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Imunolocalização do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-I) e do fator de crescimento epidermal (EGF) em ovários caninos e seus efeitos sobre a maturação in vitro de oócitos: avaliação nuclear

Cardilli, Diogo José [UNESP] 03 February 2012 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-03Bitstream added on 2014-06-13T20:06:41Z : No. of bitstreams: 1 cardilli_dj_dr_jabo.pdf: 6509698 bytes, checksum: 4403a0fa2e7c324d529f667bac1f88ca (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Facta / O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito dos fatores de crescimento IGF-I e EGF sobre a maturação nuclear de oócitos caninos e também imunolocalizar estes fatores em amostras de ovários de cadelas. Foram selecionados 787 complexos cumulus-oocitos (COCs), provenientes de ovários de 34 cadelas, em diferentes fases do ciclo estral, submetidas a ovário-histerectomias eletivas. Os COCs foram dividos em três grupos para diferentes tratamentos, A (TCM 199, n=199), B (TCM 199 + 100ng/mL de EGF, n=208) e C (TCM 199 + 100 ng/mL IGF-1, n=204). Após 96 horas de incubação a 38 °C em atmosfera de 5% de CO2, 50% dos oócitos, desprovidos das células do cumulus, de cada grupo foram corados com Bisbenzimida H33342 (Hoechst) e 50% com 4',6-Diamidino-2-phenylindole (Dapi). A adição de EGF ou de IGF-1 ao meio TCM 199 não foi benéfica à maturação in vitro (MIV) de oócitos de cadelas, e a coloração Hoechst foi mais eficaz para a avaliação dos estágios de maturação nuclear de oócitos de cadelas. Os tratos reprodutivos das 34 cadelas foram coletados, fixados, processados e incluídos em parafina. Os fragmentos de ovários foram cortados, montados em lâmina, desparafinIzados e reidratados. A técnica de Imuno-histoquímica foi realizada utilizando os seguintes anticorpos: Anti-EGF-pc (Ab-3, Calbiochem), Anti- IGF-1-pc (Ab-2, Calbiochem). As amostras foram incubadas overnight. O anticorpo primário foi detectado utilizando IgG secundária biotinilada de cabra anti-coelho ou de coelho anti-cabra, com complexo avidina-biotina-peroxidase. A detecção da reação foi feita com o AEC (Vector). A imuno-histoquímica revelou a presença de EGF e do IGF-1 no ovário da cadela. O EGF foi imunolocalizado no citoplasma das células foliculares (CF) e nos oócitos de folículos secundários e terciários e também na parede vascular, nos cordões... / The aim of the present study was to assess the effect of the addition of EGF or IGF-1 to the culture medium TCM 199 on nuclear maturation of canine oocytes and to determine the distribution of these growth factors in the ovary of the bitch. 787 comulus-oocyte complexes (COCs) were sampled during different phases of the oestral cycle from 34 bitches submitted to elective ovariohysterectomy. The COCs were distributed into three groups: A (TCM 199, n= 199); B (TCM 199 + 100ng/ml of EGF, n=208) and; C (TCM 199 + 100ng/ml of IGF-1, n=204). Following 96 hours of incubation at 38 ºC, in sterile atmosphere with 5% CO2, the nuclear maturation stage was evaluated following bisbenzimide 33342 (50%) or 4',6-Diamidino-2-phenylindole staining (50%). The addition of EGF or IGF-1 to the TCM 199 did not favour the IVM of canine oocytes. The bisbenzimide 33342 staining was better than 4',6-Diamidino-2- phenylindole staining in the assessment of nuclear maturation stage of canine oocytes. . Reproductive tracts from 34 bitches at the different phases of the estrous cycle were collected, fixed and processed with paraffin embedding. Sections were cut, mounted, dried, deparaffinized and rehydrated. Immunocytochemistry was performed using a dilution of the following antisera: anti-EGF-pc (Ab-3, Calbiochem) and Anti-IGF-1-pc (Ab- 2, Calbiochem ). Samples were incubated overnight. Primary antibody binding was detected using a biotynilated secondary goat-anti-rabbit or rabbit anti-goat IgG with avidin-biotin-peroxidase complexing. The detection reagent was AEC (Vector). Immunohistochemistry revealed the presence of EGF and IGF-1 in the ovary of the bitch. EGF was localized in the cytoplasm, while IGF-1 staining was nuclear. EGF was immunolocalized in the follicular cells (FC) and in... (Complete abstract click electronic access below)
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Imunolocalização do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-I) e do fator de crescimento epidermal (EGF) em ovários caninos e seus efeitos sobre a maturação in vitro de oócitos : avaliação nuclear /

Cardilli, Diogo José. January 2012 (has links)
