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Criopreservação de semên equino envasado em criotuboLorenzoni, Sabrina Leães Gomez January 2011 (has links)
Na espécie equina, ao contrário do obtido com ruminantes, as técnicas de criopreservação de sêmen progridem lentamente, mas apesar das barreiras técnicas o emprego da inseminação artificial com sêmen congelado vem crescendo. Este experimento foi dividido em três etapas: na primeira comparou-se a utilização de diferentes diluentes e técnicas de congelação; determinação da eficiência do criotubo para envase do sêmen para a criopreservação; e na terceira determinou-se as taxas de prenhez das éguas artificialmente inseminadas com sêmen congelado envasado em criotubo. Seis garanhões foram submetidos à coleta do sêmen e doze éguas foram inseminadas artificialmente no primeiro estro da estação reprodutiva. As amostras foram diluídas em INRA82 ou Nagase, contendo 5% de glicerol, com concentração de 200 x 106 espermatozóides/ml. Parte do sêmen diluído foi envasado em palhetas (0,5ml), das quais uma parte foi imediatamente congelada. As palhetas restantes foram resfriadas previamente da temperatura ambiente (24ºC) até 5ºC antes do congelamento. As amostras foram descongeladas em banho-maria a 37ºC por 30seg. O mesmo protocolo de congelamento com resfriamento prévio foi realizado com as amostras envasadas em criotubos, sendo estas amostras descongeladas a 50ºC por 100seg em banho-maria. A eficiência in vivo do sêmen criopreservado, foi determinada através da inseminação artificial. O diagnóstico de prenhez foi realizado 20 dias após a inseminação artificial através de exame ultrassonográfico. Após a análise dos dados verificou-se que não houve diferença significativa entre os diluentes testados na motilidade progressiva e vigor dos espermatozóides. As médias da motilidade espermática após o aquecimento das amostras foram de: 43,32% e 26,66%, para o sêmen diluído com INRA82 submetido ao resfriamento ou não antes do congelamento, respectivamente, e para o sêmen diluído com Nagase revelou motilidade espermática de 41,08% e 24,44%, respectivamente. De acordo com esses resultados, os grupos experimentais submetidos ao resfriamento prévio apresentaram taxas de motilidade espermática superiores aos grupos que foram congelados diretamente. Não se verificou diferenças quanto ao vigor, motilidade e defeitos espermáticos entre os diluentes testados e os tipos de envase. As éguas inseminadas com criotubo apresentaram taxa de prenhez de 50% (3/6), já com as éguas do grupo controle (palheta) observou-se 16,66% (1/6), provando a viabilidade do congelamento do sêmen envasado em criotubo. / In the horse industry, unlike obtained with catle, the development of sperm cryopreservation techniques are very slow but despite the technical barriers the artificial insemination with frozen semen is growing. This experiment was divided into three steps. The first one compared the use of different diluents and freezing techniques. The other two stages were the use of cryogenic tubes for filling the semen and the determination of mare pregnancy rates that were artificially inseminated with frozen semen packaged in cryogenic tubes. Six stallions were submitted to semen collection and twelve mares were artificially inseminated at first estrus of the breeding season. The samples were diluted in INRA82 or Nagase, containing 5% glycerol, with a concentration of 200 x 106 sperm / ml. A fraction of the diluted semen was stored in straws (0.5 ml), some of those straws were immediately frozen. The remaining straws were cooled from room temperature (24ºC) to 5º C before freezing. The samples were thawed in a water bath at 37° C during 30sec. The same protocol with cooling prior to freezing was performed with samples filled into cryogenic tubes, and these samples were thawed in a water bath at 50° C during 100seg. The in vivo efficiency of cryopreserved semen was determined through artificial insemination. The diagnosis of pregnancy was performed after 20 days by ultrasound examination. After analyzing the data it was found that there was no significant difference in sperm motility and vigor among the tested diluents. Motility was INRA82: 43.32% / 26.66% and Nagase: 41.08% / 24.44%, when the semen was previously cooled or frozen directly, respectively. According to these results, the experimental groups subjected to cooling prior freezing showed better motility rates than the groups that were frozen directly. There were no differences regarding the vigor, motility and sperm defects among the diluents and the semen containers. The mares inseminated with cryotubes showed 50% (3/6) pregnancy rate, and 16.66% (1/6) pregnancy rate was observed in the group of mares inseminated with straws.
