Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-24Bitstream added on 2014-06-13T18:06:52Z : No. of bitstreams: 1 santin_f_dr_botfmvz.pdf: 551149 bytes, checksum: b34b03ff0a4875c493c473ffa461cac1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A angiotensina II (ANGII) é um vasoconstritor, no entanto, sua atuação na inflamação tem sido estudada. A ANGII pode regular a expressão celular de citocinas e moléculas envolvidas no processo de apoptose. Objetivos: verificar o estímulo da ciclooxigenase-2, a indução de apoptose, a influência do TNF-α e pressão arterial na lesão renal por ANGII. Foram utilizados ratos Wistar, nos grupos: Grupo 1: controle, Grupo 2: ANG II, Grupo 3: ANG II + infliximabe, Grupo 4: ANG II + celecoxibe, Grupo 5: infliximabe e Grupo 6: celecoxibe. A ANGII foi administrada via mini-bomba no subcutâneo dos animais durante 72 horas, sendo então realizada a eutanásia. A pressão arterial foi aferida antes da administração dos fármacos e na eutanásia. Os rins dos animais foram colhidos para histopatologia e imunoistoquímica, avaliando-se a expressão de COX-2 e presença de caspase-3 ativa. O sangue dos animais foi colhido para dosagem de TNF-α. Concluiu-se que a ANGII promove lesões renais, independentemente dos valores da pressão arterial; ANGII associada ao celecoxibe, leva ao aumento da pressão arterial. O celecoxibe e o infliximabe não protegeram os rins contra as ações da angiotensina II. O Infliximabe causa lesões no interstício renal, e a ANGII não promove a apoptose da células renais. / The angiotensin II (ANGII) is a vasoconstrictor, however, her action in inflammation have been studied recently. The ANGII can regulate the cellular expression of cytokines and molecules involved in apoptosis. Objectives: to verify the stimulation of cyclooxigenase-2, the presence of apoptosis, the influence of TNF-α and blood pressure in renal damage by ANGII. Wistar rats were used in the following groups: Group 1: control, Group 2: ANGII, Group 3: ANGII + infliximib, Group 4: ANGII + celecoxib, Group 5: infliximab and Group 6: celecoxib. The ANGII was infused in the animals by subcutaneous osmotic mini-pumps during 72 hours. After that, euthanasia was performed. The blood pressure was recorded before drugs administration and before the euthanasia. Histopathological and immunohistochemistry were performed in kidneys to evaluate the expression of COX-2 and the expression of active caspase-3. TNF-α concentration was determined in the blood of the animals. It was concluded that the ANGII caused renal damage, independently of blood pressure values. ANGII associated with celeboxib created a blood pressure increasing. Celecoxib and infliximab did not protect the kidneys against ANGII activities. Infliximab caused renal intersticium damage and ANGII did not caused apoptosis in kidney cells.

