Orientadora : Profª. Drª. Jovanir Inês Muller Fernandes / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 24/02/2017 / Inclui referências ao final de cada capítulo / Resumo: Objetivou-se com este estudo, avaliar o efeito da suplementação de aditivo a base de extratos vegetais em dietas de frangos de corte sobre o desempenho produtivo, rendimento de carcaça e qualidade de carne, microbiota e qualidade intestinal. O experimento foi realizado no aviário experimental da Universidade Federal do Paraná. Foram utilizados 1408 pintos, de um dia de idade, Cobb slow, distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado com 8 tratamento, 4 repetições de 44 aves cada. Os tratamentos consistiram de: Tratamento A: Dieta controle, Tratamento B: APC, Tratamento C: extratos vegetais (100 g/ton), Tratamento D: extratos vegetais (150 g/ton), Tratamento E: APC + extratos vegetais (100 g/ton), tratamento F: APC + extratos vegetais (150 g/ton). Tratamento G: Dieta com redução nutricional 1 + APC + extratos vegetais (100 g/ton) e Tratamento H: Dieta com redução nutricional 2 + APC + extratos vegetais (150 g/ton). A avaliação do peso médio, consumo de ração, ganho de peso e conversão alimentar foi realizada semanalmente. Aos 35 dias de idade foram sacrificadas 16 aves/tratamento para avaliação da saúde intestinal, expressão de citocinas inflamatórias e coleta de material para análise da microbiota intestinal. Para cálculo do rendimento carcaça, cortes e deposição de gordura abdominal, aos 42 dias, foram abatidas 24 aves/tratamento. Para as análises de qualidade e propriedades funcionais da carne foram utilizados 12 peitos/tratamento, foi realizada a mensuração do ph do musculo 30 minutos e 24 horas após o abate, perda de água por gotejamento, por pressão, por congelamento e por cocção, análise de cor 24 horas após o abate, avaliação da ocorrência de "White Striping" e estabilidade oxidativa da carne. A análise estatística dos dados foi realizada pelo procedimento GLM, os dados não paramétricos foram analisados através do teste de kruskal-wallis do software SAS. Não houve efeito dos tratamentos sobre nenhumas das variáveis de desempenho em nenhum dos períodos avaliados. Aves que receberam dieta contendo APC associada aos extratos vegetais (100g/t) apresentaram maior rendimento de carcaça, em contrapartida, aves que receberam a dieta com APC e extratos vegetais na dose de 150g/t apresentaram menor rendimento de carcaça. A qualidade e a estabilidade oxidativa da carne in natura e armazenada não foi alterada por nenhum dos tratamentos. O uso do aditivo fitogênico diminuiu o grau de congestão e levou ao aumento no comprimento de vilo do jejuno. Não houve efeito de nenhum dos tratamentos sobre lesões macroscópicas e medidas morfometrias do duodeno e íleo. A mensuração das citocinas TNF-? e IL1, não foi alterada pela inclusão dos extratos vegetais. A avaliação da microbiota intestinal mostrou a ocorrência de espécies distintas entre os tratamentos. A suplementação de extratos vegetais em aves criadas em condições de baixo desafio sanitário não alterou o desempenho produtivo, características de carcaça e qualidade da carne, por outro lado mostrou alguns resultados satisfatórios sobre qualidade intestinal e modulação microbiota intestinal a qual foi altamente influenciada pelas diferentes dietas, esses resultados comprovam que as boas práticas de manejo, nutrição e biosseguridade são as melhores ferramentas para manutenção do máximo desempenho e qualidade de carne em frangos de corte. Palavras-chave: APC, antioxidantes, TBARs, Citocinas inflamatórias, 16S rDNA. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of the plant-extract-based additive supplementation in broiler diets on the performance, carcass yield, meat quality and microbiota and gut quality. The trial was carried out in the experimental barn of Federal University of Parana. There were 1408 Cobb Slow-chicks, housed in a completely randomized design with 8 treatments, 4 replicates and 44 birds each. The treatments were: A: control diet, B: AGP C: plant extract (100 g/ton), D: plant extract (150 g/ton), E: AGP + plant extract (100 g/ton), F: AGP + plant extract (150 g/ton), G: diet with nutritional decreasing 1 + AGP + plant extract (100 g/ton) and H: diet with nutritional decreasing 2 + AGP + plant extract (150 g/ton). The assessment of average weight, feed intake, weight gain and feed conversion ratio was weekly performed. At 35 days of age 16birds/treatment were slaughtered in order to evaluate gut health, expression of inflammatory cytokines and collection of samples for intestinal microbiota analysis. To calculate the carcass yield, cuts and deposition of abdominal fat at 42 days, 24 birds / treatment were slaughtered. For the analysis of quality and functional properties of the meat, it was used 12 breasts/treatment. It was measured the muscle pH 30 minutes and 24 hours after slaughter, loss of water by drip, pressure, freezing and cooking, color analysis 24 hours after the slaughter, evaluation of the occurrence of "White Striping" and oxidative stability of the meat. Data statistical analysis was performed by GLM procedure, and non-parametric data were analyzed through the kruskal-wallis test of SAS software. There was no effect of the treatments over any of the performance variables during the trial. Birds that received the diet containing AGP + plant extract (100g/t) showed higher carcass yield; on the other hand, birds that received the diet with AGP + plan extract (150g/t) presented lower carcass yield. The quality and the oxidative stability of the in natura and stored meat did not alter, by any of the treatments. The use of this phytogenic additive decreased the level of congestion and led to an increase in jejunum villus length; there was no effect of any of the treatments on macroscopic lesions and morphometric measurements of the duodenum and ileum. The measurement of TNF- ? and IL1 cytokines was not altered by the inclusion of plant extracts. The evaluation of the intestinal microbiota showed the occurrence of distinct species among the treatments. The supplementation of plant extracts in birds raised under low-sanitarychallenge conditions did not alter the productive performance, carcass characteristics and meat quality, on the other hand it showed some satisfactory results on intestinal quality and intestinal microbiota modulation which was highly influenced by the different diets. These results demonstrate that good management, nutrition and biosecurity are the best tools to keep maximum performance and meat quality in broilers. Key words: AGP, antioxidants, TBARs, inflammatory cytokines, 16S rDNA.

