Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas / Made available in DSpace on 2012-10-17T00:09:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T21:50:13Z : No. of bitstreams: 1 107023.pdf: 1768877 bytes, checksum: 6245831394870fc542d78c8a51b145ab (MD5) / As microemulsões água-em-óleo (água + óleo + surfactante) podem ser utilizadas para formar géis elásticos e termoreversíveis pela adição de gelatina. Este sistema é chamado de organo-gel ou MBG (do inglês, "microemulsion-based gels"). As mudanças que ocorrem no organo-gel, quanto a sua estabilidade, foram observadas fixando a concentração do surfactante AOT (di-2-etilhexil sulfosuccinato de sódio) em 0,15 mol/L e variando a quantidade de água, n-heptano e gelatina. A avaliação visual à temperatura ambiente de cada organo-gel possibilitou distinguir três regiões diferentes através do diagrama de fases, que foi obtido pelo gráfico da concentração de gelatina versus W0. As enzimas papaína e palatase M foram imobilizadas em organo-gel de n-heptano. Verificou-se que a papaína destrói o sistema e a palatase M não o altera. Usando palatase M imobilizada em organo-gel, uma série de ésteres alifáticos foi sintetizada sob condições suaves e com bons rendimentos. Parâmetros tais como tamanho da cadeia e ramificações próximas ao centro nucleofílico do álcool foram analisados e associados com a atividade catalítica desta enzima no sistema de MBG. O organo-gel com palatase M foi reutilizado, mostrando que depois de dez conversões a enzima mantém sua atividade catalítica e o sistema permanece inalterado. O gel de ágar também foi usado para imobilizar papaína e palatase M, sendo que o suporte permaneceu estável. Estas enzimas foram usadas em reações de esterificação e aminólise de éster. Com a palatase M imobili7nda em gel de ágar estudou-se o efeito do pH e da temperatura na síntese do laurato de n-pentila. O rendimento do éster não mostrou ser dependente do pH, mas dependente da temperatura.

Orientador: Rezende Gomes dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Campinas / Made available in DSpace on 2018-07-14T03:02:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amaral_SergioFerreirado_M.pdf: 1779097 bytes, checksum: b795ac66651e40b8af3213a5fc2823d9 (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: Este trabalho apresenta a otimização do processo de obtenção e purificação de Triclorosilano à partir do silício metalúrgico nacional. Este processo se constitui numa das etapas principais na tecnologia de Silício com pureza de grau eletrônico. A análise experimental do processo envolveu o projeto e a construção dos equipamentos em aço inox 316, utilizados no processamento para a obtenção e purificação do Triclorosilano. Podendo-se ressaltar os seguintes componentes: - Reator Vertical - Condensador de Triclorosilano - Coletor de Sólidos - Coletor de Triclorosilano - Coluna de Destilação - Balão de Vaporização Os equipamentos apresentaram um bom desempenho e permiti ram otimizar as condições operacionais do processamento d9 Triclorosilano. são as seguintes condições estabelecidas experimentalmente: A - Obtenção do Triclorosilano Temperatura do Reator: 360°C Vazão de HCl (com aquecimento) : 70 l/h. Estes valores permitiram obter uma mistura de Clorosilano (Triclorosilano - SiHC13 e Tetraclorosilano - SiC14) com uma taxa de produção média de 120 g/h com uma porcentagem de 90% de Triclorosilano. B - Purificação de Triclorosilano Coluna de destilação em Aço Inox 316 empacotada com Anéis de Rasching de 4 mm de diâmetro Temperatura da Coluna: 31 °C Taxa de Refluxo: 5,2 : 1 N° de Pratos Teórico: 12. Nestas condições, obteve-se Triclorosilano com pureza superior à 99,9%, com uma taxa média de produção de 102 g/h. / Abstract: This work demonstrates an optimization process for the production and purification of trichlorosilane from metallurgist silicon. This process is one of the main steps of the tecnology for the production of silicon of very high purity. For the experimental analysis it was necessary the