Orientadores: Gilberto D'Assunção Fernandes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T01:44:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guimaraes_Fernando_M.pdf: 10011651 bytes, checksum: a93242d30f0af2645d3e080c6b7aa6c5 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Alguns trabalhos relataram a participação de estruturas límbicas na modulação da resposta imune. Com relação aos núcleos septais, a lesão ampla desta área alterou a resposta humoral de ratos imunizados com hemácias de carneiro, enquanto a lesão septal medial inibiu a resposta mitogênica in vitro de linfócitos T. Neste trabalho, investigou-se a influência da área septal do cérebro sobre as freqüências de linfócitos T CD4+ e T CD8+ no baço de ratos durante o desenvolvimento tumora!. Para isso, ratos com a área septal do cérebro lesada através de cirurgia estereotáxica (LW) e ratos controles (cirurgia simulada, SW) foram comparados após receberem uma inoculação subcutânea (sc) do tumor de Walker 256 Ar (variante celular com elevado índice de regressão, obtida a partir das células tumorais de Walker 256 A). A possibilidade da atividade adrenocortical mediar os efeitos septais foi verificada pela dosagem de corticosterona sérica. Também foi investigada a influência da lesão septal sobre os efeitos sistêmicos tais como, anorexia, ganho de peso corpóreo, retenção renal de sódio e água induzidos pelo tumor (modelo de inoculação multifocal com células tumorais de Walker 256 A ), visto a possibilidade de variações destes parâmetros fisiológicos servirem como uma indicação indireta da atividade imunológica. Com relação aos efeitos sistêmicos tumorais foi observado que a lesão septal causou uma redução temporária na retenção de sódio e água induzida pelo tumor, possivelmente como conseqüência da inibição da liberação do hormônio antidiurético. Duas semanas após a inoculação do tumor de Walker 256 Ar foram identificadas regressões tumorais em 46,2 % do grupo SW e 57,1 % do grupo LW. Tanto no grupo SW como no LWo percentual de linfócitos T CD4+ nos ratos cujos tumores não regrediram (SW = 19,5 ::t 1,4 %; L W = 23,8 ::t 1,6 %) foi significativamente menor que naqueles com regressão tumoral (SW = 29,3 ::t 2,4 %; LW = 31,4::t 1,6 %). Como conseqüência a relação CD4+/CDS+ também foi significativamente menor nos ratos cujos tumores não regrediram (SW = 0,91 ::t 0,07; LW = 1,20 ::t 0,07) que naqueles com regressão tumoral (SW = 1,45 ::t 0,1; L W = 1,59 ::t 0,1). Concluiu-se que as variações nas freqüências de linfócitos T, bem como na relação CD4+/CDS+ estiveram associadas ao desenvolvimento tumoral e não foram afetadas pela lesão ampla da área septal. Através de um experimento com ratos adrenalectomizados foi observado que o crescimento contínuo ou a regressão dos tumores, bem como a resposta imune celular associada a estes eventos, não foram influenciados pela atividade adrenocortical / Abstract: Some studies have shown the influence of limbie-hypothalamie areas on the immune response modulation. Concerning the septal nueleus, the whole lesion of this limbie area impaired the humoral immune response of rats immunized with sheep red blood eells, while lesions of the medial septal nueleus produced a long lasting inhibition of T Iymphoeyt proliferation induced by mitogens. The proposal of the present study was to investigate the influenee of septal area lesion on frequeneies of splenie T CD4+ and T CDS+ Iymphoeytes, during tumor development. Therefor, septal-Iesioned rats (LW), obtained through stereotaxie surgery, were compared with sham-operated rats (SW), afier one subeutaneous (se) inoculation of Walker 256 Ar tumor cells (a cell variant obtained from Walker 256 A tumor, distinguished by presenting a high regression ineidence). The adrenocortical aetivity in the mediation of septal lesion effects was evaluated by assessing serum corticosterone. The influenee of septal lesion on systemie effeets induced by the tumor, like body weight gain and, sodium and water renal retention was also investigated (by using the multifocal se inoeulation model of Walker 256 A cells). It was suggested that ehanges in these parameters would help as an indireet indication of the immunological function alterations. Conceming the systemie effects, sodium and fluid retention induced by the Walker 256 A tumor was temporarily reduced in animais with septal area lesions. This effect was possibly a result of an inhibition of antidiuretie hormone release. By using the Walker 256 Ar tumor cells, it was observed tumor regressions in 46.2 % of the SW group and 57.1 % of the LW group two weeks afier se inoculation. In both groups SW and LW, the frequency of splenic T CD4+ Iymphocytes was significantly reduced in rats which tumors did not regress (SW = 19.5:t 1.4 %; LW = 23.8:t 1.6 %) compared with rats with tumor regression (SW = 29.3:t 2.4 %; LW = 31.4 :t 1.6 %). As a consequence, the CD4+/CD8+ ratio was also significantly