Orientadora : Profª. Drª. Elisabete Takiuchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 10/02/2017 / Inclui referências / Resumo: O parvovírus canino tipo 2 (CPV-2) é um dos principais enteropatógenos de cães, determinando alta morbidade e mortalidade em populações suscetíveis. Desde a sua emergência no final dos anos 70, o CPV-2 vem sofrendo mutações que conferiram vantagens adaptativas ao longo de sua evolução. Atualmente os três subtipos de CPV-2 circulantes são denominados CPV-2a, CPV-2b e CPV-2c. O presente estudo teve como objetivo diagnosticar e caracterizar os subtipos de CPV-2 em cães da região oeste do Paraná entre 2012 e 2016. Foram analisadas pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), 93 amostras fecais de cães com gastroenterite. Destas, 78,5% (73/93) resultaram positivas para amplificação parcial do gene VP2. O sequenciamento e caracterização molecular de 41 amostras revelou cinco subtipos CPV-2b e 36 subtipos CPV-2c. O CPV-2c foi o subtipo predominante até 2015, sendo substituído pelo CPV-2b em 2016. Entre as amostras caracterizadas como CPV-2c, 13 foram idênticas à amostra referência de CPV-2c originalmente isolada na Itália e de outros países da Europa, América do Norte e América do Sul, incluindo o Brasil. Uma amostra apresentou a mutação Thr440Ala localizado no principal sítio antigênico da VP2. Quatro amostras apresentaram a mutação silenciosa no resíduo 447 e 18 amostras a mutação silenciosa no resíduo 500. O monitoramento constante dos subtipos de CPV-2 circulantes na população canina é necessário para subsidiar estudos epidemiológicos, de patogenicidade e de evolução do CPV-2 no Brasil. Palavras-chave: Parvovírus canino, diagnóstico, caracterização molecular, análise filogenética / Abstract: Canine parvovirus type 2 (CPV-2) is one of the most important enteric pathogen in dogs with high morbidity and mortality on susceptible populations. Since its emergence in late 70s, CPV-2 has undergone mutations gaining adaptive advantages with its evolution. Three CPV-2 strains have been detected and were denominated CPV-2a, CPV-2b, and CPV-2c. This study objective was to diagnose and molecularly characterize CPV-2 strains circulating on Parana west region between 2012 and 2016. 93 fecal samples from dogs with gastroenteritis were analyzed by polymerase chain reaction (PCR). 78,5% (73/93) were positive (with the VP2 protein partial gene amplification). Sequencing and molecular characterization were performed on 41 samples, five were CPV-2b and 36 CPV-2c. The latter were the predominant strain until 2015, being replaced in 2016 by the CPV-2b. 13 samples, characterized as CPV-2c, were identical to the reference CPV-2c strain originally isolated from Italy and other European, North American and South American countries, including Brazil. One sample showed a Thr440Ala mutation, which is the main antigenic site on VP2. Four samples had a silent mutation on residue 447 and 18 samples had a silent mutation on residue 500. Constant CPV-2 strains monitoring is necessary to subsidize epidemiologic, pathogenic and evolutionary studies of CPV-2 in Brazil. Key words: Canine

Orientador : Prof. Dr. Américo Fróes Garcez Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 10/10/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Produção animal / Resumo: Foram conduzidos dois estudos com o objetivo de avaliar o efeito da utilização de permeado de soro de leite e de inoculante bacteriano contendo Lactobacillus buchneri em silagens de capim Pioneiro (Pennisetum purpureum Schum.) durante os períodos pré e pós-abertura dos silos. No primeiro, objetivou-se avaliar a composição bromatológica e as diferentes perdas decorrentes do período fermentativo destas silagens. No segundo, o objetivo foi avaliar as mudanças no perfil fermentativo, nos parâmetros químico-bromatológicos e a estabilidade do material após a abertura dos silos. A adição de permeado de soro diminuiu a umidade da massa ensilada. Durante o período pré-abertura dos silos, a inoculação com L. buchneri ocasionou o aumento dos teores de proteína bruta, FDN, FDA, hemicelulose e a diminuição dos teores de carboidratos não fibrosos, tendo isto ocorrido possivelmente devido à utilização de carboidratos não fibrosos por bactérias durante a fermentação. As perdas relativas no período pré-abertura dos silos apresentaram um padrão semelhante para todos os níveis de permeado. Foi verificado efeito linear crescente (P<0,05) da inclusão de permeado sobre as perdas acumuladas totais. No segundo estudo foi detectada quebra da estabilidade aeróbia em todas as silagens testadas. Houve redução nos teores de matéria seca durante o período de exposição aeróbia. Nos teores de FDN e nos de FDA, observou-se que tanto o fator tempo, quanto o fator níveis de permeado apresentaram efeito quadrático, onde se evidencia um aumento na concentração desses nutrientes durante os primeiros dias de estabilidade aeróbia, seguido de uma diminuição destes níveis no período final de avaliação aeróbia. O uso de permeado do soro de leite desidratado e de inoculante contendo L. buchneri na silagem de capim Pioneiro pode proporcionar silagens com maior valor nutricional. Entretanto, podem aumentar as perdas durante todo o processo de confecção e utilização das silagens. O uso L. buchneri é mais efetivo na melhoria da estabilidade aeróbia de silagens de capim Pioneiro com elevada umidade do que a utilização de permeado de soro. Palavras-chave: fermentação, gramínea tropical, inoculante, perdas / Abstract: Two studies were carried out with the aim to evaluate the effect of the use of whey permeate and bacterial inoculant containing Lactobacillus buchneri in Pioneiro grass silages before and after silo opening. In the first study, the aim was to evaluate the chemical composition and losses of these silages during the fermentative period. In the second study, the aim was to evaluate