design and construct, using inox steel 316, all the equipment which was used in the process of obtaining and purifying the trichlorosilane. The following are the principal components: - vertical reactor - condenser of trichlorosilane - colector for solids - colector for trichlorosilane - destilation column - vaporization chamber. The good perfomance of the equipment allowed us to optimize the operational conditions for processing the trichlorosilane. The following conditions were experimentally established: A - Preparation of the trichlorosilane Temperature of the reactor: 360 °C Volume output of HCl (heated) : 70 l/h. These values allowed the production of a mixture of chlorosilane (Trichlorosilane - SiHC13 + Tetrachlorosilane - SiC14) at a mean rate of 120 g/h with 90% yield of trichlorosilane. B - Purification of the Trichlorosilane Destilation column of inox stee1 316 packed Rashing rings of .4 mm diameter Column temperature: 31 °C Reflux rate : 5,2 : 1 Number of theoretical plates: 12. With the above conditions the trichlorosilane was obtained with a purity higher than 99,9% with a mean production rate of 102 g/h. / Mestrado / Mestre em Engenharia Mecânica

Orientador : Iracema de Oliveira Moraes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:08:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DelBianchi_VanildoLuiz_M.pdf: 2713030 bytes, checksum: 375c6183b3def05ca13b3c497e1aa0e6 (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: Foram examinadas vinte linhagens de fungos (dez já cadastradas e dez isoladas da natureza) com o intuito de se obter a que produzisse um extrato enzimático proteolítico de melhor atuação em meio ácido através de uma fermentação semi-sólida, verificando-se que Aspergillus awamori NRRL 3112 produz alta atividade enzimática em pH ácido ao ser comparado às demais linhagens. A produção do extrato bruto extracelular foi obtida em erlenmeyers de 250 mL, a 37°C, utilizando-se 2,0g de farinha de soja enriquecida com 10% de sacarose ou 5% de extrato de levedura, umedecida em solução-tampão acetato pH 7,9, à proporção de 1:1 (sólido/liquido). Nestas condições, o extrato enzimático é obtido em 32 horas. Este extrato enzimático apresenta uma atividade máxima a pH 3 e a 50°C, uma estabilidade térmica entre 20 a 60°C quando incubado por 10 horas a essas temperaturas, e uma estabilidade entre os pH 2 e 8. Apresentaram pequena redução na atividade enzimática os íons cálcio, zinco, ferro e lítio, enquanto que os íons magnésio, bário, cobre, manganês e potássio, além de EDTA, mostraram ter uma influência positiva na atividade da enzima. / Abstract: Twenty strains of molds were examined in order to obtain the one that produces proteolytic enzymatic extract of better performance in acid medium from a semi-solid fermentation. Aspergillus awamori NRRL 3112 produced high enzymatic activity compared with other strains. The extracelular raw extract production was obtained in 250 mL erlenmeyers, at 37°C, with 2,0g of soybean flour enriched with 10% of sucrose or 5% of yeast extract, moistened with buffer acetate solution pH 7.9 at rate of 1:1 (w/v). Under these conditions, the enzymatic extract is obtained in 32 hours. The enzymatic extract presents the highest activity at pH 3 and at 50°C, a thermic stability between 20 and 60°C, when incubated during 10 hours, and a pH stability between 2 and 8. Ions calcium, zinc, lithium and iron presented a little reduction in the enzymatic activity whereas ions magnesium, barium, copper, potassium, manganese, besides EDTA, proved to have a positive influence. / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Iracema de Oliveira Moraes / Tese (doutorado) - Universidade Estadualde Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:13:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salva_TerezinhadeJesusGarcia_D.pdf: 3434520 bytes, checksum: 42346678dc764c2c750200be2f53e52d (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: Foram estudados os efeitos de diferentes concentrações de glicose, amido