Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Foi realizado o estudo qualitativo e quantitativo das células NK em pacientes com síndrome hiper-imunoglobulinemia E autossômica dominante (AD-HIES), uma imunodeficiência rara. Em uma análise pelo National Institutes of Health foi apresentada como uma doença multissistêmica, tendo dezenove características clínicas vistas em 30 pacientes [1]. Propomo-nos a estudar células NK para auxiliar a elucidar a patologia da HIES. Constatamos um declínio na quantidade total das células NK nos pacientes HIES. Foram constituídos painéis com marcadores da atividade citotóxica, de adesão, de ativação e de inibição. Observamos um aumento dos marcadores de atividade citotóxica NKp44, NKp46 e, principalmente, NKp30 em pacientes com AD-HIES, em conjunto com maior expressão constitutiva de perforina e CD107a, este último após estímulo com células da linhagem K562. Estes resultados sugerem que, embora com percentuais circulantes diminuídos de células NK, os pacientes com AD-HIES apresentam maior atividade citotóxica inata, que pode ser conseqüência das múltiplas infecções a que estão sujeitos. / Qualitative and quantitative study of the NK cells was performed in patients with autossomal dominant hyperimmunoglobulinemia syndrome (AD-HIES) a rara immunodeficiency. An evaluation by the National Institutes of Health has described it as a multisystemic desease, with nineteen clinical characteristics saw in thirty patients [1]. We did perform several observations trying to explain the role of NK cells in such disease, helping the understanding of its pathogenesis. We were able to show a lower frequency of NK cells in AD-HIES. After constituting panels to address NK cytotoxic, adhesion, activation, and inhibition function, we were able to detect that cytotoxic markers NKp44, NKp46, and NKp30 are upregulated in AD-HIES, along with along with higher expression of perforin and CD107a, the latter after stimulation with K562 lineage cells. These results suggest that, even in the context of diminished percentages of circulating NK cells, the patients with AD-HIES present higher innate cytotoxic activity, which can be a consequence of the recurrent multiple infections. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientador : Giberto da Assunção Fernandes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T15:49:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ruocco_HeloisaHelena_D.pdf: 3955364 bytes, checksum: c05871913344ed857e9c81f61d86d467 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Centralmente aplicada, a Substância P (SP) interage com o sistema nervoso autônomo (SNA) e com o eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (IlliA). Sabendo-se que esses sistemas modulam a função imune inata e têm sido implicados na resposta inflamatória associada com doenças auto-imunes, os efeitos da administração de SP intracerebroventricular (i.c.v.) na quantificação de linfócitos e na atividade citotóxica"natural killer" (NK) de células esplênicas foram estudados na Encefalomielite Alérgica Experimental (EAE), um modelo de estresse inflamatório crônico. Neste trabalho investigou-se a influência da SP e do seu antagonista sobre as subpopulações celulares CD3+, CD4+, CD8+, CDJNKR-PI+, CD3~-PI+, quantificadas por citometria de fluxo e a atividade imunológica citotóxica NK, obtida por ensaio de liberação de cromo radioativo CrSI, no curso desse processo inflamatório. A possibilidade de avaliar a atividade do eixo IlliA nessa doença foi verificada pelas dosagens hormonais séricas do hormônio adrenocorticotrófico (ACTH) e corticosterona, e da arginina vasopressina (A VP), na eminência média. Os resultados mostraram que na EAE houve um aumento no baço nos subtipos celulares CD3+ (64,2 :!: 0,8 %), CD4+ (59,6 :!: 0,6 %), CD8+ (14,5 :!: 0,5 %) e CDTNKR-PI + (8,8 :!: 0,3 %) às custas de uma atividade esplênica citotóxica NK (5,2 :!: 0,6 %) significativamente menor que nos controles normais [CD3+ (47,8 :!: 2,2 %), CD4+ (45,6 :!: 1,3 %), CD8+ (10,7 :!: 0,4 %), CD3NKR-PI+ (4,9 :t 0,4 %), NKac (8,9 :!: 0,7 %), CD3~-PI+ (1,6:!: 0,2 %) , ACTH (10,2 :!: 1,4 pg/rnl), corticosterona (2,2 :!: O ng/rnl)]. Esses dados foram correlacionados a um aumento dos níveis plasmáticos de ACTH (92,2 :!: 38,5 pg/rnl) e corticosterona (152,1 :!: 42,5 ng/rnl). A administração de 20 nrnoles de SP aumentou a retenção de células CD4+ (5I,3:!: 1,7 %) e CD8+ (I5,0:!: 0,8 %) no baço, com um aumento da porcentagem de células CD3NKR-Pl+ (10,4 :!: 0,9 %) e conseqüente diminuição da citotoxicidade NKac (5,4 :!: 0,6 %) no pico dos sintomas clínicos, comparados aos controles salina [CD4+ (41,2 :!: 4 %), CD8+ (1I,8:!: 1,5 %), CD3NKR-PI+ (6,5:!: 1,7 %), NKac (7,6:!: 0,2 %), ACTH (47,1 :!: 6,1 pg/rnl), corticosterona (120,3 :!: 17,8 ng/rnl)]. Isto foi acompanhado por um decréscimo nos níveis dos hormônios adrenocorticotróficos (21,3 :f: 2,3 pg/rnl) e corticosterona (44,1 :f: 16,2 ng/mI). As células CD3~-P1+ [antagonista + salina (0,5 :f: 0,04 %) e antagonista + SP (0,6:f: 0,1 %)], um outro tipo celular implicado na auto-imunidade, foram reduzidas pela injeção do antagonista da SP, quando comparadas ao grupo salina (1,3 :f: 0,1 %), sugerindo um papel para a SP no fluxo migratório desse tipo celular no baço. Concluindo, os dados obtidos neste trabalho sugerem que a SP influencia o eixo HHA , podendo também modular o tráfego celular linfocitário e a resposta imune no baço e, portanto, deve