviposição das fêmeas e viabilidade dos ovos produzidos. Concluiu-se que a produção de ovos da traça A. kuehniella independe da variedade de trigo utilizada na sua criação; as melhores dietas artificiais para a criação massal de A. kuehniella foram aquelas compostas por 97% de farinha de trigo integral e 3% de levedura (dieta 1), 50% de farinha de trigo integral e 50% de farinha de milho amarelo (dieta 2) e 100% de farinha de trigo integral (dieta 3); a dieta artificial de menor custo, que proporcionou o melhor desenvolvimento para A. kuehniella, foi aquela composta por 100% de farinha de trigo integral. / The objective of this research was to evaluate biological parameters of A. kuehniella in artificial diets with composition variations, aiming to optimize its mass rearing, increasing the quantity and the quality of the produced eggs for Trichogramma spp. rearing. The research was divided into two phases. In the first one, biological parameters of A. kuehniella reared on artificial diets composed of whole wheat flour of 6 different varieties (97%) and yeast (3%) was evaluated; the tested varieties was Coodetec 150 (control), BRS Parrudo, BRS Guamirim, BRS 327, BRS 328 and BRS 374. In the second phase, the same parameters was evaluated on diets composed of wheat and yellow corn flour alone (100%), whole wheat flour (50%) and yellow corn flour (50%), and different proportions of yeast added to the wheat flour (3%, 5% and 8%). The evaluated biological parameters for both phases were: duration (days) and viability (%) of egg-adult period, adult male and female weights (mg), sex ratio, adult male and female longevity (days), daily rhythm of oviposition and viability of the produced eggs. It was concluded that the A. kuehniella eggs production is not correlated to the wheat variety used as component of the artificial diet for its rearing; the best artificial diets for the mass rearing of A. kuehniella are those composed by whole wheat flour (97%) and yeast (3%) (diet 1), whole wheat flour (50%) and yellow corn flour (50%) (diet 2) and whole wheat flour (100%) (diet 3); with regard to cost-benefit, the lowest cost artificial diet that provides the best development for A. kuehniella is that composed by whole wheat flour (100%).
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Desenvolvimento de uma dieta artificial para criação de Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) (Lepidoptera: Pyralidae), hospedeiro alternativo de Trichogramma spp / Development of an artificial diet for the rearing of Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) (Lepidoptera: Pyralidae), factitious host of Trichogramma spp.

Cristina Jensen Vasconcelos 06 December 2016 (has links)
Este trabalho teve o objetivo de avaliar parâmetros biológicos de A. kuehniella em dietas artificiais com variações de composição, com vistas a otimizar sua criação massal, aumentando a quantidade e, consequentemente, a qualidade dos ovos produzidos para a criação de Trichogramma spp. A pesquisa foi dividida em duas fases. Na primeira fase, foram avaliados parâmetros biológicos de A. kuehniella criada em dietas artificiais compostas por farinha integral de trigo de 6 diferentes variedades (97%) e levedura (3%); as variedades testadas foram Coodetec 150 (testemunha), BRS Parrudo, BRS Guamirim, BRS 327, BRS 328 e BRS 374. Na segunda fase, foram avaliados os mesmos parâmetros sobre dietas compostas por farinhas de trigo integral e de milho amarelo isoladamente (100%), farinha de trigo integral (50%) e farinha de milho amarelo (50%), e diferentes proporções de levedura adicionadas à farinha de trigo (3%, 5% e 8%). Os parâmetros avaliados foram: duração (dias) e viabilidade (%) do período ovo-adulto, peso (mg) de adultos (machos e fêmeas), razão sexual, longevidade (dias) de fêmeas e machos, ritmo diário de oviposição das fêmeas e viabilidade dos ovos produzidos. Concluiu-se que a produção de ovos da traça A. kuehniella independe da variedade de trigo utilizada na sua criação; as melhores dietas artificiais para a criação massal de A. kuehniella foram aquelas compostas por 97% de farinha de trigo integral e 3% de levedura (dieta 1), 50% de farinha de trigo integral e 50% de farinha de milho amarelo (dieta 2) e 100% de farinha de trigo integral (dieta 3); a dieta artificial de menor custo, que proporcionou o melhor desenvolvimento para A. kuehniella, foi aquela composta por 100% de farinha de trigo integral. / The objective of this research was to evaluate biological parameters of A. kuehniella in artificial diets with composition variations, aiming to optimize its mass rearing, increasing the quantity and the quality of the produced eggs for Trichogramma spp. rearing. The research was divided into two phases. In the first one, biological parameters of A. kuehniella reared on artificial diets composed of whole wheat flour of 6 different varieties (97%) and yeast (3%) was evaluated; the tested varieties was Coodetec 150 (control), BRS Parrudo, BRS Guamirim, BRS 327, BRS 328 and BRS 374. In the second phase, the same parameters was evaluated on diets composed of wheat and yellow corn flour alone (100%), whole wheat flour (50%) and yellow corn flour (50%), and different proportions of yeast added to the wheat flour (3%, 5% and 8%). The evaluated biological parameters for both phases were: duration (days) and viability (%) of egg-adult period, adult male and female weights (mg), sex ratio, adult male and female longevity (days), daily rhythm of oviposition and viability of the produced eggs. It was concluded that the A. kuehniella eggs production is not correlated to the wheat variety used as component of the artificial diet for its rearing; the best artificial diets for the mass rearing of A. kuehniella are those composed by whole wheat flour (97%) and yeast (3%) (diet 1), whole wheat flour (50%) and yellow corn flour (50%) (diet 2) and whole wheat flour (100%) (diet 3); with regard to cost-benefit, the lowest cost artificial diet that provides the best development for A. kuehniella is that composed by whole wheat flour (100%).
