CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A esquistossomose à uma parasitose causada por Platelmintos, do gÃnero Schistosoma e, embora nÃo seja uma doenÃa que cause um nÃmero elevado de mortes, apresenta um quadro de morbidade. No CearÃ, o municÃpio de Maranguape possui a localidade com maior Ãndice de positividade para a esquistossomose no estado, chamada Planalto do Cajueiro. Diversos trabalhos populacionais, demonstrando uma relaÃÃo inversa entre parasitoses e o desenvolvimento de doenÃas alÃrgicas, tem gerado especulaÃÃes sobre um efeito protetor (ou imunomodulador) dos parasitos em relaÃÃo a alergia. Segundo a HipÃtese da Higiene, a falta de intensas infecÃÃes, a higiene, a vacinaÃÃo e o uso de antibiÃticos, presentes principalmente em paÃses desenvolvidos, podem alterar o sistema imune, que passa a responder inadequadamente a algumas substÃncias. Neste estudo, objetivamos avaliar a resposta imuno-alÃrgica de pacientes diagnosticados com esquistossomose mansoni, moradores de uma Ãrea de baixa endemicidade. Para tanto, realizamos, primeiramente, o diagnÃstico parasitolÃgico da esquistossomose atravÃs do mÃtodo de Kato-Katz e, posteriormente, o diagnÃstico de outras parasitoses atravÃs do mÃtodo de Lutz. Ao final das coletas, foram encontrados 39 pacientes positivos para esquistossomose e selecionados, aleatoriamente, 52 pacientes negativos para esta parasitose. Foi realizada uma coleta sanguÃnea, em todos os 91 pacientes, para a realizaÃÃo do hemograma, dosagem de IgE, dosagem de IgG anti-S. mansoni e contagem das sub-populaÃÃes linfocitÃrias atravÃs da citometria de fluxo. AlÃm disso, no ato da coleta, foi realizado o Prick test para cinco alÃrgenos ambientais. Dos 39 indivÃduos do grupo positivo, apenas 7 foram positivos para o Prick test, enquanto dos 52 indivÃduos do grupo negativo, 20 apresentaram algum tipo de reaÃÃo. A eosinofilia e o aumento da concentraÃÃo de IgE se mostraram presente nos pacientes alÃrgicos e parasitados. O perfil linfocitÃrio dos pacientes parasitados apresentou um aumento do nÃmero de linfÃcitos CD3+CD4+ e linfÃcitos CD3+CD8+. Diante dos resultados obtidos podemos concluir que: A presenÃa da infecÃÃo pelo S. mansoni se mostrou um fator protetor para o desenvolvimento da alergia; o aumento da concentraÃÃo de IgE està diretamente relacionado com doenÃas parasitÃrias e alÃrgicas; hà uma maior concentraÃÃo de eosinÃfilos nos pacientes parasitados; pacientes parasitados pelo S. mansoni desenvolveram um aumento do nÃmero dos linfÃcitos CD3+CD4+ e linfÃcitos CD3+CD8+; o desenvolvimento de reaÃÃes alÃrgicas foi inversamente proporcional à idade dos indivÃduos. Estudos complementares dos mecanismos envolvidos nesta relaÃÃo parasito/alergia podem contribuir com novos tratamentos para a alergia / Schistosomiasis is a parasitic disease caused by flatworms, Schistosoma genus and, although not a disease that causes a high death toll, presents a framework for significant morbidity. In CearÃ, Maranguape city has the location with higher positive for schistosomiasis in the state, called Planalto do Cajueiro. Several population studies showing an inverse relationship between parasites and the development of allergic diseases, has raised speculations about a protective effect (or immunomodulating) of parasites in relation to atopy. According to the Hygiene Hypothesis, the lack of intense infections, hygiene, vaccination and antibiotic use, mainly present in developed countries, can modify the immune system, which is responding inadequately to some substances. This study aimed to evaluate the immune-allergic reactions of patients diagnosed with schistosomiasis, living in an area of low endemicity. Therefore, we performed first the parasitological diagnosis of schistosomiasis by the Kato-Katz and later diagnosed with other parasitic diseases by Lutzâs method. At the end of the sampling, 39 patients were found positive for schistosomiasis and we randomly selected 52 patients negative for this disease. A blood collection was