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Avaliação andrológica de cães da raça Golden Retriever sadios e afetados pela distrofia muscular / Breeding soundness of healthy and affected by muscular dystrophy Golden Retriever dogsMarta Maria Círchia Pinto Luppi 18 December 2006 (has links)
O objetivo do presente estudo foi avaliar a aptidão reprodutiva de cães da raça Golden Retriever afetados pela distrofia muscular. Realizou-se avaliações andrológicas em 11 cães com idades entre 10 meses e 4 anos. Destes, 7 eram afetados pela distrofia muscular e 4 sadios, utilizados como controle. Todos foram submetidos a exame clinico, análise seminal e ultra-sonografia dos órgãos reprodutores. Analisou-se também a morfologia dos testículos e seus respectivos funículos espermáticos dos cães que foram a óbito. Detectou-se as seguintes alterações nos cães afetados pela distrofia: atrofia muscular, andar rígido, pneumonia por aspiração, fragilidade do diafragma com projeção do estomago para a cavidade torácica, megaesôfago e cardiomiopatia dilatada. Em relação aos órgãos genitais dois dos cães apresentaram criptorquidismo bilateral. Os resultados das análises seminais mostraram que os cães afetados pela distrofia possuem maior quantidade de defeitos espermáticos maiores e totais. Nas avaliações ultra-sonográficas não foram identificadas diferenças entre os cães afetados pela distrofia quando comparados com cães sadios. As análises histopatológicas evidenciaram alterações morfológicas nos testículos e músculos cremáster de cães afetados pela doença. Os testículos apresentaram degeneração testicular e o músculo cremáster retração de fibras musculares com hialinizacao dos miócitos. Conclui-se então que a distrofia muscular em cães da raça Golden Retriever pode comprometer sua aptidão reprodutiva. / The aim of the present research was to evaluate the reproductive condition of Golden Retriever dogs affected by muscular dystrophy. Breeding soundness examination was performed in 11 male dogs aged between 10 months and 4 years. Seven of this total were affected by muscular dystrophy and 4 healthy dogs that served as control. All dogs were submitted to a through physical exam, seminal evaluation and ultrasound of the reproductive tract. Testicle and spermatic cord morphology of post-mortem dogs were also examined. The following alterations were observed for the affected dogs: muscular atrophy, stiff walk, aspiration pneumonia, diaphragmatic fragility with stomach projection to the torax, megaesophagus e dilated cardiomyopathy. In relation to the genital tract, two dogs presented with bilateral cryptorchidism. Semen evaluation revealed high percentage of major and total sperm defects in affected dogs. Ultrasonographic exams were similar among healthy and affected dogs. Histophatology of the testicle and cremaster muscle revealed morphologic alterations in affected dogs represented by degeneration and muscular retraction with miocyte hyalinization, respectively. In conclusion, affected Golden Retriever dogs have their reproductive performance compromised by the muscular dystrophy.
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Criopreservação de semên equino envasado em criotuboLorenzoni, Sabrina Leães Gomez January 2011 (has links)
Na espécie equina, ao contrário do obtido com ruminantes, as técnicas de criopreservação de sêmen progridem lentamente, mas apesar das barreiras técnicas o emprego da inseminação artificial com sêmen congelado vem crescendo. Este experimento foi dividido em três etapas: na primeira comparou-se a utilização de diferentes diluentes e técnicas de congelação; determinação da eficiência do criotubo para envase do sêmen para a criopreservação; e na terceira determinou-se as taxas de prenhez das éguas artificialmente inseminadas com sêmen congelado envasado em criotubo. Seis garanhões foram submetidos à coleta do sêmen e doze éguas foram inseminadas artificialmente no primeiro estro da estação reprodutiva. As amostras foram diluídas em INRA82 ou Nagase, contendo 5% de glicerol, com concentração de 200 x 106 espermatozóides/ml. Parte do sêmen diluído foi envasado em palhetas (0,5ml), das quais uma parte foi imediatamente congelada. As palhetas restantes foram resfriadas previamente da temperatura ambiente (24ºC) até 5ºC antes do congelamento. As amostras foram descongeladas em banho-maria a 37ºC por 30seg. O mesmo protocolo de congelamento com resfriamento prévio foi realizado com as amostras envasadas em criotubos, sendo estas amostras descongeladas a 50ºC por 100seg em banho-maria. A eficiência in vivo do sêmen criopreservado, foi determinada através da inseminação artificial. O diagnóstico de prenhez foi realizado 20 dias após a inseminação artificial através de exame ultrassonográfico. Após a análise dos dados verificou-se que não houve diferença significativa