solúvel, dextrina, lactose, peptona e extrato de levedura sobre a síntese de a-amilase por Bacillus subtilis ATCC 601B por processo em batelada, em meio de cultura básico composto de (KH4)2SO4, MgSO4 * 7H20, KC1, K2HPO4 e CaCl2. Foram estudados os efeitos do pH inicial do meio de cultura e da temperatura de incubação sobre a produção da enzima, e o perfil da síntese enzimática apenas no meio de cultura contendo glicose como fonte de carbono. Os resultados foram discutidos relacionando o crescimento microbiano com a síntese da enzima. Foi observado que a maior produção de a-amilase ocorreu nos meios de cultura contendo glicose a 0,1g/l e 30,0g/l ou dextrina a 10,0g/l. As atividades enzimáticas específicas globais (Emax / Xmax) mostraram que esses resultados se devem a um maior estímulo do crescimento celular em meio de cultura contendo glicose e a um maior estímulo da síntese enzimática em meio de cultura contendo dextrina. Os quatro carboidratos inicialmente adicionados ao meio de cultura causaram inibição catabólita da síntese da enzima. O aumento das atividades enzimáticas específicas globais, observadas em determinadas faixas de concentração inicial dos açúcares, indicam que durante o processo fermentativo há estímulo da síntese de a-amilase devido a formação de metabólitos ou de produtos de degradação do carboidrato. Para a faixa de concentração compreendida entre l,0g/l e 20,0g/l. O estímulo da síntese enzimática foi mais acentuada em meio de cultura contendo dextrina, seguida de amido solúvel, lactose e glicose. Os resultados obtidos para a produtividade global em 72 horas de fermentação também revelaram que a dextrina e a fonte de carbono mais adequada para a produção de a-amilase. Foi observado que as concentrações de peptona e de extrato de levedura mais adequadas para a produção de a-amilase são 10,0g/l e 5,0g/l respectivamente. Os resultados obtidos para as atividades enzimáticas específicas globais mostraram, no entanto, que a peptona afeta basicamente o desenvolvimento microbiano enquanto que o extrato de levedura afeta diretamente a síntese da enzima. Das condições estudadas, a maior produção de enzima é obtida quando o pH inicial do meio de cultura é ajustado a 7,0 e a temperatura de incubação é 37°C. Nessas condições foram obtidas as maiores atividades enzimáticas específicas globais e produtividades globais. O perfil da síntese da a-amilase revelou que houve produção da enzima mesmo na fase logarítmica de crescimento, ocorrendo, porém, com maior intensidade na fase estacionária e de lise celular. Estudos complementares mostraram que a enzima é uma a-amilase com pH ótimo ao redor de 6,4 em solução tampão ácido cítrico - fosfato de sódio, e com temperatura ótima ao redor de 50°C. Além disso, foi observado que ela mantém 100% da sua atividade inicial em solução não dialisada após 25 horas de aquecimento a 37°C. A enzima se mostrou pouco estável a 80°C, tendo sido totalmente inativada após 10 minutos de aquecimento a essa temperatura. O cálcio e o amido estabilizaram a enzima acentuadamente e a sua ação hidrolítica sobre o amido produz polímeros de glicose com duas ou mais unidades do açúcar / Abstract: It was studied the effect of concentrations of glucose, soluble starch, dextrin, lactose, peptone and yeast extract in a basic medium containing (KH4)2SO4, MgSO4 * 7H20, KC1, K2HPO4 and CaCl2 on the a-amylase production by Bacillus subtilis, ATCC 601B in batch process. The effect of medium pH and of the incubation temperature were also studied. It was investigated the profile of enzyme synthesis in a medium containing glucose as carbon source. The cell growth and a-amylase synthesis relationship were analyzed. It was shown that higher enzyme production was attained when glucose 0,lg/l and 30,0g/l or dextrin 10,0g/l were used as carbon source. The overall specific enzyme activity (Emax / Xmax) showed that while the medium containing glucose stimulates the microbial growth, the medium containing dextrin stimulates the enzyme synthesis mainly. All four