ser um elemento importante nos processos de modulação da EAE / Abstract: Substance P centrally injected (ICV) in rats acts on the autonomic nervous system and the hypotha1amic-pituitary-adrenal axis (HPA) to moduJate innate llmnune function and iDf1ammatory response in autoimmune diseases. The effects of modulation in migration and in natural killer cell activity of splenocytes in these systems were studied in experimental allergic encephalomyelitis (EAE) a model of autoimmune disease which acts as a chronic inf1ammatory stress. The migration characteristics observed by flow citometry were ofthe CD3+, CD4+, CD8+, CD3+m<R-Pl+ and NKT splenocyte subpopulations. The innate llmnune function measured was that of the cytotoxic NK activity measured by CrSI liberation assay in the peak of the inflammatory processo The hypothaJamic-pituitaryadrenal axis alterations were measured by quanti.fying the plasma hormone levels of adrenocorticotropic hormone (ACTH) and corticosterone and the median eminence values of arginine vasopressin. In this chronic inflammatory model was observed an increased retention in the spleen ofCD3+ (64,2:J: 0,8 %), CD4+ (59,6:J: 0,6 %), CD8+ (14,5:J: 0,5 %) and CD3+m<R.-Pl+ (8,8:J: 0,3. %) cellular subtypes with a dimini~hed NK cytotoxic activity (5,2:J: 0,6 %) when compared to healthy control rats [CD3+ (47,8 :J: 2,2 %), CD4+ (45,6 :J: 1,3 %), CD8+ (10,7 :J: 0,4 %), CD3+m<R.-Pl+ (4,9 :J: 0,4 %), NK cytotoxic activity (8,9:J: 0,7 %), ACTH (10,2 :J: 1,4 pg/m1), corticosterone (2,2 :J: O ng/m1)].. There was a inverse correlation with high levels of ACTH (92,2 :J: 38,5 pg/ml) and corticosterone (152,1 :J: 42,5 ng/ml): Substance P 20 nanomols ICV injected also increased the retention ofCD4+ (51,3 :J: 1,7 %), CD8+ (15,0:J: 0,8 %) and CD3+m<R-~I+ (10,4:J: 0,9 %) in the spleen ofEAE rats with a lower NK cytotoxic activity (5,4 :J: 0,6 %) in the peak ofthe clínical symptoms and decreased levels of ACTH (21,3 :J: 2,3 pg/ml) and corticosterone (44,1 :J: 16,2 nglml) when compared to injected saline controls [CD4+ (41,2 :J: 4 %), CD8+ (11,8 :J: 1,5 %) and CD3-+m<R-Pl+ (6,5 :J: 1,7 %) NK cytotoxic activity (7,6:J: 0,2 %), ACTH (47,1 :J: 6 pglm1), corticosterone (120,3 :J: 17,8 ng/m1) ]. When treated with a substance P antagonist NKT cells presented a decreased splenic retention [antagonist + saline (0,5 :J: 0,04 %) e antagonist + SP (0,6 :J: 0,1 %)] when compared to saline-treated group (1,3 :J: 0,1 %), suggesting a role for substance P in the migration control ofthis type of cell. We can conc1ude that the results ofthis work suggest a role for substance P in the moduJation of the HP A axis, to the lymphocyte traffic control and to the innate immune response in chronic autoimmune inflammatory diseases / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador : Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T06:06:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_ElianeAparecidadeAndrade_M.pdf: 3877752 bytes, checksum: 8e8fdcf07bdeab337b2c3cf008f23e49 (MD5) Previous issue date: 2002 / Mestrado

Orientador : Mary Luci de Souza Queiroz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-01T16:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valadares_MarizeCampos_D.pdf: 1218609 bytes, checksum: 217724b78283c81f36fd717fc91a9735 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Neste trabalho, dando prosseguimento a estudos prévios realizados em nosso laboratório investigamos os efeitos do composto diciclopentadienildiclorotitânio IV, DDCT, (15 mg/kg/dia/ dois dias) sobre a capacidade funcional das células ¿natural killer¿ (NK) e a produção das citocinas do perfil Th1 [interleucina (IL)-2 e interferon-g (IFN-g)] e do perfil Th2 (IL-4 e IL-10) de animais normais e portadores do tumor ascítico de Ehrlich (TAE). Além disso, para efeito comparativo, acrescentamos ao nosso estudo o diciclopentadienilditiocianatotitânio IV, BCDT, o qual é um derivado do DDCT com substituições dos radicais halogênios do DDCT por pseudo-halogênios. Com o composto BCDT, além dos parâmetros imunológicos acima mencionados, avaliamos, os efeitos do tratamento com uma, duas e três doses de BCDT (10, 15 ou 30 mg/kg/dia) sobre o crescimento e diferenciação de precursores hematopoiéticos [Células formadoras de colônias de granulócitos/macrófagos (CFU-GM)], de animais normais e portadores do TAE, os quais foram previamente realizados com o DDCT. Nestes animais, avaliamos ainda a celularidade da medula óssea, a presença de fatores estimuladores de colônias hematopoéticas (CSFs ) e a sobrevida. Nossos resultados demonstraram uma maior eficácia do composto DDCT em relação ao BCDT. No entanto, apesar das diferenças encontradas, verificamos que estes titanocenos compartilham a habilidade de regular positivamente os desequilíbrios hematopoiéticos e imunológicos envolvidos na evolução temporal do TAE. Como já esperado, o TAE produziu, concomitante à mielossupressão, um aumento no número de CFU-GM esplênico e uma diminuição da celularidade da medula óssea. O tratamento dos animais portadores do TAE com o BCDT produziu, de forma dose-dependente, paralelamente a um aumento na sobrevida, um aumento da mielopoiese, uma redução no número de colônias esplênicas e uma restauração no número total e diferencial da medula óssea. A maior eficácia foi encontrada com a dose de 10 mg/kg/dia/ três dias, a qual, em animais normais, produziu melhor recuperação no número de CFU-GM na medula óssea e estimulou