entre os diluentes testados na motilidade progressiva e vigor dos espermatozóides. As médias da motilidade espermática após o aquecimento das amostras foram de: 43,32% e 26,66%, para o sêmen diluído com INRA82 submetido ao resfriamento ou não antes do congelamento, respectivamente, e para o sêmen diluído com Nagase revelou motilidade espermática de 41,08% e 24,44%, respectivamente. De acordo com esses resultados, os grupos experimentais submetidos ao resfriamento prévio apresentaram taxas de motilidade espermática superiores aos grupos que foram congelados diretamente. Não se verificou diferenças quanto ao vigor, motilidade e defeitos espermáticos entre os diluentes testados e os tipos de envase. As éguas inseminadas com criotubo apresentaram taxa de prenhez de 50% (3/6), já com as éguas do grupo controle (palheta) observou-se 16,66% (1/6), provando a viabilidade do congelamento do sêmen envasado em criotubo. / In the horse industry, unlike obtained with catle, the development of sperm cryopreservation techniques are very slow but despite the technical barriers the artificial insemination with frozen semen is growing. This experiment was divided into three steps. The first one compared the use of different diluents and freezing techniques. The other two stages were the use of cryogenic tubes for filling the semen and the determination of mare pregnancy rates that were artificially inseminated with frozen semen packaged in cryogenic tubes. Six stallions were submitted to semen collection and twelve mares were artificially inseminated at first estrus of the breeding season. The samples were diluted in INRA82 or Nagase, containing 5% glycerol, with a concentration of 200 x 106 sperm / ml. A fraction of the diluted semen was stored in straws (0.5 ml), some of those straws were immediately frozen. The remaining straws were cooled from room temperature (24ºC) to 5º C before freezing. The samples were thawed in a water bath at 37° C during 30sec. The same protocol with cooling prior to freezing was performed with samples filled into cryogenic tubes, and these samples were thawed in a water bath at 50° C during 100seg. The in vivo efficiency of cryopreserved semen was determined through artificial insemination. The diagnosis of pregnancy was performed after 20 days by ultrasound examination. After analyzing the data it was found that there was no significant difference in sperm motility and vigor among the tested diluents. Motility was INRA82: 43.32% / 26.66% and Nagase: 41.08% / 24.44%, when the semen was previously cooled or frozen directly, respectively. According to these results, the experimental groups subjected to cooling prior freezing showed better motility rates than the groups that were frozen directly. There were no differences regarding the vigor, motility and sperm defects among the diluents and the semen containers. The mares inseminated with cryotubes showed 50% (3/6) pregnancy rate, and 16.66% (1/6) pregnancy rate was observed in the group of mares inseminated with straws.
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Estresse oxidativo e integridade do DNA em sêmen resfriado de gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus, SCHREBER, 1775) / Oxidative Stress and DNA integrity in chilled sêmen of tigrina (Leopardus tigrinus, SCHREBER, 1775)Paulo Menezes Holanda Barros 18 December 2007 (has links)
A sobrevivência da maioria das espécies de Felideos selvagens conhecidas, foi colocada em risco por diversos fatores, entre eles a perda difusa de habitat, a caça ilegal e a fragmentação e degradação de suas áreas de ocorrência. Para o sucesso de um plano conservacionista faz-se necessária a utilização de biotecnologias direcionadas à preservação da variabilidade genética das populações de animais selvagens. Na prática, a aplicação de biotécnicas reprodutivas no manejo destas populações enfrenta dificuldades como a distância entre os indivíduos que se deseja acasalar ou a distância destes em relação aos centros de pesquisa onde se encontra a estrutura necessária para manipulação de seus gametas. O resfriamento é uma técnica de conservação de sêmen frequentemente utilizada para contornar estes problemas, porém pode submeter os gametas ao estresse oxidativo. Sabe-se que as espécies reativas ao oxigênio responsáveis por este estresse podem causar danos estruturais significantes às membranas e, principalmente, ao material genético dos espermatozóides. O uso de diluidores e antioxidantes que possam promover uma proteção aos espermatozóides contra os danos do estresse oxidativo pode ser uma alternativa para manter a qualidade do sêmen sob refrigeração. Para avaliar esta hipótese, o sêmen do gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus, SCHREBER, 1775) foi submetido a testes convencionais e funcionais em diferentes tempos de refrigeração a 