carboydrates used in the medium caused catabolite repression of the enzyme synthesis. The overall specific enzyme activities in some carbohydrate concentrations showed that there was an estimulation of the enzyme synthesis during the fermentative process due to metabolites or degradation products formation. In the range of 1,0g/l to 20,0g/1 of carbohydrate concentrations this estimulation was higher in dextrin containing medium followed by soluble starch, lactose and glucose. The overall productivity in 72 hours of fermentation also revealed that dextrin is the best carbon source for a-amylase production by the microbial strain. It was found that the best peptone and yeast extract concentrations for enzyme production are 10,0g/1 and 5,0g/1, respectively. The overall specific enzyme activities showed, however, that peptone affects the microbial growth, while yeast extract affects the enzyme synthesis directly. Among the conditions studied, the best one for a-amylase production were medium pH 7,0 and incubation temperature 37°C. At that conditions it were obtained higher overall specific enzyme activity and overall productivity. The profile of enzyme synthesis showed that the enzyme is synthesized yet in the logarithmic growth phase, but more intensively during stationary phase and with cell lyses. Further studies showed that the enzyme was an a-amylase with optimal pH around 6,4 and optimal temperature around 50°C in citric acid - sodium phosphate buffer. It was observed that 100% of initial enzyme activity was maintained, in non-dialised solution, after 25 hours at 37°C. The enzyme stability was lower at 80°C. At this temperature the enzyme lost completely its activity after 10 minutes. Calcium and starch stabilized the enzyme and the hydrolyses of starch produces glucose polymers with two or more units / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos

Orientador : Jaime Amaya-Farfan / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-18T00:26:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Benedet_HonorioDomingos_D.pdf: 3710174 bytes, checksum: 9bc147c05a655042ff45c3cbf6bc1c84 (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: Dezesseis coalhos comerciais, obtidos nas regiões centro sul e sul do Brasil, foram estudados, objetivando caracterizar os mesmos em termos das enzimas coagulantes neles contidas. Perfis de aminoácidos livres nos soros resultantes da ação das diferentes enzimas (renina, pepsina bovina, pepsina porcina e dos fungos Endothia parasitica, Mucor miehei e Mucor pusillus) em leite desnatado mostraram diferenças quantitativas entre os mesmos. Não houve, porém, relação clara entre as atividades proteolíticas das enzimas e o nível de aminoácidos liberados. Todavia, foi observado que a enzima da Endothia parasitica liberou seis vezes mais fenilalanina que o encontrado no soro após precipitação ácida, enquanto que a enzima do Mucor pusillus promoveu a liberação de quantidade considerável de carnosina. A aplicação do método de difusão de enzimas coagulantes em gel de ágar-caseína, capaz de distinguir entre si os seis tipos de enzimas, revelou que a maioria dos coalhos amostrados possui atividade de pepsina bovina. 0 único coalho rotulado como sendo de vitelo apresentou a difusão característica da renina. As frações dos coalhos comerciais com atividade coagulante, obtidas por filtração era gel Sephadex G-1Q0, foram submetidas à eletroforese em gel normal de poliacrilamida e as bandas resultantes comparadas com as dos padrões. Todas as frações apresentaram uma banda principal, cuja mobilidade e aspecto coincidiram com as da pepsina bovina, menos uma, que exibiu duas bandas, uma intensa, comparada à da renina, e outra tênue, com mobilidade semelhante ã da pepsina bovina. Partindo das enzimas coagulantes cromatograficamente homogêneas, estudou-se a influência da concentração do íon cálcio na velocidade de coagulação. A concentração de cálcio que forneceu a velocidade máxima de coagulação foi 58 e 68 mM para as duas pepsinas e para as outras