reduced in rats without tumor regression (SW = 0.91 :I:: 0.07; LW = 1.20 :t 0.07) in relation to those with tumor regression (SW = 1.45 :I:: 0.1; LW = 1,59 :t 0.1 %). Therefore, septal area lesion did not affect the frequencies of T Iymphocytes. Nevertheless, the alterations observed in the frequencies of T Iymphocytes, as well as in CD4+/CD8+ ratio were associated with tumor development (continuous growth or regression). It was also observed that tumor continuous growth or tumor regression, as well as the immune response associated with these events were not affected by adrenocortical activity / Mestrado / Fisiologia / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Carlos Rossa Junior / Banca: Guiseppe Alexandre Romito / Banca: Daniela Leal Zandim-Barcelos / Resumo: moleculares (PRR) reconhecido principalmente por seu envolvimento na patogênese de complicações secundárias do Diabetes Mellitus. Sua ativação está relacionada à modulação da resposta imune-inflamatória, promovendo ativação, migração e maturação de leucócitos; e induzindo a liberação de citocinas inflamatórias. A sinalização via RAGE também está relacionada à regulação dos processos de sobrevivência, apoptose e autofagia celular. Pouco se sabe sobre o papel de RAGE na regulação desses processos em células da resposta imune adaptativa e, especificamente, em linfócitos T. Nosso objetivo foi avaliar a influência da ativação de RAGE na biologia de células T. Para isso, observamos seus efeitos na modulação da proliferação, apoptose e autofagia, e a contribuição da ativação de NF-κB na indução desses processos. Células de linhagem de linfócitos T (JM/Jurkat) foram estimuladas com os ligantes de RAGE BSA-AGE (100 e 200 μg/mL) e S100b (10 μg/mL). A estimulação também foi realizada mediante a pré-ativação do receptor de células T (TCR). Experimentos de ganho de função foram realizados por meio da transfecção transitória das células com um vetor plasmidial de RAGE. A proliferação celular foi determinada por ensaio de exclusão com azul de Trypan. A apoptose foi avaliada através da detecção da fragmentação do DNA pelo método TUNEL e da expressão de p53, Bax e Bcl-2 por Western blot. Ainda por Western blot, observamos a expressão de proteínas características do processo de autofagia, p62 e LC3; e de p50, subunidade do fator de transcrição NF-κB. O estímulo com BSA-AGE e S100b não alterou a proliferação e a viabilidade, mas, em células transfectadas, esse estímulo tendeu a aumentar a proliferação e a viabilidade, sobretudo após a pré-ativação das células. O BSA-AGE e o S100b produziram efeitos distintos sobre a apoptose a depender da pré-ativação e do período... / Abstract: RAGE (Receptor for advanced glycation endproducts) is a pattern recognition receptor (PRR) that is especially recognized for its involvement in the pathogenesis of secondary complications of Diabetes Mellitus. Its activation is related to the modulation of immune-inflammatory responses, by promoting activation, maturation and migration of leukocytes, as well as the induction of inflammatory cytokines. RAGE signaling is also related to the regulation of cellular processes like survival, apoptosis and autophagy. Little is known about the role of RAGE in the regulation of these processes in cells of the adaptive immune response, specifically in T lymphocytes. Our main purpose was to evaluate the influence of RAGE activation in T cell biology. We observed the role of this receptor in the modulation of proliferation, apoptosis and autophagy, and the contribution of NF-kB in the induction of these processes. A human cell line of T lymphocytes (JM/ Jurkat) were stimulated with the RAGE ligands: BSA-AGE (100 and 200 μg/mL) and S100B (10 μg/mL). The stimulation was also performed after pre-activation of the T cell receptor (TCR). Gain of function experiments were performed by transient transfection of cells with a plasmid vector to increase RAGE expression. Cell proliferation was determined by Trypan blue dye exclusion assay. Apoptosis was assessed by the detection of DNA fragmentation by the TUNEL method, and p53, Bax and Bcl-2 expression by Western blotting. Also by Western blotting, we observed the effect of RAGE on the expression of autophagy-related proteins, p62 and LC3, and on the expression of p50, subunit of the transcription factor, NF-κB. The stimulation with BSA- AGE and S100b did not alter the proliferation and viability, but, in transfected cells, this stimulation tended to increase proliferation and viability, especially after the cell pre-activation. BSA-AGE and S100b had distinct effects on apoptosis depending on the... / Mestre