performed in all 91 patients for complete blood count, IgE, IgG anti-S.mansoni and counting of lymphocyte subpopulations by flow cytometry. Furthermore, Prick test were performed, using five environmental allergens. Of the 39 subjects in the (S.mansoni) positive group, only 7 were positive to Prick test, while the 52 subjects in the negative (S.mansoni), 20 had some kind of reaction. Eosinophilia and increased levels of IgE were shown in allergic and S.mansoni infected patients. The profile of lymphocytes in infected patients showed an increased number of cells CD3 + CD4 + and CD3 + CD8 +. Based on these results we conclude that: The presence of infection by S. mansoni showed to be a protective factor for the development of allergy; the increased concentration of IgE is directly related to allergic and parasitic diseases, with a higher concentration of eosinophils in infected patients, patients infected with S. mansoni developed an increased number of cells CD3 + CD4 + and CD3 + CD8 +, and the development of allergic reactions was inversely proportional to age of individuals. Further studies of the mechanisms involved in this parasite relationship can contribute to the development new treatments for allergy.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A hansenÃase à uma doenÃa infecciosa crÃnica causada pelo bacilo Mycobacterium leprae. No Cearà à observado o aumento do nÃmero de casos novos de hansenÃase. A infecÃÃo de indivÃduos suscetÃveis acontece principalmente pela inalaÃÃo de bacilos eliminados pelas vias aÃreas superiores de pacientes multibacilares. A transmissÃo à influenciada por fatores genÃticos do hospedeiro, estado nutricional e taxa de exposiÃÃo ao M. leprae ou outras micobactÃrias. Acredita-se que o contato com fatores ambientais sejam possÃveis fontes de infecÃÃo, como a Ãgua, o solo e alguns animais. O papel exato do ambiente na dinÃmica de transmissÃo ainda à especulativo. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar por tÃcnicas de biologia molecular a presenÃa de Ãcidos nucleicos de M. leprae em amostras de Ãguas ambientais coletadas em Ãreas endÃmicas de municÃpios de Estado do CearÃ, assim como cultivar micobactÃrias ambientais nestas mesmas amostras. Foram coletadas amostras de Ãgua de 24 reservatÃrios, sendo coletadas rÃplicas de cada sÃtio selecionado, totalizando 119 amostras. As amostras coletadas foram provenientes de aÃudes, riachos, rios e balneÃrios recreativos. O DNA e RNA total foram extraÃdos atravÃs de kits especÃficos para amostras ambientais de acordo com as recomendaÃÃes do fabricante, seguido de amplificaÃÃo dos Ãcidos nucleicos por PCR e RT-PCR respectivamente, gerando produto de 187pb relativo ao gene gyrA de M. leprae. Em relaÃÃo ao cultivo, as amostras de Ãgua foram descontaminadas e cultivadas em meio Lowestein-Jensen, seguido de identificaÃÃo da espÃcie de micobactÃria por mÃtodo de PRA. O DNA e o RNAm do M. leprae foram detectados em todos os municÃpios estudados. Do total de 119 amostras de Ãgua analisadas, 76 apresentaram positividade para Ãcidos nucleicos de M. leprae (64%). Dentre estas, 23 foram positivas apenas para DNA (30,3%), 24 apenas para RNAm (31,5%) e 29 positivas para ambos os Ãcidos nucleicos (38,2%). O produto de PCR de duas amostras da regiÃo gyrA foi confirmado por sequenciamento e BLAST. Houve uma significÃncia estatÃstica de maior frequÃncia de positividade de DNA e RNAm nos reservatÃrios de Ãgua com temperatua mÃdia de 28,4oC. O cultivo mostrou que alÃm do bacilo M. leprae, as amostras de Ãgua continham espÃcies de micobactÃrias nÃo tuberculosas Este estudo indica presenÃa de DNA e RNAm de M. leprae nas amostras de Ãguas ambientais. Demonstrando, portanto, nÃo somente a existÃncia do bacilo da hansenÃase, mas indica fundamentalmente a presenÃa de bacilos viÃveis, os quais sÃo geneticamente iguais à referÃncia de M. leprae em relaÃÃo ao fragmento analisado. Desta forma, os resultados obtidos contribuem para ampliar o conhecimento da dinÃmica de transmissÃo da hansenÃase.

