Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-11Bitstream added on 2014-12-02T11:21:06Z : No. of bitstreams: 1 000796267.pdf: 2331595 bytes, checksum: a54fbece3e4646af27b186ebe1b5047b (MD5) / Dada à necessidade de uma efetiva barreira tecidual precoce ao redor dos implantes osseointegrados, o presente estudo avaliou, in vitro, a influência das características físicas e químicas de materiais simulando superfícies de abutments de implantes em titânio (T) e zircônia (ZrO2) na adesão de células epiteliais gengivais OBA-9. Para este estudo foram utilizados espécimes em forma de discos (n=13) de titânio e zircônia, e como controles positivo e negativo, discos de esmalte bovino (EB) e lamínulas de vidro (LV), respectivamente. Foram avaliadas previamente a adesão celular a rugosidade superficial (Ra), energia livre de superfície (ELS) e os elementos químicos presentes na superfície identificados por meio de Espectrômetro de raios-X por Dispersão de Energia em Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV). Após a adesão celular em 1 e 24 horas, foram avaliadas a viabilidade celular por meio do MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide); e a morfologia das células aderidas sobre as superfícies por meio de MEV. Os dados de viabilidade celular foram avaliados estatisticamente pelo teste de ANOVA a dois critérios fixos (“material” e “período de análise”), enquanto os dados de ELS foram submetidos aos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, considerando um nível de significância de 5%. A superfície de T obteve o maior valor de ELS com 6,2N/m, seguida pela ZrO2 com 5,8N/m, LV com 4,9N/m, e com o menor valor o EB com 4,7N/m. Foi observado que os fatores material (p=0,336) e período de análise (p=0,400) não apresentaram efeito sobre os dados de viabilidade celular, assim como a interação entre eles (material*período de análise, p=0,559). A análise da morfologia celular mostrou que as células aderidas às superfícies de T e ZrO2 apresentaram espraiamento semelhante, sendo este maior quando comparado as superfícies de EB e LV. Concluiu-se que não houve diferença entre a adesão... / Given the need for effective early mucosal barrier around dental implants, the present study evaluated, in vitro, the influence of physical and chemical characteristics of materials simulating abutments implants surfaces in titanium (T) and zirconium (ZrO2) on gingival epithelial cells OBA-9 adhesion. For this study, disks-shaped samples (n=13) of titanium and zirconium were tested, and as positive and negative control groups, bovine enamel disks (BE), and glass coverslips (GCS), respectively. Previously the cellular adhesion surface roughness (Ra), surface free energy (SFE) and the chemical composition of specimens by X-ray Spectrometer Dispersive Energy in Scanning Electron Microscope (SEM) were evaluated. After the periods of cellular adhesion, 1 and 24 hours, the cellular viability was evaluated by MTT Assay (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) and the morphology of the epithelial cells adhered to the surfaces was analyzed using the SEM. The data of cell viability were statistically evaluated by two-way ANOVA (Material and period of analysis), while the SFE data were submitted to Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests, considering a significance level of 5%. The T specimens showed the highest values of SFE (6.2 N/m), followed by ZrO2 (5.8 N/m), GCS (4.9 N/m), and BE (4.7 N/m). It was observed that the factors material (p = 0.336) and periods of analysis (p = 0.400) showed no effect on cell viability data, as well as the interaction between them (material* period of analysis, p = 0.559). The analysis of cell morphology showed that cells adhered to the T and ZrO2 surfaces presented similar spreading, which was higher compared to the BE and GCS surfaces. It was concluded that there was no difference between the cellular adhesion to different materials for implant abutments, T and ZrO2, in evaluated periods. However, cell spreading was qualitatively higher in rougher surfaces and greater titanium and zirconia...