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:05:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317914.pdf: 3287867 bytes, checksum: 384318c7ee62dcef59b7569f7b16fc5e (MD5) Previous issue date: 2013 / Os resultados dos testes laboratoriais devem ser comparados o intervalo de referência com o objetivo de se obter um diagnóstico e/ou uma decisão terapêutica. Por isso, os laboratórios de análises clínicas necessitam de intervalos de referência confiáveis e aplicáveis a sua população para todos os parâmetros analisados. De maneira geral, os intervalos de referência aplicados nas rotinas laboratoriais são obtidos da literatura ou de informações contidas nas bulas dos fabricantes dos reagentes; não sendo obtidos com resultados referentes à população ao qual será aplicado. Dessa forma, preconiza-se que cada laboratório estabeleça o intervalo de referência referente a sua população, baseado na metodologia utilizada na rotina. Para isso, foi analisado 238 amostras de sangue periférico de indivíduos adultos saudáveis, não fumantes, doadores de sangue do Serviço de Hemoterapia do Hospital Universitário Polydoro Ernani de São Thiago da Universidade Federal de Santa Catarina. Para a identificação e quantificação das células linfoides foi utilizado o seguinte painel de anticorpos monoclonais anti-: CD4/CD8/CD3/CD45, CD20/CD19/CD45, CD16/CD56/CD3/CD45 e TCRaB/TCRyd/CD3/CD45. Os intervalos de referência para encontrados foram CD3+ de 51,3 a 83,5% e de 718 a 2494 células/mm3; CD4+ de 24,4 a 54,2% e de 456 a 1492 células/mm3; CD8+ de 12,8 a 40,2% e de 272 a 1144 células/mm3; relação T CD4+/T CD8+ de 0,68 a 3,61; CD4+ CD8+ de 0,01 a 3,6% e de 2 a 88 células/mm3; TCR aB+ de 44,3 a 77% e de 855 a 2384 células/mm3; TCR yd de 0,99 a 15,9% e de 19 a 345 células/mm3; CD3+ CD4-CD8- de 1,2 a 13,3% e de 28 a 292 células/mm3; CD19+CD20+ de 6,3 a 20,8% e de 110 a 618 células/mm3; CD19+CD20- de 0,001 a 1,3% e de 0 a 23 células/mm3; NK maduras de 3,1 a 27,4% e de 70 a 745 células/mm3; NK imaturas de 0,08 a 1,1% e de 1 a 23 células/mm3; NK totais de 3,7 a 28,5% e de 82 a 760 células/mm3 e NKT de 0,9 a 21,4% e de 18 a 488 células/mm3. Com relação aos gêneros, as células T CD3+, T CD4+, CD4+CD8+, TCR aB+, TCR yd+, CD19+CD20-, NK maduras e imaturas e NKT apresentaram diferenças significativas na contagem de linfócitos tanto para o valor relativo quanto para o absoluto entre homens e mulheres. Por outro lado, as células T CD8+ e CD19+ apresentaram diferenças apenas relacionadas ao valor absoluto e na relação T CD4+/T CD8+ não foram observadas diferenças estatísticas. A comparação entre o intervalo de referência obtido em indivíduos naturais do Estado de Santa Catarina com os de indivíduos de outros Estados do país e de outros países do mundo confirmou a necessidade de se estabelecer intervalos de referência próprios para essa população.<br> / Abstract : The results of laboratory tests should be compared with the reference range in order to obtain a diagnosis and/or treatment decision. Thus, clinical laboratories need reliable and applicable reference intervals for its population for all parameters analyzed. In general, the reference ranges used in clinical laboratories are obtained from literature or information provided by the reagents manufacturers'. Thus, the reference range are not obtained with results concerning the population which will be applied, since few laboratories establish their own reference ranges. Thus, it is recommended that each laboratory establish reference range refeferente its population, based on the methodology used in the routine.With this purpose, we have analyzed 238 peripheral blood samples from healthy adult subjects, nonsmokers, who donated blood in the Hemotherapy Service of Hospital Universitário Polydoro Ernani de São Thiago da Universidade Federal de Santa Catarina. The panel of monoclonal antibodies employed was composed by anti-: CD4/CD8/CD3/CD45, CD20/CD19/CD45, CD16/CD56/CD3/CD45 e TCRaß/TCRyd/CD3/CD45. The reference ranges obtained were: CD3+ 51,3 to 83,5% and 718 to 2494 cells/mm3; CD4+ 24,4 to 54,2% and 456 to 1492 cells/mm3; CD8+ 12,8 to 40,2% and 272 to 1144 cells/mm3; T CD4+/T CD8+ ratio 0,68 to 3,61; CD4+ CD8+ 0,01 to 3,6% and 2 to 88 cells/mm3; TCR aß+ 44,3 to 77% and 855 to 2384 cells/mm3; TCR ?d 0,99 to 15,9% and 19 to 345 cells/mm3; CD3+CD4-CD8- 1,2 to 13,3% and 28 to 292 cells/mm3; CD19+CD20+ 6,3 to 20,8% and 110 a 618 cells/mm3; CD19+CD20- 0,001 to 1,3% and 0 to 23 cells/mm3; mature NK cells 3,1 to 27,4% and 70 to 745 cells/mm3; immature NK cells 0,08 to 1,1% and 1 to 23 cells/mm3; total NK cells 3,7 to 28,5% and 82 to 760 cells/mm3 and NKT cells 0,9 to 21,4% and 18 to 488 cells/mm3. In relation to genders, the CD3+, CD4+, CD4+ CD8+, TCR aß+, TCR yd+, CD19+CD20-, mature and immature NK and NKT cells showed significant differences for both relative and absolute values. Moreover, CD8+ and CD19+ cells differ only when related to absolute values and T CD4+/ T CD8+ ratio had no statistical differences. Comparison between reference ranges obtained in subjects born in Santa Catarina State and individuals from other states of the country or other countries of the world affirmed the need to establish reference intervals for this population.