Orientador: Gilson Helio Toniollo / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Kellen de Sousa Oliveira / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Maria Denise Lopes / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito dos fatores de crescimento IGF-I e EGF sobre a maturação nuclear de oócitos caninos e também imunolocalizar estes fatores em amostras de ovários de cadelas. Foram selecionados 787 complexos cumulus-oocitos (COCs), provenientes de ovários de 34 cadelas, em diferentes fases do ciclo estral, submetidas a ovário-histerectomias eletivas. Os COCs foram dividos em três grupos para diferentes tratamentos, A (TCM 199, n=199), B (TCM 199 + 100ng/mL de EGF, n=208) e C (TCM 199 + 100 ng/mL IGF-1, n=204). Após 96 horas de incubação a 38 °C em atmosfera de 5% de CO2, 50% dos oócitos, desprovidos das células do cumulus, de cada grupo foram corados com Bisbenzimida H33342 (Hoechst) e 50% com 4',6-Diamidino-2-phenylindole (Dapi). A adição de EGF ou de IGF-1 ao meio TCM 199 não foi benéfica à maturação in vitro (MIV) de oócitos de cadelas, e a coloração Hoechst foi mais eficaz para a avaliação dos estágios de maturação nuclear de oócitos de cadelas. Os tratos reprodutivos das 34 cadelas foram coletados, fixados, processados e incluídos em parafina. Os fragmentos de ovários foram cortados, montados em lâmina, desparafinIzados e reidratados. A técnica de Imuno-histoquímica foi realizada utilizando os seguintes anticorpos: Anti-EGF-pc (Ab-3, Calbiochem), Anti- IGF-1-pc (Ab-2, Calbiochem). As amostras foram incubadas overnight. O anticorpo primário foi detectado utilizando IgG secundária biotinilada de cabra anti-coelho ou de coelho anti-cabra, com complexo avidina-biotina-peroxidase. A detecção da reação foi feita com o AEC (Vector). A imuno-histoquímica revelou a presença de EGF e do IGF-1 no ovário da cadela. O EGF foi imunolocalizado no citoplasma das células foliculares (CF) e nos oócitos de folículos secundários e terciários e também na parede vascular, nos cordões... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to assess the effect of the addition of EGF or IGF-1 to the culture medium TCM 199 on nuclear maturation of canine oocytes and to determine the distribution of these growth factors in the ovary of the bitch. 787 comulus-oocyte complexes (COCs) were sampled during different phases of the oestral cycle from 34 bitches submitted to elective ovariohysterectomy. The COCs were distributed into three groups: A (TCM 199, n= 199); B (TCM 199 + 100ng/ml of EGF, n=208) and; C (TCM 199 + 100ng/ml of IGF-1, n=204). Following 96 hours of incubation at 38 ºC, in sterile atmosphere with 5% CO2, the nuclear maturation stage was evaluated following bisbenzimide 33342 (50%) or 4',6-Diamidino-2-phenylindole staining (50%). The addition of EGF or IGF-1 to the TCM 199 did not favour the IVM of canine oocytes. The bisbenzimide 33342 staining was better than 4',6-Diamidino-2- phenylindole staining in the assessment of nuclear maturation stage of canine oocytes. . Reproductive tracts from 34 bitches at the different phases of the estrous cycle were collected, fixed and processed with paraffin embedding. Sections were cut, mounted, dried, deparaffinized and rehydrated. Immunocytochemistry was performed using a dilution of the following antisera: anti-EGF-pc (Ab-3, Calbiochem) and Anti-IGF-1-pc (Ab- 2, Calbiochem ). Samples were incubated overnight. Primary antibody binding was detected using a biotynilated secondary goat-anti-rabbit or rabbit anti-goat IgG with avidin-biotin-peroxidase complexing. The detection reagent was AEC (Vector). Immunohistochemistry revealed the presence of EGF and IGF-1 in the ovary of the bitch. EGF was localized in the cytoplasm, while IGF-1 staining was nuclear. EGF was immunolocalized in the follicular cells (FC) and in... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Estudo da eficiencia da uma vacina oleosa contra colibacilose neonatal bovina

Garcia, Marcina 14 July 2018 (has links)
Orientador : Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:12:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_Marcina_M.pdf: 2770033 bytes, checksum: b78b4da0d360a3a848b05b9582ef7ad9 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: No presente estudo, 05 antigenos K99-F41,de Escherrichia coli de bovinos, Foram semi-purificados através de extração por aquecimento, precipitação com sulfato de amônia, tratamento com desoxicolato de sódio para uso na produção de vacina oleosa contra a colibacilose bovina. Foram preparadas vacinas contendo dose antigênica de 1500 UH (Undade hemaglutinantes), 750 UH e 380 UH, sendo que a vacina contendo 750 UH foi a que melhor induziu a produção de anticorpos e respectiva transferência destes para os bezerros. A eficiência da vacina foi avaliada através do teste de imunodifusão dupla e ensaioimunoenzimático (Elisa), demostrou conversão sorológica na 2ª, 3ª coleta e bezerros. De um total de 259 soros de bovinos testados, pelos dois métodos, 101 apresentaram resultado positivo da imunodifusão dupla e 135 pelo Elisa. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Imunologia