Resumo: A angiotensina II (ANGII) é um vasoconstritor, no entanto, sua atuação na inflamação tem sido estudada. A ANGII pode regular a expressão celular de citocinas e moléculas envolvidas no processo de apoptose. Objetivos: verificar o estímulo da ciclooxigenase-2, a indução de apoptose, a influência do TNF-α e pressão arterial na lesão renal por ANGII. Foram utilizados ratos Wistar, nos grupos: Grupo 1: controle, Grupo 2: ANG II, Grupo 3: ANG II + infliximabe, Grupo 4: ANG II + celecoxibe, Grupo 5: infliximabe e Grupo 6: celecoxibe. A ANGII foi administrada via mini-bomba no subcutâneo dos animais durante 72 horas, sendo então realizada a eutanásia. A pressão arterial foi aferida antes da administração dos fármacos e na eutanásia. Os rins dos animais foram colhidos para histopatologia e imunoistoquímica, avaliando-se a expressão de COX-2 e presença de caspase-3 ativa. O sangue dos animais foi colhido para dosagem de TNF-α. Concluiu-se que a ANGII promove lesões renais, independentemente dos valores da pressão arterial; ANGII associada ao celecoxibe, leva ao aumento da pressão arterial. O celecoxibe e o infliximabe não protegeram os rins contra as ações da angiotensina II. O Infliximabe causa lesões no interstício renal, e a ANGII não promove a apoptose da células renais. / Abstract: The angiotensin II (ANGII) is a vasoconstrictor, however, her action in inflammation have been studied recently. The ANGII can regulate the cellular expression of cytokines and molecules involved in apoptosis. Objectives: to verify the stimulation of cyclooxigenase-2, the presence of apoptosis, the influence of TNF-α and blood pressure in renal damage by ANGII. Wistar rats were used in the following groups: Group 1: control, Group 2: ANGII, Group 3: ANGII + infliximib, Group 4: ANGII + celecoxib, Group 5: infliximab and Group 6: celecoxib. The ANGII was infused in the animals by subcutaneous osmotic mini-pumps during 72 hours. After that, euthanasia was performed. The blood pressure was recorded before drugs administration and before the euthanasia. Histopathological and immunohistochemistry were performed in kidneys to evaluate the expression of COX-2 and the expression of active caspase-3. TNF-α concentration was determined in the blood of the animals. It was concluded that the ANGII caused renal damage, independently of blood pressure values. ANGII associated with celeboxib created a blood pressure increasing. Celecoxib and infliximab did not protect the kidneys against ANGII activities. Infliximab caused renal intersticium damage and ANGII did not caused apoptosis in kidney cells. / Orientador: Denise Saretta Schwartz / Coorientador: Luis Cuadrado Martin / Banca: Alexandra Melchert / Banca: Silvia Franco Andrade / Banca: Michiko Sakate / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-25Bitstream added on 2014-06-13T18:44:23Z : No. of bitstreams: 1 coelho_wmd_dr_jabo.pdf: 4287442 bytes, checksum: 7091394609cf026e1187fcfeac0e61e9 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A criptosporidiose é uma doença entérica grave, economicamente significante, caracterizada principalmente por desordens intestinais, podendo ocasionar manifestações clínicas variadas e eventual mortalidade, principalmente em animais jovens. Este estudo objetivou detectar molecularmente genótipos e subgenótipos de Cryptosporidium spp. em fezes de cabritos provenientes dos Estados de Goiás, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais e São Paulo, Brasil. Amostras fecais foram colhidas diretamente do reto de 192 cabritos de diferentes raças, machos e fêmeas, com até doze meses de idade. Adicionalmente, foram analisadas amostras fecais de ovinos, bovinos, suínos e eqüinos jovens. A eliminação de oocistos de Cryptosporidium spp. foi observada por meio das técnicas de Sheather e Kinyoun, seguindo-se a micrometragem dos oocistos com ocular de campo amplo micrométrica 10x (Bioval®) em aumento microscópico de 400 e 1000x. A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi realizada para amplificação dos fragmentos dos genes da subunidade 18S do rRNA e da glicoproteína GP60. Presença de oocistos de Cryptosporidium spp. foram observados pela análise microscópica em 11,45% (22/192) das amostras analisadas. Amplificação gênica positiva para Cryptosporidium foi