the changes in fermentation profile, nutritional parameters and aerobic stability. The addition of whey permeate was able to decrease the moisture of the silages. During the fermentative phase, inoculation by L. buchneri resulted in increased levels of crude protein, neutral detergent fiber, acid detergent fiber, hemicellulose and decreasing levels of non-fibrous carbohydrates. The result found is likely due to the use of non-fiber carbohydrates by bacteria during fermentation. Relative losses during the fermentative period presented similar results to all levels of whey permeate addition. An increased linear effect was found to total accumulative losses with the addition of whey permeate (P <0.05). In the second study was observed the break of aerobic stability to all tested silages. There was a negative effect of time on the dry matter content during aerobic exposure. The neutral detergent fiber and acid detergent fiber were affected by the whey permeate and aerobic exposure, both presenting a quadratic effect where it was observed an increase in the concentration of these nutrients during the first days of aerobic exposure followed by a decrease in those levels in the final period of aerobic evaluation. The use of dehydrated whey permeate and inoculant containing L. buchneri to Pioneiro grass silages can provide an improvement in the nutritional value of the silages. However, the losses with whey permeate may increase during the fermentation and after silo opening. The L. buchneri is more effective to improve the quality of Pioneiro grass silages with high moisture content than the use of dehydrated whey permeate. Keywords: fermentation, inoculant, losses, tropical grass

Orientador : Profª. Drª. Erica Cristina Bueno do Prado Guirro / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 13/06/2016 / Inclui referências : f. 28-34 / Resumo: Três semanas antes e três semanas depois do parto as vacas passam pelo período de transição, e esta fase é marcada por alterações metabólicas significativas, especialmente devido aoo balanço energético e hipocalcemia. Os exames laboratoriais podem ajudar a destacar a ocorrência dessas alterações metabólicas e, portanto, o objetivo deste estudo foi analisar o padrão hematológico, bioquímico e urinário na fase inicial da lactação em vacas Holandesas preto e branco. Trinta vacas com idades entre três e sete anos foram selecionadas e amostras de sangue e urina foram colhidas aos 60 dias antes da secagem (T-60), dia do parto (T0), três dias (T3), sete dias (T7), 15 dias (T15), 21 dias (T21) e 30 dias (T30) após o parto para fazer hemograma, exames bioquímicos e urinálise. Os resultados revelaram aumento nos índices de células vermelhas em T0, possivelmente associada à baixa ingestão de líquidos e de indução da eritropoiese pela prolactina e coriônica somatotropina; aumento dos níveis de beta-hidroxibutirato, ácidos graxos não-esterificados e glicose no T0 e subsequente redução gradativa, comprovando a lipomobilização tecidual para produção de energia; a urinalise revelou a presença de corpos cetônicos e de leucócitos nos dias próximos ao parto. Concluindo, o hemograma e a avaliação bioquímica de beta-hidroxibutirato, ácidos graxos não esterificados e glicose são importantes ferramentas para avaliar as alterações metabólicas no início da lactação de vacas Holandesas preto e branco, mas a urinálise não apresenta alterações importantes. As alterações hematológicas e bioquímicas são mais significativas no dia do parto e, posteriormente, ocorrer normalização gradativa desses testes. Palavras chave: lactação, balanço energético, vacas, beta hidroxibutirato, ácidos graxos não esterificados, glicose, hemograma / Abstract: Three weeks before and three weeks fafter calving the cows pass through the transition period, and this phase is marked by significant metabolic changes, specially due energy balance and hypocalcemia. Laboratory tests can help to highlight the occurrence of these metabolic changes and and, therefore, the aim of this study was to analise the hematological, biochemical and urinary profile in the initial phase of lactation in Holstein cow. Thirty black and white Holstein cows aged three and seven years were selected and blood and urine samples were collected at 60 days before drying (T- 60), delivery day (T0), three days(T3), seven days (T7), 15 days (T15), 21 days (T21) and 30 days (T30) after delivery for making blood count, biochemical tests and urinalysis. The results showed an increase in red blood cells indices at T0 possibly associated with low intake of liquids and induction of erythropoiesis by prolactin and chorionic somatotropin; increase in the levels of beta-hydroxybutyrate, non-esterified fatty acids and glucose at T0 and subsequent gradual reduction, showing the tissue lipomobilização for energy production; urine showed the presence of ketone bodies and leucocytes in the coming days to delivery. In conclusion, the blood count and biochemical evaluation of betahydroxybutyrate, non-esterified fatty acids and glucose are important tools to assess metabolic changes in the early latation of black and White Holstein cow, but the urinalysis shows no major changes. The hematological and biochemical changes are more significant at delivery day and subsequently occur gradual normalization of these tests. Keywords: lactation, energy balance, cows, beta-hydroxybutyrate, non-esterified fatty acids, glucose, hemograma