4°C (2, 12 e 24 horas), utilizando-se três diluidores (TCM 199, Ham F10 e tris-gema-citrato) e o tratamento com glutationa reduzida (GSH) em diferentes concentrações (0; 0,5; 1,0 e 1,5mM) para obter uma melhora na qualidade do sêmen. Os testes convencionais utilizados foram a motilidade e vigor. Os funcionais compreenderam as avaliações da integridade das membranas plasmática e acrossomal, da atividade mitocondrial, e da fragmentação do material genético. Também foi avaliada a suscetibilidade das células espermáticas à peroxidação lipídica induzida através da mensuração da concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Os resultados obtidos para as provas convencionais e funcionais, com exceção da resistência dos espermatozóides ao estresse oxidativo por meio da dosagem TBARS, indicaram que o diluidor tris-gema-citrato (TGC) foi superior aos diluidores TCM 199 (TCM) e Ham F10 (HAM), sendo que não houve efeito do tratamento com GSH. Para todos os diluidores as variáveis referentes aos testes funcionais apresentaram correlação com as variáveis referentes aos testes convencionais. Apenas para os diluidores HAM e TGC a concentração de TBARS apresentou correlação com a atividade mitocondrial e integridade acrossomal. Nas amostras diluídas no TGC não foram verificados efeitos do tratamento com GSH, ou do tempo de refrigeração no grau de integridade do DNA das células espermáticas. Também nas amostras diluídas em TGC, a integridade do DNA correlacionou-se com a concentração de TBARS e com aatividade mitocondrial, mas não com os testes convencionais e os outros testes funcionais. Conclui-se que o melhor diluidor para manter o sêmen do gato-do-mato-pequeno sob refrigeração a 4ºC, por 24 horas, é o diluidor à base de gema de ovo (TGC), sendo que o tratamento antioxidante com GSH nas concentrações utilizadas não apresentou efeito sobre a qualidade deste sêmen. / The survival of most of the known wild feline species was jeopardized by diffuse habitat lost, illegal hunting and fragmentation and devastation of their occurrence areas. The use of biotechnologies aiming to preserve the genetic variability of wild animal populations is crucial for the success of a conservationist program. The practical application of reproductive biotechnologies on the management of these populations faces difficulties such as the distance between individuals included in a breeding plan or between the animals and the research centers where the necessary structure to manipulate their gametes is located. Semen cooling is a conservation technique frequently used to overcome those problems. However such technology may submit the spermatozoa to the oxidative stress. It is well known that the reactive oxygen species which are responsible for this stress can cause structural damages to the membranes and especially to the genetic material of the spermatozoa. The use of extenders and antioxidants that could protect the spermatozoa against oxidative damages can be an alternative to maintain the quality of semen samples under cooling. In order to test this hypothesis semen samples of tigrina (Leopardus tigrinus, SCHREBER, 1775) was submitted to conventional and functional tests at different cooling periods (4°C; 2, 12 and 24 hours), using three extenders (TCM 199, Ham\'s F10 and Tris-egg yolk-citrate) and treatment with reduced glutathione (GSH) in different concentrations (0, 0.5, 1.0 and 1.5mM). Conventional tests used in the present experiment were motility and vigor. Functional tests included the evaluation of plasmatic and acrosomal membrane integrity, of mitochondrial activity and of DNA fragmentation. The susceptibility of the spermatozoa to the induced lipidic peroxidation followed by the measurement of thiobarbituric acid reactive substances concentration (TBARS) was used as an index of oxidative stress. Results obtained for the conventional and functional tests indicated that the tris-egg yolk citrate (TGC) extender was superior to the TCM 199 (TCM) and the Ham\'s F10 (HAM). No effect of GSH was observed. For all extenders, correlations were found between the functional tests and the conventional tests variables. Only for the HAM and TGC extenders, the concentration of TBARS showed negative correlation with mitochondrial activity and acrosomal integrity. For the samples diluted in TGC, no effects of GSH treatment or cooling time was observed on the spermatic cells DNA integrity. Also in sample diluted in TGC, the DNA integrity was correlated with the concentration of TBARS and the mitochondrial activity, but not with conventional tests the others functional tests. Results of the present experiment suggested that the best extender to maintain the semen of tigrina under 4°C for 24 hours is the one containing egg yolk (TGC), and the antioxidant treatment with GSH showed no effect on semen quality.