No Brasil ocorrem epidemias de dengue de grande magnitude e nem todos os casos que evoluem para Ãbito sÃo diagnosticados pelos serviÃos de saÃde. Objetivo: avaliar o impacto do ServiÃo de VerificaÃÃo de Ãbitos Dr. Rocha Furtado (SVO-RF) para a detecÃÃo de Ãbitos nÃo suspeitos de dengue no CearÃ. MÃtodos: foram avaliados os Ãbitos encaminhados para o SVO-RF como suspeitos de dengue e aqueles encaminhados com outra hipÃtese diagnÃstica, mas que os patologistas suspeitaram de dengue. Foi colhido material biolÃgico(sangue, lÃquor, fragmentos de cÃrebro, coraÃÃo, pulmÃo, fÃgado e baÃo) de todos os corpos autopsiados, com suspeita de dengue, entre os anos de 2011 e 2012. As amostras foram encaminhadas ao LaboratÃrio Central de SaÃde PÃblica do Cearà (LACEN-CE) para investigaÃÃo atravÃs dos testes diagnÃsticos: IgM, NS1, isolamento viral, PCR; e encaminhados para o Instituto Evandro Chagas (IEC) para a realizaÃÃo de imunohistoquÃmica. Foram confirmados os Ãbitos que preencheram os critÃrios de confirmaÃÃo de caso da OMS. O trabalho foi aprovado pelo CEP do Centro UniversitÃrio Christus (078/2011). Resultados: foram realizadas 214 autopsias e 121 (56,5%) foram confirmadas como dengue. O SVO-RF detectou 90 Ãbitos por dengue que nÃo tiveram suspeita clÃnica durante a evoluÃÃo da doenÃa. A mediana de idade foi de 36 anos (5mâ84a), 54,1% apresentava renda familiar acima de um salÃrio mÃnimo e 54,5% do sexo masculino. Comorbidades foram referidas em 72,2% dos Ãbitos confirmados, com destaque para hipertensÃo (36,4%), cardiopatia (28,8%) e diabetes mellitus (22,9%). Os principais fatores de risco relatados foram etilismo (32,9%), obesidade (31,0%) e tabagismo (30, 6%). Foram identificadas 46 coinfecÃÃes, destacando-se as bactÃrias como agente etiolÃgico em 93,5%. Foi observado edema e hemorragia em todos os ÃrgÃos, destacando- se edema mais acentuado nos pulmÃes (79%) e sistema nervoso central (71%) e hemorragias mais intensas nas adrenais (31%) e pulmÃes (24%). A causa imediata de morte registrada com maior frequÃncia nas DeclaraÃÃes de Ãbito foi insuficiÃncia respiratÃria aguda (47,1%), seguida de choque (33,8%). ConclusÃo: a articulaÃÃo do SVO-RF com o NÃcleo de VigilÃncia EpidemiolÃgica (NUVEP-CE) da Secretaria de SaÃde do Cearà e LACEN-CE contribuiu para o aumento de 5,1 vezes no nÃmero de Ãbitos por dengue. Trata-se da maior sÃrie histÃrica de Ãbitos por dengue autopsiados no mundo. / There is expressive epidemic outbreaks of dengue in Brazil and not all the cases with fatal evolution are diagnosed by the public health service. Objectives: survey the Coronerâs Office Dr. Rocha Furtado (CO-RF) impact in detecting death related to dengue inunsuspicious case by the clinician in CearÃ. Methods: Were evaluated post-mortem examinations performed in the period from 2011 to 2012, due suspect of dengue and cases unsuspected by the clinician but that were suspected by pathologist. Biologic material (blood, cerebrospinal fluid, tissue from brain, liver, heart, lung, and spleen) was collected from all the autopsied bodies with dengueâs suspect. The sample test to IgM, NS1, viral isolation and PCR were sent to Central Laboratory of Public Health of Ceara (LACEN). The immunohistochemical test were performed at Evandro Chagas Institute in Amazon. Deaths due to dengue were confirmed only if they fulfilled the WHO criteria. This work was approved by the ethics committee of the Christus Universitary Center (078/2011). Results: 214 post-mortem examinations was performed and 121 (56,5%) were confirmed as dengue. CO-RF found 90 deaths due to dengue that did not have clinical suspicious throughout evolution of illness. Median age was 36 years old (5 months-84 yo), 54,5% were male and 54,1% had a family income above one minimum wage. Comorbidities were reported in 72.2% of this deaths notably hypertension (36.4%), heart disease (28,8%) and diabetes mellitus (22,9%). Alcoholism (32,9%), obesity (31%) and smoking(30,6%) were the main risk factors reported. Coinfections were detected in 46 cases in which bacterial organisms was the most prevalent (93.5%). Edema and hemorrhage occured in all organs with more marked edema in the lungs (79%) and central nervous system (71%). Hemorrage was predominant in suprarenal (31%) and lung (24%). Acute respiratory failure was the most frequently deathâscause registered in death certificate (47,1%) followed by shock (33.8%). Conclusion: The joint between the CO-RF with the Center for Epidemiological Surveillance (NUVEP-CE) and LACEN helped to increased by 5.1 times the number of dengueâs related deaths. This is the largest historic series of autopsied deaths due to dengue in the world.