Orientadora : Profa. Dra. Jovanir Inês Muller Fernandes / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 12/04/2017 / Inclui referências : f.103-113 / Resumo: O selênio (Se) é um micronutriente essencial para o crescimento e manutenção do organismo animal. Está presente no organismo como selenometionina ou selenocisteína nas proteínas e tem como principal função a proteção dos lipídios das membranas e outros constituintes celulares contra a lesão oxidativa. O objetivo do trabalho foi suplementar dietas comerciais para frangos de corte com selênio orgânico sobre desempenho, qualidade da carne e estabilidade oxidativa de frangos de corte criados em ambiente termoneutro e submetidos ao estresse térmico. Foram realizados 2 experimentos, sendo o primeiro de 1 à 42 dias de idade, no qual as aves foram criadas em conforto térmico e um segundo experimento, onde as aves submetidas ao estresse térmico no período pré-abate (42 a 49 dias de idade). Foram utilizados 1440 pintos de corte, machos, distribuídos aleatoriamente em um delineamento inteiramente casualizado com 3 tratamentos e 12 repetições, compondo 36 unidades experimentais. As dietas experimentais foram compostas por dieta suplementada com 0,3 ppm de selênio de fonte inorgânica, dieta suplementada com 0,3 ppm de selênio de fonte orgânica, dieta suplementada com 0,6 ppm de selênio de fonte orgânica. A fonte inorgânica utilizada foi o selenito de sódio (45,6%) e a fonte orgânica foi o seleno-hidroxi-metionina (HMSeBA - ácido 2-hidroxi-4-metil-selenio-butanoico). A suplementação de fontes e níveis de Se não influenciou (p>0,05) o desempenho produtivo dos frangos de corte e manteve o balanço oxidativo dos frangos de corte e os atributos funcionais da carne de frangos. O nível de 0,6ppm de HMSeBA resultou em maior rendimento de carcaça e peito (p<0,05). A suplementação de selenito de sódio ou HMSeBA nos níveis recomendados preservou a carne refrigerada ou congelada da oxidação lipídica. A suplementação de fontes e níveis de Se não influenciou (p>0,05) a ocorrência e severidade das lesões macroscópicas decorrentes das miopatias white striping e wooden breast em peitos de frangos de corte. Houve uma maior substituição por colágeno no tecido muscular dos peitos de frangos de corte suplementados com selenito de sódio. A suplementação de HMSeBA reduziu a gravidade e frequência das lesões histopatológicas observadas nas amostras de peito. No período pré-abate, em que as aves foram submetidas ao estresse por calor, a suplementação de HMSeBA não influenciou (p>0,05) os níveis de HSP70, a estabilidade oxidativa e o rendimento de carcaça e de cortes comerciais. A suplementação 0,6 ppm de HMSeBA na dieta de frangos de corte submetidos ao estresse térmico pré-abate preveniu a queda do pH e resultou na menor (p<0,05) perda de água na carne do peito e reduziu (p<0,05) a formação de malondialdeído na carne congelada por 60 dias. Níveis mais elevados de Se podem ser necessários para garantir a permeabilidade da membrana de frangos mantidos em ambientes adversos no período ante mortem. Fontes orgânicas podem ser adicionadas às dietas em níveis mais elevados e podem ser uma estratégia interessante para diminuir a ocorrência das miopatias e para a cadeia avícola incorporar um nutriente essencial na carne de frangos. Palavras chave: Atividade antioxidante, Estresse térmico, Glutationa Peroxidase, HSP70, lipoperoxidação, MDA. / Abstratc: Selenium (Se) is an essential micronutrient for the growth and maintenance of the animal organism. It is found in the organism as selenomethionine or selenocysteine in proteins and its main function is to protect membrane lipids and other cellular constituents against oxidative damage. The aim of this study was to supplement commercial diets for broilers with organic selenium on performance, meat quality and oxidative stability of broilers reared in thermoneutral environment and submitted to thermal stress. Two trials were carried out, the first from 1 to 42 days of age, in which the birds were raised in thermal comfort and the second one the birds underwent thermal stress in the pre-slaughter period (42 to 49 days of age). 1440 male chicks were distributed in a completely randomized design with 3 treatments and 12 replicates, totaling 36 experimental units. The diets: 1) Supplemented with 0.3 ppm of selenium from inorganic source; 2) Supplemented with 0.3 ppm of selenium from organic source and 3) Supplemented with 0.6 ppm of selenium from organic source. The inorganic source was sodium selenite (45.6%) and the organic source was selenohydroxy methionine (HMSeBA-2-hydroxy-4-methyl selen-butanoic acid). The supplementation of different sources and levels of Se did not influence (p>0.05) the productive performance of broilers and maintained the oxidative balance of broilers and the functional attributes of broiler meat. The 0.6ppm level of HMSeBA showed higher carcass and breast yield (p<0.05). Sodium selenite or HMSeBA supplementation at the recommended levels preserved the cooled or frozen meat from lipid oxidation. The supplementation of sources and levels of Se did not influence (p<0.05) the occurrence and severity of macroscopic lesions from white striping and wooden breast myopathies in breasts of broilers. There was a higher replacement of collagen in breast muscle tissue of broilers supplemented with sodium selenite. The supplementation with HMSeBA decreased the severity of histopathologic lesions seen in breast samples. In the pre-slaughter period, in which birds underwent heat stress, HMSeBA supplementation did not influence (p>0.05) HSP70 levels, oxidative stability, carcass yield and commercial cut-up. The supplementation of 0.6 ppm of HMSeBA in the diet of broilers submitted to pre-slaughter heat stress avoided pH drop and resulted in lower (p<0.05) water loss in the breast meat and reduced (p<0.05) the amount of malondialdehyde in frozen meat for 60 days. Higher levels of Se may be required to ensure membrane permeability of broilers kept in adverse environments in the ante-mortem period. Organic sources can be added to diets at higher levels and may be an interesting strategy to reduce occurrence of myopathies and to poultry industry to incorporate an essential nutrient into poultry meat. Key-words: Antioxidant activity, Thermal stress, Glutathione peroxidase, HSP70, lipoperoxidation, MDA.