Resumo: Células T reguladoras naturais expressam constitutivamente a molécula CD25 e o fator de transcrição Foxp3 e representam uma importante subpopulação de linfócitos T CD4 com atividade supressora. Estas células têm sido estudadas em várias doenças autoimunes, incluindo pênfigo vulgar, mas até o momento não foram estudadas em pênfigo foliáceo (PF). MicroRNA constituem uma classe de pequenos RNA nãocodificantes, de aproximadamente 22 nucleotídeos, que atuam póstranscricionalmente, participando da sintonia fina da expressão gênica através do pareamento com a região 3' não traduzida de certos RNA mensageiros. MicroRNA são importantes para o desenvolvimento e função normais do sistema imune, sendo que alterações quantitativas estão frequentemente associadas à doenças autoimunes. PF trata-se de uma doença autoimune caracterizada pela produção de autoanticorpos IgG dependente de células Th2 e direcionados contra proteínas de adesão entre células da pele. Considerando esta importância de células Th2 e B autorreativas, bem como o evidente papel de células T reguladoras na perda de autotolerância, o objetivo deste trabalho foi verificar o padrão de expressão de cinco microRNA candidatos à regulação da resposta (auto)imune adaptativa do PF (miR-145, miR-148a, miR-155, miR-338-5p, and miR-1321) nas três subpopulações de linfócitos acima mencionadas, bem como analisar a proporção de células T reguladoras CD4+CD25+. Os resultados principais foram: (1) em células B de memória expressando IgG de superfície (B IgG+) e Th2, miR-155 esteve 2 e 3 vezes superexpresso, respectivamente, em pacientes sem lesão em relação aos controles sadios (P = 0,02 and P = 0,03, respectivamente); (2) miR- 1321 apresentou tendência de superexpressão em células Th2 do conjunto total de pacientes comparados aos controles sadios (P = 0,10) e há evidências de que este microRNA regule a expressão de BLyS, um estimulador de células B, uma vez que os seus níveis mostraram-se inversamente proporcionais aos de BLyS; (3) miR-148a não foi detectado em células B IgG+ de pacientes sem lesão, mas foi consistentemente expresso por células de pacientes com a doença ativa; e (4) células T reguladoras CD4+CD25+ estiveram significativamente reduzidas em pacientes com a doença ativa em relação aos controles sadios (P = 0,02) e aos pacientes sem lesão (P = 0,03). Além disso, foi detectada uma tendência de menor expressão de Foxp3 em pacientes com a doença ativa, sugerindo que células T reguladoras sejam ainda menos frequentes no PF. Curiosamente, células Th2 e B IgG+, potenciais alvos de células T reguladoras, mostraram-se sutilmente mais frequentes em pacientes com lesões ativas. Estes resultados colocam miR-148a, miR-155 e miR-1321 como potenciais alvos para terapias alternativas em PF. Além disso, sugere-se que uma redução da frequência de células T reguladoras esteja associada ao PF, destacando a importância destas células para a manutenção da autotolerância.