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Efeito do inibidor de tripsina de sementes de Adrenanthera pavonina sobre os lepidopteros Anticarsia gemmatalis e Anagasta kuehniella / The effects of the trypsin inhibitor from Adrenanthera pavonina seeds on the lepidopteros Anticarsia gemmatalis and Anagasta kuehniella

Silva, Desireé Soares da, 1982- 15 August 2018 (has links)
Orientadores: Maria Ligia Rodrigues Macedo, Goran Nesic / Dissertação (Mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:49:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_DesireeSoaresda_M.pdf: 1615013 bytes, checksum: e404c15f23a6cd6027750ac4c6e28c69 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: As sementes são ricas fontes de inibidores de proteinases, que prejudicam sua qualidade nutricional, reduzindo a digestibilidade das proteínas e sua absorção. Neste estudo, um inibidor de tripsina (ApTI) foi purificado a partir de sementes de Adenanthera pavonina e testado seu efeito no crescimento e desenvolvimento de dois lepidópteros. Larvas de Anagasta kuehniella alimentadas com ApTI 1% mostraram redução de 50% na sobrevivência e no peso médio. Larvas de Anticarsia gemmatalis alimentadas com dieta contendo ApTI 0,5% apresentaram diminuição de 31% na sobrevivência e de 22% no peso médio. O tempo de desenvolvimento larval e pupal de Anagasta kuehniella alimentadas com a dieta contendo ApTI 1% foi maior, enquanto a porcentagem de adultos sobreviventes diminuiu em relação ao grupo controle. A avaliação nutricional de ApTI sobre o desenvolvimento larval de A. kuehniella mostrou redução na eficiência de conversão do alimento ingerido (ECI) e alimento digerido (ECD), e aumento na digestibilidade aproximada (AD) e no custo metabólico (CM). Em relação as larvas de A. gemmatalis, não houve efeito na (ECI), porém foi observado redução na (ECD) e aumento na (AD) e no (CM). Para examinar o efeito in vivo de ApTI sobre os insetos, as atividades das proteinases intestinais das larvas que se alimentaram com dietas livres do inibidor e contendo o inibidor a 0,25 - 1% foram comparadas através de ensaios enzimáticos e eletroforese em gel de atividade enzimática. Larvas de quarto instar de A. kuehniella alimentadas com dieta contendo ApTI 1% apresentaram diminuição na atividade tríptica do intestino e manutenção dessa nas fezes. Larvas de A. gemmatalis alimentadas em dieta contendo ApTI 0,5% mostraram diminuição da atividade tríptica do intestino e das fezes. Estes resultados sugerem que ApTI possui efeitos anti-metabólicos quando ingeridos por A. kuehniella e A.gemmatalis. / Abstract: Seeds are a major source of proteinases inhibitors, which cause nutrition quality damage and reduce the absorption and digestibility of proteins. In this study, a trypsin inhibitor (ApTI) was purified from Adenanthera pavonina seeds and their effect on growth and development tested in two Lepidoptera. Anagasta kuehniella larvae were fed with ApTI 1% showing a significant decrease in survival and larval weight (50%). A. gemmatalis fed with 0.5% ApTI showed a survival of 31% and decrease in weight of 22%, when compared with the control group. Larval and pupal developmental time of Anagasta kuehniella larvae, fed on an ApTI diet at 1% was significantly longer, and the percentage of surviving adults decreased. The nutritional effect of ApTI on A. kuehniella larval development was to decrease the conversion of ingested food (ECI) and digested food (ECD) efficiency, and increase estimated digestibility (AD) and metabolic cost (CM). ApTI had no effect on A. gemmatalis conversion of ingested food efficiency. However, a decrease in the conversion of digested food efficiency (ECD) and increase in estimated digestibility (AD) and metabolic cost (CM) were observed. Enzymatic assays and electrophoreses were performed in order to evaluate the in vivo ApTI effect of larval intestinal proteinase activities between those that were not fed with the inhibitor and those fed with inhibitor (0.25 - 1%). A. kuehniella four instars larvae fed with 1% ApTI showed a reduction in intestinal tryptic activity and maintenance of feces tryptic activity. A. gemmatalis fed with 0.5% ApTI suffered a reduction in intestinal and feces tryptic activities. These results suggest that ApTI presents considerable anti-metabolic effects in A. kuehniella and A. gemmatalis. / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular
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Efeito de um inibidor de tripsina de sementes de Plathymenia foliolosa sobre o desenvolvimento e atividade enzimatica de Anagasta kuehniella / Effect of a trypsin inhibitor from Plathymenia foliolosa seeds on Anagasta kuehniella development and enzymatic activity

Ramos, Vanessa da Silveira, 1983- 19 February 2008 (has links)