demonstrada em 16,66% (32/192) destas amostras. Com o sequenciamento dos produtos da PCR do gene 18S rRNA, todas as amostras foram identificadas como Cryptosporidium parvum. Por meio da subgenotipagem com o sequenciamento do gene GP60, foi encontrado exclusivamente o subgenótipo de C. parvum IIaA15G2R1. Através dos resultados obtidos, pode-se inferir que a infecção por C. parvum está presente em rebanhos caprinos de diferentes Estados brasileiros podendo, esta espécie animal, atuar como uma importante fonte de infecção do subtipo zoonótico de Cryptosporidium para outras espécies animais, em especial para o ser humano / Cryptosporidiosis is a serious enteric disease, economically significant, mainly characterized by intestinal disorders, may cause various clinical manifestations and eventual mortality, especially in young animals. This study aimed to detect and molecularly genotypes and subgenotypes of Cryptosporidium spp. in feces of goat kids from the states of Goiás, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais and São Paulo, Brazil. Fecal samples were collected directly from the rectum of 192 goat kids of different breeds, males and females, with up to twelve months old. Additionally, were analyzed fecal samples from cattle, sheep, pigs and young horses. The elimination of oocysts of Cryptosporidium spp. was observed using the Sheather and Kinyoun techniques, followed by micrometric analysis with ocular micrometer wide-field 10x (Bioval ®) in increase from 400 and 1000x. The polymerase chain reaction (PCR) was performed to amplify fragments of genes of the subunit 18S rRNA and glycoprotein GP60. Presence of Cryptosporidium spp. was observed by microscopic examination in 11.45% (22/192) of the samples. Gene amplification for Cryptosporidium was demonstrated in 16.66% (32/192) of these samples. With the sequencing of the PCR products of 18S rRNA gene, all samples were identified as Cryptosporidium parvum. Through of subgenotyping with sequencing of GP60 gene was found exclusively the subtype of C. parvum IIaA15G2R1. By the results obtained, it can be inferred that infection with C. parvum is present in goat kids in different brazilian states may, this animal species act as an important source of infection with zoonotic subtype of Cryptosporidium to other animal species, especially for humans

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Coorientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Luiz Eduardo Corrêa Fonseca / Banca: Adjair Antonio do Nascimento / Banca: Jancarlo Ferreira Gomes / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Resumo: A criptosporidiose é uma doença entérica grave, economicamente significante, caracterizada principalmente por desordens intestinais, podendo ocasionar manifestações clínicas variadas e eventual mortalidade, principalmente em animais jovens. Este estudo objetivou detectar molecularmente genótipos e subgenótipos de Cryptosporidium spp. em fezes de cabritos provenientes dos Estados de Goiás, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais e São Paulo, Brasil. Amostras fecais foram colhidas diretamente do reto de 192 cabritos de diferentes raças, machos e fêmeas, com até doze meses de idade. Adicionalmente, foram analisadas amostras fecais de ovinos, bovinos, suínos e eqüinos jovens. A eliminação de oocistos de Cryptosporidium spp. foi observada por meio das técnicas de Sheather e Kinyoun, seguindo-se a micrometragem dos oocistos com ocular de campo amplo micrométrica 10x (Bioval®) em aumento microscópico de 400 e 1000x. A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi realizada para amplificação dos fragmentos dos genes da subunidade 18S do rRNA e da glicoproteína GP60. Presença de oocistos de Cryptosporidium spp. foram observados pela análise microscópica em 11,45% (22/192) das amostras analisadas. Amplificação gênica positiva para Cryptosporidium foi demonstrada em 16,66% (32/192) destas amostras. Com o sequenciamento dos produtos da PCR do gene 18S rRNA, todas as amostras foram identificadas como Cryptosporidium parvum. Por meio da subgenotipagem com o sequenciamento do gene GP60, foi encontrado exclusivamente o subgenótipo de C. parvum IIaA15G2R1. Através dos resultados obtidos, pode-se inferir que a infecção por C. parvum está presente em rebanhos