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Colheita e avaliação do sêmen do bicho-preguiça (Bradypus sp.) / Sêmen collection and avaliation of the sloth (Bradypus sp.)Peres, Maria Angélica 04 March 2005 (has links)
Os bichos-preguiça são animais extremamente sensíveis e sofrem com a destruição e a fragmentação das matas. Apresentam baixa taxa de crescimento populacional e necessitam serem mais estudados para que se possa pensar na preservação da espécie. Este estudo teve como objetivo captar informações sobre o sêmen deste animal. Para tanto 18 machos foram capturados em Manaus (AM), Valença (RJ) e Santos (SP), quinze da espécie Bradypus trydactilus e três B. variegatus. Após a captura, os animais foram anestesiados com cloridrato de quetamina (Vetaset® ? Fort Dodge) na dosagem de 10mg/kg associada com cloridrato de xilazina (Kensol® ? König), na dosagem de 1mg/kg, administrado por via intra-muscular. Os eletrochoques foram aplicados em seqüências de três intensidades progressivas de choques, com dez repetições para cada intensidade e variação de 10 mA entre elas. Iniciou-se com 20 mA, atingindo o máximo de 60 mA. A cada série de 3 intensidades de choque realizou-se um intervalo de aproximadamente 3 minutos, após o qual se reiniciou a seqüência com 10 mA acima da mA inicial da seqüência anterior. Cada estímulo durou aproximadamente 3 segundos. O sêmen colhido foi processado conforme as técnicas utilizadas para animais domésticos, realizou-se também preparação para microscopia eletrônica de varredura. Todos os animais ejacularam uma pequena quantidade de sêmen, porém em alguns o volume ejaculado foi insuficiente para a realização do espermiograma completo. Os espermatozóides apresentaram grande variedade de defeitos e as características observadas nas colheitas do primeiro semestre eram distintas das observadas no segundo semestre, porém os dados ainda não foram suficientes para a padronização do sêmen ou para definições mais precisas da existência de sazonalidade. Embora maiores estudos sejam necessários, este estudo foi pioneiro e mostrou a possibilidade de colheita de sêmen através da eletroejaculação nesta espécie. / Sloths are extremely sensitive animals that suffer with the destruction and fragmentation of forests. They present a low population growth rate and need to be further studied for the preservation of the species. This study intended to contribute with information about their semen. In order to do that, 18 male individuals were captured in Manaus (AM), Valença (RJ), and Santos (SP), fifteen of them belonging to the Bradypus tridactylus, and three to the B. Variegatus spieces. After being captured, animals were anesthetized with an intramuscular injection of a combination of 10mg/kg ketamine hydrochloride (Vetaset® ? Fort Dodge) and 1mg/kg of xylazine hydrochloride (Kensol® ? König). Electroshocks were givem in sequences of three progressive intensities, with ten repetitions for each intensity and variation of 10 mA between them. They started with 20 mA and peaked at 60 mA. For each series of 3 shock intensities, there was an interval of approximately 3 minutes, after which they received a new sequence 10 mA above the initial mA of the previous sequence. Each stimulus lasted about 3 seconds. The semen collected was processed according to the techniques used for domestic animals. Spermatozoa were also analyzed by electron scanning microscopy. All animals ejaculated small quantities of semen, and in some of them the volume ejaculated was not enough for a complete spermiogram. Spermatozoa presented a wide variety of defects and the features seen in the collections of the first half of the year were different from those seen in the specimen collected in the second half of the year. Nevertheless, the data were not sufficient to standardize semen, neither to define seasonality more precisely. Although further studies are necessary, this study has shown the possibility of collecting semen through electroejaculation in this species.
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Efeitos do estresse térmico testicular e do uso da somatotropina recombinante bovina nas características seminais, integridade de membranas, função mitocondrial e estrutura da cromatina de espermatozóides de touros Simental (Bos taurus taurus) / Effects of thermal stress and recombinant bovine somatotropine employment on seminal features, integrity of membranes, mitochondrial function and chromatin structure of spermatozoa from Simmental bulls (Bos taurus taurus)Garcia, Alexandre Rossetto 17 December 2004 (has links)
Uma abordagem mais moderna sobre o binômio estresse térmico-degeneração foi realizada, visando monitorar a integridade de acrossomo, mitocôndrias e cromatina. Raros são os trabalhos sobre os efeitos da somatotropina bovina exógena (bST) sobre a qualidade seminal de touros que tenham passado por períodos de estresse térmico e conseqüente degeneração testicular. Foram objetivos do trabalho: 1) Comparar as características seminais e espermáticas de touros normais e touros submetidos a estresse térmico testicular (tratados ou não com bST); 2) Avaliar a integridade da membrana plasmática e acrossomal, função mitocondrial e defeitos cromossômicos de espermatozóides de touros normais e touros submetidos a estresse térmico testicular (tratados ou não com bST). Para tanto, o experimento foi dividido em 4 fases: Fase Pré-Insulação: período do dia 1 ao dia 35 (dia 1 = dia do início do experimento), Fase Pré-Tratamento: período do dia 36 ao dia 63 (colocação da bolsa insuladora no dia 36 por 96 horas), Fase Tratamento: período do dia 64 ao dia 119 (aplicações de bST), Fase Pós-tratamento: período do dia 120 ao dia 154. O sêmen de dezesseis touros Simental (Bos taurus taurus) foi coletado semanalmente ao