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Neuroproteômica : proteínas relacionadas à aprendizagem em abelhas e ratos

Souza, Jaques Miranda Ferreira de 15 February 2012 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-05-21T16:16:48Z No. of bitstreams: 1 2012_JaquesMirandaFerreiraSouza.pdf: 1466502 bytes, checksum: a3e11d9bfc528999e781e05214053d36 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-23T11:44:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_JaquesMirandaFerreiraSouza.pdf: 1466502 bytes, checksum: a3e11d9bfc528999e781e05214053d36 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-23T11:44:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_JaquesMirandaFerreiraSouza.pdf: 1466502 bytes, checksum: a3e11d9bfc528999e781e05214053d36 (MD5) / Aprendizagem associativa pode ocorrer por condicionamento operante, através do qual o animal consegue antecipar eventos futuros baseado em suas experiências como consequências de seus próprios comportamentos. Trata-se de uma forma de aprendizagem que o homem compartilha com outros animais, incluindo invertebrados. O uso de ratos e abelhas como modelos biológicos em estudos comportamentais tem ajudado na compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos na aprendizagem por condicionamento operante. O objetivo desse trabalho foi identificar proteínas envolvidas no processo de aprendizagem por meio de análises proteômicas cerebrais de abelha mandaçaia (Melipona quadrifasciata) e rato (Rattus norvegicus). Neste trabalho, foram padronizadas condições para separação de extratos cerebrais de abelhas por meio de eletroforese bidimensional (2DE). Os perfis que apresentaram melhor resolução de spots proteicos foram obtidos com as seguintes condições: concentração de anfólitos a 1,5 %, CHAPS a 1 % e reposição de DTT no cátodo durante a isoeletrofocalização. Proteomas cerebrais de abelhas treinadas por condicionamento operante e controles foram comparados através de DIGE, mas nenhuma diferença de expressão proteica foi observada até o momento. Em relação a ratos, o primeiro mapeamento em grande escala por LC-MS/MS de proteomas de córtex pré-frontal de rato foi realizado, até onde sabemos. Foi possível identificar 923 proteínas, valor seis vezes maior quando comparado a outros estudos presentes na literatura. As proteínas identificadas foram categorizadas de acordo com sua localização e função biológica. A localização subcelular assim se dá: 21 % citosol, 18 % membrana plasmática, 13% mitocôndrias, 10 % núcleo, 8% citoesqueleto, 6 % complexo de Golgi ou retículo endoplasmático, 3 % proteínas extracelulares, 3 % outras organelas e 18 % de proteínas intracelulares. Entre as proteínas identificadas no córtex pré-frontal podemos destacar quatro delas como sendo descritas com envolvimento em processos de aprendizagem : contactin-2, calbindin, subunidade gamma da proteína quinase c (PKCgamma) e gp78. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Associative learning can occur by operant conditioning, when the animal can anticipate future events based on his experiences as a consequence of their own behaviour. That is a form of learning that humans share with others animals, including invertebrates. The use of rats and bees as biological models in behavioural studies have helped in understanding the molecular mechanisms involved in learning by operant conditioning. The aim of this study was to identify proteins related to the learning process through proteomic analysis of brains from "mandacaia" bee (Melipona quadrifasciata) and rat (Rattus norvegicus). In this study, conditions for separation of bee brain extracts by two-dimensional electrophoresis (2DE) were optimized. The profiles showing better protein spots resolution were obtained with the following conditions: 1,5% ampholytes concentration, 1% CHAPS and DTT replacement in the cathode during isoeletric focusing. Brain proteomes of bees trained by operant conditioning and control groups were compared by DIGE, but no difference in protein expression was observed so far. For rats, the first large-scale LC-MS/MS mapping of prefrontal cortex proteomes was achieved to our know ledge. A total of 923 proteins was identified, a value six times higher than other studies in the literature. The identified proteins were categorized according to their location and biological function. The subcellular localizations were 21% cytosol, 18% plasma membrane, 13% mitochondria, 10% nucleus, 8% cytoskeleton, 6% endoplasmic reticulum and Golgi complex, 3% extracellular proteins, 3% other organelles and 18% other intracellular proteins. Among the proteins identified in the prefrontal cortex, four of them can be highelihted as they are described in the literature as involved in learning processes: 2-contactin, calbindin, gamma subunit of protein kinase c (PKCgamma) and gp78.
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Ação neuroprotetora da sonata de Mozart na aprendizagem e memória de ratos expostos à hipóxia cerebral