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Chemotherapy available for leishmaniasis is effective in many cases, however is still not satisfactory, presenting several inconveniences, one of them, resistance to antimony, which is a major current problems. Few studies using treatment with recombinant chemokines for leishmaniasis have been reported. The objective of this study was to evaluate the immunomodulatory effect in vitro of CXCL10 and its association with Glucantime for the infection of macrophages by Leishmania braziliensis strain refractory to treatment with antimony. For this, murine macrophages were infected with L. braziliensis and treated or not with CXCL10 (25, 50 e 100ng/mL), Glucantime (32mg/mL), and CXCL10+Glucantime [(25, 50 e 100ng/mL) + (32mg/mL)]. After 24 and 48h of infection were evaluated: parasitic load (macrophages infected count on coverslips stained), nitric oxide concentration (NO) and the pattern of the cytokines TNF-&#945;, IL-12, IL-4, IL-10, and TGF-&#946; in the culture supernatant. The results showed that the treatment with CXCL10 and CXCL10+Glucantime combination resulted in a significant reduction of the parasitic load, ranging from 70.5% to 95% and 92.4% and 95.0%, respectively, compared with the control untreated, while treatment with Glucantime decreased infection of macrophages to 74.0%. The reduction of the parasitic load was correlated with the increase of NO in all concentrations of CXCL10 (p <0.001). However, it was not observed the same dynamic when it was used to CXCL10+Glucantime association. TNF-&#945; and IL-12 levels increased as a function of the concentration of CXCL10 in the first 24h, however, was inhibited when the infected macrophages were treated with Glucantime (p <0.05). The concentration of TNF-&#945; was lower in cells treated with CXCL10+Glucantime than in those treated only with CXCL10 in both time periods. To the association CXCL10+Glucantime the IL-12 only induced a significant production within 24h when CXCL10 was used at a concentration of 100ng/ml (p <0.01). CXCL10 and association CXCL10+Glucantime treated cells showed a decrease of IL-4 concentration decreasing as the chemokine concentrations were higher (p <0.01) while treatment with Glucantime had a high production of this cytokine. In both times evaluated, treatment with CXCL10 induced IL-10 production at concentrations of 50ng/ml, and 100ng/ml, induced a 3-fold more IL-10 (p <0.001) when compared with antimony or with association CXCL10+Glucantime. TGF-&#946; showed different behavior in the two time periods, an increase in the early hours, and fall in the past 48h. Glucantime induced TGF-&#946; concentration higher than that induced by CXCL10. The association CXCL10+Glucantime showed increased production of TGF-&#946; inverse of the concentration of CXCL10 used. In conclusion, in vitro treatment with CXCL10 induced a Th1 response profile (increase of TNF-&#945;, and IL-12), controlling the intracellular parasitemia and modulation of the inflammatory response mediated by IL-10, in macrophages infected with L. braziliensis refractory to antimony. The Glucantime+CXCL10 association, although it has reduced parasitic load, not inducing a significant increase in nitric oxide, and showing a induction of TNF-&#945;, IL-12 and reduction IL-4,. / A quimioterapia disponÃvel para as leishmanioses à eficaz em muitos casos, contudo ainda nÃo à satisfatÃria, apresentando vÃrias inconveniÃncias, uma delas, a resistÃncia aos antimoniais, que à um dos grandes problemas atuais. Poucos estudos utilizando tratamento com quimiocinas recombinantes para as leishmanioses tÃm sido relatados. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito imunomodulador in vitro de CXCL10 e sua associaÃÃo com Glucantime na infecÃÃo de macrÃfagos por cepa de Leishmania braziliensis refratÃria ao tratamento com antimÃnio. Para isso, macrÃfagos murinos foram infectados com L. braziliensis e tratados ou nÃo com CXCL10 (25, 50 e 100ng/mL), Glucantime (32mg/mL) e CXCL10+Glucantime [(25, 50 e 100ng/mL) + (32mg/mL)]. ApÃs 24 e 48h de infecÃÃo, avaliou-se: carga parasitÃria (contagem de macrÃfagos infectados em lamÃnulas coradas), concentraÃÃo de Ãxido nÃtrico (NO) e o padrÃo da citocinas TNF-&#945;, IL-12, IL-4, IL-10 e TGF-&#946; nos sobrenadantes das culturas. Os resultados mostraram que os tratamentos com CXCL10 e a associaÃÃo CXCL10+Glucantime resultaram em uma significante reduÃÃo da carga parasitÃria, variando entre 70,5% a 95% e 92,4% a 95,0%, respectivamente, quando comparado com o controle nÃo tratado, enquanto o tratamento com Glucantime apresentou reduÃÃo da infecÃÃo dos macrÃfagos de 74,0%. A reduÃÃo da carga parasitÃria foi correlacionada com o aumento de NO em todas as concentraÃÃes de CXCL10 (p< 0,001). No entanto, nÃo foi observada a mesma dinÃmica quando utilizado a associaÃÃo CXCL10+Glucantime. Os nÃveis de TNF-&#945; e IL-12 aumentaram em funÃÃo da concentraÃÃo de CXCL10 nas primeiras 24h, no entanto, foi inibida quando os macrÃfagos parasitados foram tratados com Glucantime (p<0,05). A concentraÃÃo de TNF-&#945; foi