longo de 22 semanas (154 dias). Os touros foram divididos em quatro grupos: o Grupo CONT foi o controle, não foi submetido a qualquer tratamento; o Grupo INSUL sofreu insulação testicular; o Grupo bST recebeu aplicações de somatotropina bovina (Lactotropin® 1 mg/kg PV) a cada quatorze dias a partir do dia 64; o Grupo IbST sofreu insulação e recebeu aplicações de somatotropina. Os animais foram avaliados quanto às características físicas e seminais. O estresse térmico testicular influenciou negativamente o perímetro escrotal, a motilidade espermática, o vigor, o movimento de massa, mas aumentou o total de defeitos espermáticos. A somatotropina bovina influenciou a quantidade de cabeças piriformes nos ejaculados. Os defeitos de cromatina foram influenciados pelo estresse térmico testicular. A população de espermatozóides com membrana plasmática íntegra, acrossomo intacto e potencial mitocondrial foi reduzida em função do estresse térmico testicular / Modern approach concerning binomial thermal stress-testicular degeneration was done in order to study chromatin, acrosomal and mitochondrial integrity. Furthermore, there are few relates about effects of exogenous bovine somatotropine (bST) on seminal quality of bulls which were submitted to thermal stress and consequent testicular degeneration. The objectives of this study were: 1) Comparing seminal and spermatic features of bulls which were submitted to testicular thermal stress (treated or not with bST); 2) Evaluating of the plasmatic and acrosomal membrane integrity, mitochondrial function, and chromosomal defects from the spermatozoa of these bulls. The experiment was divided in 4 phases. Pre-insulation phase: from day 1 to 35 (day 1 = first day of experiment), Pre-treatment phase: from day 36 to 63, Treatment phase: from day 64 to 119 (treatment with bST) and Post-treatment phase: from day 120 to 154. Semen of sixteen Simmental bulls (Bos taurus taurus) was collected once a week, during 22 weeks (154 days). Bulls were split in four groups: Group CONT was the control, and it was not treated or insulated; Group INSUL was insulated; Group bST was treated with bovine somatotropine (Lactotropin® 1.2 mg/kg BW) each 14 days since day 64. Group IbST was insulated and treated with bST. Physical and seminal features of bulls were evaluated. Thermal stress decreased scrotal circumference, sperm motility, vigour and gross motility, and increased total sperm defects. The bST increased pyriform heads in ejaculated. Testicular thermal stress increased chromatin defects. Sperm population with intact plasmatic membranes, intact acrosome and mitochondrial function were reduced by testicular thermal stress
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Efeitos do estresse térmico testicular e do uso da somatotropina recombinante bovina nas características seminais, integridade de membranas, função mitocondrial e estrutura da cromatina de espermatozóides de touros Simental (Bos taurus taurus) / Effects of thermal stress and recombinant bovine somatotropine employment on seminal features, integrity of membranes, mitochondrial function and chromatin structure of spermatozoa from Simmental bulls (Bos taurus taurus)Alexandre Rossetto Garcia 17 December 2004 (has links)
Uma abordagem mais moderna sobre o binômio estresse térmico-degeneração foi realizada, visando monitorar a integridade de acrossomo, mitocôndrias e cromatina. Raros são os trabalhos sobre os efeitos da somatotropina bovina exógena (bST) sobre a qualidade seminal de touros que tenham passado por períodos de estresse térmico e conseqüente degeneração testicular. Foram objetivos do trabalho: 1) Comparar as características seminais e espermáticas de touros normais e touros submetidos a estresse térmico testicular (tratados ou não com bST); 2) Avaliar a integridade da membrana plasmática e acrossomal, função mitocondrial e defeitos cromossômicos de espermatozóides de touros normais e touros submetidos a estresse térmico testicular (tratados ou não com bST). Para tanto, o experimento foi dividido em 4 fases: Fase Pré-Insulação: período do dia 1 ao dia 35 (dia 1 = dia do início do experimento), Fase Pré-Tratamento: período do dia 36 ao dia 63 (colocação da bolsa insuladora no dia 36 por 96 horas), Fase Tratamento: período do dia 64 ao dia 119 (aplicações de bST), Fase Pós-tratamento: período do dia 120 ao dia 154. O sêmen de dezesseis touros Simental (Bos taurus taurus) foi coletado semanalmente ao longo de 22 semanas (154 dias). Os touros foram divididos em quatro grupos: o Grupo CONT foi o controle, não foi submetido a qualquer tratamento; o Grupo INSUL sofreu insulação testicular; o Grupo bST recebeu aplicações de somatotropina bovina (Lactotropin® 1 mg/kg PV) a cada quatorze dias a partir do dia 64; o Grupo IbST sofreu insulação e recebeu aplicações de somatotropina. Os animais foram avaliados quanto às características físicas e seminais. O estresse térmico testicular influenciou negativamente o perímetro escrotal, a motilidade espermática, o vigor, o movimento de massa, mas aumentou o total de defeitos espermáticos. A somatotropina bovina influenciou a quantidade de cabeças piriformes nos ejaculados. Os defeitos de cromatina foram influenciados pelo estresse térmico testicular. A população de espermatozóides com membrana plasmática íntegra, acrossomo intacto e potencial mitocondrial foi reduzida em função do estresse térmico testicular / Modern approach concerning binomial thermal stress-testicular degeneration was done in order to study chromatin, acrosomal and mitochondrial integrity. Furthermore, there are few relates about effects of exogenous bovine somatotropine (bST) on seminal quality of bulls which were submitted to thermal stress and consequent testicular degeneration. The objectives of this