enzimas, respectivamente, a pH 5,0 e 35°C. Estudou-se também o comportamento das enzimas frente ao cloro ativo. As experiências mostraram que todas sofreram inativação quando a concentração atingiu 100 ppm. Mo caso da renina, o efeito foi notável, sendo esta enzima completamente inativada com apenas 10 ppm de cloro ativo. / Abstract: Sixteen commercial rennets sampled in Brazil's middle southern and southern regions were characterized in terms of their constituting enzymes. Free amino acid profiles of the whey¿s resulting from the action of the enzymes rennin, bovine pepsin, and porcine pepsin, arid these of the fungi Endothia parasitica, Mucor miehei and Mucor pusillus on defatted milk revealed that quantitative differences associated with the type of enzyme used are likely to occur. No clear relationship was found, however, between the photolytic activity of each enzyme and the level of free amino acids released. On the other hand, it was observed that the Endothia parasitica¿s enzyme liberated six times more phenylalanine and that of Mucor pusillus enzyme liberated considerately more carnosine than found in the acid produced whey. Testing all the enzyme standards and the rennet samples by the method of difusion in agar-casein gel it was possible to distinguish among the six different enzymes and to ascertain that all but one of the rennets were of the bovine pepsin type. The only exception, rennet labeled as being from calf origin, showed, upon analysis, the typical pattern of rennin. The rennets were fractionated in Sephadex G-100 columns and the fractions with coagulating activity were compared by normal polyacrylamide-gel electrophoresis (PAGE) with the standard enzymes. Such fractions showed one main band which coincided with that of bovine pepsin for all the rennets, except for one which had the same mobility of rennin: the rennet of calf origin. This latter rennet exhibited a PAGE pattern which also suggested the presence of minor amounts of bovine pepsin. Influence of the calcium ion concentration on the rate of coagulation was studied on the chromatographically homogeneous coagulating enzymes. Optimal rates were obtained at 58 and 68 mM of Ca++ for the two pepsins and the other enzymes, respectively, at pH 5,0 and 35°C. The effect of active chlorine on the enzyme activity was also studied. The results showed that all enzymes underwent inactivation when the active chlorine concentration reached 100 ppm. Rennin was particulary sensitive an enzyme to this type of treatment since it was completely inactivated with 10 ppm of chlorine. / Doutorado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Roberto da Silva / Banca: Luiz Juliano / Banca: Ana Lúcia Barretto Penna / Resumo: Proteases constituem um dos grupos mais importantes de enzimas industriais, sendo o setor alimentício um dos que mais as utilizam, pois atuam sobre proteínas. Este trabalho teve como objetivo produzir, purificar e caracterizar a protease do fungo termofílico Thermoascus aurantiacus. A produção foi em fermentação em estado sólido e o extrato enzimático bruto foi caracterizado. A atividade de protease, no extrato enzimático bruto, foi inibida por ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) (60,61%) e por fluoreto fenimetilsulfonil (PMSF) (56,37%) e foi levemente estimulada por Ca2+. Seu padrão de ação hidrolítico sobre a caseína foi estudado por UREA-PAGE, mostrando diferença significativa em relação a uma renina microbiana recombinante. O extrato enzimático bruto foi purificado através de precipitação com álcool a 72% seguido de cromatografias em resinas Sephadex G75 e Sephacryl S100. Apresentou rendimento de 0,4% e um fator de purificação de 80 vezes. A massa molecular de 24,5 KDa foi estimada por SDS-PAGE. A protease pura apresentou inibição somente por EDTA (96,70%) e ativação por sulfato ferroso, revelando-se uma metaloprotease ativada por ferro. O pH ótimo foi 5,5; a temperatura ótima foi 75°C e foi termoestável a 65°C por 1 hora retendo mais de 70% de atividade