a produção de CSFs. Efeitos tóxicos foram observados nas maiores doses do composto associado à presença de hematopoiese esplênica e uma menor sobrevida dos animais. Quanto à produção das citocinas, o tratamento com os compostos impediu a polarização Th1-Th2 encontrada nos animais portadores do TAE. Neste sentido, o tratamento destes animais com o DDCT (15 mg/kg/dia/por dois dias) ou com o BCDT (10 mg/kg/dia/por 3dias), aumentou os níveis de secreção de IL-2, regulou positivamente a secreção atípica de IFN-g e reduziu os níveis de IL-10 aumentados durante a evolução temporal do TAE. O estudo da atividade funcional das células NK em animais portadores do TAE e tratados com os titanocenos demonstrou, especialmente com o DDCT, um aumento na capacidade citotóxica das células NK, a qual se encontrava reduzida. Estes resultados são encorajadores, uma vez que favorecem a utilização dos titanocenos em combinações terapêuticas com outros quimioterápicos visando reduzir a mielotoxicidade e suplementar a eficácia tumoricida destes agentes / Abstract: In this work, as a continuation of previous studies in our laboratory, we investigated the effects of the titanocene dicyclopentadienyldichlorotitanium IV compound, DDCT, (15 mg/kg/day/ per two days) on the natural killer cell activity (NK) and on Th1 [interleukin (IL)-2 and interferon-g (IFN-g)] and Th2 (IL-4 and IL-10) responses in normal and Ehrlich ascites tumor (EAT)-bearing mice. Moreover, for comparative effect, we also studied the dicyclopentadienylditiocianatetitanium IV, BCDT. The structural difference between these compounds is the substitution of the halides halogens present in DDCT by pseudo halogens in BCDT. With the BCDT compound, besides the immunological parameters mentioned above, we evaluated the effect of the treatment using one, two or three doses of BCDT (10, 15 or 30 mg/kg/day) on the growth and differentiation of granulocyte-macrophage progenitor cells [colony-forming units of granulocyte-macrophage (CFU-GM)], of normal and EAT-bearing mice. As studied previously with the DDCT compound, we also evaluated the bone marrow cellularity, the presence of colony stimulating factors (CSFs) and survival of these animals. Our results demonstrated that the DDCT compound is more effective than the BCDT one. In despite of the differences found, we observed that these compounds share the ability of regulating positively the hematopoietic and immunologic unbalance during the EAT evolution. As expected for the EAT-model, concomitant myelosuppression, increased number of spleen CFU-GM and changes in bone marrow cellularity were observed. The treatment of EAT-bearing mice with BCDT produced a dose-dependent increase in myelopoiesis, a reduction in splenic colonies and a restoration of the total and differential marrow cell counts. In addition, BCDT treatments also increased the survival of these animals. The most effective dose schedule was 10 mg/kg/day/per three days, which, in normal animals, also produced increased bone marrow CFU-GM numbers along with a CSF production boost. High doses of BCDT cause toxic effects and induced extramedular hematopoiese. Regarding the production of cytokines, the treatment with the titanocene compounds blocked the Th1-Th2 polarization found during the EAT progression. In this respect, the treatment of these animals with DDCT (15 mg/kg/day/per two days) or BCDT (10 mg/kg/day/per three days) increased the IL-2 levels, regulated the atypical IFN-g secretion positively and reduced the levels of IL-10, increased during the temporal evolution of EAT. In relation to the functional activity of NK cells, the treatment with both compounds enhanced the NK cell function, reduced during the EAT growth. Only the DDCT compound rescued to normal values the activity of NK cells. These up-modulatory effects demonstrated in this study, specially using the DDCT compound, indicated a new aspect of the antitumoral action mechanism of the titanocenes. Thus, it is encouraging, in this context, to consider these compounds for combination chemotherapy, protecting the host from hematotoxicity as well as supplementing tumoricidal efficacy / Doutorado / Doutor em Farmacologia

PITOMBEIRA, Alaíde da Silva. Estudo sobre sepse neonatal : avaliação dos parâmetros hematológicos e de subpopulações linfocitárias em recém-nascidos sépticos e não-sépticos. 2006. 77 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2006. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-06-24T11:44:25Z No. of bitstreams: 1 2006_dis_aspitombeira.pdf: 642210 bytes, checksum: 95d0b961fc5143cc67a25b063676a24b (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-06-24T12:43:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_dis_aspitombeira.pdf: 642210 bytes, checksum: 95d0b961fc5143cc67a25b063676a24b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-24T12:43:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_dis_aspitombeira.pdf: 642210 bytes, checksum: 95d0b961fc5143cc67a25b063676a24b (MD5) Previous issue date: 2006 / Neonatal sepsis is one of the most important cause of death of the newborn admitted to the Intensive Care Units; hence, the identification of the prognostic factors of this disease becomes very relevant in the follow up and evaluation of the patients. The aim of this study was to evaluate the hematological parameters and the lymphocyte subpopulations of the newborn with sepsis; in order to identify those parameters