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Influência da suplementação com citamina E(dl-alfa tocoferol) nas funções de monócitos e polimorfonucleares de eqüinos da raça Árabe submetidos ao exercício físico /

Saito, Mere Erika. January 2007 (has links)
Orientador: Aguemi Kohayagawa / Banca: Alice Maria Melville Paiva Della Libera / Banca: Mara Regina Stipp Balarim / Banca: Alexandre Secorun Borges / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Resumo: A alteração biológica mais evidente observada durante o exercício físico é o aumento da taxa metabólica, com elevada demanda de oxigênio, que pode aumentar a formação de espécies reativas de oxigênio (ROS) potencialmente danosas ao organismo, ocorrendo lipoperoxidação como conseqüência. Foi desenvolvido um método de isolamento simultâneo de células mononucleares e polimorfonucleares de sangue periférico eqüino, utilizando gradiente descontínuo de ficoll-hipaque d=1,077 e d=1,119. A separação de ambos os tipos celulares resultou em alto grau de pureza e viabilidade. Foram avaliadas funções de monócitos e polimorfonucleares em eqüinos da raça Árabe suplementados com vitamina E comparando-se com um grupo controle em duas provas de exercício progressivo em esteira de alta velocidade antes e depois de serem submetidos a um protocolo de treinamento. Os resultados indicam que o treinamento e a suplementação com vitamina E preservaram as funções dos monócitos eqüinos quanto à geração de anion superóxido (O2 -), peróxido de hidrogênio (H2O2), óxido nítrico (NO) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) ao mesmo tempo em que preveniram a produção exacerbada dessas substâncias. Enquanto as produções de H2O2 e O2 - por polimorfonucleares pelo grupo de animais suplementados foram mais elevadas. Isso indica a exacerbação desta função dos polimorfonucleares dos eqüinos pela vitamina E antes e após a prova de exercício físico em esteira de alta velocidade. A vitamina E suplementar na dieta promoveu menor formação de malondialdeído (MDA), ou seja, ocorreu atenuação da lesão oxidativa. / Abstract: The clearest biological alteration observed during physical exercise is the increase of metabolic rate, with a high oxygen demand. It can increase the reactive oxygen species (ROS) formation potentially harmful to the organism, occurring lipoperoxidation as a result. It was developed a method of simultaneous separation of peripheral blood mononuclear and polymorphonuclear cells in horse utilizing discontinuous Ficoll-Hypaque gradients d=1,077 and d=1,119. Both cells types isolation resulted in high purity and viability degree. It was evaluated functions in monocytes and polymorphonuclear cells in Arabian horses supplemented with vitamin E by comparing a control group in two incremental treadmill exercises before and after been submitted to a training protocol. Results indicated that training and vitamin E supplementation preserved the monocyte functions regarding superoxide anion generation (O2 -), hydrogen peroxide (H2O2), nitric oxide (NO) and tumor necrosis factor alpha (TNF-a) at the same time that they prevented an excessive production of those substances. Whereas H2O2 e O2 - productions by polymorphonuclear cells in supplemented animals group were higher. It indicates an exacerbation of that horse polymorphonuclear cells function by vitamin E before and after incremental treadmill exercises. Supplementary vitamin E in the diet promoted a lower malondialdeide (MDA) formation, namely occurred attenuation in oxidative stress. / Doutor
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Quantificação de células CD117+, CD45+ e subpopulações linfocitárias no sangue do cordão umbilical e periférico de suínos neonatos /

Tchamo, Cesaltina da Conceição Lopes Menete. January 2011 (has links)
Orientador: Áureo Evangelista Santana / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Ferreira / Banca: Aparecido Antonio Camacho / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Wanderson Adriano Biscola Pereira / Resumo: Tendo em conta a importância do sangue do cordão umbilical (SCU) como fonte de células-tronco objetivou-se este estudo, visando quantificar células CD117+, CD45+ e subpopulações linfocitárias; e determinar os valores eritroleucométricos bem como a contagem de reticulócitos no sangue do cordão umbilical (SCU) e sangue periférico de suínos imediatamente ao nascimento (SPI) e quarenta e oito horas depois (SP48), utilizando-se de 48 amostras de SCU e periférico de neonatos. Comparando-se os grupos, a