original. Apresentou aumento de 151,0% de atividade na presença de Tween-20 e, através dos estudos de cinética enzimática, hidrolisou melhor a caseína do que a azocaseína. / Abstract: Proteases are a very important group of industrial enzymes, and are most employed in the food segment due to their action on proteins. This work had the aim to produce, purify and characterize the protease from the thermophilic Thermoascus aurantiacus. The production was carried out in solid state fermentation and the crude enzymatic extract was characterized. The proteolytic activity, in the crude extract, was inhibited by ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) (60.61%) and by phenylmethylsulphonyl fluoride (PMSF) (56.37%) and was slightly stimulated by Ca2+. Its hydrolytic action profile on casein was studied by UREA-PAGE, showing significant difference when compared to a recombinant microbial rennet. The crude enzymatic extract was purified through precipitation with ethanol at 72% followed by cromatographies in columns of Sephadex G75 and Sephacryl S100. It was purified 80-fold and exhibited recovery of total activity of 0.4%. SDS-PAGE analysis indicated an estimated molecular mass of 24.5 KDa. The purified protease was only inhibited by EDTA (96.70%) and stimulated by Fe2+ revealing to be a metalloprotease activated by iron. The optimum pH was 5.5, optimum temperature was 75°C and it was thermostable at 65°C for 1 hour maintaining more then 70% of original activity. It showed increase of 151.0% in activity in the presence of Tween-20 and, through enzyme kinetics studies, better hydrolyzed casein than azocasein. / Mestre

Orientador :Emilio S. Contreras Guzman / Tese (doutorado) - Universidade Estadualde Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:39:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Seron_LuciaHelena_D.pdf: 9245756 bytes, checksum: a7caa8bc9adc89f7bc9cbdaebd318201 (MD5) Previous issue date: 1991 / Doutorado

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2012-10-22T22:15:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 236517.pdf: 728736 bytes, checksum: e26db0471df1af7a61c395526f733932 (MD5) / Na busca intensa de matérias-primas alternativas para a indústria, o talco - silicato de magnésio tem um significativo mercado quando comparado aos demais minerais presentes no solo brasileiro. O presente trabalho propõe a utilização do talco como material aditivo de cerâmicas (porcelanato branco, porcelana), papel, inseticidas e tintas. No Brasil cada segmento do mercado exige determinadas características para o talco, como por exemplo, a composição química, granulometria e a alvura do material. Dentre os três aspectos citados a alvura é a mais apreciada no meio industrial, pois para cada aplicação do material exige-se determinado grau de alvura. A alvura é a porcentagem de luz de determinado comprimento de onda refletido da superfície do produto. Esta interfere na capacidade do mineral de reflectância tanto para mais como para menos em relação ao propósito em que será usado. Essa característica do material pode ser potencializada através do tratamento químico com ataque ácido na amostra fazendo com que haja a remoção praticamente total do ferro, que é o que colore o talco. Esse procedimento é adotado pelas indústrias que necessitam do minério em melhor escala de reflectância, ou seja, melhor capacidade de refletir as cores, que significa que o talco esta o mais branco possível, tornando o produto final de acordo com as exigências do mercado. A cinética do processo pode ser definida como de primeira ordem e o estágio controlador do processo é a reação química. O melhor resultado obtido com o tratamento químico junto ao talco com ácido clorídrico foi a concentração de 4 molar à 80 °C, tendo uma remoção do ferro na ordem de 78,67%. Em termos de alvura o resultado mais satisfatório é também a 4 molar e 80 °C, entretanto os demais ensaios obtiveram resultados muitos coerentes uma vez que os padrões de alvura exigidas pelo mercado estão dentro da faixa de 70 a 90% dos resultado obtidos.