that may correlate with the onset of this neonatal disease. Twenty one newborns admitted to the ICU of the Albert Sabin Children’s Hospital, and a group of 10 healthy newborns from the Obstetric Center of the Angeline General and Maternity Hospital, were studied. In the two groups, red cells, hematocrit, hemoglobin, platelets, total and differential leukocytes, absolute and relative T and B cells; as also the blood PCR values in the septic newborn, were determined. In addition, NK, B, TCD4+ and TCD8+ cell numbers were evaluated by immunophenotyping, using their respective markers CD56, CD19, (CD3 + CD4) and (CD3 + CD8). The data were expressed as variation and mean  SD, and analyzed by Student’s T test, at the significance level of p = 0.05. Significant differences were not observed between septic and non-septic newborn, in the mean values of the parameters: red cells, hematocrit, hemoglobin, platelets, total lymphocytes, and T, B, T CD4+, TCD8+ lymphocytes. Total leukocyte counts were elevated in septic newborns (18.080  9.210/µL in septic patients, against 12.040  3.980/µL in controls; the difference between the means significant, p = 0.0166); due, principally, to increase of circulating polymorphic neutrophils. PCR levels were elevated in newborns with fatal sepsis; as compared to those of septic newborns who responded to treatment (fatal sepsis: 38,00  13,15 mg/L; non-fatal sepsis: 13,00  8,83 mg/L – the differencea between the means highly significant, p < 0,01). The NK cells were highly significantly reduced in septic newborns (80  80/µL; v 250  220/µL dos controles; p = 0,0041). Of the septic cases, the mean NK values for those who responded to treatment was 32 20/µL; against 120  80,90/µL for those with fatal sepsis. Both these values were below that of the control group; but the difference between the means of the two subgroups of the septics was significant (p = 0,0124). These results suggest that NK cells were reduced significantly in septic newborn; irrespective of their response to treatment, or not. However, the true significance of the oscillation of NK cell numbers in neonatal sepsis could not be evaluated in this study, because of the small numbers of septic newborns available for the subgroups under study. Investigations with much larger number of cases of septic newborns could better define the real role of NK cells in sepsis and its evolution to fatality. / A sepse neonatal é uma das mais importantes causas de óbito de recém-nascidos (RNs) internados nas Unidades de Tratamento Intensivo (UTI). Deste modo, torna-se relevante a identificação de fatores prognósticos no acompanhamento e avaliação desses pacientes. O objetivo deste estudo é determinar os valores hematológicos e as sub-populações dos linfócitos dos RNs sépticos, procurando identificar aqueles parâmetros que correlacionem com a incidência e evolução da sepse no RN. A população analisada foi constituída por 21 RNs sépticos admitidos na CTI do Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS) e um grupo controle de 10 RNs saudáveis do Centro Obstétrico do Hospital Geral e Maternidade Angeline (HGMA). Foram avaliados nos RNs dos dois grupos (casos e controles), as contagens de hemácias, hematócrito, hemoglobina, plaquetas, contagens total e diferencial de leucócitos, e contagens absolutas e relativas dos linfócitos T e B; além dos valores de PCR nos RNs sépticos. Adicionalmente, foram avaliados os linfócitos nulos (NK), células B, TCD4+ e TCD8+, pelo método de imunofenotipagem, utilizando-se os marcadores CD56, CD19, (CD3+CD4) e (CD3+CD8) respectivamente. Os resultados foram expressos em variação e média  DP, e avaliados pelo teste T, ao nível de significância de p = 0,05. Não foram constatadas diferenças estatísticamente significantes, entre RNs sépticos e não sépticos, quanto aos valores de hemácias, hematócrito, hemoglobina, plaquetas, linfócitos totais, e células T, B, T CD4+ e TCD8+. A contagem de leucócitos totais se mostrou elevada em RNs sépticos, 18.080  9.210/mm3, contra 12.040  3.980/µL nos controles (valores médios significativamente diferentes, p = 0.0166), devido, principalmente, ao aumento de neutrófilos circulantes. Os valores de PCR dos RNs que foram ao óbito estavam elevados, em comparação aos valores dos sépticos que responderam ao tratamento (sépticos que foram a óbito: 38,00  13,15 mg/L; sépticos que responderam ao tratamento: 13,00  8,83 mg/L – a diferença entre as médias altamente significativa (p < 0,041). Os linfócitos NK apresentaram uma diminuição significativa no grupo de RNs sépticos (80  80/µL; v 250  220/µL dos controles; p = 0,0041). Dos sépticos, o valor médio dos casos que responderam ao tratamento foi de 32 20,00/ µL; contra 120  80,90/µL para sépticos que foram a óbito. Ambos os valores se situam abaixo do valor para o grupo controle, porém a diferença entre as médias desses dois subgrupos de sépticos é significativa (p = 0,0124). Esses dados mostram que os NK dos sépticos apresentam valores significativamente abaixo dos controles, independente da resposta desses ao tratamento. Porém, o real significado da oscilação dos valores de NK entre os sépticos que responderam ao tratamento e os que foram a óbito, não pôde ser avaliado devido aos pequenos números de RNs que compuseram esses grupos de estudo. Investigações com maior número de casos de sepse podem melhor definir a possível relação da célula NK com a evolução e o óbito do recém-nascido com sepse.