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-18Bitstream added on 2015-01-26T13:30:36Z : No. of bitstreams: 1 000792285.pdf: 363368 bytes, checksum: bfcb9b7c5a5d2b307fa8df344ff91ccf (MD5) / Muitas biotecnologias estão sendo desenvolvidas visando a conservação do material genético de garanhões de alto valor zootécnico. Dentre estas pode-se destacar a colheita de espermatozoides do epidídimo de animais que sofreram algum trauma ou enfermidade que impossibilitem a colheita do sêmen, óbito ou eutanásia. Porém essas células espermáticas não entram em contato com o plasma seminal, importante por conter proteínas que participam de processos relacionados à proteção e ligação dos espermatozoides aos reservatórios espermáticos na tuba uterina. Neste sentido, sugere-se que haja importantes alterações bioquímicas nas células espermáticas do epidídimo, objetivando-se assim com esta revisão, estudar as principais diferenças morfofuncionais entre os espermatozoides provenientes do epidídimo e do ejaculado / Several biotechnologies are being developed aiming genetic material conservation of stallions with high zootechnical value, as we can highlight the harvest epididymis’s sperm of animals who suffered trauma or illness that makes impossible the semen collection, death or euthanasia. However these sperm cells do not get in touch with seminal plasma, important whereas it has proteins that participate in processes related to the protection and binding of sperm to the sperm reservoir in the oviduct. In this sense, it suggests that there is significant biochemical changes in epididymal sperm, aiming with this review to study the main morphological and functional differences between the sperm from the epididymis and ejaculated

Orientadores: Antonio Fernando Pestana de Castro, Wanderley Dias da Silveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T10:56:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nucci_Cristiane_M.pdf: 4331361 bytes, checksum: e778048bb6d975d8afdb042485c27907 (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Orientadores: Maria Silvia Viccari Gatti, Antonio Fernando Pestana de Castro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T12:11:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AngelaBonifacioBarbosade_M.pdf: 5173818 bytes, checksum: 01ef420d430ad90980e8c98866b3fd56 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Porphyromonas gingivalis é um dos agentes etiológicos envolvidos na periodontite. Os objetivos do trabalho foram isolar P. gingivaBs da bolsa periodontal de pacientes com periodontite, identificá-la por métodos tradicionais e através de PCR, realizando com essas amostras testes de adesão e invado, inibição desses fen6menos em células epiteHais KB com soros humano e fetal bovino, além de açúcares (D-manose, D-manosamina, N-acetil-galactosamina, D-galactosamina, N-acetil-galatosamina e a-D-fucose). O microrganismo foi isolado de pacientes com doença periodontal e sua identificaçlo foi realizada com os testes de produçlo de pigmento escuro em ágar sangue, coloração de Gram, crescimento sob atmosfera anaeróbia, aglutinação de eritrócitos de carneiro e reação em cadeia da polimerase (PCR). Quatro amostras de Porphyromonas gingivalis isoladas dos pacientes foram testadas no PCR, sendo que uma delas não apresentou 8 seqüência gênica para a fimbria característica. Após a identificação, a amostra padrão ATCC 33277 e duas amostras positivas.também em PCR, foram testadas em células KB para a verificação de sua capacidade de adesão e invasão, utilizando-se para a visualiZaçAo dos testes a coloração de Kinyon e também a reação de imunoperoxidase, com anti-soro produzido em coelhos albinos, a partir da inoculação da amostra padrão inativada. Todas as amostras testadas foram capazes de aderir e Invadir células e essa capacidade foi inibida com o pré-tratamento das células com soro humano e soro fetal bovino. A aglutinação também foi inibida quando as hemácias foram tratadas da mesma forma. o mesmo não ocorrendo quando as bactérias foram tratadas com os soros e quando os açúcares foram testados, tanto nas células como nas bactérias. O sobrenadante da cultura de P. gingivalis foi testado sobre as monocamadas celulares e verificou-se a destruição celular / Abstract: Porphyromonas gingivalis, a gram negative anaerobic bacterium, is one of the etiological agents responsible for periodontitis and produces a variety of virulence factors. The aim of this study was not on1y to isolate and identify P. gingivalisfrom periodontal pocket ar periodontitis patients using traditional and PCR methodologies, but aJso to observe their process of adhesion