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-21Bitstream added on 2014-12-02T11:21:07Z : No. of bitstreams: 1 000797900.pdf: 2369287 bytes, checksum: bc2c91fee9aa9b9e5e12f11873a0438e (MD5) / moleculares (PRR) reconhecido principalmente por seu envolvimento na patogênese de complicações secundárias do Diabetes Mellitus. Sua ativação está relacionada à modulação da resposta imune-inflamatória, promovendo ativação, migração e maturação de leucócitos; e induzindo a liberação de citocinas inflamatórias. A sinalização via RAGE também está relacionada à regulação dos processos de sobrevivência, apoptose e autofagia celular. Pouco se sabe sobre o papel de RAGE na regulação desses processos em células da resposta imune adaptativa e, especificamente, em linfócitos T. Nosso objetivo foi avaliar a influência da ativação de RAGE na biologia de células T. Para isso, observamos seus efeitos na modulação da proliferação, apoptose e autofagia, e a contribuição da ativação de NF-κB na indução desses processos. Células de linhagem de linfócitos T (JM/Jurkat) foram estimuladas com os ligantes de RAGE BSA-AGE (100 e 200 μg/mL) e S100b (10 μg/mL). A estimulação também foi realizada mediante a pré-ativação do receptor de células T (TCR). Experimentos de ganho de função foram realizados por meio da transfecção transitória das células com um vetor plasmidial de RAGE. A proliferação celular foi determinada por ensaio de exclusão com azul de Trypan. A apoptose foi avaliada através da detecção da fragmentação do DNA pelo método TUNEL e da expressão de p53, Bax e Bcl-2 por Western blot. Ainda por Western blot, observamos a expressão de proteínas características do processo de autofagia, p62 e LC3; e de p50, subunidade do fator de transcrição NF-κB. O estímulo com BSA-AGE e S100b não alterou a proliferação e a viabilidade, mas, em células transfectadas, esse estímulo tendeu a aumentar a proliferação e a viabilidade, sobretudo após a pré-ativação das células. O BSA-AGE e o S100b produziram efeitos distintos sobre a apoptose a depender da pré-ativação e do período... / RAGE (Receptor for advanced glycation endproducts) is a pattern recognition receptor (PRR) that is especially recognized for its involvement in the pathogenesis of secondary complications of Diabetes Mellitus. Its activation is related to the modulation of immune-inflammatory responses, by promoting activation, maturation and migration of leukocytes, as well as the induction of inflammatory cytokines. RAGE signaling is also related to the regulation of cellular processes like survival, apoptosis and autophagy. Little is known about the role of RAGE in the regulation of these processes in cells of the adaptive immune response, specifically in T lymphocytes. Our main purpose was to evaluate the influence of RAGE activation in T cell biology. We observed the role of this receptor in the modulation of proliferation, apoptosis and autophagy, and the contribution of NF-kB in the induction of these processes. A human cell line of T lymphocytes (JM/ Jurkat) were stimulated with the RAGE ligands: BSA-AGE (100 and 200 μg/mL) and S100B (10 μg/mL). The stimulation was also performed after pre-activation of the T cell receptor (TCR). Gain of function experiments were performed by transient transfection of cells with a plasmid vector to increase RAGE expression. Cell proliferation was determined by Trypan blue dye exclusion assay. Apoptosis was assessed by the detection of DNA fragmentation by the TUNEL method, and p53, Bax and Bcl-2 expression by Western blotting. Also by Western blotting, we observed the effect of RAGE on the expression of autophagy-related proteins, p62 and LC3, and on the expression of p50, subunit of the transcription factor, NF-κB. The stimulation with BSA- AGE and S100b did not alter the proliferation and viability, but, in transfected cells, this stimulation tended to increase proliferation and viability, especially after the cell pre-activation. BSA-AGE and S100b had distinct effects on apoptosis depending on the...