menor nas cÃlulas tratadas com CXCL10 + Glucantime do que naquelas tratadas somente com CXCL10 em ambos os tempos avaliados. Para IL-12 a assosciaÃÃo CXCL10+Glucantime sà induziu uma produÃÃo significante nas primeiras 24 h quando CXCL10 foi utilizado na concentraÃÃo de 100ng/ml (p<0,01). As cÃlulas tratadas com CXCL10 e associaÃÃo CXCL10+Glucantime apresentaram uma reduÃÃo da concentraÃÃo de IL-4, diminuindo à medida que as concentraÃÃes da quimiocina foram maiores (p<0,01), enquanto o tratamento com Glucantime apresentou uma elevada produÃÃo desta citocina. Em ambos os tempos avaliados, o tratamento com CXCL10 induziu a produÃÃo de IL-10 nas concentraÃÃes de 50ng/mL e 100ng/mL, uma induÃÃo 3 vezes mais de IL-10 (p<0,001), quando comparado ao antimÃnio ou com a associaÃÃo CXCL10+Glucantime. TGF-&#946; mostrou comportamento diferente nos dois tempos avaliados, com aumento nas primeiras horas e queda nas Ãltimas 48h. Glucantime induziu concentraÃÃo de TGF-&#946; superior Ãquela induzida por CXCL10. A associaÃÃo CXCL10+ Glucantime apresentou produÃÃo elevada de TGF-&#946; inversa à concentraÃÃo de CXCL10 utilizada. Em conclusÃo, o tratamento in vitro com CXCL10 induziu um perfil de resposta Th1 (aumento de TNF-&#945; e IL-12), com controle da parasitemia intracelular, e modulaÃÃo da resposta inflamatÃria mediada por IL-10, em macrÃfagos infectados por L. braziliensis refratÃria ao antimÃnio. A associaÃÃo Glucantime+CXCL10, embora tenha reduzido carga parasitÃria, nÃo induzindo aumento significante de Ãxido nÃtrico, mostrando uma induÃÃo de TNF-&#945;, IL-12 e reduzindo IL-4.

Fino dagli albori della metodica scientifica, l’osservazione e la vista hanno giocato un ruolo fondamentale. La patologia è una scienza visiva, dove le forme, i colori, le interfacce e le architetture di organi, tessuti, cellule e componenti cellulari guidano l’occhio del patologo e ne indirizzano la scelta diagnostico-classificativa. L’osservazione del preparato istologico in microscopia ottica si attua mediante l’esame e la caratterizzazione di anomalie ad ingrandimenti progressivamente crescenti, a diverse scale spaziali, che partono dalla valutazione dell’assetto architettonico sovracellulare, per poi spostarsi ad investigare e descrivere le cellule e le peculiarità citomorfologiche delle stesse. A differenza di altri esami di laboratorio che sono pienamente quantificabili, l’analisi istologica è intrinsecamente soggettiva, e quindi incline ad un alto grado di variabilità nei risultati prodotti da differenti patologi. L’analisi d’immagine, l’estrazione da un’immagine digitale di contenuti utili, rappresenta una metodica oggettiva, valida e robusta ormai largamente impiegata a completamento del lavoro del patologo. Si sottolinea come l’analisi d’immagine possa essere vista come fase descrittiva quantitativa di preparati macroscopici e microscopici che poi viene seguita da una interpretazione. Nuovamente si sottolinea come questi descrittori siano oggettivi, ripetibili e riproducibili, e non soggetti a bassa concordanza inter operatore. La presente tesi si snoda attraverso un percorso concettuale orientato ad applicazioni di analisi d’immagine e patologia quantitativa che parte dalle applicazioni più elementari (densità, misure lineari), per arrivare a nozioni più avanzate, quali lo studio di complessità delle forme mediante l’analisi frattale e la quantificazione del pattern spaziale di strutture sovracellulari. / Until the dawn of the scientific method, observation was pivotal. Pathology is a visual science, where the forms, colors, interfaces and architectures of organs, tissues, cells and cell components direct the diagnosis. The observation of the histological preparation in optical microscopy is implemented through the examination and characterization of anomalies at progressively higher magnifications, at different spatial scales, which start from the evaluation of sovracellular architecture, then move to investigate and describe the cells and cytological fetures. In contrast to other laboratory tests that are quantitative, histological analysis is inherently subjective, and therefore prone to a high degree of variability in the results produced by different pathologists. The image analysis, extraction from a digital image of meaningful content, is an objective and robust method, now widely used to aid the pathologist. Should be stressed that image analysis can be seen as a quantitative descriptor of macroscopic and microscopic specimens, followed by an interpretation (the diagnosis). This thesis unfolds through different applications of image analysis and quantitative pathology that starts with the most basic applications (density, linear measurements), to get to more advanced concepts, such as the study of the complexity of shapes by the ' fractal analysis and quantification of the spatial patterns of sovracellular structures.