caprinos de diferentes Estados brasileiros podendo, esta espécie animal, atuar como uma importante fonte de infecção do subtipo zoonótico de Cryptosporidium para outras espécies animais, em especial para o ser humano / Abstract: Cryptosporidiosis is a serious enteric disease, economically significant, mainly characterized by intestinal disorders, may cause various clinical manifestations and eventual mortality, especially in young animals. This study aimed to detect and molecularly genotypes and subgenotypes of Cryptosporidium spp. in feces of goat kids from the states of Goiás, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais and São Paulo, Brazil. Fecal samples were collected directly from the rectum of 192 goat kids of different breeds, males and females, with up to twelve months old. Additionally, were analyzed fecal samples from cattle, sheep, pigs and young horses. The elimination of oocysts of Cryptosporidium spp. was observed using the Sheather and Kinyoun techniques, followed by micrometric analysis with ocular micrometer wide-field 10x (Bioval ®) in increase from 400 and 1000x. The polymerase chain reaction (PCR) was performed to amplify fragments of genes of the subunit 18S rRNA and glycoprotein GP60. Presence of Cryptosporidium spp. was observed by microscopic examination in 11.45% (22/192) of the samples. Gene amplification for Cryptosporidium was demonstrated in 16.66% (32/192) of these samples. With the sequencing of the PCR products of 18S rRNA gene, all samples were identified as Cryptosporidium parvum. Through of subgenotyping with sequencing of GP60 gene was found exclusively the subtype of C. parvum IIaA15G2R1. By the results obtained, it can be inferred that infection with C. parvum is present in goat kids in different brazilian states may, this animal species act as an important source of infection with zoonotic subtype of Cryptosporidium to other animal species, especially for humans / Doutor

Orientador: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira / Banca: Fernanda C. L. Alvarenga / Banca: José Buratini Junior / Resumo: No quimerismo por agregação, células de embriões oriundos de fertilizações distintas se distribuem, aleatoriamente, para formar um único indivíduo. Entretanto, a formação de embriões tetraploides (4n), por eletrofusão, e o posterior quimerismo com um embrião diploide (2n) deve resultar em um embrião quimérico, porém com massa celular interna (MCI) não aleatória, isto é, exclusivamente 2n. Desta forma, a agregação de um embrião zebuíno (4n, genótipo termorresistente) com um taurino (2n, genótipo termossensível) resultaria em uma MCI exclusivamente ―taurina‖, porém com o trofectoderma (futuro elemento extraembrionário, isto é, o córion) de maior composição zebuína, podendo constituir um modelo para estudos de adaptação - durante a gestação - deste embrião/feto em clima tropical. O objetivo do presente trabalho foi padronizar a produção de embriões 4n da raça Nelore (Bos indicus) bem como o quimerismo por agregação com embriões mestiço Bos taurus (2n) com Bos indicus (4n). Oócitos de vacas Nelore provenientes de abatedouro foram maturados, fertilizados com sêmen de touros Nelore ou Holandês Preto e Branco e cultivados em meio SOF. Embriões da raça Nelore, em estágio de 2 células (30 h pós-inseminação, hpi) e com o eixo interblastômeros bem definido, foram selecionados para o procedimento de eletrofusão (equipamento ECM 830-BTX, Harvard Apparatus) com o intuito de produzir embriões tetraploides. Para este procedimento, foram testados alguns parâmetros, de acordo com o número de pulsos (1 ou 2), voltagem (0,40; 0,50; 0,75; 1,0; 1,4; 5,0 kV/cm) e duração do eletrochoque (20; 25; 50; 60 μs). Embriões zebuínos 4n, formados após a eletrofusão, e embriões mestiços taurinos 2n, ambos em estágio de 8 a 16 células (72 hpi), foram submetidos a tratamentos com protease... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The embryonic chimeras production by aggregation allows embryonic cells from two distinct fertilizations to be randomly distributed to compose a single individual. However, the formation of tetraploid embryo (4n) by electrofusion and its subsequent chimerism with a diploid embryo (2n) should result in a chimeric conceptus, whose inner cell mass (ICM) would be entirely 2n. Hence, the aggregation of a zebu embryo (4n, thermotolerant) with a European breed embryo (2n, thermosensitive or ―taurine‖) would result in an exclusively taurine ICM, but the trophectoderm (future extraembryonic components, i.e. chorion) would be mostly from zebu embryo, which could support taurine embryo/fetus in a different way - during pregnancy - under tropical environment. The aim of this study was to standardize the production of 4n Nelore embryos (Bos indicus) and the production of embryonic chimeras by aggregation of crossbred Bos taurus (2n) with Bos indicus (4n) embryos. Nelore cows ovaries were collected from abattoir and oocytes were obtained, matured, fertilized with semen from Nelore or Holstein bulls, and cultured in SOF (synthetic oviduct fluid). Two-cell stage Nelore embryos (30 hours post insemination or hpi), with a clearly visible interblastomeric axis, were selected for electrofusion procedure (ECM 830-BTX, Harvard Apparatus) to produce tetraploid embryos. For this purpose, some parameters were tested according to the number of pulses (1 or 2), voltage (40, 50, 75, 100, 140, 500 V) and time length of electroshock (20, 25, 50, 60 μs). Nelore tetraploid embryos produced after electrofusion and diploid crossbred taurine embryos, both on 8 to 16-cells stage (72 hpi) were subjected to protease treatment to remove the zona pellucida, and subsequently treated with the agglutinant agent... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-08Bitstream added on 2015-05-14T16:59:06Z : No. of bitstreams: 1 000825515.pdf: 1397732 bytes, checksum: 7e29c0069beb8a8f904238c78ceaef94 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

A proteína p53é freqüentemente relacionada às neoplasias humanas e animais, estando indiretamente relacionada com o bloqueio do ciclo celular, angiogênese e indução à apoptose. O objetivo deste trabalho foi analisar a presença de alterações no gene TP53, assim como a expressão dos genes relacionados ao câncer em neoplasias caninas.Tumores caninos (n=50) foram avaliados através de análise histopatológica, perfis de SSCP dos exons 5, 6 e 7 e seqüenciamento da região intron5-exon7. Parte destes tumores (45 amostras) foram analisados quanto à expressão dos genes TP53, p21, MDM2, Bax, Bcl2, IGF-BP3, VEGF e bFGF através de qRT-PCR. Os resultados mostraram que as neoplasias mamárias, particularmente túbulo-papilares complexas, são as mais comuns em cães. A ocorrência de neoplasias em cães está relacionada com a idade e a raça. Alta prevalência de alterações nos perfis de SSCP foi constatada em tumores caninos. Entretanto, esta técnica, preconizada como eficiente por diversos autores apresenta análise e interpretação complexa e subjetiva, não apresentando relação com os dados de seqüenciamento no presente trabalho. Parte dos tumores (42%) apresentaram alterações nos exons 6 e/ou 7 do gene TP53, e apesar de se encontrarem em heterozigose, podem comprometer funcionalmente a proteína p53. A única alteração em homozigose foi detectada num osteossarcoma de mama e correspondeu a uma transição GA no códon 270 (arghis) conhecido como hotspot situado no domínio de ligação da proteína p53 ao DNA. As alterações observadas nas sequências nos introns 5 e 6 do gene TP53 não se encontram em sítios envolvidos no processamento do RNA. Ampla variação na expressão relativa dos genes TP53, Bax, p21, MDM2, Bcl2, IGF-BP3 e bFGF foi constatada em tumores mamários e de pele. Entretanto, não foi possível estabelecer relações entre expressão e alterações no gene TP53, ou entre a expressão dos genes em estudo entre si. O gene IGFBP3foi hiper ou hipo expresso em 60% dos tumores de pele, mas não apresentou alteração em tumores de mama. Por outro lado, 82,9% dos tumores mamários apresentaram hiper expressão do gene Bax, enquanto não foi observada alteração na expressão deste gene em tumores de pele. Apesar de serem considerados indicadores de prognóstico, de um modo geral não foi constatada correlação entre o nível de expressão dos genes TP53, Bax, p21, MDM2, Bcl2, IGF-BP3e bFGF e o grau histopatológico. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-07-17T16:49:03Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Guilherme Thomazi.pdf: 2020976 bytes, checksum: 98e8bd3f32246c587da8b05e0df7a2fa (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-17T16:49:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Guilherme Thomazi.pdf: 2020976 bytes, checksum: 98e8bd3f32246c587da8b05e0df7a2fa (MD5) / The p53 protein is frequently associated with human and animal cancer. This protein is involved in the regulation of cell cycle, angiogenesis and apoptosis. The aim of this work was to analyze modification on TP53 gene sequence, as well as the relative expression of several cancer related genes in dog´s tumors. A total of 50 neoplasias were evaluated by classical histopathological analysis, SSCP profiles of exons 5, 6 and 7, and sequencing of intron5-exon7 region of TP53. Most of these tumors (n=45) were evaluated for the expression of TP53, p21, MDM2, Bax, Bcl2, IGF-BP3, VEGF and bFGF genes by qRTPCR. The results showed that breast cancer, particularly the complex tubular-papilary, are the most common in dogs. The prevalence of cancer in dogs is related with the age and breed. High frequency of SSCP altered patterns were detected in canine tumors. However, this technique, pointed out as efficient by several authors, has complex and subjective interpretation, and it did not show relation with our sequence data. Heterozygotic alterations in exons 6 and/or 7 of TP53, which may compromise p53 protein function, were detected in 40% of the tumors. A homozygotic transition GA at the codon 270 (arghis), known as a hotspot on the DNA-binding domain of p53, was detected in an osteossarcoma. Alteration detected in the intronic regions 5 and 6 of TP53 are probably not involved in RNA processing. High variation of the relative expression of TP53, p21, MDM2, Bax, Bcl2, IGF-BP3, VEGF and bFGF genes were detected in both mammary and skin tumors. However, it was not possible to establish clear relation among genes expression, or between expression and TP53 alterations. IGF-BP3gene was over or under express in 60% of skin tumors, but no alterations were found in mammary tumors. Conversely, 82.9% of mammary tumors exhibited Bax over-expression, while skin tumors showed a control-like behavior. Although considered as prognostic markers, it was not detected relation between TP53, p21, MDM2, Bax, Bcl2, IGF-BP3, VEGF and bFGF genes and histopathological grade.

A proteína p53é freqüentemente relacionada às neoplasias humanas e animais, estando indiretamente relacionada com o bloqueio do ciclo celular, angiogênese e indução à apoptose. O objetivo deste trabalho foi analisar a presença de alterações no gene TP53, assim como a expressão dos genes relacionados ao câncer em neoplasias caninas.Tumores caninos (n=50) foram avaliados através de análise histopatológica, perfis de SSCP dos exons 5, 6 e 7 e seqüenciamento da região intron5-exon7. Parte destes tumores (45 amostras) foram analisados quanto à expressão dos genes TP53, p21, MDM2, Bax, Bcl2, IGF-BP3, VEGF e bFGF através de qRT-PCR. Os resultados mostraram que as neoplasias mamárias, particularmente túbulo-papilares complexas, são as mais comuns em cães. A ocorrência de neoplasias em cães está relacionada com a idade e a raça. Alta prevalência de alterações nos perfis de SSCP foi constatada em tumores caninos. Entretanto, esta técnica, preconizada como eficiente por diversos autores apresenta análise e interpretação complexa e subjetiva, não apresentando relação com os dados de seqüenciamento no presente trabalho. Parte dos tumores (42%) apresentaram alterações nos exons 6 e/ou 7 do gene TP53, e apesar de se encontrarem em heterozigose, podem comprometer funcionalmente a proteína p53. A única alteração em homozigose foi detectada num osteossarcoma de mama e correspondeu a uma transição GA no códon 270 (arghis) conhecido como hotspot situado no domínio de ligação da proteína p53 ao DNA. As alterações observadas nas sequências nos introns 5 e 6 do gene TP53 não se encontram em sítios envolvidos no processamento do RNA. Ampla variação na expressão relativa dos genes TP53, Bax, p21, MDM2, Bcl2, IGF-BP3 e bFGF foi constatada em tumores mamários e de pele. Entretanto, não foi possível estabelecer relações entre expressão e alterações no gene TP53, ou entre a expressão dos genes em estudo entre si. O gene IGFBP3foi hiper ou hipo expresso em 60% dos tumores de pele, mas não apresentou alteração em tumores de mama. Por outro lado, 82,9% dos