Orientadora : Profª. Drª. Elisabete Takiuchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 28/07/2017 / Inclui referências : f. 55-62 / Resumo: O Picobirnavirus (PBV) constitui um grupo de vírus emergentes pertencente à família Picobirnaviridae. São vírus com capsídeo icosaédrico, genoma formado por dois segmentos de RNA fita dupla, que podem infectar uma ampla gama de hospedeiros. Embora o vírus tenha sido detectado em animais com diarreia, alguns estudos têm sugerido que o PBV não possua uma relação etiológica com a diarreia, mas com diversas condições de imunossupressão que favorecem a replicação e excreção viral. Esse estudo relata a ocorrência de PBV em hospedeiros ovinos a partir de amostras fecais provenientes de um rebanho com aptidão para corte e a caracterização molecular dos isolados. Foram analisadas 100 amostras de fezes representativas de diferentes idades e categorias animais do rebanho. O PBV foi detectado em 5% (5/100) e 62% (62/100) das amostras pelas técnicas eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA) e RT-PCR, respectivamente. Todas as amostras PBV positivas na EGPA apresentaram o perfil "large profile". Os produtos amplificados baseados na sequência parcial do gene RdRp foram caracterizados como genogrupo I do PBV (PBV-GI) após o sequenciamento genômico. A análise filogenética dos seis isolados de PBV ovino detectados neste estudo demonstrou alta heterogeneidade, apresentando maior identidade com PBV isolado de espécies heterólogas, (suínos e dromedário) ou detectado em efluentes de águas residuais urbanas em estações de tratamento. Este é o segundo relato de detecção do PBV em ovinos no mundo e o primeiro a demonstrar a alta prevalência do vírus em um rebanho ovino de exploração econômica, incluindo a caracterização molecular dos isolados. Palavras-chave: Picobirnavírus, ovino, EGPA, RT-PCR. / Abstract: Picobirnavirus (PBV) constitutes a group of emerging viruses belonging to the Family Picobirnaviridae. They are viruses with an icosahedral capsid and a genome formed by two double stranded RNA segments, which can infect a wide range of hosts. Although the virus has already been detected in animals with diarrhea, some studies have suggested that PBV does not have an etiologic relationship with diarrhea, but with several immunosuppressive conditions that favor viral replication and excretion. This study reports the occurrence of PBV in sheep hosts from fecal samples from a herd with meat production and the molecular characterization of the isolates. A hundred representative stool samples of different ages and animal categories of the herd were analyzed. PBV was detected in 5% (5/100) and 62% (62/100) of the samples by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and RT-PCR, respectively. All PBV positive samples in PAGE presented the "large" profile. Amplified products based on the partial sequence of the RdRp gene were characterized as PBV genogroup I (PBV-GI) after genomic sequencing. The phylogenetic analysis of the six isolates of ovine PBV detected in this study demonstrated high heterogeneity, presenting a higher identity with PBV isolated from heterologous species (swine and dromedary) or detected in urban wastewater in treatment plants. This is the second report of detection of PBV in sheep in the world and the first to demonstrate the high prevalence of the virus in a sheep herd of economic exploitation, including the molecular characterization of the isolates. Keywords: Picobirnavirus, sheep, PAGE, RT-PCR.

Orientador : Profª. Drª. Silvia Cristina Osaki / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 17/02/2017 / Inclui referências : f. 39-48;68-72;80-82;95-98;101-115 / Resumo: Parasitos são seres que se beneficiam de um hospedeiro para sobreviver, podendo causar danos à saúde do animal. Em bovinos, os parasitos que acometem o sistema reprodutor possuem grande importância, principalmente pelos prejuízos econômicos que geram. O objetivo desse trabalho foi pesquisar a prevalência de Neospora caninum e Trypanosoma vivax em bovinos; N. caninum e parasitos grastrintestinais em cães; N. caninum em fetos bovinos, além de determinar os principais fatores de risco associados com os patógenos pesquisados em propriedades rurais de bovinocultura de leite da região Oeste do Paraná. Após a realização do cálculo de amostragem foram coletadas 600 amostras de sangue e 17 fetos bovinos, 163 amostras de sangue e 120 amostras de fezes de cães de propriedades rurais das cidades de Cascavel, Toledo, Marechal Cândido Rondon e Palotina, e aplicado um questionário epidemiológico. Para a detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em cães e bovinos foi realizada a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Para o diagnóstico de T. vivax em bovinos foi realizada a RIFI e esfregaço sanguíneo da capa leucocitária. Os Métodos de Willis-Mollay, Hoffman, Pons e Janer e Sheather foram utilizados para a detecção de ovos e/ou oo (cistos) de parasitos em amostras de fezes dos cães. Amostras do cérebro, coração e placenta dos fetos bovinos foram submetidas à técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para o diagnóstico de Neospora caninum. Os resultados e os dados coletados a partir do questionário epidemiológico foram analisados através do programa EpiInfo. Das amostras de bovinos, 23,67% foram positivas para N. caninum e todas apresentaram resultado negativo para T. vivax. Em nove (52,94%) fetos foi possível amplificar material genético do N. caninum. As principais variáveis associadas com a infecção foram histórico de aborto, baixa produção de leite, criação extensiva e raça Jersey. Das 163 amostras de sangue de cães, 11,66% foram positivas para o N.caninum, não havendo correlação significativa entre os resultados da sorologia dos cães e dos bovinos. Das amostras fecais, 71,67% foram positivas para ao menos um parasito. Os mais encontrados foram Ancylostoma spp. (80,23%), Trichuris vulpis (20,93%), Cystoisospora spp. (17,44%) e Giardia spp. (8,14%). Também foram encontrados Sarcocystis spp., Toxocara spp., Hymenolepis diminuta e Capillaria spp. em um percentual menor. Pseudoparasitos como oocistos da família Adeleidae e Eimeria spp., e ovos da família Ascaridiidae também foram encontrados. De acordo com o gênero/espécie de parasito, associação foi verificada entre fezes pastosas e parasitismo por Cystoisospora spp. e Sarcocystis spp., histórico de verminose e Trichuris vulpis, e condições de vida, ou seja, se vivem soltos ou presos, para e Ancylostoma spp., Cystoisospora spp., Giardia spp. e Trichuris vulpis. Palavras-chave: aborto, coproparasitológico, enteroparasitos, PCR, RIFI / Abstract: Parasites are beings that benefit from a host to survive, and can cause harm to the health of the animal. In cattle, the parasites that affect the reproductive system are of great importance, mainly for the economic damages that they cause. The objective of this study was to investigate the prevalence of Neospora