SOLON, Vitória Régia Magalhães. Estudo das subpopulações linfocitárias em sangue periférico de pacientes com hanseníase. 2012. 78 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-05T12:08:54Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_vrmsolon.pdf: 935285 bytes, checksum: a169aa20171b463c5e9f2e88152b971a (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-05T12:09:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_vrmsolon.pdf: 935285 bytes, checksum: a169aa20171b463c5e9f2e88152b971a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-05T12:09:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_vrmsolon.pdf: 935285 bytes, checksum: a169aa20171b463c5e9f2e88152b971a (MD5) Previous issue date: 2012 / Leprosy is a chronic infectious disease caused by the Mycobacterium leprae, a resistant alcohol-acid bacillus. It has a high infectivity, although the pathogenicity is low. Clinical manifestations present a great diversity. Host immune response is an important determinant of this clinical diversity, whilst lymphocytes collaborate to it. Thus, the present study aimed to describe lymphocyte subpopulations: T lymphocytes (CD3+), T helper lymphocytes (CD4+), T cytotoxic (CD8+), T CD4+CD8+, B (CD19+), Natural killers-NK (CD3- CD16+ CD56+) and T Natural killers - NKT (CD3+CD16+ CD56+) in peripheral blood samples from patients with leprosy, before and after the treatment with multidrugtherapy. Patients were selected at the Dona Libania Dermatology Center, at Fortaleza-CE, Brazil. The determination in each subpopulation of lymphocytes was done by flow-cytometer and statistical analysis by GraphPad Prism 5.0 for Windows. Significance was established at p values of <0.05. A total of 133 samples were studied, while 79 (59,4%) were males and 54 (40,6%)females. Median age of patients was 43 years old for the group before treatment and 46 years old for the group after treatment. Nine patients presented with paucibacillary and 124 with multibacillary form. NK (CD3-CD16+ CD56+) lymphocytes medians cells/mm³) were 142.0 [15,0–463,0] and 189,5 [18,0 – 1037,0], respectively for the groups before and after treatment, with a p value of 0.0484. On the other hand, no differences were observed when pauci and multibacillary groups were compared. T lymphocytes (CD3+), T helper lymphocytes (CD4+), T cytotoxic lymphocytes (CD8+), T (CD4+CD8+), B lymphocytes (CD19+) and NKT lymphocytes (CD3+CD16+CD56+)were similar at the groups before and after treatment and also at pauci and multibacillary. In conclusion, data from this study shows a reduction at NK lymphocytes (CD3-CD16+CD56+) populations in leprosy before any therapeutical intervention. After leprosy treatment, a recovery of this cell population occurs. / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae, um bacilo álcool-ácido resistente. Tem alta infectividade, porém baixa patogenicidade, e quando se manifesta, apresenta-se sob uma grande diversidade de formas clínicas. Essa diversidade depende, em grande parte, da resposta imunológica do hospedeiro, sendo os linfócitos, em sua plasticidade, componentes essenciais no desenvolvimento da imunidade. Assim, este trabalho teve como objetivo descrever as subpopulações linfocitárias: linfócitos T totais (CD3+), T auxiliares (CD4+), T citotóxicos (CD8+), T CD4+CD8+, B (CD19+), Natural killers-NK (CD3- CD16+ CD56+) e T Natural killers - NKT (CD3+ CD16+ CD56+) no sangue periférico de pacientes portadores de hanseníase, antes e após uso da multidrogaterapia. Os pacientes foram selecionados no Centro de Dermatologia D. Libânia, Fortaleza-CE, Brasil. A determinação de linfócitos em cada subpopulação foi realizada por citômetria de fluxo e análise estatística pelo programa GraphPad Prism 5.0 para Windows. A significância foi estabelecida para valores de p<0,05. Um total de 133 amostras foram utilizadas para as comparações, sendo 79 (59,4%) do gênero masculino e 54 (40,6%) do gênero feminino. A mediana da idade dos pacientes foi de 43 anos no grupo pré-tratamento e de 46 anos no pós-tratamento. Nove pacientes foram incluídos na forma paucibacilar e 124, na multibacilar. As medianas das contagens (células/mm3) de linfócitos NK (CD3-CD16+ CD56+) nos grupos antes e após tratamento foram 142,0 [15,0–463,0] e 189,5 [18,0 – 1037,0], respectivamente (p=0,0484), enquanto não houve diferenças quando foram comparados os grupos pauci e multibacilar. As contagens de linfócitos T totais (CD3+), T auxiliares (CD4+), T citotóxicos (CD8+), T (CD4+CD8+), B (CD19+), e NKT(CD3+CD16+CD56+) mantiveram-se inalteradas nos grupos antes e pós-tratamento, assim como nos grupos pauci e multibacilar. Em conclusão, os resultados deste estudo apontam para uma redução na população de células NK (CD3-CD16+CD56+) em indivíduos com hanseníase antes de qualquer intervenção terapêutica. Após o tratamento, há uma recuperação na contagem desta população celular.