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-11-21T11:39:00Z No. of bitstreams: 1 Telma Alves Garcia.PDF: 1041199 bytes, checksum: f43838dc7fc3e11fe66d87f8ec48892f (MD5) / Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2009-11-23T19:40:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Telma Alves Garcia.PDF: 1041199 bytes, checksum: f43838dc7fc3e11fe66d87f8ec48892f (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-23T19:40:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Telma Alves Garcia.PDF: 1041199 bytes, checksum: f43838dc7fc3e11fe66d87f8ec48892f (MD5) Previous issue date: 2006 / O fungo Pycnoporus sanguineus foi eficiente na descoloração de alguns corantes empregados na indústria farmacêutica. Os resultados obtidos indicam que o P. sanguineus e principalmente as lacases produzidas por este fungo apresentam grande potencial para aplicações biotecnológicas. Para a produção de lacase (EC 1.10.3.2, p-difenol:dioxigênio oxidoredutase) o fungo foi cultivado em meio contendo 2,5- xilidina e cobre como indutores. Duas isoformas da enzima (Lac 1 e Lac 2) foram identificadas e separadas através de cromatografia de interação hidrofóbica. As enzimas Lac 1 e Lac 2 apresentaram uma massa molecular de 79,7 kDa e 68,1 kDa, respectivamente. As duas isoformas apresentaram características bioquímicas diferentes. A enzima Lac 1, contendo menor atividade especifica, foi parcialmente purificada. Usando seringaldazina como substrato a enzima apresentou um pH ótimo de 4,8, temperatura ótima de 25-30 °C e Km de 10,3 μmol.L-1. A enzima mostrou baixa estabilidade à temperatura de 50 °C, mantendo apenas 10% da atividade após 5 horas de incubação. A enzima Lac 2, contendo maior atividade especifica, foi purificada com um rendimento final de 13,9 %. Usando seringaldazina como substrato a enzima apresentou um pH ótimo de 4,2, temperatura ótima de 50 °C e Km de 8,3 μmol.L-1. A enzima mostrou alta estabilidade a temperatura de 50 °C, mantendo 100 % da atividade após 5 horas de incubação. Ambas as enzimas foram inibidas por azida sódica e fluoreto de sódio. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Fungus Pycnoporus sanguineus was efficient in the discoloration of some dyes used in the pharmaceutical industry. Ours results indicated that the P. sanguineus and mainly laccases produced by this fungus presents great potential for biotechnological applications. For the production of laccase (EC 1.10.3.2, p-diphenol:dioxigen oxidoreductase) this fungus was cultivated in medium containing 2,5- xylidine and copper as inducer. Two isoforms of the enzyme (Lac 1 and Lac 2) had been identified and separated through chromatography on hydrophobic interaction. The enzymes Lac 1 and Lac 2 had presented a molecular mass of 68.1 kDa and 79.7 kDa, respectively. The two isoforms presented different biochemical characteristics. The enzyme Lac 1, with lower specific activity, was partially purified. Using syringaldazine as substrate the enzyme showed pH optima of 4.8, temperature optima of 25-30 °C and Km of 10.3 μmol.L-1. The enzyme showed low stability at temperature of 50 °C, keeping only 10% of the activity, after 5 hours of incubation. The enzyme Lac 2, with higher specific activity, was purified with a final yield of 13.9 %. Using syringaldazine as substrate the enzyme presented one pH optima of 4.2, temperature optima of 50 °C and Km of 8.3 μmol.L-1. The enzyme showed high stability at temperature of 50 °C, keeping 100% of the activity even after 5 hours of incubation. Both enzymes were inhibited by sodium azide and sodium fluoride.