caninum and Trypanosoma vivax in cattle; N. caninum and gastrointestinal parasites in dogs; N. caninum in bovine fetuses, in addition to the main risk factors associated with the pathogens researched in rural dairy cattle in the western region of Paraná. After the sampling calculation was performed, 600 blood samples and 17 bovine fetuses, 163 blood samples and 120 faecal samples of rural dogs were collected from the cities of Cascavel, Toledo, Marechal Cândido Rondon and Palotina, and also an epidemiological questionnaire was applied. For the detection of anti-Neospora caninum antibodies in dogs and cattle, an Indirect Immunofluorescence Reaction (IFAT) was performed. For the diagnosis of T. vivax in cattle, an IFAT and blood smear of the leukocyte layer was performed. The methods of Willis-Mollay, Hoffman, Pons and Janer and Sheather were used to detect eggs and/or oo(cysts) of parasites in samples of feces from dogs. Brain, heart and placenta samples from bovine fetuses were submitted to the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique for the diagnosis of Neospora caninum. The results and data collected from the epidemiological questionnaire were analyzed through the EpiInfo program. Of the bovine samples, 23.67% were positive for N. caninum and all showed negative results for T. vivax. In nine (52.94%) fetuses it was possible to amplify genetic material of N. caninum. The main variables associated with the infection were abortion history, low milk yield, extensive breeding and Jersey breed. Of the 163 dog blood samples, 11.66% were positive for N. caninum, with no significant correlation between the serology results of dogs and cattle. Of the fecal samples, 71.67% were positive for at least one parasite. The most sought after were Ancylostoma spp. (80.23%), Trichuris vulpis (20.93%), Cystoisospora spp. (17.44%) and Giardia spp. (8.14%). Sarcocystis spp., Toxocara spp., Hymenolepis diminuta and Capillaria spp. were also found In a lower percentage. Pseudoparasites such as oocysts of the family Adeleidae and Eimeria spp., and eggs of the Ascaridiidae family were found too. According to the genus/species of parasite, the association was verified between pasty faeces and parasitism by Cystoisospora spp. and Sarcocystis spp., history of verminosis and Trichuris vulpis, and living conditions, that is, if they live loose or trapped, for Ancylostoma spp., Cystoisospora spp., Giardia spp. and Trichuris vulpis. Key words: abortion, coproparasitological, enteroparasites, IFAT, PCR

Orientador : Prof. Dr. Luciano dos Santos Bersot / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina,31/03/2016 / Inclui referências : f. 66-68 / Resumo: Salmonella sp. é capaz de migrar para o interior da carne, sendo que as condições de estocagem e a presença de microbiota proteolítica podem influenciar nessa migração. No capítulo 1, realizou-se a pesquisa de Salmonella sp. em 21 peitos de frango, os quais foram segmentados em quatro partes, sendo elas pele, superfície, meio e interior. Subentendendo-se que a contaminação do frango ocorre na superfície, o estudo objetivou verificar a ocorrência de Salmonella sp. nos segmentos mais interiores do peito de frango e a possível influência de bactérias deterioradoras na presença de Salmonella sp. nesses segmentos. Como esperado, a porção com maior presença do patógeno foi a pele, seguida da superfície; os segmentos mais internos apresentaram uma porcentagem menor, porém foi detectada a bactéria. Não foi possível correlacionar a presença de bactérias deterioradoras com o aumento da prevalência de Salmonella sp. no interior da carne. No capítulo 2 objetivou-se avaliar a migração de Salmonella Enteritidis (SE) e Salmonella Heidelberg (SH) isoladas e adicionadas de psicrotróficos proteolíticos (SEP e SHP) para o interior de blocos de carne de frango submetidos a diferentes condições de estocagem: pelos tempos 6, 12, 24, 48 e 168 horas e nas temperaturas 2, 7 e - 30°C. Para quantificação bacteriana, as amostras foram divididas segmentos iguais, sendo o segmento A o mais superficial, B o intermediário e C o mais interno deles. Os resultados foram expressos em LogUFC/g e submetidos a análise de variância (ANOVA) e comparação de médias pelo teste de SNK. Salmonella sp teve êxito na migração pela carne frango em todas variações de tempo-temperatura e tratamentos, além disso, os dados sugerem que a migração foi progressiva até o tempo de 24h, porém decaiu com 48h. Em relação aos tratamentos, SEP teve contagens menores que os outros três tratamentos, os quais foram iguais entre si. Conclui-se que Salmonella sp. é capaz de migrar para o interior da carne em um curto período de tempo, mesmo em temperaturas de refrigeração, e que a presença de psicrotróficos proteolíticos teve efeito inibitório na migração do sorovar S. Enteritidis. / Abstract: Salmonella sp. is able to migrate into the meat, and the storage conditions as well the presence of proteolytic microflora may influence this migration. In Chapter 1, has been realized the research with Salmonella sp. using 21 chicken breasts, which were segmented into four pieces, which were: skin, surface, middle and interior. On supposing that the chicken's contamination occurs on the surface, the study aimed to verify the occurrence of Salmonella sp.in the innermost segments of the chicken breast and the possible influence of bacterial spoilage with the presence of Salmonella sp. in these segments. As expected, the portion with increased pathogen was skin, then the surface; the innermost segments showed a smaller percentage, but the bacterium was detected. It was not possible to correlate the presence of spoilage bacteria with increased prevalence of Salmonella sp. inside the meat. In chapter 2, one aimed to evaluate the migration of Salmonella Enteritidis (SE) and Salmonella Heidelberg (SH) isolated and added of proteolytic psychrotrophic (SEP and SHP) to the inside of chicken meat blocks under different storage conditions: to five periods of storage: 6, 12, 24, 48 and 168 hours and under temperatures of 2o, 7o and -30° C. For a bacterial quantitation, the samples were divided into equal segments, the segment A is the most superficial, segment B the intermediate and C the innermost of them. The results were expressed as logUFC/g and subjected to analysis of variance (ANOVA) and means were compared by SNK test. Salmonellasp succeeded by migration inside of chicken' meat in all variations of time-temperature and treatments and, in addition, the data suggest that the migration was growing gradually until 24 hours, but declined after 48 hours. In relation to treatments SEP had lower scores than the other three treatments which were equal among them. One may conclude that Salmonella sp. is able to migrate into the meat in a short period of time, even under refrigerated temperatures, and the presence of proteolytic psychrotrophic had inhibitory effect on the migration of serotype S. Enteritidis.