um nível de significância de 5% na quantificação de células CD117+ a marcação foi muito baixa presumivelmente porque o CD117 marca células em estágio de diferenciação. Pelo que se recomenda que mais estudos sejam feitos, combinando-o com o marcador da verdadeira célula- tronco. As contagens de células CD5+ , CD4+ e CD8+ por citometria de fluxo, no SCU e SPI foram inferiores àquelas reportadas para o sangue periférico de adultos, indicando um componente imunológico imaturo. A proporção CD4:CD8, tanto para o SCU quanto para SPI, assim como SP48, demonstrou dominância das células TCD4+. Relativamente ao eritrograma, houve diferença significativa entre as variáveis nos grupos estudados, excetuando-se o volume corpuscular médio (VCM), hemoglobina corpuscular média (HCM) e concentração da hemoglobina corpuscular média (CHCM) que não variaram entre os grupos, SCU e SPI; a contagem de reticulócitos no grupo SP48 foi superior ao dos grupos SCU e SPI. No leucograma, todas as variáveis mostraram diferença significativa, excetuando-se a contagem de monócitos, que não variou entre os grupos, SCU e SPI. Já nos grupos SPI e SP48 foi observada diferença significativa na contagem de neutrófilos segmentados e monócitos, enquanto o total de leucócitos, neutrófilos bastonetes e linfócitos não diferiram / Abstract: Given the importance of Umbilical cord blood (UCB) as a source of stem cell, this study was aimed to quantify CD117+, CD45+ and lymphocyte subsets and determine the eritroleucometric values and the recticulocyte count in umbilical cord blood (UCB) and peripheral blood of piglets immediately at birth (PBI) and forty-eight hours late (PB48), using 48 samples of umbilical cord and peripheral blood of neonates. Comparing the groups at a significance level of 5 %, in the quantification of CD117+ cells, marking was very low presumably because CD117 mark cells in differentiation stage. It is recommended that more studies be done combining it with the marker of true stem cell marker. The lymphocyte subsets counts CD5+, CD4+ even CD8+ of UCB and PBI performed by flow citometry, were lower than those reported for peripheral blood of adult pigs, indicating an immature immunologic component. The ratio CD4:CD8 obtained in this trial, both UCB, PBI and PB48 showed dominance of CD4+ T cells lymphocytes. Regarding the erythrogram there was a significant difference between variables of groups with exception for mean corpuscular volume (MCV) mean corpuscular hemoglobin (MHC) and mean corpuscular hemoglobin concentration(MCHC) that did not vary between UCB and PBI groups; the reticulocyte count in PB48 group was higher than that of UCB and PBI groups. In the WBC, all variables showed significant differences, except for the number of monocytes, which vary between UCB and PBI groups. In PBI and PB48 groups there was no significant difference in the mature neutrophils and monocyte count, while the total leukocyte, band neutrophils and lymphocytes did not differ / Doutor
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Ativação de macrófagos de frango através da interaçao entre os receptores CD80 e CD86 com proteina CD28 recombinante

Ingberman, Max January 2015 (has links)
Orientador : Prof. Dr. Silvio Marques Zanata / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 14/08/2015 / Inclui referências : f. 81-95 / Área de concentração / Resumo: Em um ramo novo da ciência como a imunologia, poucos modelos são capazes de resistir por tanto tempo quanto o modelo de sinalização dupla, proposto por Bretcher e Cohn em 1970. Atualmente, entende-se que a dupla sinalização atua de forma sinérgica para a ativação dos linfócitos T e que a via do CD28 é apenas uma parte de uma grande rede de controle incluindo diversas outras vias que atuam em conjunto para controlar a ativação de linfócitos. Tanto do ponto de vista funcional, assim como do ponto de vista estrutural, a abordagem da via de CD28-CD80/86 na maioria dos casos tem um enfoque sobre a via de ativação de linfócitos, a qual é bastante descrita enquanto as APCs aparecem apenas como coadjuvantes nessa interação. Essa perspectiva começou a mudar em 2004 quando foi descrito que células dendríticas de camundongo, quando estimuladas com LPS e CD28 sofrem uma ativação e iniciam a secreção de interleucinas. Num contexto no qual o efeito das vias de sinalização sobre os APCs começa a ser compreendido, torna-se importante o estabelecimento de modelos adequados a esse estudo. Frangos são um modelo clássico para o estudo em imunologia, desde o início do desenvolvimento desse campo de conhecimento. Não foi descrita na literatura, até o momento, a sinalização CD28-CD80/86 em macrófagos de aves, as quais podem apresentar diferenças fisiológicas e funcionais