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, 2014. / Submitted by Ruthléa Nascimento (ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2014-05-21T10:35:09Z No. of bitstreams: 1 2014_AntonielleVieiraMonclaro.pdf: 1778681 bytes, checksum: 1798a65b4d7d75d27b16ed6a3a3d7e4f (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-22T10:50:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AntonielleVieiraMonclaro.pdf: 1778681 bytes, checksum: 1798a65b4d7d75d27b16ed6a3a3d7e4f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-22T10:50:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AntonielleVieiraMonclaro.pdf: 1778681 bytes, checksum: 1798a65b4d7d75d27b16ed6a3a3d7e4f (MD5) / No presente estudo, multi-formas de xilanases, produzidas pelo fungo A. oryzae crescido em quatro resíduos têxteis – piolho de algodão limpo tratado e não tratado, e pó de filtro tratado e não tratado - foram purificadas e caracterizadas. A curva de indução enzimática do fungo nos resíduos indicou alta atividade xilanolítica a partir do segundo dia, mantendo-se constante ao longo de 14 dias. A suplementação com sulfato de amônio como fonte de nitrogênio, e utilização dos resíduos pré-tratados, aumentou a atividade das xilanases. Como os ultrafiltrados apresentaram maior atividade específica xilanolítica, deu-se continuidade com a purificação a partir destas frações. A xilanase xyl-1 foi purificada em apenas uma etapa cromatográfica, identificada por espectrometria de massa como endo-β-1,4-xilanase de tamanho 35,55 kDa. As outras xilanases foram parcialmente purificadas em uma etapa cromatográfica e por SDS-PAGE apresentaram massa molecular estimada entre 35 kDa e 22 kDa. O espalhamento de luz dinâmico (ELD) se apresentou como uma ferramenta eficaz em avaliar o grau de pureza das amostras, a presença de agregações e tamanho das enzimas. Como as leituras de ELD mostraram agregações enzimáticas, foi adicionado Tween-80 0,1%, que foi eficaz em desagregar as xilanases, além de não influenciar na atividade enzimática. Xyl-1 apresentou atividade catalítica máxima em pH 6,0, 50ºC, retendo 50% de sua atividade enzimática na faixa de pH 3,5-9,0. Xyl-1 também obteve maior afinidade ao substrato (fração solúvel de xilana de aveia) em comparação às outras estudadas (KM 4,45 mg/mL; VMáx 0,240 UI/mL). Além disso, as xilanases foram incubadas na presença de inibidores fenólicos provenientes da lignina e apresentaram ativação no lugar da inibição. E na presença do licor de auto-hidrólise de sabugo de milho também apresentaram ativação. Os resultados indicam que essas multi-formas de xilanase de A. oryzae possuem potencial para várias aplicações biotecnológicas. __________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In this study, multiple-forms of xylanases produced by A. oryzae when grown in four textile wastes were purified and characterized. Wastes comprised–pre treated and untreated clean cotton and filter dust. The fungus displayed high amounts of xylanolytic activity from the second day onward, remaining constant up to 14 days. Growth media supplemented with ammonium sulfate as nitrogen source and with pre-treated residues increased the xylanase activity. Xylanase xyl-1 was purified in a single chromatographic step and identified as endo-β-1,4-xylanase by mass spectrometry with a molecular mass of 35.55 kDa. Other xylanases were partially purified in one chromatographic step. Based on zymograme, xyl-8 and xyl-9 presented a molecular mass of 35 kDa whilst xyl-6, xyl-7, xyl-9 and xyl-11 presented a mass of 22 kDa. Dynamic light scattering (DLS) was effective in evaluating the degree of purity of the samples, the presence of aggregations and size of the enzymes. As DLS showed enzyme aggregates, Tween-80 0.1% was added, which proved to be an efficient disintegrator agent and did not influence enzyme activity. Xyl-1 presented the highest catalytic activity at pH 6.0, 50°C, and retaining 50% of its enzymatic activity at pH 3,5-9,0. Xyl-1 also showed higher affinity to the substrate (soluble fraction of xylan oatspelt) compared to the others (KM 4,45 mg/mL; VMáx 0,240 UI/mL). Furthermore, the xylanases were incubated with phenolic inhibitors from lignin and displayed activation. The presence of an auto-hydrolysis liquor of corncob also showed activation. These findings indicate that multiple-forms of xylanases from A. oryzae offer potential in different biotechnological applications.