Orientadora : Profa. Dra. Jovanir Inês Müller Fernandes / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 24/02/2017 / Inclui referências / Resumo: Esse trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar o efeito da adição de queratinase em dietas contendo inibidores de tripsina sobre o desempenho produtivo, peso do pâncreas, rendimento e composição de carcaça e integridade intestinal de frangos de corte submetidos ou não a um modelo de desafio sanitário. Foram realizados dois experimentos. No experimento 1 foram alojados 1280 pintos em esquema fatorial 2 x 2 (com e sem a presença de soja x com e sem queratinase). A inclusão da queratinase foi de 250 g/tonelada. O desempenho das aves foi avaliado semanalmente até os 42 dias. Aos 21 e 42 dias de idade, o peso do pâncreas foi obtido para cálculo do peso relativo. Aos 42 dias foi determinado o rendimento de carcaça, avaliação da ocorrência de White Striping, resistência de pele e composição de carcaça. Aos 21 e 42 dias foram coletados segmentos intestinais para histomorfometria, contagem de caliciformes e Índice de Saúde intestinal (ISI). No experimento 2; 640 pintos foram alojados em gaiolas experimentais e distribuídos em esquema fatorial 2 x 2 (com e sem queratinase e com e sem desafio). As rações foram formuladas com farelo de soja subprocessado. O desafio foi promovido por meio da utilização de cama descartada. Aos 21 dias foi realizado o desempenho zootécnico das aves. Aos 14 e 21 dias foram coletados segmentos intestinais para histomorfometria, contagem de caliciformes e avaliação da saúde intestinal. No experimento 1, a suplementação da queratinase resultou em maior ganho de peso e a inclusão de soja crua em pior conversão alimentar aos 7 dias. Aos 21 dias, a associação entre a queratinase e a soja crua reduziu o peso do pâncreas. Aves suplementadas com a queratinase apresentaram maior rendimento de carcaça. A inclusão de soja crua resultou em maior elasticidade de pele. Aos 21 dias, aves que consumiram dieta com soja crua apresentaram menor relação V:C e maior número de criptas por vilo. A utilização da queratinase reduziu os escores de ISI aos 21 dias. No entanto, aos 42 dias a queratinase resultou em maior inflamação intestinal. No experimento 2, o desafio resultou em maior largura de cripta e menor relação vilo:cripta, aos 14 dias. Aves que sofreram o desafio e receberam a suplementação de queratinase apresentaram maior área de absorção do jejuno. Aos 21 dias, aves suplementadas com a queratinase apresentaram maior largura de vilo e as desafiadas, em maior número de caliciformes no jejuno. Aves que receberam dietas sem a inclusão da queratinase e foram desafiadas apresentaram maior número de caliciformes no duodeno. Resultado semelhante foi observado nas aves não desafiadas e que receberam a suplementação de queratinase. Aves desafiadas apresentaram maior escore de ISI aos 14 dias. Aos 21 dias, aves suplementadas com queratinase e desafiadas apresentaram maior inflamação intestinal. Portanto, a suplementação de queratinase resultou em melhora no desempenho e integridade intestinal na fase inicial de criação. Além disso, a associação da queratinase e soja crua resultou em redução no peso do pâncreas e da inflamação intestinal no íleo. Palavras-chave: desafio sanitário, globulinas, inflamação intestinal / Abstract: The aim was to evaluate the effect of queratinase addition on diets containing trypsin inhibitors on the productive performance and intestinal health of broilers and under sanitary challenge. There were two trials; in the first one there were 1280 chicks housed in a completely randomized design in a 2 x 2 factorial scheme (with and without raw soybean replacing deactivated soybean x with and without queratinase). The queratinase was added in the diets at a dose of 250 g/ton. The performance of the birds was weekly assessed. At 21 and 42 days of age, the weight of the pancreas was obtained in order to calculate the relative weight. At 42 days, the carcass yield was performed, assessment of White Striping, skin resistance and carcass composition. At 21 and 42 days, intestine fragments were collected for histomorphometry, goblet cell counting and intestinal health evaluation, applying the morphometric index "I See Inside" (ISI). In the second trial, there were 640 chicks housed in experimental cages and placed in a completely randomized design following a 2 x 2 factorial scheme (with and without queratinase and with and without challenge). The diets were calculated with subprocessed soybean meal. The challenge was promoted through the use of discarded bedding. At 21 days, the performance of the animals was obtained. At 14 and 21 days intestine fragments were collected for histomopho metry, goblet cell counting and intestinal health evaluation. The results were submitted to analysis of variance at the 5% level of significance using SAS. In the first trial, the queratinase supplementation showed higher weight gain and raw soybean worst feed conversion ratio at 7 days of age. At 21 days, the association of queratinase and raw soybean resulted in a reduction of pancreatic weight. Birds supplemented with queratinase showed higher carcass yield. The addition of raw soybean caused higher skin elasticity. At 21 days, birds that received the diet with raw saybean showed lower V:C and higher number of crypts per villi. The use of queratinase provided a decrease of the ISI scores at 21 days. However, at 42 days, the queratinase showed higher intestinal inflammation. In the second trial, the