La perdita della comunicazione cellulare può portare ad una crescita deregolata e dunque alla trasformazione neoplastica. Gli scopi dello studio di dottorato sono stati di individuare il rapporto funzionale di alcuni fattori di crescita (FC) e dei loro recettori (RTC) in tipi di neoplasie e displasie degli animali domestici, quali: 1. Amplificazione del proto-oncogene ERBB2 e sovra-espressione del RTC erb-b2. in tumori mammari della gatta. 2. Espressione di erb-b2, di recettori ormonali, di citocheratine luminali, basali e marcatori mioepiteliali in carcinomi mammari a cellule chiare del cane. 3. Proliferazione microvascolare ed espressione di FC dell’angiogenesi e RTC (PDGF, VEGF, PDGFR-alfa e PDGFR-beta) in tumori dei plessi coroidei del cane. 4. Ruolo di FGF-2 in relazione a proteine strutturali e del ciclo cellulare nella differenziazione della cartilagine di accrescimento in vitelli con condrodisplasia di Ellis van Creveld. Nei tumori mammari felini il gene HER2 era amplificato e la proteina erbB2 era sovraespressa in un sottogruppo di tumori. L’ibridazione in situ a fluorescenza è il metodo ottimale per identificare l’amplificazione genica e per riscontrare falsi positivi e negativi ottenuti con l’immunoistochimica. Il carcinoma mammario glycogen-rich può essere considerato uno nuovo sottotipo istologico di tumore mammario del cane, PAS positivo, dPAS labile, con un fenotipo triplo negativo, dunque erbB2 negativo. I carcinoma dei plessi coroidei correlavano significativamente con l’indice Ki67 e la proliferazione microvascolare glomeruloide. I corpi glomeruloidi possono essere utilizzati come marcatori istologici di malignità e il PDGFR-beta risulta coinvolto nella loro formazione. La prematura degradazione del collagene II, una perdita di collagene X, unitamente ad una perdita di FGF2, suggeriscono che la sindrome EvC bovina è un disordine di differenziazione condrocitaria, caratterizzata da una differenziazione accelerata ed un’ipertrofia prematura. L’identificazione di alterazioni patologiche dei FC e dei RTC possono indirizzare scelte terapeutiche mirate nelle displasie e nelle neoplasie animali. / The loss of cells communication can lead to a deregulated growth and therefore to the neoplastic transformation. The aims of the phD study were to identify the relationship of growth factors (GF) and their tyrosine Kinase receptors (TKR) in types of neoplasia and dysplasia of domestic animals, as: 1. Amplification of the ERBB2 proto-oncogene and over-expression of the TKR erbB2 in feline mammary carcinoma. 2. Expression of erbB2, hormonal receptors, luminal, basal and myoepithelial markers in canine mammary clear cell carcinoma. 3. Microvascular proliferation and expression of angiogenic growth factors and their TKR (PDGF, VEGF, PDGFR-alpha and PDGFR-beta) in the canine choroid plexus tumors. 4. Role of Fibroblast Growth Factor-2 in relation to the structural and cell cycle proteins and the differentiation of the growth plate in calves with chondrodysplasia of Ellis van Creveld. In feline mammary carcinoma the HER2 gene was amplified and erbB2 protein was overexpressed in a subset of tumors. Fluorescence In situ hybridization is the method to identify the gene amplification and to detect false negatives and false positives obtained with immunohistochemistry. The glycogen-rich carcinoma can be considered a new histological subtype of canine mammary tumor, PAS positive, dPAS labile, expressing a triple-negative phenotype, therefore resulting erbB2 negative. Choroid plexus carcinomas significantly correlates with the Ki67 proliferation index and with the glomeruloid microvascular proliferation. Glomeruloid bodies may be used as a marker of malignancy in the canine choroid plexus tumors and PDGFR-beta is involved in their formation. The premature degradation of collagen II, a loss of the collagen X, together with a loss of FGF2, suggest that the bovine EvC syndrome is a disorder of chondrocyte differentiation, characterized by an accelerated and premature differentiation. Identification of the GF and TKR changes may direct targeted therapeutic choices in dysplasia and neoplasia of domestic animals.

