Orientador: Classius de Oliveira / Coorientador: Cláudia Regina Bonini Domingos / Banca: Antonio Sebben / Banca: Luciana de Souza Ondei / Resumo: Os anfíbios sofrem influência de diversos contamiantes que podem afetar o seu ciclo de vida. O benzo[α]pireno (BaP) é um composto biocumulativo encontrado na atmosfera, água e solo. Para mensurar como o BaP interfe nos anuros Physalaemus cuvieri e Leptodactylus fuscus utilizamos alguns biomarcadores de contaminação, como: os melanomacrófagos hepáticos, que são células com função de detoxificação; mastócitos, com função de proteção em respostas inflamatórias; micronúcleos (MN), fragmentos de DNA resultantes de exposição a agentes tóxicos e também os glóbulos brancos, pois alteração do padrão dos leucócitos indica que o animal não está nas suas condições normais (está sob influência de estresse, poluentes). A princípio foi feita a descrição do fígado das espécies com microscopia de luz e eletrônica de transmissão. Notou-se que o tecido hepático é semelhante entre elas, especialmente a disposição dos hepatócitos em cordão duplo. Para o estudo com o BaP utilizou-se 36 animais de cada espécie divididos em 6 tratamentos. Injetou-se por via cutânea 2mg/kg de BaP diluído em óleo mineral e nos controles apenas óleo mineral (mesma via). Seguiram-se os processos para análise hepática e sanguínea. Com 7d de tratamento, a área de melanina reduziu nas duas espécies e em 13d aumentou em L. fuscus. A diminuição pode estar relacionada ao efeito citotóxico do composto e o aumento, com o ajuste fisiológico. Houve aumento da densidade de mastócitos nas duas espécies e em todos os tratamentos. Essa resposta está relacionada com a função de proteção em respostas inflamatórias. Não houve alteração na frequência dos MN em nenhuma espécie, provavelmente porque as células mais danificadas sofreram morte celular ou perderam a capacidade de entrar em mitose. L. fuscus, em 13d, teve aumento dos neutrófilos devido à sua função em... / Abstract: Amphibians are influenced by several pollutants that may affect their life cycle. Benzo[α]pyrene (BaP) is a bioaccumulative contaminant found in the atmosphere, water and soil. In order to measure how this pollutant acts in the species Physalaemus cuvieri and Leptodactylus fuscus, specific biomarkers were utilized, such as hepatic melanomacrophages, which displays detoxification functions; mast cells, which are protective cells during inflammatory response; micronuclei (MN), DNA fragments resulting from the exposure to toxic agents; white blood cells, due to leukocytes patterns alterations indicating that the organism is not in its normal conditions. Initially, the description of the species liver (6 animals of each species) was performed by means of light and transmission electron microscopy. It was observed that the hepatic tissue is very similar between species. For the BaP study, 36 animals of each species were used, divided in 6 treatments. The treated ones received a subcutaneous injection (2 mg/kg) of BaP, diluted in mineral oil, while control animals received only mineral oil. The following processes were performed for blood and light microscopy analysis: with 7d of treatment, melanin area were reduced in both species, followed by an increased in 13d for the species L. fuscus. This decline may be related to the cytotoxic effect of the compound or the organism physiological adjustment. Mast cells displayed increased density in both species and in all treated groups. This response is linked to the cells' protection function on inflammatory responses. No changes in MN frequency were found for both species, probably because most damaged cells underwent apoptosis or lost the capacity of initializing mitosis. After 13d of treatment, an increase in neutrophils was observed, given its function in inflammatory responses, such as a decrease in eosinophils, due to immune ... / Mestre

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Orientador: Classius de Oliveira / Coorientador: Guillermo S. Natale / Banca: Monica Jones Costa / Banca: Lucilene Regina Maschio / Resumo: Atualmente, Brasil é o maior consumidor mundial de herbicidas. Além, o cultivo de cana de açúcar é a prática agrícola com maios extensão no Brasil, acompanhada por o uso de herbicidas como atrazina (ATRZ). A metade de estes poluentes é distribuída pelo só, ar e lagunas, abarcando amplia diversidade de microhábitats. Os efeitos de ATRZ têm sido muito documentados em anuros. O objetivo deste trabalho tem como objetivo avaliar efeito do herbicida atrazina na pigmentação cutânea e hepática como novo biomarcador de efeito e exposição, assim como os parâmetros toxicológicos clássicos (efeitos subletais e letais) em girinos de R. schneideri e P. nattereri. Foram coletadas desovas nas proximidades da cidade de São Jose do Rio Preto e mantidas em condições controladas de laboratório, posteriormente foram acondicionadas e alimentadas (fotoperiodo 16:8; temperatura 25° C) ate alcançar o estádio de desenvolvimento 30 segundo Gosner. Posteriormente os girinos foram expostos durante 48 e 96 h á formulação SIPTRAN (50:100 gr ATRZ) em seis diferentes concentrações entre 1,5 - 25 mg ATRZ/L de acordo as referências bibliográficas. Dez girinos foram expostos por concentração usando três replicas por grupo exposto, além foi usada água de rede declorinada como controle negativo. Depois de concluídos os ensaios, foram estimadas as curvas dose-resposta e demais parâmetros toxicológicos para os dois tempos de exposição. Foram analisados efeitos letais (mortalidade), subletais (alterações na natação, crescimento, desenvolvimento, massa corporal, MNs e anormalidades nucleares e presencia de anormalidades morfológicas) e o novo biomarcador proposto: pigmentação extra-cutânea nos melanóforos e pigmentação hepática com contagem dos MMCs. Os dados foram analisados utilizando o método Probit, ANOVA e post hoc Dunnett, test-t e análises de componentes... / Abstract: Currently, Brazil is the world's largest consumer of herbicides. Besides, sugar cane cultivation is the agricultural practice with more extension in Brazil, accompanied by the use of herbicides as atrazine (ATRZ). Half of these pollutants is distributed in soil, air and lagoons, covering a wide variety of microhabitats. The effects of ATRZ have been widely documented in anurans. This study aims to evaluate the effect of ATRZ on extra cutaneus pigmentation and liver as a new biomarker of exposure and effect, as well as the classical toxicological parameters (sublethal and lethal effects) in tadpoles of R. schneideri and P. nattereri. Spawns were collected near the city of Sao Jose do Rio Preto, after preparation were maintained and fed under controlled laboratory conditions (photoperiod 16:8; temperature 25 °C) until reaching the development stage 30 described by Gosner. Later the tadpoles were exposed for 48 and 96 h to SIPTRAN formulation (50: 100 gr ATRZ) in six different concentrations between 1.5 to 25 mg ATRZ / L according references. Ten tadpoles were exposed for concentrations using three replicates per treatment group, in addition were used declorinated water as negative control. Finishing the test, the dose-response curves and other toxicological endpoints for the two exposure times were estimated. Lethal (mortality) and sublethal effects were analyzed (changes in swimming behavior, growth, development, body weight, MN and nuclear abnormalities and presence of morphological abnormalities) and the proposed new biomarker: extra cutaneous pigmentation in cutaneous melanophores and liver pigmentation with counting of MMCs. Data were analyzed using the Probit method, ANOVA and post-hoc Dunnett, t-test and principal components analysis. The LC50 value was 22.18 and 33.71 mg / L ATRZ in R. schneideri and P. nattereri, respectively after 96 h of exposure. The results showed ... / Mestre