and invasion on epithelial cells (ephidermoid, carcinoma, oral, HeLa markers - KB). We studied also the capability of human and calf sera anel several kinds of sugars to impair cellular adhesion and invasion. The pathogen was isolated from patients with periodontal disease and its identification was performed by dark pigment production on blood agar. Gram staining, growth under anaerobic atmosphere, sheep blood agglutination tests and polymerase chain reaction (PCR). Four colonies of The isolates were tested by PCR for the fimbriae of this pathogen. One of them did not present the genomic sequenc8 for the fimbriae of the bacteria / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Maria Heloisa Souza Lima Blotta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T08:39:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fornazim_MarciaCristina_M.pdf: 977684 bytes, checksum: 6e57e24188b29731261e168251676a0d (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Para investigar a resposta imune local versus sistêmica em pacientes com paracoccidioidomicose pulmonar analisamos o fenótipo de diferentes populações celulares e o padrão de produção de citocinas por células do lavado broncoalveolar (LBA) e do sangue periférico. O grupo estudado foi constituído por 19 pacientes com idade entre 36 a 65 anos. O diagnóstico foi confirmado pela demonstração do fungo P. brasiliensis no escarro, LBA e/ou biópsia. A análise do LBA mostrou aumento de linfócitos e neutrófilos em relação ao descrito para indivíduos normais saudáveis. Linfócitos T CD8+ encontravam-se em maior número no LBA do que no sangue periférico. A expressão de moléculas do MHC classe II, ICAM-1 (CD54) e B7-2, foi aproximadamente 3 vezes maior em macrófagos alveolares (MA), do que em monócitos do sangue periférico. Sobrenadantes de culturas de curta duração de MA apresentaram níveis mais elevados de IL-6, TNF-a, IL-12 p40 e MIP-1a, do que sobrenadantes de monócitos do sangue periférico. No LBA destes pacientes também foi possível detectar IL-6, TNF-a e MIP-1a, assim como anticorpos específicos anti-gp43 de P. brasiliensis, principalmente da classe IgG2. Como foi demonstrado que MIP-1a atrai seletivamente linfócitos T CD8+ e esta população celular está aumentada no LBA, nossos achados sugerem que além de macrófagos ativados, células T CD8+ devem ter um importante papel no desenvolvimento da PCM pulmonar / Abstract: To investigate the local immune response we analyzed the cellular infiltrate and patterns of cytokine production in bronchoalveolar lavage cells and fluid from patients with pulmonar paracoccidioidomycosis (PCM). The group consisted of 19 patients, 16 male and 3 female, with age ranging from 36 to 65 years. The diagnosis was confirmed by demonstration of fungus in the sputum or bronchoalveolar lavage fluid (BAL), in addition to serological tests. Cytospin preparations from patients with PCM showed an increased number of lymphocytes in BAL, mostly CD8+T cells. Cultured alveolar macrophages produced higher levels of IL-6, TNF-a ??and MIP-1a as compared with PBMC. No differences were detected in relation to IL-8, IL-12p40, IL-10 and TGF-a. BAL fluid from PCM patients contained low but significant levels of IL-6, TNF-a and MIP-1a, and specific antibodies to Paracoccidioides brasiliensis, mainly of the IgG2 isotype. These findings indicate that the local inflammatory reaction in the lungs of patients with pulmonary paracoccidioidomycosis is mediated by the inflammatory cytokines TNF-a ??IL-6 and MIP-1a characterized by a lymphocytic infiltration and local release. MIP-1a may play an important role in the pathogenesis of PCM, mediating the recruitment of lymphocytes and macrophages to the site of infection / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T02:23:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_RaimundoNonatoPereirada_M.pdf: 3164333 bytes, checksum: 78a508da9ba2db4ac569d31a75b1ec47 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Anemia falciforme (AF) é uma doença monogênica, mas com uma apresentação clínica variável, devido a possível associação com outros genes. Especula-se que nesta doença genes envolvidos com a resposta inflamatória tenham efeito epistático. A mieloperoxidase (MPO) é uma enzima com atividade antimicrobicida, sendo encontrada nos grânulos azurofilicos dos neutrófilos. O polimorfismo A-463MPO diminui a expressão desta enzima, podendo este alelo ser possível marcador para eventos infecciosos em pacientes com defesa imune já comprometida. Neste estudo 97 pacientes com AF acompanhado pelo ambulatório de hematologia-Unicamp foram inicialmente divididos em dois grupos, conforme