quando comparadas às de mamíferos. Desta forma, este estudo pretende estabelecer se os mecanismos de sinalização reversa presentes em mamíferos e aves foi conservado durante a evolução, avaliando ainda a hipótese de que macrófagos possam ser artífices da sinalização reversa, fato observado apenas para células dendríticas. Este trabalho tem como objetivo avaliar a ativação de macrófagos de frango frente ao estímulo com CD28 recombinante. Às células previamente estimuladas com LPS, foram adicionados meios de cultivo com LPS, CD28 e CD28 deletada (com uma deleção em seu sítio MYPPPY de ligação com CD80/86) e os estímulos mensurados através de qPCR para diversas citocinas em diferentes tempos experimentais. Para o primeiro estimulo com LPS, houve uma redução na produção de IL-4, IL-2 e IFN-? e uma alteração sugerida para a expressão reduzida de IL-6, IL-12, IL-1? e aumentada de TNF?. Na segunda estimulação apenas com LPS, pode-se concluir que o ambiente resultante é pró-inflamatório, uma vez que a expressão das interleucinas com características anti-inflamatórias, IL-4 e IL-10, está diminuída ou ausente, enquanto IL-2, IL-18 e IL-12 estão aumentadas. Sugere-se que o estimulo com CD28 produz uma ativação de macrófagos que tem característica pró-inflamatória, porém sem direcionamento M1 ou M2. Essa polarização provavelmente advém de uma interação com os outros atores do sistema imune por diversos mecanismos de troca de informação, como citocinas, quimiocinas e outras moléculas sinalizadoras. Este trabalho mostrou pela primeira vez o mecanismo de sinalização reversa mediado por células apresentadoras de antígeno profissionais em macrófagos de aves. Palavras-chave: imunologia; aves; gallus; macrófago; CD28; sinalização reversa; citocinas. / Abstract: In a new branch of science such as immunology, just a few models are able to resist for as long as the dual signaling model proposed by Bretcher and Cohn in 1970. Currently, it is known that the double signaling acts synergistically to activate T lymphocytes and that the path of CD28 is only one part of a large network control including several other ways that work together to control the activation of lymphocytes. In a functional point of view as well as from a structural point of view, the approach of CD28-CD80 / 86 in most cases has a focus on the activation pathway of lymphocytes, which is detailed described as the APCs appear only with a secondary role in this interaction. This perspective started to change in 2004 when it was reported that mouse dendritic cells when stimulated with LPS and CD28 undergoes activation and start to secrete interleukins. In a context that the effect of signaling pathways on APCs begins to be understood, it is important to establish suitable models in this study. Chickens are a classic model for the study in immunology, since the beginning of development of this field of knowledge. It has not been described in so far, CD28-CD80/86 signaling in avian macrophage, which may have physiological and functional differences compared to mammal ones. Thus, this study aims to establish if the mechanisms of reverse signaling present in mammals has been conserved during evolution and is similar in birds, also evaluating the hypothesis that macrophages can be passive of reverse signaling, which was observed only for dendritic cells. This project aims to evaluate the activation of chicken macrophages front of the stimulation with recombinant CD28. The cells previously stimulated with LPS, received culture media containing LPS, CD28 and deleted CD28 (with a deletion on the MYPPY CD80/86 binding site) the stimuli was measured by qPCR for different cytokines under different experimental times. For the first stimulation with LPS, there was a reduction in the production of IL4, IL2 and IFN-? and a modification on the expression was suggested with an increase for IL6, IL12, IL-1? and decreased for TNF. In the second stimulation with LPS, one may conclude that the resulting environment was pro-inflammatory, since the expression of interleukins with anti-inflammatory characteristics, IL-4 and IL-10, is decreased or absent, while IL-2 IL-18 and IL-12 are increased. It is suggested that CD28 stimulation generate an activation of macrophages that has pro-inflammatory characteristic but without polarization M1 or M2. This bias probably comes from an interaction with other actors of the immune system through several mechanisms of signaling such as cytokines, chemokines, and other signaling molecules. This study showed for the first time the reverse signaling mechanism mediated by professional antigen presenting cells in avian macrophage. Key words: immunology; birds; gallus; macrophage; CD28; reverse signaling; cytokines.