Sá, Kelvia Miranda. Imunoexpressão de marcadores de linfócitos natural killer (nk), cd16+ e cd56+, em biópsias cutâneas de pacientes com hanseníase. 2015. 89 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-16T16:22:48Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_kmsá.pdf: 1739711 bytes, checksum: 871a53040708714d705afaf7a43824ac (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-16T16:24:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_kmsá.pdf: 1739711 bytes, checksum: 871a53040708714d705afaf7a43824ac (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T16:24:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_kmsá.pdf: 1739711 bytes, checksum: 871a53040708714d705afaf7a43824ac (MD5) Previous issue date: 2015 / Immune response to M leprae is determinant to leprosy evolution and NK cells are important constituents of the innate immune response and can contribute to the adaptive response activation. The aim of this study was to evaluate the immunoexpression of NK cells markers CD16+ and CD56+ in skin lesions of patients with leprosy, before any treatment. A total of 54 skin biopsies of patients with leprosy were evaluated by immunohistochemistry using rabbit anti-human CD16a (clone SP189) from Spring Bioscience® and mouse anti-human CD56 (clone 123C3) from Dako®, together with Envision Flex kit from Dako®. Nineteen cases were from tuberculoid (TT) clinical form, 14 were borderline (BT, BB, BL) and 20 were lepromatous (LL), while one case was from indeterminate form (I). Among them 31 (57,4%) were from male gender and 30 (55,5%) presented positive baciloscopy. The samples were collected at the “Centro de Dermatologia Dona Libânia” in Fortaleza, Ceará, Brazil, and were analysed at the “Laboratório de Técnicas Cito-histopatológicas Especiais do Departamento de Patologia e Medicina Legal da Universidade Federal do Ceará”. Positive controls for the CD16 and CD56 expression were lung tissue and carcinoid tumor, respectively. Fisher, Chi-square, Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests were used to statistical analysis and a p value of <0.05 was considered significant. Differences were observed when expression of CD16+ cells was compared between tuberculoid and borderlines forms (p=0.0329), as also among gender comparisons (p=0.0129). The CD16+ cells in the three different clinical forms groups were also statistically different achieving a p value of 0.0085, and showing a higher median of expression of CD16+ in the TT group. These data suggests that a protective immune response against M. leprae in leprosy requires a balance between NK cells subgroups (CD16+ and CD56+) and that the tuberculoid form presents higher levels of CD16+ cells expression when compared to borderlines and LL forms. In addition, the study suggests that there are possible hormonal or genetic influences on the distribution of NK cell function markers. / A resposta imunológica ao Mycobacterium leprae é componente determinante na evolução da doença. As células Natural Killer (NK) são constituintes importantes da resposta imune inata, podendo participar da ativação da resposta adaptativa. Este estudo objetivou avaliar a imunoexpressão de marcadores de células NK, CD16+ e CD56+, em lesões cutâneas de pacientes com hanseníase antes do tratamento, por imunoistoquímica. Foram analisadas 54 biópsias cutâneas de lesões de paciente com hanseníase. Sendo 19 casos da forma clínica tuberculóide (TT), 14 da forma borderline (BT, BB e BL) e 20 da forma lepromatosa (LL) e 1 caso da forma clínica indeterminada (I). Destes pacientes 31 (57,4%) eram do gênero masculino, 30 (55,5%) eram baciloscopia positiva. As amostras foram provenientes do Centro de Dermatologia Dona Libânia e analisadas no Laboratório de Técnicas Cito-histopatológicas Especiais do Departamento de Patologia e Medicina Legal da Universidade Federal do Ceará. Para a imunistoquímica foram utilizados os anticorpos monoclonais primários: rabbit anti-human CD16a (clone SP189) da Spring Bioscience® e o mouse anti-human CD56 (clone 123C3) da Dako®, juntamente com o kit Envision Flex da Dako®. Os controles positivos para CD16 e CD56 foram obtidos a partir de secções de tecidos de pulmões e tumor carcinóide, respectivamente. Os testes de Fisher, Qui-quadrado, Kruskal-Wallis e Mann-Whitney foram utilizados para análise estatística, sendo considerado significante quando p<0,05. A comparação entre a imunoexpressão de CD16+ em linfócitos teciduais da forma tuberculóide em relação às formas borderlines apresentou diferenças estatísticas significantes (p=0,0329), como também em relação ao gênero (p=0,0129). Através do teste Kruskal-Wallis, comparando os três grupos das formas clinicas da doença em relação ao número de células imunomarcadas com CD16+, foi observado que a mediana do grupo tuberculóide foi maior, conferindo p=0,0085. Pode-se concluir que o estudo sugere que uma resposta imunológica protetora na hanseníase requer um equilíbrio entre subgrupos de células NK CD16+ e CD56+, e que a forma tuberculoide cursa com predomínio dessas células NK citotóxicas quando comparadas às formas borderline e lepromatosas. Em adição, o estudo sugere que há possíveis influências hormonais ou genéticas na distribuição destes marcadores de função de células NK.