Orientador: Maria Ligia Rodrigues Macedo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T12:29:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ramos_VanessadaSilveira_M.pdf: 1587017 bytes, checksum: 9b8d97615e6656343053ce2fd7f519ba (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Inibidores de proteinases (IPs) são amplamente distribuídos em animais, microorganismos e plantas. IPs de plantas são geralmente proteínas pequenas que tem sido principalmente descritas como ocorrendo em órgãos de reserva, tais como sementes e tubérculos, mas eles também foram encontrados nas partes aéreas da planta, nas folhas, flores e raízes. O possível papel sugerido para inibidores de proteinase de sementes inclui a função como parte do sistema defensivo da planta contra pragas via inibição de suas enzimas proteolíticas. A atividade dos IPs é devido a sua capacidade de formar complexos estáveis com as proteases alvos, bloqueando, alterando ou prevenindo o acesso ao sítio ativo da enzima. Lepidoptera são insetos que frequentemente atacam uma ampla variedade de culturas, causando alto dano econômico. A. kuehniella é encontrada mundialmente, este inseto ataca grão estocados e produtos de arroz, aveia, centeio, milho e trigo. Neste trabalho, um inibidor purificado das sementes de Plathymenia foliolosa (Mimosoideae) ¿ PFIT foi utilizado em dietas artificiais, e através de bioensaios seu potencial tóxico contra A. kuehniella foi determinado. A ingestão de PFIT resultou em uma redução significativa na sobrevivência e no peso larval (32,3% e 66,1% respectivamente) e também reduziu a viabilidade larval e o peso das pupas (35,7% e 9,1% respectivamente). Os resultados dos experimentos nutricionais realizados com larvas de A. kuehniella apresentaram uma redução na eficiência de conversão do alimento ingerido (ECI) e alimento digerido (ECD), e um aumento na digestibilidade aproximada (AD) e no CM (custo metabólico). Para examinar o efeito da proteína sobre o inseto, a atividade das proteinases intestinais das larvas que se alimentaram em dietas livres do inibidor e alimentadas em dieta contendo o inibidor a 0,7% foi comparada através de ensaios enzimáticos e eletroforese em géis de atividade enzimática. As larvas de quarto instar alimentadas em dieta contendo PFIT apresentaram uma diminuição na atividade tríptica do intestino e um aumento na atividade tríptica das fezes, confirmado por ensaios enzimáticos e na eletroforese de atividade. Além disso, a atividade tríptica das larvas que se alimentaram em dieta com PFIT foi sensível à inibição por PFIT. Estes resultados sugerem que PFIT possui efeitos anti-metabólicos quando ingeridos por A. kuehniella / Abstract: Proteinase inhibitors (PIs) are widely distributed in animals, microorganisms, and plants. Plant PIs are generally small proteins that have mainly been described as occurring in storage tissues, such as tubers and seeds, but they have also been found in the aerial parts of plants, in the leaves, flowers and roots. The possible roles suggested for seed proteinase inhibitors include the function as a part of the plant defensive system against pest via inhibition of their proteolytic enzymes. The activity of PIs is due to their capacity to form stable complexes with target proteases, blocking, altering or preventing access to the enzyme active site. Lepidoptera are often insects which attack a wide range of crops, causing damage high economic value. A. kuehniella is found worldwide, this insect attacks stored grains, and products of rice, oat, rye, corn and wheat. In this report, the pure inhibitor from seeds of Plathymenia foliolosa (Mimosoideae) ¿ PFTI was monitoring by an insect bioassay its toxic activity toward A. kuehniella. The chronic ingestion of PFTI did result in a significant reduction in larval survival and weight (32.3% and 66.1% respectively) and also reduced the larval viability and the weight of pupae (35.7% and 9.1% respectively). The results from nutritional experiments realized with A. kuehniella larvae presented a reduction in efficiency of conversion of ingested food (ECI) and digested food (ECD), and an increase in approximate digestibility (AD) and CM (metabolic cost). To examine the protein effects on insect, the midgut proteinases of A. kuehniella larvae reared on artificial PI-free diet and on a diet containing PFTI at 0.7% were compared by using enzymatic assays and polyacrilamide gel electrophoresis. The fourth instar larvae reared on a diet containing PFTI showed a decrease in tryptic activity of gut and increase in tryptic activity of faeces, as confirmed by BApNA as substrate and by activity in gels. In addition, the tryptic activity in PFTI-fed larvae was sensitive to PFTI. These results suggest that PFTI have a potential antimetabolic effect when ingested by A. kuehniella / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

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