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Quantificação de células CD117+, CD45+ e subpopulações linfocitárias no sangue do cordão umbilical e periférico de suínos neonatos

Tchamo, Cesaltina da Conceição Lopes Menete [UNESP] 16 December 2011 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-16Bitstream added on 2014-06-13T20:44:54Z : No. of bitstreams: 1 tchamo_cclm_dr_jabo.pdf: 1695408 bytes, checksum: 35b843331f0d7d9684e135a19a514e9a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Tendo em conta a importância do sangue do cordão umbilical (SCU) como fonte de células-tronco objetivou-se este estudo, visando quantificar células CD117+, CD45+ e subpopulações linfocitárias; e determinar os valores eritroleucométricos bem como a contagem de reticulócitos no sangue do cordão umbilical (SCU) e sangue periférico de suínos imediatamente ao nascimento (SPI) e quarenta e oito horas depois (SP48), utilizando-se de 48 amostras de SCU e periférico de neonatos. Comparando-se os grupos, a um nível de significância de 5% na quantificação de células CD117+ a marcação foi muito baixa presumivelmente porque o CD117 marca células em estágio de diferenciação. Pelo que se recomenda que mais estudos sejam feitos, combinando-o com o marcador da verdadeira célula- tronco. As contagens de células CD5+ , CD4+ e CD8+ por citometria de fluxo, no SCU e SPI foram inferiores àquelas reportadas para o sangue periférico de adultos, indicando um componente imunológico imaturo. A proporção CD4:CD8, tanto para o SCU quanto para SPI, assim como SP48, demonstrou dominância das células TCD4+. Relativamente ao eritrograma, houve diferença significativa entre as variáveis nos grupos estudados, excetuando-se o volume corpuscular médio (VCM), hemoglobina corpuscular média (HCM) e concentração da hemoglobina corpuscular média (CHCM) que não variaram entre os grupos, SCU e SPI; a contagem de reticulócitos no grupo SP48 foi superior ao dos grupos SCU e SPI. No leucograma, todas as variáveis mostraram diferença significativa, excetuando-se a contagem de monócitos, que não variou entre os grupos, SCU e SPI. Já nos grupos SPI e SP48 foi observada diferença significativa na contagem de neutrófilos segmentados e monócitos, enquanto o total de leucócitos, neutrófilos bastonetes e linfócitos não diferiram / Given the importance of Umbilical cord blood (UCB) as a source of stem cell, this study was aimed to quantify CD117+, CD45+ and lymphocyte subsets and determine the eritroleucometric values and the recticulocyte count in umbilical cord blood (UCB) and peripheral blood of piglets immediately at birth (PBI) and forty-eight hours late (PB48), using 48 samples of umbilical cord and peripheral blood of neonates. Comparing the groups at a significance level of 5 %, in the quantification of CD117+ cells, marking was very low presumably because CD117 mark cells in differentiation stage. It is recommended that more studies be done combining it with the marker of true stem cell marker. The lymphocyte subsets counts CD5+, CD4+ even CD8+ of UCB and PBI performed by flow citometry, were lower than those reported for peripheral blood of adult pigs, indicating an immature immunologic component. The ratio CD4:CD8 obtained in this trial, both UCB, PBI and PB48 showed dominance of CD4+ T cells lymphocytes. Regarding the erythrogram there was a significant difference between variables of groups with exception for mean corpuscular volume (MCV) mean corpuscular hemoglobin (MHC) and mean corpuscular hemoglobin concentration(MCHC) that did not vary between UCB and PBI groups; the reticulocyte count in PB48 group was higher than that of UCB and PBI groups. In the WBC, all variables showed significant differences, except for the number of monocytes, which vary between UCB and PBI groups. In PBI and PB48 groups there was no significant difference in the mature neutrophils and monocyte count, while the total leukocyte, band neutrophils and lymphocytes did not differ
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Influência da suplementação com citamina E(dl-alfa tocoferol) nas funções de monócitos e polimorfonucleares de eqüinos da raça Árabe submetidos ao exercício físico

Saito, Mere Erika [UNESP] 13 February 2007 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-13Bitstream added on 2014-06-13T21:02:24Z : No. of bitstreams: 1 saito_me_dr_botfmvz.pdf: 234612 bytes, checksum: f305f4a0cc1a03361d24663bf833ca32 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A alteração biológica mais evidente observada durante o exercício físico é o aumento da taxa metabólica, com elevada demanda de oxigênio, que pode aumentar a formação de espécies reativas de oxigênio (ROS) potencialmente danosas ao organismo, ocorrendo lipoperoxidação como conseqüência. Foi desenvolvido um método de isolamento simultâneo de células mononucleares e polimorfonucleares de sangue periférico eqüino, utilizando gradiente descontínuo de ficoll-hipaque d=1,077 e d=1,119. A separação de ambos os tipos celulares resultou em alto grau de pureza e viabilidade. Foram avaliadas funções de monócitos e polimorfonucleares em eqüinos da raça Árabe suplementados com vitamina E comparando-se com um grupo controle em duas provas de exercício progressivo em esteira de alta velocidade antes e depois de serem submetidos a um protocolo de treinamento. Os resultados indicam que o treinamento e a suplementação com vitamina E preservaram as funções dos monócitos eqüinos quanto à geração de anion superóxido (O2 -), peróxido de hidrogênio (H2O2), óxido nítrico (NO) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) ao mesmo tempo em que preveniram a produção exacerbada dessas substâncias. Enquanto as produções de H2O2 e O2 - por polimorfonucleares pelo grupo de animais suplementados foram mais elevadas. Isso indica a exacerbação desta função dos polimorfonucleares dos eqüinos pela vitamina E antes e após a prova de exercício físico em esteira de alta velocidade. A vitamina E suplementar na dieta promoveu menor formação de malondialdeído (MDA), ou seja, ocorreu atenuação da lesão oxidativa. / The clearest biological alteration observed during physical exercise is the increase of metabolic rate, with a high oxygen demand. It can increase the reactive oxygen species (ROS) formation potentially harmful to the organism, occurring lipoperoxidation as a result. It was developed a method of simultaneous separation of peripheral blood mononuclear and polymorphonuclear cells in horse utilizing discontinuous Ficoll-Hypaque gradients d=1,077 and d=1,119. Both cells types isolation resulted in high purity and viability degree. It was evaluated functions in monocytes and polymorphonuclear cells in Arabian horses supplemented with vitamin E by comparing a control group in two incremental treadmill exercises before and after been submitted to a training protocol. Results indicated that training and vitamin E supplementation preserved the monocyte functions regarding superoxide anion generation (O2 -), hydrogen peroxide (H2O2), nitric oxide (NO) and tumor necrosis factor alpha (TNF-a) at the same time that they prevented an excessive production of those substances. Whereas H2O2 e O2 - productions by polymorphonuclear cells in supplemented animals group were higher. It indicates an exacerbation of that horse polymorphonuclear cells function by vitamin E before and after incremental treadmill exercises. Supplementary vitamin E in the diet promoted a lower malondialdeide (MDA) formation, namely occurred attenuation in oxidative stress.