tumores mamários apresentaram hiper expressão do gene Bax, enquanto não foi observada alteração na expressão deste gene em tumores de pele. Apesar de serem considerados indicadores de prognóstico, de um modo geral não foi constatada correlação entre o nível de expressão dos genes TP53, Bax, p21, MDM2, Bcl2, IGF-BP3e bFGF e o grau histopatológico. / The p53 protein is frequently associated with human and animal cancer. This protein is involved in the regulation of cell cycle, angiogenesis and apoptosis. The aim of this work was to analyze modification on TP53 gene sequence, as well as the relative expression of several cancer related genes in dog´s tumors. A total of 50 neoplasias were evaluated by classical histopathological analysis, SSCP profiles of exons 5, 6 and 7, and sequencing of intron5-exon7 region of TP53. Most of these tumors (n=45) were evaluated for the expression of TP53, p21, MDM2, Bax, Bcl2, IGF-BP3, VEGF and bFGF genes by qRTPCR. The results showed that breast cancer, particularly the complex tubular-papilary, are the most common in dogs. The prevalence of cancer in dogs is related with the age and breed. High frequency of SSCP altered patterns were detected in canine tumors. However, this technique, pointed out as efficient by several authors, has complex and subjective interpretation, and it did not show relation with our sequence data. Heterozygotic alterations in exons 6 and/or 7 of TP53, which may compromise p53 protein function, were detected in 40% of the tumors. A homozygotic transition GA at the codon 270 (arghis), known as a hotspot on the DNA-binding domain of p53, was detected in an osteossarcoma. Alteration detected in the intronic regions 5 and 6 of TP53 are probably not involved in RNA processing. High variation of the relative expression of TP53, p21, MDM2, Bax, Bcl2, IGF-BP3, VEGF and bFGF genes were detected in both mammary and skin tumors. However, it was not possible to establish clear relation among genes expression, or between expression and TP53 alterations. IGF-BP3gene was over or under express in 60% of skin tumors, but no alterations were found in mammary tumors. Conversely, 82.9% of mammary tumors exhibited Bax over-expression, while skin tumors showed a control-like behavior. Although considered as prognostic markers, it was not detected relation between TP53, p21, MDM2, Bax, Bcl2, IGF-BP3, VEGF and bFGF genes and histopathological grade.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-23. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:56Z : No. of bitstreams: 1 000819087.pdf: 1423284 bytes, checksum: a89857bcef9822e82a34c2b6424c6064 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral é uma doença que causa manifestações clínicas variadas em cães, que podem apresentar desde alterações subclínicas a desordens generalizadas, incluindo alterações neurológicas. Há evidências do comprometimento das barreiras encefálicas, como a presença de infiltrado inflamatório com predomínio de linfócitos T CD3+ no sistema nervoso central. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi determinar e comparar os imunofenótipos de linfócitos T no sangue periférico e no liquor e avaliar as lesões encefálicas em cães infectados. Verificou-se que os linfócitos T presentes em maior quantidade no liquor foram os duplos negativos (DN) e os duplos positivos (DP), com predomínio de TCRαβ. Também verificou-se que as células sanguíneas não diferiram das células do liquor em quantidade, o que indica que pode estar havendo um comprometimento da barreira hematoliquórica, permitindo que as células do sangue migrem para o liquor. Ocorreu também o predomínio de infiltrado linfohistioplasmocitário no encéfalo, principalmente em leptomeninges. Porém, não houve correlação entre a inflamação nessa área e as células T. Além disso, a correlação positiva entre a inflamação no subepêndima e as células T DN do liquor indica que essas células chegam no encéfalo também pelos vasos subependimários. Em conjunto, os resultados contribuem para explicar a inflamação observada no encéfalo de cães com leishmaniose, sendo que as células T DN podem ser responsáveis pela progressão neurológica da doença / Visceral leishmaniasis (VL) is a disease causing several clinical manifestations in dogs, that can present from subclinical