Orientador: Maria Heloisa Souza Lima Blotta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T08:39:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fornazim_MarciaCristina_M.pdf: 977684 bytes, checksum: 6e57e24188b29731261e168251676a0d (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Para investigar a resposta imune local versus sistêmica em pacientes com paracoccidioidomicose pulmonar analisamos o fenótipo de diferentes populações celulares e o padrão de produção de citocinas por células do lavado broncoalveolar (LBA) e do sangue periférico. O grupo estudado foi constituído por 19 pacientes com idade entre 36 a 65 anos. O diagnóstico foi confirmado pela demonstração do fungo P. brasiliensis no escarro, LBA e/ou biópsia. A análise do LBA mostrou aumento de linfócitos e neutrófilos em relação ao descrito para indivíduos normais saudáveis. Linfócitos T CD8+ encontravam-se em maior número no LBA do que no sangue periférico. A expressão de moléculas do MHC classe II, ICAM-1 (CD54) e B7-2, foi aproximadamente 3 vezes maior em macrófagos alveolares (MA), do que em monócitos do sangue periférico. Sobrenadantes de culturas de curta duração de MA apresentaram níveis mais elevados de IL-6, TNF-a, IL-12 p40 e MIP-1a, do que sobrenadantes de monócitos do sangue periférico. No LBA destes pacientes também foi possível detectar IL-6, TNF-a e MIP-1a, assim como anticorpos específicos anti-gp43 de P. brasiliensis, principalmente da classe IgG2. Como foi demonstrado que MIP-1a atrai seletivamente linfócitos T CD8+ e esta população celular está aumentada no LBA, nossos achados sugerem que além de macrófagos ativados, células T CD8+ devem ter um importante papel no desenvolvimento da PCM pulmonar / Abstract: To investigate the local immune response we analyzed the cellular infiltrate and patterns of cytokine production in bronchoalveolar lavage cells and fluid from patients with pulmonar paracoccidioidomycosis (PCM). The group consisted of 19 patients, 16 male and 3 female, with age ranging from 36 to 65 years. The diagnosis was confirmed by demonstration of fungus in the sputum or bronchoalveolar lavage fluid (BAL), in addition to serological tests. Cytospin preparations from patients with PCM showed an increased number of lymphocytes in BAL, mostly CD8+T cells. Cultured alveolar macrophages produced higher levels of IL-6, TNF-a ??and MIP-1a as compared with PBMC. No differences were detected in relation to IL-8, IL-12p40, IL-10 and TGF-a. BAL fluid from PCM patients contained low but significant levels of IL-6, TNF-a and MIP-1a, and specific antibodies to Paracoccidioides brasiliensis, mainly of the IgG2 isotype. These findings indicate that the local inflammatory reaction in the lungs of patients with pulmonary paracoccidioidomycosis is mediated by the inflammatory cytokines TNF-a ??IL-6 and MIP-1a characterized by a lymphocytic infiltration and local release. MIP-1a may play an important role in the pathogenesis of PCM, mediating the recruitment of lymphocytes and macrophages to the site of infection / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Elisa Yoko Hirooka / Banca: Tereza Cristina Moreira de Oliveira / Banca: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Resumo: Os estafilococos coagulase-negativos (ECN) são integrantes da microbiota normal da pele humana e os microrganismos mais frequentemente isolados de materiais clínicos. No ambiente hospitalar são a maior causa de bacteremias, na maioria dos casos em pacientes mantidos em unidades de tratamento intensivo. A patogenia das infecções causadas por estas bactérias é complexa e multifatorial, sendo vários os fatores de virulência envolvidos nas infecções. O biofilme é o principal fator de virulência dos ECN, conferindo proteção contra o sistema imune do hospedeiro e a ação dos antimicrobianos. As toxinas estafilocócicas denominadas superantígenos são classificadas antigenicamente em toxina 1 da síndrome do choque tóxico (TSST-1) e em enterotoxinas. Desencadeiam uma série de efeitos tóxicos, pois funcionam como potentes toxinas gastrointestinais e estimulam de forma inespecífica a proliferação de células T. Os sistemas regulatórios estafilocócicos, tais como o sistema agr, podem afetar a produção das toxinas e do biofilme agindo como indutores ou repressores de genes específicos para a produção de fatores de virulência. Além dos fatores de virulência, o aumento da resistência antimicrobiana nos últimos anos tem fundamental significância nas infecções hospitalares. As amostras resistentes à oxacilina deixam poucas alternativas para o tratamento das infecções causadas por estes patógenos. Uma das drogas de escolha tem sido a vancomicina, porém já são relatados casos de susceptibilidade reduzida e de resistência a esta. Assim, este estudo objetivou caracterizar as espécies de ECN provenientes de hemoculturas de pacientes do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu quanto à detecção e expressão dos fatores de virulência, ao sistema agr envolvido na regulação da virulência e à susceptibilidade aos antimicrobianos / Abstract: Coagulase-negative staphylococci (CNS) are normal resident microbes of human skin, often isolated from clinical specimens. They are the major cause of bacteremia in inpatients, especially intensive care patients. Pathogenesis of infection caused by these organisms