Orientadores: Aureo Tatsumi Yamada, Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:05:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bizinotto-Assuncao_MarciaCristina_M.pdf: 6104041 bytes, checksum: 3ffb92d94cec782124d560cb2a5a0ffb (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Durante a gestação de roedores é observado, na região mesometria! de cada sítio de desenvolvimento embrionário, um acúmulo transitório de células linfocitárias da Hnhagem natural killer (NK). Estas células Natural Ki!ler de ambiente uterino (NK-u) apesar de expressarem antígenos de superfície semelhante as demais Nk, não desencadeiam a atividade cito!ítica como as Nk de sangue circulante. Este comportamento peculiar não foi ainda explicado o que vem dificultando a compreensão das possíveis participações destas células na imunoiogia da reprodução. A citoquímica de lectina OSA (Dofichos bíflorus aggfutin), tem sido utilizada para a marcação se!etiva das células NK-u de camundongos. Uma vez que esta lectina não reage com outros linfócitos, os glicoconjugados reativos a [ectina OBA, localizados na superfície das NK-u, poderiam ser moléculas especificas desta Hnhagem celular. Porém estes glicoconjugados não foram ainda isolados ou caracterizados. Neste trabalho, propôs-se a obtenção de anticorpos específicos para o reconhecimento de céiulas Nku de camundongos além de procurar identificar moléculas de expressão específica destas células. Para tanto as cé!ulas NK-u, isoladas de úteros de camundongos prenhes foram utilizadas como inócu!o antigênico em machos da mesma espécie. Apenas um dentre os seis camundongos imunizados produziu anticorpos que reagiram com as células NK_u, por meio de testes imunocitoquímícos. Do animal receptor que apresentou resposta imune, produzindo anticorpos reativos às células NK-u, foram obtidos os linfócitos espJênicos empregados na obtenção de hibridomas através da fusão com céluJas tumorais. Quatro hibridomas foram selecionados para a obtenção de líquido ascítico contendo anticorpos monoclonais. A especifiddade dos antícorpos obtidos foi avaliada por métodos imunocitoquímicos e imunoquímicos (westem b/otting). Entre os quatro clones selecionados (2C6.289, 2C6.2E4 2C4.1C10 e 2C4.5A10), dois apresentaram marcação tanto na superfície quanto no conteúdo citoplasmátíco das NK-u (2C4.1C10. 2C4.5A10), enquanto os outros dois marcaram apenas o conteúdo citoplasmático (2C6.2S9, 2C6.2E4). Pelos testes imunoquímícos realizados, os antícorpos produzidos pelos dones 2C4.1C10 e 2C4.5A 10 identificaram bandas de 52,0 KDa e 53,8 KOa e os anticorpos dos dones 2C6.289 e 2C6.2E4 identificaram uma banda de 41,4 KDa, que apresentam correspondência com bandas positivas à lectina DBA. o fato da imunização intraespécíe, com o uso de células NK-u inteiras ter resultado na produção de anticorpos contra estas células, toma-se a primeira evidência direta de que as células NK-u fazem parte de uma linhagem específica da gestação, as quais expressam moléculas exclusivas, reconhecidas como "non-self' pelos machos da mesma espécie. Dentre os c!ones de hibridomas produtores de anticorpos monoclonais aqueles que reconhecem estruturas de superfície das células NK-u podem ser utilizados como potenciais marca dores dessas células em camundongos, uma vez que reconhecem giicoconjugados também reativos à Jectina DBA, que seriam expressos exclusivamente por estas células / Abstract: During the pregnancy in the rodents a transient accumulation of natural killer (NK) cells 1s seen In the uterus. These cells found in the uterine environment express the surface antigen common to drculating NK (cNK) cells, but they do not show some cytokine receptors and do not trigger the cytoJytíc activity during normal pregnancy. Such a peculiar behavior of uNK ceH has not beeo fuUy explained aod their role io the immunoiogy of reproduction 1s stH! unc!ear. It has been reported the use of OBA (Dofichos bifJorus) lectin cytochernistry for selective staining of mouse uNK cel!. Since thís lectin does not react with othar !ymphocytes, the g!ycoconjugates reactive to OBA iectin localized on uNK cel! surface could be specific mo!ecules of such a cal! lineage. However, the glycoconjugates reactive to OBA lectin have no! been isolated ar characterized yet. The present work was proposed to obtain antibodies specific agaínst mouse uNK cel! and iooking identify mo!ecules of specific expression for. In this aim, the whole uNK ce!ls isolated from pregnant mice uterus were used as antigen and male mice of sarne strain, as host. From the animal producing antibodies against mouse uNK cell were collected the spleen and further processed to isolate the Iymphoeytes dones producing the monoclonal antibody (mAb) and the hybridomas of four clones were producad the ascites. The specificities of antibodies were evaluated by immunocytochemistry and immunoblotting. Only one among six immunized miee produced antibody against mouse uNK eells evaluated by immunocytochemistry. Four dones showing two different JabeJing pattern by immunocytochemistry were chosen to obtain ascites. The two (2C6.2B9, 2C6.2E4) clones producing mAS against uNK ceU cytop!asm eontents showed one positive band (41,4 KDa) in the westem blot matched to the DBA lectin positive bands. The other two ciones (2C4.1C10 e 2C4.5A 10) producJng mAb reacting on ceil surface and cytoplasm contents showed two positive bands (52,0 KDa and 53,8 KDa) corresponding to OBA lectin positive bands. Therefore, the antibody production against uNK cells afier intra-specie inoculation is the first direct evidence showíng uNK cells as being a cel! !ineage specific of pregnancy, which express specific molecules recognízed as non-self by male of the sarne strains. Among the mAb obtained, those reactive to antigen localized on call surface could be used as