o número de internamentos hospitalares para antibioticoterapia: pacientes que não apresentaram infecção com necessidade de intemação (64 pacientes) e um segundo grupo onde ocorreu pelo menos 1 episódio de hospitalização devido a infecção (33 pacientes). O grupo controle foi composto por 48 indivíduos sadios negros da Babia-BrasiL Pacientes e controles foram genotipados para o polimorfismo G/A-463MPO, através da técnica de "Conformation Sensitive Gel Eletrophoresis" (CSGE) e sequenciamento automatizado. Observou-se que a presença do genótipo AA ou AG está associado a maior número de eventos infecciosos (P=O.005 OR=3.8). Esta correlação também foi observada na análise quanto à presença do alelo A-463MPO (P=0.004 OR=2.7). Este achado sugere que deficiência de MPO em pacientes com AF provavelmente favorece a ocorrência de eventos infecciosos. Vaso oclusão é o principal evento nas crises dolorosas dos pacientes com anemia falciforme (AF) e marcadores genéticos de risco para eventos vaso oclusivos ainda são desconhecidos. Polimorfismos em genes envolvidos na adesão celular PSGL-l (VNTR no exon 2), ICAM-1 G241R e K461E) e CD18 (V441V) foram genotipados em 103 pacientes com AF. Os pacientes foram inicialmente divididos em dois grupos: pacientes em que ocorre acidente vascular cerebral (AF+A VC,16 pacientes) e pacientes sem ocorrência de A VC (AF-A VC, 87 pacientes). Posteriormente, os pacientes foram divididos em outros dois grupos: pacientes em que foi detectado um dos seguintes eventos: A VC, síndrome torácica aguda (STA), necrose asséptica de cólo de fêmur (NACF) e priapismo (AF+FVO, 35 pacientes) e pacientes em que não ocorrem essas complicações (AF-FVO, 70 pacientes). PSGL-l é um receptor nas células mielóides e linfócitos T estimulados de alta afinidade para P-selectinas, tendo fundamental papel na adesão dos leucócitos às plaquetas e ao endotélio. O gene contém 3 variantes alélicas (A, B, C) de um número variável de repetição "in tandem" (VNTR). A análise das freqüências dos genótipos e alelos revelou associação da variante B com o grupo AF+FVO [p=O.04, IC 95% OR=2 (1-4)] e quase significante com os casos de A VC [p=0.09, IC 95% OR=2 (0.8-4.9)], enquanto que o alelo A revelou nível significativo de associação com o grupo AF+FVO [p=O.Ol IC 95% OR=O.5 (0.2 0.9)]. O gene da molécula de adesão leucócitário CD-I8 é a beta-2 subunidade das integrinas a_heterodímeros. O polimorfismo C1323T foi recentemente implicado como fator de risco para fenômenos vaso oc1usivos. O estudo deste polimorfismo em pacientes portadores de anemia falciforme não revelou associação significativa com FVO ou A VC. ICAM-l é uma molécula da superfamília das imunoglobulinas com importante papel na adesão das células endotelial-leucócitos durante a resposta inflamatória. No mínimo dois sítios polimórficos são conhecidos R241E e K469E. Ambos sítios estão envolvidos na ligação aos contrareceptores Mac-I e LF A-I. A análise destes polimorfismos através da técnica de CSGE e seqüenciamento, revelou uma associação significativa do heterozigoto K469E para risco a A VC [P=0.02 IC 95% OR=3.6 (1.1-12.3)]. No entanto, o estudo falhou em demonstrar associação alélica com os casos de A VC ou FVO. Como não se conhece bem a relação funcional deste polimorfismo, maiores estudos são necessários incluindo análise funcional, para se esclarecer o real papel deste polimorfismo ao risco a AVC / Abstract: Not informed / Mestrado / Genetica Medica / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-21Bitstream added on 2014-06-13T18:56:50Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_ics_me_sjc.pdf: 668962 bytes, checksum: 9fcef8d37972e56096faee53f7658608 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O álcool atua no organismo podendo trazer várias doenças, entretanto sua ação no tecido ósseo ainda apresenta resultados controversos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do consumo crônico de álcool a 20% em osteoblastos obtidos da calvária de ratos recém-nascidos. Foram utilizadas 18 ratas prenhas, tratadas durante a gestação e divididas em grupos conforme a dieta: álcool a 20%, grupo isocalórico, e controle. Aos três dias de vida, os recém-nascidos foram eutanasiados para remoção da calvária e isolamento das células por meio de digestão enzimática sequencial, sendo estas cultivadas por períodos de até 14 dias. Foram realizados testes para avaliar o efeito do álcool na adesão, proliferação e viabilidade celular, no conteúdo de proteína total, na atividade da fosfatase alcalina e nas formações nodulares de matriz mineralizada. Os resultados mostraram que em geral, a adesão celular não foi influenciada pelo