challenge resulted in larger crypts and lower V:C at 14 days. The birds that underwent the challenge and received the queratinase supplementation had higher absorption area of jejunum. At 21 days, birds supplemented with queratinase showed higher larger villi; and the ones that were challenged higher number of goblet cells in the jejunum. Animals that received diets without queratinase and underwent the challenge had higher number of goblet cells. A similar result was noticed in birds that were not challenged and received queratinase supplementation. Challenged birds presented higher score of ISI at 14 days. At 21 days, challenged birds supplemented with queratinase had higher intestinal inflammation. The results obtained in this study indicate that the benefits of exogenous queratinase are better in the initial phase of broilers. Key-words: globulins, intestinal inflammation, sanitary challenge

Orientadora : Profª. Drª. Aline de Marco Viott / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 18/12/2017 / Inclui referências : f. 22-25 / Resumo: Bactérias do gênero Brachyspira podem ocasionar enfermidades entéricas em aves e a correta identificação se faz necessário tendo em vista que algumas espécies não são patogênicas. Devido à característica fastidiosa de crescimento e a sua importância na agroindústria comercial, técnicas de identificação rápidas e eficazes se fazem necessárias. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da técnica de hibridização fluorescente in situ (FISH) para o diagnóstico de Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia utilizando amostras de ceco de aves de postura comercial e matrizes comerciais fixadas em formol. Foram coletadas amostras de 112 aves com idade entre 35 e 82 semanas, sendo 42 oriundas de granjas de galinhas de postura comercial e 70 de granjas de matrizes de corte. Para avaliação primeiramente procedeu-se ao isolamento bacteriano a partir das fezes, técnica ouro para identificação do agente. As amostras positivas foram submetidas a qPCR para identificação de espécies patogênicas. Posteriormente, segmentos formolizados de ceco, dessas mesmas aves, foram processados pela técnica de FISH utilizando sondas marcadas de Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia. A comparação dos dados encontrados foi realizada através do teste não paramétrico de qui-quadrado. Das 112 amostras foram obtidos 40 isolamentos característicos de Brachyspira e destes, no qPCR, 14 identificadas como B. hyodysenteriae e 7 como Brachyspira intermedia, 2 foram positivas para ambas e 21 não foram caracterizadas. Na FISH 52 amostras foram positivas para Brachyspira sp, 22 para B. hyodysenteriae, 28 para B. intermedia, 7 para B. pilosicoli e 8 amostras foram positivas para duas espécies. A avaliação estatística revelou que a técnica de FISH foi capaz de indicar maior número de aves positivos quando comparada ao isolamento bacteriano e a qPCR, inclusive revelando aves positivos para B. pilosicoli que não tinham sido identificados anteriormente. Dessa forma conclui-se que a FISH apresentou-se eficaz na identificação das Brachyspiras avaliadas servindo assim como uma ferramenta rápida e eficiente para o diagnóstico. Palavras-chave: Espiroquetose intestinal aviária. Hibridização fluorescente in situ. Brachyspira. / Abstract: Bacteria of the genus Brachyspira can cause enteric diseases in birds and its correct identification is necessary because some species are nonpathogenic. Due to the fastidious growth characteristic and importance of these bacteria in agroindustry, fast and effective identification techniques are required. The objective of this study was to evaluate the effectiveness of the Fluorescent in situ Hybridization technique (FISH) for diagnosis of the Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae, and Brachyspira intermedia, using formalin-fixed samples from the cecum of laying hens and commercial matrices. Samples were collected from 112 animals with age from 35 to 82 weeks, being 42 from commercial farm laying hens and 70 from broiler matrices farm. Firstly, the bacterial isolation was made from feces, which is a gold technique for microorganism identification. The samples were submitted to qPCR for identification of pathogenic species. Subsequently, the cecal fragments fixed with formalin, from the same birds, were processed through FISH technique, using marked probes of Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae, and Brachyspira intermedia. A comparison of the obtained data was performed through chi-square non-parametric test. From the 112 samples, it was obtained 40 bacterial isolates characteristic of Brachyspira. From that, qPCR identified 14 as B. hyodysenteriae and seven as Brachyspira intermedia, two samples were positive for both and 21 were no characterized. In FISH, 52 samples were positive for Brachyspira sp., 22 for B. hyodysenteriae, 28 for B. intermedia, 7 for B. pilosicoli and eight samples were positive for two bacterial species. The statistical evaluation showed that using the FISH technique it was possible to identify a greater number of positive animals in comparison with bacterial isolation and qPCR, inclusive identifying positive animals for B. pilosicoli, which were not identified before. Therefore, it is concluded that the FISH technique is efficient for identification of the Brachyspira species evaluated in this study as well as is a fast and efficient tool for the diagnosis. Key-words: Fluorescent in situ hybridization. Avian intestinal spirochaetosis. Brachyspira.