study were: 1) Comparing seminal and spermatic features of bulls which were submitted to testicular thermal stress (treated or not with bST); 2) Evaluating of the plasmatic and acrosomal membrane integrity, mitochondrial function, and chromosomal defects from the spermatozoa of these bulls. The experiment was divided in 4 phases. Pre-insulation phase: from day 1 to 35 (day 1 = first day of experiment), Pre-treatment phase: from day 36 to 63, Treatment phase: from day 64 to 119 (treatment with bST) and Post-treatment phase: from day 120 to 154. Semen of sixteen Simmental bulls (Bos taurus taurus) was collected once a week, during 22 weeks (154 days). Bulls were split in four groups: Group CONT was the control, and it was not treated or insulated; Group INSUL was insulated; Group bST was treated with bovine somatotropine (Lactotropin® 1.2 mg/kg BW) each 14 days since day 64. Group IbST was insulated and treated with bST. Physical and seminal features of bulls were evaluated. Thermal stress decreased scrotal circumference, sperm motility, vigour and gross motility, and increased total sperm defects. The bST increased pyriform heads in ejaculated. Testicular thermal stress increased chromatin defects. Sperm population with intact plasmatic membranes, intact acrosome and mitochondrial function were reduced by testicular thermal stress
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Centrifugação com amortecimento durante a seleção espermática na produção in vitro de embriões bovinos / Use of a cushioning centrifugation during sperm selection for in vitro production of bovine embryosPavin, Cecilia Isabel Inês Urquiza Machado 05 August 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-08-05 / Os métodos de seleção espermática são utilizados com o objetivo de isolar uma maior população de espermatozoides morfologicamente melhor, além de permitir a capacitação destes, incrementando a taxa de embriões produzidos in vitro. Entre os métodos de seleção, o mais utilizado comercialmente na produção in vitro (PIV) de embriões bovinos é o método de Gradiente Descontínuo de Percoll® (GDP). No entanto, apesar da praticidade desta técnica, a etapa de centrifugação é prejudicial, sendo responsável por danos estruturais as células espermáticas, bem como a diminuição da motilidade e da taxa de recuperação, interferindo assim, nas taxas de fecundação in vitro (FIV). Este estudo objetivou avaliar a centrifugação com amortecimento utilizando uma solução de iodixanol durante a seleção espermática para a PIV de embriões bovinos. No experimento I, o sêmen foi descongelado e dividido em quatro grupos, e os espermatozoides submetidos a separação espermática pelo método de GDP com ou sem a solução colóide; sendo o amortecimento testado na primeira (C1), segunda (C2) ou ambas centrifugações (C1-2). Em seguida, foram avaliadas a taxa de recuperação, a cinética espermática, e a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). No experimento II foi avaliada a taxa de fecundação e a cinética de desenvolvimento embrionário dos grupos C e C1, que foram os tratamentos que demonstraram os melhores resultados para a cinética espermática, taxa de recuperação e análise bioquímica no primeiro experimento. Neste estudo, o grupo com amortecimento obteve um aumento na taxa de fecundação e clivagem, quando comparado ao grupo controle (60,5 vs 48,55 e 80,0 vs 64,7%, respectivamente). Com base nestes resultados foi possível concluir que o uso de 9
uma solução de amortecimento durante a etapa de centrifugação para a seleção espermática permitiu a preservação da cinética e da integridade da membrana dos espermatozoides, sem reduzir a taxa de recuperação. Adicionalmente, foi demonstrado pela primeira vez que o uso da centrifugação com amortecimento incrementa, não apenas a taxa de fecundação e clivagem, mas também o número de embriões que clivam mais cedo. / In order to optimize bovine in vitro fertilization (IVF), sperm selection methods have been used to isolate sperm subpopulations with high fertilizing capacity for use in animal breeding. Among the methods of sperm selection, the most common method used is the Discontinuous Percoll® Gradients (DPG). However, again despite the practicality of this technique, the centrifugation step is harmful, accounting for structural damage in sperm and decrease in motility and sperm recovery rate, as well as interfering with in vitro fertilization rates. This study aimed to evaluate the cushioned centrifugation using an iodixanol solution on sperm selection for in vitro production (IVP) of bovine embryos. In experiment I, the thawed semen was divided into four groups and the sperm subjected to the separation method by discontinuous Percoll® gradients with and without a colloid solution, where the cushioning was tested in the first (C1), second (C2), and both centrifugations (C1-2). Then, the recovery rate, sperm kinetics, and production of reactive oxygen species (ROS) were evaluated. Experiment II evaluated the fertilization rate and embryonic development kinetics of C and C1 groups; who were the treatments that have shown the best results for motion kinetics, recovery rate, and biochemical analysis in Experiment I. In this assay, the group with cushioning obtained an increase in the fertilization and cleavage rate when compared with the control (60.5 vs 48.55 and 80.0 vs 64.7%, respectively). With this study, we can conclude that the use of a cushion solution during centrifugation on sperm selection had preserved the motion properties of spermatozoa and the 11
integrity of the sperm membrane without lowering the recovery rate. Furthermore, it was demonstrated for the first time that the use of cushioned centrifugation increases not only the cleavage rate but the number of embryos previously cleaved.