consumo crônico de álcool, já que não foi demonstrada diferença estatística entre os grupos. Contudo, o grupo álcool apresentou aumento significativo na proliferação, exceto no período de 1 dia, e nas formações nodulares. Com relação a viabilidade celular, apenas no período de 3 dias houve aumento significativo de células no grupo álcool. Os valores representativos de proteína total variaram dependendo do período estudado, sendo maior no grupo controle com 7 dias, porém aos 14 dias houve maior média nos grupos isocalórico e álcool. Quanto à fosfatase alcalina observamos aumento de sua atividade nos grupos álcool e isocalórico em todos os períodos. Concluímos que nesta metodologia, o álcool não apresentou efeito deletério para os osteoblastos, talvez pelo curto tempo de administração / The alcohol affects the organism and may cause various diseases, even though its effects on bone metabolism are still controversial. The purpose of this paper was to evaluate the effects of alcohol 20% chronic consumption in osteoblasts obtained from the calvaria of newborn mice. The alcohol was administrated to pregnant mice throughout the entire pregnancy. For that purpose, 18 mice were used, divided in groups according to the diet: 6 receiving alcohol 20%, 6 belonging to the isocaloric group and 6 receiving water and ration at will. At three days of life, the newborns were euthanized so as to remove the calvaria and start the cell culture procedures. The osteoblastic lineage cells were isolated by sequential enzymatic digestion and the osteoblasts were cultivated for periods of 14 days or less. Tests were performed on the culture slides to evaluate the effect of alcohol based on adhesion, proliferation and cellular viability on total protein content, alkaline phosphatase activity and nodule formation of mineralized matrix. The results have shown that the alcohol group presented significant increase in proliferation, except for the period of one day, and in nodule formation. A significant increase in the alcohol group concerning cellular viability was only observed in the period of 3 days and there was no statistic difference in adhesion. The total protein content was higher in the control group in 7 days, and the average higher in the isocaloric and alcohol groups in 14 days, according to the periods of time studied. An increase in the activity of the alkaline phosphatase was observed in the isocaloric and alcohol groups in all periods of evaluation. By this methodology, we have concluded that the alcohol has not presented any deleterious effect on osteoblasts, possibly due to the short period of administration

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-25Bitstream added on 2014-06-13T18:56:12Z : No. of bitstreams: 1 costa_acbp_me_sjc.pdf: 3713548 bytes, checksum: 5d63f9c051b3f55b3f5296a1362fb144 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os objetivos do presente estudo foram avaliar a ação antifúngica da Terapia Fotodinâmica (TFD) em culturas planctônicas e biofilmes de Candida albicans formados in vitro e em modelo de candidose experimental em camundongos, bem como sua interferência na aderência de C. albicans às células epiteliais bucais humanas in vitro. Foi utilizada cepa padrão de C. albicans (ATCC 18804) para os ensaios. Como fonte de luz foi utilizado o Diodo Emissor de Luz (LED) com emissão de luz verde (532±10 nm) com potência de 90 mW e fotossensibilizador eritrosina nas concentrações variando de 200 a 0,39 μM para os ensaios em cultura plactônica. O biofilme foi formado em placas de 96 poços e tratado com o fotossensibilizador eritrosina na concentração de 400 μM e luz LED. 56 camundongos machos e adultos foram imunossuprimidos e inoculados com suspensões contendo 108 células/mL de C. albicans. Os animais foram submetidos a TFD mediada pelo corante eritrosina (400 μM) e irradiados por LED. Antes e após os tratamentos, foram recuperadas leveduras da cavidade bucal dos animais. As leveduras recuperadas após a TFD e grupo controle foram avaliadas quanto a interferência da TFD na aderência de C. albicans às células do epitélio bucal humano. Em seguida, os animais foram sacrificados e as línguas retiradas para análise macroscópica e histológica. Os biofilmes, línguas e lâminas de aderência foram também analisados por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A análise dos dados foi feita por ANOVA e Teste de Tukey, teste t de Student e Kruskal-Wallis (P < 0,05). A TFD aplicada à cultura planctônica de C. albicans foi dose-dependente com redução significativa a partir da menor concentração testada (0,39 μM) e 100% de morte das células a partir de 3,12 μM. A