specific ceH marker of uNK once recognize the same glycoconjugates reactive to DBA lectin tha! seems to be expressed only by this cell / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Malacrida_SolangeAparecida_D.pdf: 2637555 bytes, checksum: 4cab03e4ab1ef1f1045bcc26432ea8fe (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Neste trabalho, investigamos o efeito do extrato de Maytenus i/icifolia Mart. ex Reissek (ES), sobre o crescimento e diferenciação de precursores hematopoeticos para granulócitos e macrófagos (CFU-GM) da medula óssea e do baço, a atividade estimuladora de colônias do soro de animais infectados com dose sub-Ietal (5xI03 BaclmL) de Listeria monocytogenes, a atividade das células "natural killer" (NK) e a produção de INF-y. Redução significativa no número de CFU-GM da medula óssea foi observada na fase inicial da infecção em paralelo a um aumento significativo na hematopoése esplênica. O tratamento dos camundongos, com as doses de 250, 500 e 1000 mgIKgldia por 5 dias anteriores .à infecção, estimulou a produção de CFU-GM na medula óssea, reduziu, aos níveis normais o número de CFU-GM no baço e aumentou a atividade hematopoética do soro. A presença da infecção estimulou a produção de IFN-y e a atividade lítica das células NK nestes animais, o tratamento com as três doses do extrato de ES utilizando-se o mesmo protocolo anterior, potencializou a produção de IFN-y e a atividade lítica das células NK, sendo este efeito mais marcante às 48 horas para as células NK e às 72 horas para o IFN-y . A avaliação da eficácia terapêutica do extrato de ES, avaliada através da resistência produzida em camundongos infectados com dose letal da bactéria (5xI05 BaclmL), demonstrou proteção de 40% com a dose de 1000 mglKg e 30% com a dose de 250 mgIKg, sendo que esta diferença entre as doses não foi significativa. Nossos resultados demonstram que o extrato de ES pode aumentar a resistência antibacteriana na listeriose através da geração de CFU-GM, da produção de IFN-y e do aumento na atividade lítica das células NK / Abstract: In this work, we have investigated the effects of Maytenus ilicifolia Mart. ex Reissek (ES) extract on the growth and differentiation of bone marrow and spleen granulocyte- macrophage progenitor cells (CFU-GM), serum colony stimulating activity (CSA), natural killer (NK) cell activity and IFN-y production in a Listeria monocytogenes infected mice.A significant rOOuction in the CFU-GM number was observed in the initial phase of the infection with sublethal dose of (5x103 baclrnL), in parallel to a signiticant increase in the spleen hematopoiesis. The treatment of mice with 250, 500 and 1000 mg/Kg/day ES extract for tive days prior to the infection stimulated bone marrow myelopoiesis, reduced to normal levels CFU-GM number in the spleen and increased the serum colony stimulating activity. The infection enhanced IFN-y levels and NK cell activity. Treatment with ES extract using the same dose schOOule presented above, 100 to further increases in IFN-y levels and NK cell activity. Peak levels of IFN-y was seen at 72 h after the infection and NK cell activity was mostly increased at 48 h after the infection. Evaluation of the therapeutic efficacy of the ES extract, evaluatOO by the resistence of infected mice exposed to letha1 dose of the bacteria (5x10s BaclmL), resulted in protection of 400.10 with dose of 1000 mg/Kg and of 30% with 250 mg/Kg. Difference between the doses was not significant. Our results show that ES extract can increase antibacterial resistance in the listeriosis by modulation of CFU- GM generation, increased IFN-y production and lytic NK cells activity / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T20:11:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 270312.pdf: 1276526 bytes, checksum: df4944e102b03f66313ae4454f115adf (MD5) / Embora adenovírus (Ad) humano do sorotipo 5 tenha sido utilizado como vetor vacinal contra inúmeras doenças infecciosas, a população humana apresenta imunidade pré-existente contra estes vírus. Para transpor este problema, Ad de outras espécies animais, tal como o Ad isolado de chimpanzés do sorotipo 6, denominado AdC6, tem sido utilizado. No entanto, existem poucos estudos sobre a resposta imune induzida por AdC6 em tecidos de mucosas. Este estudo avaliou células T ?/d e células NK das mucosas do trato genital de camundongos BALB/c após imunização intravaginal com o vetor AdC6 expressando a proteína Gag do HIV-1 (AdC6gag37). Análises de citometria de fluxo demonstraram que imunização com 1010 partículas virais de AdC6gag37 aumentou a frequência e o número de células T ?/d nas mucosas do trato genital. O número de células T ?/d atingiu seu pico três dias após a imunização, uma resposta que decresceu no sétimo dia. Além disso, detectou-se aumento relevante da expressão do marcador de ativação CD69 em células T ?/d do trato genital. Entretanto, não houve alteração na expressão da molécula CD25. Adicionalmente, para investigar o perfil de expressão gênica após exposição ao vetor adenoviral, células T ?/d do trato genital de camundongos imunizados foram isoladas magneticamente e avaliadas através de PCR em tempo real. Observou-se que AdC6gag37 foi capaz de aumentar a expressão de genes (1) relacionados com mecanismos de citotoxicidade mediado por células, tais como perforina e granzima B, (2) citocinas pró-inflamatórias, IL-6 e IL-12 e (3) quimiocinas CXCL-10, CCL5, CCL3 e CCL4. Demonstrou-se também que imunização com AdC6gag37 (105 e 107 partículas virais) foi capaz de induzir aumento expressivo na freqüência e no número de células NK do trato genital. Estes resultados indicam que AdC6gag37 modula a freqüência e o número de células T ?/d e células NK nas mucosas do trato genital e sugerem que estas células podem influenciar a resposta imune durante a imunização.