Costa, Larice Feitosa 14 June 2016 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Psicologia, Departamento de Processos Psicológicos Básicos, Programa de Pós-Graduação em Ciências do Comportamento, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-08-11T14:52:24Z No. of bitstreams: 1 2016_LariceFeitosaCosta.pdf: 1075622 bytes, checksum: 1e893861578c3a67843ab728d356b45f (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-10-24T13:38:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LariceFeitosaCosta.pdf: 1075622 bytes, checksum: 1e893861578c3a67843ab728d356b45f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-24T13:38:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LariceFeitosaCosta.pdf: 1075622 bytes, checksum: 1e893861578c3a67843ab728d356b45f (MD5) / A hipóxia isquêmica (HI) encefálica desencadeia uma cascata de eventos bioquímicos que podem culminar em uma extensa morte celular, levando aos déficits cognitivos e comportamentais. A exposição à música, por sua vez, tem sido sugerida como efeito neuroprotetor benéfico durante o desenvolvimento do cérebro e para melhorar a capacidades de aprendizagem e memória em ratos. No entanto, as respostas produzidas por esses eventos parecem ser dependentes da fase de desenvolvimento do cérebro. Com isso, o objetivo deste estudo foi investigar o efeito neuroprotetor da Sonata de Mozart na aprendizagem e memória de ratos com e sem HI, em diferentes fases de desenvolvimento do SNC. Para tal, usou-se ratos fêmeas Wistar (n=48), avaliadas no teste da esquiva inibitória do tipo step-down, que foi dividido em três etapas: treino, aprendizagem/memória de curta duração (MCD) e memória de longa duração (MLD). A HI foi induzida nos ratos com nitrito de sódio quando estavam com 3 meses de idade. Foram utilizados 6 grupos experimentais de ratos (n= 8/grupo), divididos em G1 (controle), G2 (controle com HI), G3 (música aguda), G4 (música aguda e HI), G5 (música crônica), G6 (música crônica e HI). Os resultados mostraram que os animais controles, quando avaliados de forma sequenciada ao completarem 1, 2, 3 e 4 meses de idade apresentaram um perfil de resposta, cujo efeito foi progressivamente aumentado quando os ratos foram expostos uma vez por mês à Sonata de Mozart, durante 4h/dia/4 dias. Essa resposta foi mantida mesmo com os prováveis danos produzidos pelo nitrito de sódio. Os efeitos mais relevantes dessa etapa experimental ocorrerarm aos 3 e 4 meses de idade. Ao contrário, quando expostos 4h/dia/4 meses, os animais só manifestaram respostas aos 4 meses, que não foi mantida frente à indução da HI. Em resumo, os dados puderam inferir que a exposição à Sonata de Mozart parece ser um fator importante para estimulação à plasticidade neuronal, visto que quando exposta de forma aguda foi possível perceber respostas sugestivas de aprendizagem e memória, mesmo após lesão por hipóxia isquêmica induzida, enquanto a exposição crônica não demonstrou nenhum efeito neuroprotetor contra a lesão. Os achados parecem demonstrar a possibilidade da utilização de uma ferramenta importante para a neuroplasticidade, relevante para o desenvolvimento do cérebro e readaptação neurológica. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The hypoxic ischemic (HI) brain triggers a cascade of biochemical events that may lead to extensive cell death, leading to cognitive and behavioral deficits. Exposure to music, in turn, has been proposed as beneficial neuroprotective effect during brain development and enhance the capacity of learning and memory in rats. However, the responses produced by these events appear to be dependent on the stage of development of the brain. Thus, the aim of this study was to investigate the neuroprotective effect of Mozart's Sonata in learning and memory in rats with and without HI, at different stages of development of the central nervous system. To this end, we used female Wistar rats (n = 48) evaluated in a step-down inhibitory avoidance task, which was divided into three stages: training, learning/short-term memory (STM) and long-term memory (LTM). HI was induced in rats with sodium nitrite at 3 months of age. It was used 6 experimental groups of rats (n = 8/group), divided into G1 (control), G2 (control with HI), G3 (acute music), G4 (acute music and HI), G5 (chronic music), G6 (chronic music and HI). The results showed that the control animals, when assessed in sequential manner to complete 1, 2, 3 and 4 months of age showed a response that was progressively increased when rats were exposed once a month with Mozart Sonata for 4h/day/4 days. This response was maintained even with the potential damage produced by sodium nitrite. The most significant effects of this experimental stage was at 3 and 4 months old. Conversely, when exposed 4h/day/4 months, the animals only showed responses at 4 months age, which was not maintained against damage caused by HI. In summary, the data could infer that exposure to Mozart's Sonata appears to be an important factor for stimulating neuronal plasticity, as when exposed acutely it was revealed answers suggestive of learning and memory even after induced HI injury, while chronic exposure showed no neuroprotective effect against injury. These findings seem to demonstrate the possibility of using an important tool to neuroplasticity, relevant to the development of the brain and neurological rehabilitation.

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