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Estudo da imunidade celular e humoral em potros recem-nascidos

Rodrigues, Rosely Lucht January 1993 (has links)
Orientador: Euripedes Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias Agrarias / Resumo: Para um estudo dos parâmetros normais das condições imunológicas de potros PSI recém-nascidos até um seguimento de 120 dias, realizou-se a colheita e processamento de sangue periférico, para posterior obtenção de soro e linfócitos do mesmo. Para estabelecer níveis de imunoglobulinas da amostragem do soro obtido dos animais hígidos ( 10), realizou-se a determinação da proteína total, eletroforese de proteínas, e imunodifusão&o radial simples, verificando-se que os potros recém-nascidos são agamaglobulinêmicos ao nascer, apresentando apenas uma pequena quantidade de IgM. Já às 24 horas, as IgG, M e A dos potros apresentam níveis semelhantes aos do soro da égua, sendo que em todo o período de observação ( 120 dias) cada uma das imunoglobulinas tem um comportamento diferente. Os níveis de IgG após 24 horas até ás 72 horas permanecem em torno de 3450,6mg/dl, caindo ao final do primeiro mês para 2017,5 mg/dl, enquanto que no segundo, no terceiro e no quarto mês ficam em torno de 1406 mg/dl. A IgM dos potros, ao nascer, está em torno de 19,60 mg/dl indo a 46,26 mg/dl nas primeiras 72 horas, sofrendo um pequeno decréscimo ao primeiro mês ( 40,52 mg/dl ), estabilizando-se ao término do período de observação em torno de 81,78 mg/dl. Já a IgA, inexistente ao nascer, apresenta-se em torno de 75 mg/dl nas primeiras 72 horas, revelando uma queda no primeiro mês (42,4 mg/dl), finalizando o período de observação com 77,07 mg/dl. Para estabelecer os parâmetros normais das subpopulações linfocitárias T e B, usou-se técnicas de marcadores de membranas. Quanto aos linfócitos T, com a formação de rosetas com eritrócitos heterógenos, determinou-se que os mesmos, apresentanse em torno de 3,4% a 10,8% em todo período de observação. Já os linfócitos B mostraram-se, através de técnicas de fluorescência, em porcentagens altas nos primeiros dias de vida (aproximadamente 37,95%) e após o 3Qq dia os valores estabilizaram-se entre 10,7% a 18,1%. / Abstract: The present study was undertaken in order to stablish the normal immunological parameters, under normal conditions, of foal as newborn until 120 days of life. The humoral immunity was assessed throug the assay of total protein in the serum, by electrophoresis and simple radial immunedifusion. It was found that newborn foal has agammaglobulinemia soon after birth, with a very low level of IgM. However, after 24 hours, the serum levels of IgG, IgA and IgM are similar as the serum levels of its mother. The behavior of different immunoglobulins in the subsequent 120 days is quite different for each immunoglobulin. The IgG level between 24 and 72 hours is around 3450.6mg/dl, in the first month, falling to 2017.5mg/dl and by the second and third months is maintained at 1406m/dl. The IgM level at birth is around 19.60mg/dl, raising to 46.26mg/dl in the first 24 hours, falling to 40.52mg/dl by the first month and, again, raising and stabilising at 81.78mg/dl at 120 days. The IgA, not present at birth, raises to 75mg/dl in the next 72 hours, falling to 42.4mg/dl in the first month and. stabilising at 77.07mg/dl by the 120 days. The T and B lymphocytes are determined by using specific surface marker of each sub-population. The T lymphocytes were identified through rosette formation, using guinea pig erythrocytes. The T lymphocytes ranged from 3.4% to 10.8% during the different periods of this study. The B lymphocytes were identified by detecting immunoglobulins on its surface. Antihorse immunoglobulin conjugated with fluorescein was employed. A very high percentage of B lymphocytes (37.95%) was detected in the first days of life and after one month the percentage ranged between 10.7 and 18,1%
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Efeitos da adição de mananoproteínas derivadas da parede celular de leveduras sobre parâmetros imunológicos de cães adultos e idosos /

Kroll, Fernanda Sant Anna. January 2014 (has links)