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Colheita e avaliação do sêmen do bicho-preguiça (Bradypus sp.) / Sêmen collection and avaliation of the sloth (Bradypus sp.)Maria Angélica Peres 04 March 2005 (has links)
Os bichos-preguiça são animais extremamente sensíveis e sofrem com a destruição e a fragmentação das matas. Apresentam baixa taxa de crescimento populacional e necessitam serem mais estudados para que se possa pensar na preservação da espécie. Este estudo teve como objetivo captar informações sobre o sêmen deste animal. Para tanto 18 machos foram capturados em Manaus (AM), Valença (RJ) e Santos (SP), quinze da espécie Bradypus trydactilus e três B. variegatus. Após a captura, os animais foram anestesiados com cloridrato de quetamina (Vetaset® ? Fort Dodge) na dosagem de 10mg/kg associada com cloridrato de xilazina (Kensol® ? König), na dosagem de 1mg/kg, administrado por via intra-muscular. Os eletrochoques foram aplicados em seqüências de três intensidades progressivas de choques, com dez repetições para cada intensidade e variação de 10 mA entre elas. Iniciou-se com 20 mA, atingindo o máximo de 60 mA. A cada série de 3 intensidades de choque realizou-se um intervalo de aproximadamente 3 minutos, após o qual se reiniciou a seqüência com 10 mA acima da mA inicial da seqüência anterior. Cada estímulo durou aproximadamente 3 segundos. O sêmen colhido foi processado conforme as técnicas utilizadas para animais domésticos, realizou-se também preparação para microscopia eletrônica de varredura. Todos os animais ejacularam uma pequena quantidade de sêmen, porém em alguns o volume ejaculado foi insuficiente para a realização do espermiograma completo. Os espermatozóides apresentaram grande variedade de defeitos e as características observadas nas colheitas do primeiro semestre eram distintas das observadas no segundo semestre, porém os dados ainda não foram suficientes para a padronização do sêmen ou para definições mais precisas da existência de sazonalidade. Embora maiores estudos sejam necessários, este estudo foi pioneiro e mostrou a possibilidade de colheita de sêmen através da eletroejaculação nesta espécie. / Sloths are extremely sensitive animals that suffer with the destruction and fragmentation of forests. They present a low population growth rate and need to be further studied for the preservation of the species. This study intended to contribute with information about their semen. In order to do that, 18 male individuals were captured in Manaus (AM), Valença (RJ), and Santos (SP), fifteen of them belonging to the Bradypus tridactylus, and three to the B. Variegatus spieces. After being captured, animals were anesthetized with an intramuscular injection of a combination of 10mg/kg ketamine hydrochloride (Vetaset® ? Fort Dodge) and 1mg/kg of xylazine hydrochloride (Kensol® ? König). Electroshocks were givem in sequences of three progressive intensities, with ten repetitions for each intensity and variation of 10 mA between them. They started with 20 mA and peaked at 60 mA. For each series of 3 shock intensities, there was an interval of approximately 3 minutes, after which they received a new sequence 10 mA above the initial mA of the previous sequence. Each stimulus lasted about 3 seconds. The semen collected was processed according to the techniques used for domestic animals. Spermatozoa were also analyzed by electron scanning microscopy. All animals ejaculated small quantities of semen, and in some of them the volume ejaculated was not enough for a complete spermiogram. Spermatozoa presented a wide variety of defects and the features seen in the collections of the first half of the year were different from those seen in the specimen collected in the second half of the year. Nevertheless, the data were not sufficient to standardize semen, neither to define seasonality more precisely. Although further studies are necessary, this study has shown the possibility of collecting semen through electroejaculation in this species.
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