is complex and multifactorial, with several virulence factors involved in infection processes. Biofilm is key for CNS virulence, since it provides protection against the host's immune system and the action of antimicrobial agents. Staphylococcal toxins known as superantigens are antigenically classified as toxic shock syndrome toxin 1 (TSST-1) and enterotoxins. They trigger a chain of toxic effects by acting as potent gastrointestinal toxins and nonspecifically stimulating T cell proliferation. Staphylococcal regulatory systems, such as agr, may affect toxin and biofilm production through induction or repression of genes coding for virulence factor production specifically. In addition to virulence factors, increasing resistance rates to antimicrobial agents is also highly significant in nosocomial infections. Oxacillin-resistant strains leave few treatment alternatives for infection caused by these pathogens. Vancomycin has shown to be one drug of choice, although decreased susceptibility, as well as resistance, to vancomycin have been reported lately. Therefore, the aim of this study has been to categorize CNS species in blood culture specimens from inpatients at the UNESP Hospital das Clínicas in Botucatu, Brazil, as per detection and expression of virulence factors, agr system involved in virulence regulation, and susceptibility to antimicrobial agents / Doutor

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Coorientador: Letícia Abrahão Anai / Banca: Andrigo Barboza De Nardi / Banca: Sabryna Gouveia Calazans / Banca: Thiago Demarchi Munhoz / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Resumo: O linfoma pode ser caracterizado pela proliferação clonal de linfócitos malignos nos órgãos linfóides, podendo, porém, atingir diversos tecidos entre os quais a pele, denominado linfoma cutâneo. No cão, o linfoma cutâneo pode apresentar-se clinicamente por lesões localizadas ou generalizadas, podendo evoluir para lesões em placas e nódulos, muitas vezes edemaciados, ulcerados e hemorrágicos. Segundo avaliação histopatológica, podem ser classificados em epiteliotrópico ou não epiteliotrópico, com linhagem imunofenotípica T ou B, sendo o T mais comum. Células T reguladoras são linfócitos com capacidade imunossupressora, com papel importante na manutenção de processos fisiológicos, impedindo respostas de autoimunidade. Além disto, estudos demonstraram a influência das mesmas na supressão de respostas anti-tumorais, permitindo o escape das células neoplásicas dos mecanismos de defesa. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar a presença das células T reguladoras em 12 cães com linfoma cutâneo T e 12 animais saudáveis, no sangue periférico e pele, através das técnicas de citometria de fluxo, avaliando porcentagens de Tregs, células T CD4+ e CD8+, e imuno-histoquímica, com a expressão tecidual de Foxp3. Observou-se maior número de Tregs no sangue periférico de cães com linfoma cutâneo (10,84±1,18) em relação aos animais saudáveis (5,67±0,89), sem diferença quanto às porcentagens de células CD4+ (48,26±4,54; 51,01±4,92, respectivamente) e CD8+ (30,32±4,82; 31,78±5,65... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Lymphoma can be characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes in the lymphoid organs, but may reach several tissues including the skin, called cutaneous lymphoma. In dogs, the cutaneous lymphoma may present clinically as localized or generalized lesions, wich may progress to plaque and nodules, often swollen, ulcerated and bleeding. Histologically, they can be classified as epitheliotropic or non-epitheliotropic, with immunophenotypic line T or B. Regulatory T cells are lymphocytes with immunosuppressive capacity, with a significant role in the maintenance of physiological processes, preventing autoimmunity responses. Furthermore, studies have demonstrated their influence in the suppression of anti-tumor responses, allowing the escape of neoplastic cells from the defense mechanisms. Thus, the present study aimed to evaluate the presence of regulatory T cells in 12 dogs with cutaneous T cell lymphoma and 12 healthy animals in peripheral blood and skin, through flow cytometry techniques, assessing blood concentration of Tregs, CD4+ and CD8+, and immunohistochemical, through tissue expression of Foxp3. A higher number of Tregs in the peripheral blood of dogs with cutaneous lymphoma (10,84±1,18) was observed in relation to the healthy animals (5,67±0,89), with no difference in the percentages of CD4 + (48,26±4,54; 51,01±4,92, respectively) and CD8 + (30,32±4,82; 31,78±5,65, respectively) cells. There was no difference in cellular values between the animals with ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-11Bitstream added on 2015-04-09T12:48:10Z : No. of bitstreams: 1 000813832_20150711.pdf: 211442 bytes, checksum: ae09adc1e315a8f0dd0f3d34bcfd4f9b (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-03T12:21:07Z: 000813832_20150711.