Orientador: Marcio Antonio Brunetto / Coorientador: Aulus Cavalieri Carciofi / Banca: Helio Jose Montassier / Banca: Ricardo Souza Vasconcellos / Resumo: Acredita-se que as frações ativas de mananoproteinas (FAM), obtidas a partir da extração e fracionamento da parede celular de leveduras (Saccharomyces cerevisiae) possam modular de forma benéfica o sistema imune. Este estudo avaliou os efeitos imunológicos das FAM em cães adultos e idosos. Foram empregadas três dietas extrusadas, isonutritivas com inclusão de 0% (T0); 0,04% (T400) e 0,08% de FAM (T800). No total, foram utilizados 36 cães da raça beagle. Os tratamentos resultaram da combinação de idade (adultos e idosos) e dieta (T0, T400 e T800), gerando seis tratamentos experimentais. Para cada dieta foram utilizados seis cães adultos (4,0±2,0 anos) e seis cães idosos (11,0±1,0 anos). O experimento seguiu delineamento em blocos, com três blocos de 12 cães (seis adultos e seis idosos, dois cães por idade e dieta). Nos dias zero, 14 e 28, amostras de sangue foram coletadas para fenotipagem dos leucócitos sanguíneos e ensaio de fagocitose. Nos dias zero e 28 foram realizados: hemogramas, análises bioquímicas, teste de linfoproliferação, produção de intermediários reativos do oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO), avaliação da concentração de imunoglobulina A fecal e teste de hipersensibilidade cutânea tardia (DTH). Os dados foram submetidos à análise de variância com medidas repetidas no tempo, exceto o DTH, no qual se analisou separadamente cada tempo do período experimental. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey (p≤0,05). A FAM mostrou-se segura nos teores e períodos estudados. Aos 28 dias, cães adultos alimentados com a dieta T400 em relação à T0 apresentaram contagens mais elevadas de linfócitos totais (p<0,05). Ao analisar a fenotipagem dos leucócitos sanguíneos demonstrou-se que, mais especificamente, o consumo de 0,04% de FAM pelos cães adultos elevou a contagem de linfócitos T totais (p=0,05). Independente da idade, neutrófilos de cães alimentados com T400, em relação à dieta ... / Abstract: It is believed that the active fractions mananoproteínas (AFM), obtained from the extraction and fractionation of cell wall of yeast (Saccharomyces cerevisiae), may beneficially modulate the immune system. This study evaluated the immunological effects of FAM in adults or elderly dogs. Three extruded diets with isonutritives including 0% (T0); 0.04% (T400) and 0.08% of AFM (T800) were used. In total, 36 beagle dogs were used. The treatments resulted from the combination of age (adults and elderly) and diet (T0, T400 and T800), generating six experimental treatments. For each diet six adult dogs (4.0 ± 2.0 years) and six elderly dogs (11.0 ± 1.0 years) were used. The experiment was randomized complete block design with three blocks of 12 dogs (six older and six adults, two dogs by age and diet). At zero, 14 and 28 days, blood samples were collected for phenotyping of blood leukocytes and evaluation of phagocytic activity. In zero and 28 days, hemogram, biochemical analysis, lymphocyte proliferation, production of hydrogen peroxide (H2O2), nitric oxide (NO), evaluation of the concentration of fecal immunoglobulin A and delayed test hypersensitivity (DTH) were performed. Data were subjected to analysis of variance with repeated measures, except DTH, in which we analyzed separately each time the trial period. Means were compared by Tukey test (p≤0.05). The AFM was safe in the levels and periods. At 28 days, adult dogs fed the diet T400 relative to T0 had higher counts of total lymphocytes (p<0.05). By analyzing the phenotype of the blood leucocytes was shown that, more specifically, adult dogs consuming 0.04% of the AFM increased the amount of total T-lymphocytes (p=0.05). Regardless of age, neutrophils from dogs fed T400, relative to T0 diet, tended to produce more H2O2 (p=0.09). Higher percentage of phagocytic activity of neutrophils were observed in adult dogs fed on T400 compared to the T800 diet (p<0.05). The skin response ... / Mestre

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