to generalized disorders, including neurological disorders. There are evidences of cerebral barriers involvement, such as the presence of inflammatory infiltrate with predominance of CD3+ T cells in the brain of infected dogs. Therefore, the aim of this study was to determine and to compare the immunophenotypes of T lymphocytes in the peripheral blood and in the cerebrospinal fluid (CSF) of dogs with VL and evaluate the brain lesions. It was detected that the double negative (DN) and double positive (DP) T cells were present in higher percentage in the CSF, with predominance of TCRαβ. Besides, the amount of blood T cells did not differ from those observed in the CSF, indicating that the blood-CSF barrier may be damaged, allowing the migration of cells from the blood to the CSF. Moreover, inflammatory infiltrate with predominance of lymphohistioplasmacytic cells was observed, mainly in leptomeninges. However, there was no correlation between the intensity of the inflammation in this area and the T cells. Furthermore, the positive correlation between intensity of the inflammation in the subependimal area and DN T cells in the CSF indicates that these cells also may reach the brain through the subependymal vessels. Together, the results contribute to explain the inflammation observed in the brain of dogs with VL, where the DN T cells may contribute to the neurological progression of the disease

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-14. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:24Z : No. of bitstreams: 1 000819084.pdf: 1209964 bytes, checksum: 04874bbac5638856dedf456279299e45 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral é uma doença imunomediada que pode causar alterações na população de linfócitos T em diferentes órgãos e tecidos, e também aumento de células inflamatórias no encéfalo de cães infectados. O objetivo deste estudo foi avaliar e caracterizar as lesões encefálicas por meio de análise de cortes histológicos do encéfalo e as subpopulações de linfócitos T CD4+, CD8+, duplo-positivos (DP), duplo-negativos (DN), TCRs αβ e δγ e células dendríticas (cd11c+/MHC-II+) provenientes de linfonodos regionais da cabeça e do linfonodo poplíteo de cães com leishmaniose visceral utilizando citometria de fluxo. Os resultados mostram que encéfalos de cães com LV podem apresentar infiltrados inflamatórios em região de leptomeninges, plexo coroide e região subependimária. Entre os linfonodos, não houve diferença entre as subpopulações de linfócitos T, porém, observamos redução dos linfócitos T CD8+ e aumento dos T DN e TCR δγ enquanto que os CD4+ e DP e TCR αβ mantiveram-se próximos a valores de cães saudáveis, sugerindo assim que os linfócitos DN e TCR δγ podem estar relacionados com a resposta imunológica de cães sintomáticos com LV. Todos esses achados descartam a hipótese de que os linfonodos regionais da cabeça poderiam apresentar um padrão de resposta imune específica relacionada com as lesões encefálicas dos cães / Visceral leishmaniasis (VL) is an immune-mediated disease which may cause changes in T lymphocytes population in different organs and tissues, and also an increase in the inflammatory cells population in the brain of infected dogs. The aim of this study was to evaluate the encephalic lesions in brain sections, and to characterize the T lymphocytes subsets CD4+, CD8+, double-positive (DP), double-negative (DN), the TCRs αβ and δγ, and the dendritic cells (CD11c+/MHC-II+) from the regional lymph nodes of the head and the popliteal lymph node using flow cytometry. The results evidenced that the brain of dogs with VL may present inflammatory infiltrates in leptomeninges, choroid plexus and subependymal area. Between the lymph nodes, there was no difference among the T cell subsets, nevertheless, there was noticed a reduction in the CD8+ lymphocytes and an increase in the DN subset as well as the TCR δγ, while CD4+, DP and TCR αβ were detected in amounts closely related to described reference ranges, which suggests that the DN and TCR δγ lymphocytes may be related to the immune response in symptomatic dogs. Altogether, these findings discard the hypothesis that the regional lymph nodes of the head may present a specific pattern of immune response related to the brain lesions in dogs with VL.