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-03T12:22:20Z : No. of bitstreams: 1 000813832.pdf: 2665159 bytes, checksum: a88a775cdeb772a5823624b15944a8d7 (MD5) / O mastocitoma é uma neoplasia caracterizada pela proliferação de mastócitos e corresponde ao tumor cutâneo mais frequente em cães. Seu comportamento biológico extremamente variável dificulta a determinação prognóstica e terapêutica, o que torna necessário a busca por indicadores prognósticos mais confiáveis. As células T regulatórias (Tregs) constituem um subgrupo dos linfócitos T que expressam CD4 e CD25, e são transcritas pelo fator Foxp3. As Tregs, através de seu potencial imunossupressor, regulam as respostas imunes em diversas enfermidades. Do ponto de vista oncológico, elas são responsáveis pela limitação da resposta imune antitumoral, promovendo uma tolerância imunológica às células neoplásicas mastocitárias. Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo quantificar, através da citometria de fluxo, a expressão de Tregs e a relação Treg/CD8+ no sangue periférico de cães portadores de mastocitoma cutâneo (n = 18) no momento do diagnóstico. Tais variáveis também foram avaliadas entre diferentes graus histológicos de mastocitoma, segundo classificação de Kiupel et al. (2011). Os resultados mostraram que cães portadores de mastocitoma (8,99 ± 1,15) apresentaram porcentagem significativamente maior (p<0,01) de Tregs do que cães saudáveis (4,71 ± 0,51). Não houve diferença nas quantidades de Tregs obtidas para cães portadores de mastocitoma de alto grau (5,55 ± 1,16) e baixo grau (4,96 ± 0,70). Cães com mastocitoma (0,27 ± 0,04) também apresentaram relação Treg/CD8+ significativamente maior (p = 0,04) do que os cães controle (0,12 ± 0,01). Concluiu-se que o mastocitoma em cães leva a um aumento na população de Tregs no sangue periférico, além de propiciar um aumento na relação Treg/CD8+ / Mast cell tumor is a neoplastic proliferation of mast cells which is the most frequent cutaneous tumor in dogs. Its extremely variable biological behavior makes the prognostic and therapeutic determination more difficult, which demands the search for more reliable prognostic indicators. The regulatory T cells (Tregs) are a subset of T lymphocytes that express CD4 and CD25, and are transcribed by Foxp3 factor. The Tregs, through their immunosuppressive potential, regulate the immune responses in several diseases. Regarding the oncological aspects, they are responsible for the limitation of the antitumoral immune response, promoting an immunological tolerance to the neoplastic mast cells. In this context, the current study had the objective to quantify, through flow cytometry, the expression of Tregs and the Treg/CD8+ ratio in the peripheral blood of dogs with cutaneous mast cell tumor (n = 18) at diagnosis. Such variables were also evaluated in different histologic grades of mast cell tumor, according to the grading system proposed by Kiupel et al. (2011). The results indicated that dogs with mast cell tumor (8,99 ± 1,15) showed significantly higher percentage (p<0,01) of Tregs when compared to healthy dogs (4,71 ± 0,51). There was not difference in the quantities of Tregs for dogs with high (5,55 ± 1,16) and low (4,96 ± 0,70) grade mast cell tumor. Dogs with mast cell tumor (0,27 ± 0,04) also presented significantly higher Treg/CD8+ ratio (p = 0,04) when compared to control dogs (0,12 ± 0,01). It was concluded that the mast cell tumor in dogs increases Tregs in the peripheral blood, and also leads to a higher Treg/CD8+ ratio

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T20:11:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 270312.pdf: 1276526 bytes, checksum: df4944e102b03f66313ae4454f115adf (MD5) / Embora adenovírus (Ad) humano do sorotipo 5 tenha sido utilizado como vetor vacinal contra inúmeras doenças infecciosas, a população humana apresenta imunidade pré-existente contra estes vírus. Para transpor este problema, Ad de outras espécies animais, tal como o Ad isolado de chimpanzés do sorotipo 6, denominado AdC6, tem sido utilizado. No entanto, existem poucos estudos sobre a resposta imune induzida por AdC6 em tecidos de mucosas. Este estudo avaliou células T ?/d e células NK das mucosas do trato genital de camundongos BALB/c após imunização intravaginal com o vetor AdC6 expressando a proteína Gag do HIV-1 (AdC6gag37). Análises de citometria de fluxo demonstraram que imunização com 1010 partículas virais de AdC6gag37 aumentou a frequência e o número de células T ?/d nas mucosas do trato genital. O número de células T ?/d atingiu seu pico três dias após a imunização, uma resposta que decresceu no sétimo dia. Além disso, detectou-se aumento relevante da expressão do marcador de ativação CD69 em células T ?/d do trato genital. Entretanto, não houve alteração na expressão da molécula CD25. Adicionalmente, para investigar o perfil de expressão gênica após exposição ao vetor adenoviral, células T ?/d do trato genital de camundongos imunizados foram isoladas magneticamente e avaliadas através de PCR em tempo real. Observou-se que AdC6gag37 foi capaz de aumentar a expressão de genes (1) relacionados com mecanismos de citotoxicidade mediado por células, tais como perforina e granzima B, (2) citocinas pró-inflamatórias, IL-6 e IL-12 e (3) quimiocinas CXCL-10, CCL5, CCL3 e CCL4. Demonstrou-se também que imunização com AdC6gag37 (105 e 107 partículas virais) foi capaz de induzir aumento expressivo na freqüência e no número de células NK do trato genital. Estes resultados indicam que AdC6gag37 modula a freqüência e o número de células T ?/d e células NK nas mucosas do trato genital e sugerem que estas células podem influenciar a resposta imune durante a imunização.