TFD em biofilme formado in vitro reduziu 0,74 log10 de C. albicans com redução de leveduras e hifas... / The aims of the present study were evaluate the antifungal action of Photodynamic Therapy (PDT) on Candida albicans planktonic cultures and biofilms formed in vitro and experimental candidosis model in mice, as well as its interference on C. albicans adherence on humans buccal epithelial cells in vitro. Standard strain of C. albicans (ATCC 18804) was used for assays. Green Light Emitting Diode (LED- 532 ± 10 nm) was used as light source with an output power of 90 mW and erythrosine photosensitizer at concentrations range from 200 to 0.39 μM for the assays on plaktonic cultures. The biofilm was formed on plates of 96- wells and treated with the erythrosine photosensitizer at a concentration of 400 μM and LED light. 56 adults and males mice were immunosuppressed and inoculated with suspensions containing 108 cells/ mL of C. albicans. The animals were submitted to erythrosine dye- mediated PDT (400 μM) and irradiated by LED. Before and after the treatments, yeasts from the animals´ oral cavities were recovered. The yeasts recovered after PDT and control group were evaluated for interference of PDT on C. albicans adherence to humans buccal epithelial cells. Following, the animals were sacrified and their tongues taken away for macroscopic and histological analysis. The biofilms, tongues and adherence slices were also analized by Scanning Electron Microscopy (SEM). The analysis of the dates were done by ANOVA and Tukey test, Student t test and Kruskal-Wallis (P < 0.05). PDT applied on C. albicans planktonic culture was concentrationdependent with significant reduction from minor concentration tested (0.39 μM) and 100% of cells death from 3.12 μM. C. albicans biofilm formed in vitro was reduced 0.74 log10 by PDT with reduction of yeasts and hyphaes verified by SEM. In vivo, 0.73 log10 of C. albicans and 35% adherence on buccal epithelial cells were reduced, but there was not... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Resumo: Os objetivos do presente estudo foram avaliar a ação antifúngica da Terapia Fotodinâmica (TFD) em culturas planctônicas e biofilmes de Candida albicans formados in vitro e em modelo de candidose experimental em camundongos, bem como sua interferência na aderência de C. albicans às células epiteliais bucais humanas in vitro. Foi utilizada cepa padrão de C. albicans (ATCC 18804) para os ensaios. Como fonte de luz foi utilizado o Diodo Emissor de Luz (LED) com emissão de luz verde (532±10 nm) com potência de 90 mW e fotossensibilizador eritrosina nas concentrações variando de 200 a 0,39 μM para os ensaios em cultura plactônica. O biofilme foi formado em placas de 96 poços e tratado com o fotossensibilizador eritrosina na concentração de 400 μM e luz LED. 56 camundongos machos e adultos foram imunossuprimidos e inoculados com suspensões contendo 108 células/mL de C. albicans. Os animais foram submetidos a TFD mediada pelo corante eritrosina (400 μM) e irradiados por LED. Antes e após os tratamentos, foram recuperadas leveduras da cavidade bucal dos animais. As leveduras recuperadas após a TFD e grupo controle foram avaliadas quanto a interferência da TFD na aderência de C. albicans às células do epitélio bucal humano. Em seguida, os animais foram sacrificados e as línguas retiradas para análise macroscópica e histológica. Os biofilmes, línguas e lâminas de aderência foram também analisados por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A análise dos dados foi feita por ANOVA e Teste de Tukey, teste t de Student e Kruskal-Wallis (P < 0,05). A TFD aplicada à cultura planctônica de C. albicans foi dose-dependente com redução significativa a partir da menor concentração testada (0,39 μM) e 100% de morte das células a partir de 3,12 μM. A TFD em biofilme formado in vitro reduziu 0,74 log10 de C. albicans com redução de leveduras e hifas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aims of the present study were evaluate the antifungal action of Photodynamic Therapy (PDT) on Candida albicans planktonic cultures and biofilms formed in vitro and experimental candidosis model in mice, as well as its interference on C. albicans adherence on humans buccal epithelial cells in vitro. Standard strain of C. albicans (ATCC 18804) was used for assays. Green Light Emitting Diode (LED- 532 ± 10 nm) was used as light source with an output power of 90 mW and erythrosine photosensitizer at concentrations range from 200 to 0.39 μM for the assays on plaktonic cultures. The biofilm was formed on plates of 96- wells and treated with the erythrosine photosensitizer at a concentration of 400 μM and LED light. 