Lo studio è stato condotto su pazienti affetti da carcinoma nasale trattati con radioterapia presso il Centro Oncologico Veterinario (Sasso Marconi, BO). Lo studio, prospettico, randomizzato e in doppio cieco, ha valutato l’efficacia del trattamento radioterapico in combinazione o meno con firocoxib, un inibitore selettivo dell’enzima ciclossigenasi 2 (COX-2). Sono stati inclusi pazienti con diagnosi istologica di carcinoma nasale sottoposti a stadiazione completa. I pazienti sono stati successivamente suddivisi in due gruppi in base alla tipologia di trattamento: radioterapia associata a firocoxib (Gruppo 1) o solo radioterapia (Gruppo 2). Dopo il trattamento, i pazienti sono stati monitorati a intervalli di 3 mesi sia clinicamente che mediante esami collaterali, al fine di valutare condizioni generali del paziente, un’eventuale tossicità dovuta alla somministrazione di firocoxib e la risposta oggettiva al trattamento. Per valutare la qualità di vita dei pazienti durante la terapia, è stato richiesto ai proprietari la compilazione mensile di un questionario. La mediana del tempo libero da progressione (PFI) è stata di 228 giorni (range 73-525) nel gruppo dei pazienti trattati con radioterapia e firocoxib e di 234 giorni (range 50-475) nei pazienti trattati solo con radioterapia. La sopravvivenza mediana (OS) nel Gruppo 1 è stata di 335 giorni (range 74-620) e di 244 giorni (range 85-505) nel Gruppo 2. Non si sono riscontrate differenze significative di PFI e OS tra i due gruppi. La presenza di metastasi ai linfonodi regionali condizionava negativamente PFI e sopravvivenza (P = 0.004). I pazienti trattati con firocoxib hanno mostrato un significativo beneficio in termini di qualità di vita rispetto ai pazienti trattati con sola radioterapia (P=0.008). La radioterapia può essere considerata un’efficace opzione terapeutica per i cani affetti da neoplasie nasali. Firocoxib non sembra migliorare significativamente i tempi di sopravvivenza, ma risulta utile al fine di garantire una migliore qualità di vita. / Carcinomas represent two-thirds of canine nasosinal neoplasms. Although radiation therapy (RT) is the standard of care, the incidence of local recurrence following treatment is high. Cyclooxygenase-isoform-2 (COX-2) is expressed in 71-95% of canine nasal carcinomas and has been implicated in tumor growth and angiogenesis. Accordingly, COX-2 inhibition seems rational to improve outcome. Dogs with histologically confirmed, previously untreated nasal carcinomas were randomized to receive the combination of a selective COX-2 inhibitor (firocoxib) and palliative RT (Group 1) or RT and placebo (Group 2). Patients were regularly monitored with blood tests, urinalysis, and computed tomography. Pet owners were asked to complete monthly a quality-of-life questionnaire. Twenty-four dogs were prospectively enrolled. According to Adams modified system, there were five stage 1, five stage 2, three stage 3, and 11 stage 4 tumors. Two dogs had metastases to regional lymph nodes. Median progression-free interval and overall survival were 228 and 335 days in Group 1 (n = 12) and 234 and 244 days in Group 2 (n = 12). These differences were not statistically significant. The involvement of regional lymph nodes was significantly associated with progression-free interval and overall survival (P = 0.004). Quality of life was significantly improved in Group 1 (P = 0.008). In particular, a significant difference was observed for activity and appetite. Although not providing a significant enhancement of progression-free interval and overall survival, firocoxib in combination with RT is safe and improved life quality in dogs with nasal carcinomas.

Il contributo di ricerca di questo lavoro è consistito nel rivalutare da un punto di vista diagnostico, classificativo e statistico, una casistica di neoplasie del gatto archiviate in 23 anni (1984-2006). Nei primi 20 anni sono state diagnosticate 1696 neoplasie su un totale di 3682 campioni prevenuti nello stesso periodo, con una prevalenza delle patologie di tipo neoplastico del 46,06%. Nei tre anni successivi sono state individuate 382 neoplasie su un totale di 601 campioni archiviati, con una prevalenza del 61,02%. Le neoplasie avevano per l'81,8% un comportamento maligno, e questo dato risulta coerente con il dato più recente sulla malignità (85,6%) e con quello fornito da altri autori. L'età dei soggetti affetti era simile nei due studi, compresa fra pochi mesi e 22 anni, con il maggior numero di casi fra 9 e 13 anni. Le due casistiche presentano inoltre dati simili riguardo gli organi coinvolti anche se i tumori della mammella sono notevolmente diminuiti negli ultimi anni, con un aumento corrispondente di neoplasie cutanee. I fibrosarcomi, che hanno subito un drastico aumento tra il 1993 e il 1994 si sono mantenuti costanti in tutti gli anni successivi, dato ancora oggi quasi certamente correlabile alle pratiche vaccinali. I linfomi sono risultati piuttosto infrequenti in entrambe le casistiche, comparate con i dati della letteratura in cui vengono riportate percentuali nettamente maggiori. I tumori del cavo orale e dell'intestino hanno mantenuto circa le stesse percentuali di insorgenza nel corso degli anni. Tra i tumori presenti in questo studio, sono stati approfonditi i tumori a carico delle sierose (mesoteliomi) e del polmone attraverso metodiche immunoistochimiche e ultrastrutturali. Nei 23 anni sono stati diagnosticati 10 casi di mesotelioma, di cui 8 coinvolgenti la pleura e due il peritoneo. Su questi casi è stata applicata una metodica immunoistochimica con un pannello anticorpale utilizzato di routine in patologia umana per la diagnosi di mesotelioma e per la diagnosi differenziale con i carcinomi polmonari. Tutti i casi presentavano una doppia positività per vimentina e citocheratine ad ampio spettro; anticorpi specifici come CK5/6 e HBME-1 hanno presentato una buona specificità. Anche la microscopia elettronica si è rivelata di ausilio, mettendo in evidenza la presenza di tonofilamenti citoplasmatici e di microvilli, tipici delle cellule mesoteliali. Le neoplasie polmonari, analogamente a quelle umane hanno, sono notevolmente aumentate negli ultimi anni. Dei 24 casi raccolti tra il materiale di archivio, 14 sono stati diagnosticati negli ultimi 5 anni. Si è rilevata una significativa predisposizione nei gatti di razza Persiana, e le metastasi più frequenti sono state a carico dei linfonodi, del miocardio e dei cuscinetti plantari, analogamente a quanto segnalato in letteratura. L’istotipo più rappresentato è stato il carcinoma squamoso, seguito da adenocarcinomi papillari e bronchioloalveolari. Il pannello immunoistochimico applicato, finalizzato a individuare l’origine broncogena o ghiandolare della neoplasia, è risultato utile per la diagnosi delle forme squamose poco differenziate (CK 5/6 e CK 14). Infine è stato testato l’anticorpo di elezione nella diagnosi differenziale fra le neoplasie primitive e secondarie del polmone, il TTF-1, che però non ha cross-reagito con tessuti di gatto; la diagnosi di neoplasia primitiva polmonare si è dunque basata sull’assenza, anche nei dati anamnestici, di masse in altri distretti corporei.

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Sebbene il sistema nervoso enterico (“enteric nervous system”, ENS) svolga un ruolo cruciale nella patogenesi della Scrapie ovina, non esistono tuttavia in letteratura dati sulle popolazioni cellulari progressivamente coinvolte nel corso dell’infezione, né sugli eventuali danni morfo-funzionali da esse subiti. Il presente studio è stato condotto sui plessi mienterici e sottomucosi dell’ileo di 46 pecore di razza Sarda, recanti diversi polimorfismi del gene Prnp (ARQ/ARQ, ARQ/AHQ, ARQ/ARR, ARR/ARR). I suddetti animali, infettati per os all’età di 8 mesi con un ceppo di Scrapie precedentemente caratterizzato nel topo, sono stati sacrificati mediante eutanasia a determinati intervalli di tempo post-infezione (p.i.). E’ stata quindi valutata, tramite immunoistochimica ed immunofluorescenza indiretta su sezioni tissutali e su preparati “wholemount”, l’immunoreattività (IR) nei confronti della PrPSc, del “marker” panneuronale Hu C/D, dell’ossido-nitrico sintetasi (nNOS), della calbindina (CALB) e della proteina fibrillare acida gliale (GFAP). In 8 pecore con genotipo ARQ/ARQ, clinicamente sane e sacrificate a 12-24 mesi p.i., nonché in 5 ovini clinicamente affetti (2 con genotipo ARQ/ARQ, 3 con genotipo ARQ/AHQ), questi ultimi sacrificati rispettivamente a 24, 36 e 40 mesi p.i., le indagini immunoistochimiche hanno consentito di dimostrare la presenza di PrPSc a livello sia dell’encefalo (obex), sia dell’ENS, in particolar modo nei plessi mienterici. In tali distretti il deposito della PrPSc risultava pienamente compatibile con un interessamento delle cellule enterogliali (“enteroglial cells”, EGCs), mentre occasionalmente si notava un contestuale coinvolgimento della componente neuronale ivi residente. In conclusione, i dati della presente indagine consentono di ipotizzare un verosimile coinvolgimento delle EGCs e dei neuroni residenti a livello dei plessi dell’ENS nella patogenesi della Scrapie sperimentale realizzata per os in ovini di razza Sarda. / The enteric nervous system (ENS) is believed to play a key role in the pathogenesis of sheep Scrapie infection, although no information exists on the ENS cytotypes which are progressively involved, nor on the morpho-functional damage of such cells in the time course of infection. We investigated the ileal myenteric (MPs) and submucosal plexuses (SMPs) of 46 Sarda breed sheep carrying different PrP genotypes (ARQ/ARQ, ARQ/AHQ, ARQ/ARR, ARR/ARR), which had been orally dosed with Scrapie at 8 months of age and euthanized at definite time intervals post-infection (p.i.). PrPSc immunoreactivity (IR), along with pan-neuronal marker Hu C/D, nitric oxide synthase (nNOS), calbindin (CALB) and glial fibrillary acidic protein (GFAP)-IR, were evaluated by means of immunohistochemistry (IHC) and indirect immunofluorescence (IF) on paraffin-embedded sections and wholemount preparations. Eight clinically-healthy ARQ/ARQ sheep euthanized at 12-24 months p.i., along with 2 ARQ/ARQ (euthanized at 24 months p.i.) and 3 ARQ/AHQ (euthanized at 36 and 40 months p.i., respectively) clinicallyaffected sheep, showed IHC evidence of PrPSc in both their brain (obex) and ENS, especially in MPs. PrPSc deposition was fully compatible with an involvement of enteroglial cells (EGCs) and, occasionally, also with an involvement of neurons residing within ileal ENS plexuses. In conclusion, EGCs and neurons residing within ileal ENS plexuses may be likely involved in the pathogenesis of oral experimental Scrapie infection in Sarda breed sheep.