56 adults and males mice were immunosuppressed and inoculated with suspensions containing 108 cells/ mL of C. albicans. The animals were submitted to erythrosine dye- mediated PDT (400 μM) and irradiated by LED. Before and after the treatments, yeasts from the animals' oral cavities were recovered. The yeasts recovered after PDT and control group were evaluated for interference of PDT on C. albicans adherence to humans buccal epithelial cells. Following, the animals were sacrified and their tongues taken away for macroscopic and histological analysis. The biofilms, tongues and adherence slices were also analized by Scanning Electron Microscopy (SEM). The analysis of the dates were done by ANOVA and Tukey test, Student t test and Kruskal-Wallis (P < 0.05). PDT applied on C. albicans planktonic culture was concentrationdependent with significant reduction from minor concentration tested (0.39 μM) and 100% of cells death from 3.12 μM. C. albicans biofilm formed in vitro was reduced 0.74 log10 by PDT with reduction of yeasts and hyphaes verified by SEM. In vivo, 0.73 log10 of C. albicans and 35% adherence on buccal epithelial cells were reduced, but there was not... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientadores: Carmen Verissima Ferreira, Jose Mauro Granjeiro, Maikel Peppelenbosch / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T21:31:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zambuzzi_WillianFernando_D.pdf: 4779822 bytes, checksum: 33696a8be638dbe16ec5d944f0e3b0d2 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Este trabalho teve como principal objetivo investigar os mecanismos de transdução de sinal disparados durante a diferenciação de células ósseas. Desta forma, vários aspectos moleculares desse processo foram analisados. A modulação da Src kinase pela proteína tirosina fosfatase de baixo peso molecular (LMWPTP) é essencial para a diferenciação dos pré-osteoblastos induzida pelo ácido ascórbico/glicerofosfato. Outro enfoque dado nesse trabalho foi a avaliação, sob o aspecto molecular e morfológico, da diferenciação de pré-osteoblastos em ¿osteocyte-like cells¿, processo esse induzido quando o Matrigel foi utilizado como substrato. De forma inédita demonstramos que nessa condição as células produziram a proteína sonic hedgehog (Shh), a qual também foi essencial para o processo de diferenciação. A análise do perfil quinômico dessas células apontou uma prevalência das quinases envolvidas com a comunicação celular. Este fato é coerente com a super-expressão de conexina 43 observada. Além disso, observamos que RECK e TIMP-1 modulam a atividade do rearranjo da matriz extracelular durante a diferenciação de osteoblastos, bem como o requerimento das proteínas PP2A e p38 MAPK durante a adesão de osteoblastos. Adicionalmente observamos uma modulação refinada das PTPs (LMWPTP, SHP2 e PTPa) bem como do status redox celular. Os resultados em conjunto demonstram que o estudo de transdução de sinal pode fornecer informações importantes para o entendimento do funcionamento celular bem como definir alvos moleculares que podem servir como ferramentas para diferentes aplicações / Abstract: The main goal of this work was to investigate the signal transduction pathways triggered during the bone cells differentiation. In this way, several molecular aspects of this process were analyzed. Src kinase modulation by the low molecular weight protein tyrosine phosphatase (LMWPTP) was essential for the occurrence of the differentiation induced by ascorbic acid and glycerophosphate. We also evaluated, under molecular and morphological patterns, the differentiation of pre-osteoblasts into osteocyte-like cells induced by 3D scaffold (matrigel as substrate). Interestingly, under this condition, the cells produced sonic hedgehog (Shh), which also was essential for stimulating the differentiation signaling pathway. Kinomic profiling of these cells revealed a prevalence of kinases involved in cellular communication, which is in agreement with the overexpression of connexin 43 observed. Besides we observed that RECK and TIMP-1 modulated the extracellular matrix rearrangement and that PP2A and p38 MAPK are required for osteoblasts adhesion. In addition, we observed that during pre-osteoblasts differentiation both PTPs and cellular redox are tightly regulated. Our findings demonstrated that the signal transduction evaluation can provide important information for understanding the cell biology as well as defining molecular targets that can be useful for different applications / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular