Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La osteoartritis (OA) o enfermedad degenerativa articular (EDA) es la principal causa de invalidez en el equino. Es una afección multifactorial en la que participan diversos mediadores químicos, entre ellos las metaloproteinasas (MMPs), que actúan degradando los componentes de la matriz extracelular (MEC) del cartílago articular, generando una cadena de reacciones que llevan a la destrucción progresiva del mismo. Se ha demostrado que recuentos elevados de células nucleadas en el líquido sinovial están relacionados con un incremento en la actividad de las MMPs, especialmente la MMP-9, lo que incide en el establecimiento y posterior progreso de la OA. Como una forma de validar un modelo de normalidad articular en base a la observación macroscópica, en este estudio se obtuvo muestras de la articulación metacarpo falángica equina, realizando una clasificación entre articulaciones normales y patológicas según la apariencia macroscópica del cartílago articular, separando luego las articulaciones normales según su recuento celular en un grupo normal con recuento celular elevado (> 600 células nucleadas/µl) y en otro normal con bajo recuento celular (< 300 células nucleadas/µl). Además, se incorporó un grupo articular con daño crónico de la articulación como control positivo. A todas las muestras se les determinó la concentración de proteínas totales y la actividad gelatinolítica para las MMPs 2 y 9 mediante zimografía. Además, se realizaron cortes histológicos del cartílago articular con el fin de evaluar la pérdida de matriz extracelular, mediante la medición del grosor de la zona superficial del cartílago. También en estos cortes se realizó recuento de condrocitos y se evaluó la cantidad de grupos isógenos. La muerte celular se evaluó mediante el recuento de lagunas vacías en un área determinada de cartílago articular. En el grupo patológico se detectó una marcada disminución en el grosor de la zona superficial del cartílago articular y se encontró el mayor recuento de lagunas vacías. En ambos grupos normales a la inspección macroscópica no se detectó diferencias en el grosor de la zona superficial del cartílago ni en el recuento de condrocitos y de grupos isógenos. Sin embargo, se encontró diferencia significativa en la cantidad de lagunas vacías, siendo ésta mucho mayor en el grupo con un recuento celular elevado. También se encontró una relación entre la mayor actividad gelatinolítica de MMP-9 y un mayor recuento de células nucleadas en el líquido sinovial

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad degenerativa articular (EDA) u osteoartritis (OA) afecta el rendimiento de los equinos con las consecuentes pérdidas económicas. El trauma articular puede provocar la liberación de mediadores químicos que incluyen citoquinas y enzimas denominadas metaloproteinasas (MMPs), que pueden degradar la matriz extracelular (MEC), componente importante del cartílago articular. Un mecanismo de regulación en la degradación de la MEC lo constituye la acción de los inhibidores tisulares de metaloproteinasas (TIMPs), que son inhibidores naturales de las MMPs encontrados en varios tejidos y fluidos corporales. El balance que existe entre MMPs y TIMPs está involucrado en eventos normales y patológicos entre los cuales se encuentran la cicatrización, la remodelación de tejidos, la angiogénesis, tumorogénesis y metástasis. En éste estudio se analizaron muestras de líquido sinovial equino (LS) para comparar la cantidad de TIMP-1 de las articulaciones metacarpofalángicas normales y alteradas. Se trabajó con cuatro grupos de LS clasificados según las características del cartílago articular (CA) y de la membrana sinovial (MS). En el primer grupo se consideraron las muestras de LS cuya articulación presentaba el CA y la MS normales (NN), en el segundo grupo el CA normal y la MS alterada (NA), en el tercer grupo el CA alterado y la MS normal (AN) y en el último grupo el CA y la MS alterados (AA). Se encontró que los niveles de TIMP-1 fueron significativamente más altos en los LS provenientes de las articulaciones de equinos normales, tanto en membrana sinovial como en cartílago articular (NN), que en aquellos que al menos presentaban una alteración (AN, NA y AA).

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La osteoartritis (OA) es la enfermedad articular de mayor frecuencia de presentación en los equinos. Independiente de la causa de origen, uno de sus componentes más importantes es el cuadro inflamatorio, que puede comprometer al cartílago, membrana sinovial, cápsula articular o hueso subcondral. Esto genera la liberación de mediadores inflamatorios alterándose el metabolismo articular e inhibiéndose la síntesis de los componentes de la matriz extracelular (MEC) del cartílago y de la membrana sinovial. Este desbalance en el recambio de la matriz, provocado por la pérdida de regulación de la síntesis y de la actividad de las metaloproteinasas y de sus inhibidores, provoca la pérdida gradual de componentes de la MEC del cartílago, lo que conduce finalmente al desarrollo de la OA. En esta memoria de título se estudió la actividad de la metaloproteinasa-2 (MMP-2) y la presencia del inhibidor tisular de metaloproteinasa-1 (TIMP-1), con el fin de establecer las posibles relaciones con los indicios prematuros de daño o alteración articular. Para este estudio se utilizaron 20 articulaciones metacarpofalángicas de equinos mestizos, beneficiados en el matadero “La Pintana”. Se obtuvo líquido sinovial mediante artrocéntesis aséptica en el cual se midió el recuento total de células nucleadas (RCN) y la cantidad de proteínas totales con el fin de seleccionar muestras que tuvieran rangos fisiológicos o levemente aumentados. Se formaron dos grupos: A (n=10) articulaciones macroscópicamente normales con RCN < 1000 por μL y B (n=10) articulaciones macroscópicamente normales con RCN > 1000 por μL. Se realizó una artrotomía y se extrajo muestras de cartílago articular para análisis histológico en cada muestra. El grupo B presentó un aumento estadísticamente significativo en la cantidad de grupos isógenos. Este resultado permitió establecer que existe un inicio de OA temprana. En ambos grupos se detectó la pro-MMP-2 no existiendo diferencias en su cantidad. La presencia del TIMP-1 no se pudo evidenciar a través de la técnica de “Western Blot”, debido a la interferencia que presentaba el segundo anticuerpo y no pudo ser repetida por la ausencia de anticuerpos específicos TIMP-1 para la especie equina y los altos costos del mismo / Osteoarthritis (OA) is the most common joint disease in horses. Regardless of the root cause, one of its most important components is an inflammatory condition, either in cartilage, synovial membrane, articular capsule or subchondral bone. This generates the release of inflammatory mediators and articular metabolism altering inhibited the synthesis of extracellular matrix components of cartilage and synovium. This imbalance in matrix turnover, caused by the loss of regulation of the synthesis and activity of metalloproteinases and their inhibitors, causes gradual loss of components of the extracellular matrix (ECM) of the cartilage, which ultimately leads to the development of OA. Memory title was studied the activity of metalloproteinase-2 (MMP -2) and the presence of tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP -1) was studied in order to establish possible relations with premature signs of damage or alteration articular. For this study, were used 20 metacarpophalangeal joints of crossbred equines, benefited in the slaughterhouse "La Pintana". Synovial fluid was obtained by aseptic needle aspiration in which the total nucleated cell count (NCC) and total protein amount in order to select samples that have physiological or slightly increased was measured ranges. Two groups were formed: A (n = 10) macroscopically normal joints with NCC < 1000 μL and B (n = 10) macroscopically normal joints with NCC > 1000 μL. Was performed joint arthrotomy and articular cartilage samples extracted for histological analysis, group B had a higher amount of isogenic groups being statistically significant difference for counting the isogenic groups. This result established that there is an early onset of OA. In both groups, the pro-MMP-2 was detected no differences in quantity. The presence of TIMP-1 could not be evidenced through the technique of Western blotting, due to the interference presented by the second antibody and could not be repeated by the absence of antibodies TIMP-1 for equine species and high costs thereof

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La fisiopatología/etiología de la enfermedad degenerativa articular ha demostrado que esta es una patología asociada a estrés oxidativo. No existen antecedentes concluyentes acerca de la capacidad antioxidante del líquido sinovial (LS). Es por ello, que en este trabajo se evaluó el efecto antioxidante de Acido Hialurónico (AH), Condroitín-Sulfato (CS) y LS proveniente de la articulación metacarpo falángica equina normal, con daño crónico y con membrana sinovial congestiva. Este efecto se evaluó en un sistema biológico constituido por una fracción enriquecida en retículo endoplásmico de hígado de rata (microsomas) sometida a estrés oxidativo por Fe+3/ascorbato, que es un sistema generador de especies radicalarias del oxígeno. Los LS de articulación normal y con daño crónico inhibieron significativamente la lipoperoxidación microsómica inducida por Fe+3/ascorbato (40%) (p<0,05), efecto que no fue dependiente de la concentración, aunque los volúmenes ensayados de LS fluctuaron entre 10 y 100 L. El LS de la articulación con membrana sinovial congestiva, produjo un efecto significativamente menor (16%), el que fue observado sólo con el volumen de 100 L. El AH y CS no inhibieron la lipoperoxidación microsómica. Por otro lado, todos LS ensayados presentaron actividad Glutatión transferasa (GSH-T) equivalente aproximadamente al 10% de la actividad total microsómica en los LS provenientes de articulación normal y con daño crónico y al 12%, en el LS de articulación con membrana sinovial congestiva. Más aún, la presencia en los LS, de AH y CS previno el daño oxidativo sobre la GSH-T microsómica inducido por Fe+3/ascorbato. Por otra parte, los LS de articulación normal y con daño crónico no afectaron la disminución de los tioles microsómicos inducida por Fe+3/ascorbato; sin embargo, el LS proveniente de la articulaciones con membrana sinovial congestiva, AH y CS la inhibieron significativamente (p<0,05). Estos resultados indicarían que en los LS existirían diferentes mecanismos antioxidantes, los que estarían asociados a cada condición articular. Así el LS de articulación con membrana sinovial congestiva protegió los grupos tioles y la actividad GSH-T, mientras que los LS de articulación normal y con daño crónico ejercen una mayor acción protectora frente a la lipoperoxidación / Proyecto FIV 2007 Nº 12100101 4602018

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La osteoartritis es la enfermedad articular más común en la especie equina, que provoca dolor y disminución de la movilidad articular, cuya consecuencia es la disminución del desempeño deportivo. La osteoartritis se caracteriza por la destrucción del cartílago articular, que se manifiesta por úlceras focales y fragmentación. El óxido nítrico (NO) participaría como un importante mediador biológico en la patología articular, que podría alterar la homeostasis del cartílago conduciendo a su destrucción. El NO es un radical libre, gaseoso, sintetizado a partir del aminoácido L-arginina, por una familia de isoenzimas conocidas como óxido nítrico sintasas (NOS). Se ha descrito que el NO participaría en una amplia variedad de procesos biológicos, siendo oxidado en el medio biológico a nitrito y nitrato, los que se han utilizado como marcadores de su biosíntesis. En las articulaciones diartrodiales los condrocitos son la principal fuente de NO. Para desarrollar el presente trabajo, se obtuvo líquido sinovial de 110 articulaciones metacarpofalángicas de equinos mestizos de matadero, cuya selección se realizó de acuerdo al aspecto macroscópico (normal o alterado) del cartílago articular y de la membrana sinovial, generándose cuatro grupos de articulaciones: NN = cartílago y membrana normales (n = 47); NA = cartílago normal y membrana alterada (n= 25); AN = cartílago alterado y membrana normal (n = 23); AA = cartílago y membrana alterados (n = 15). Se determinaron las concentraciones de proteína y de nitrito por los métodos de Lowry y de Griess, respectivamente. Además, se determinó la edad de los animales por cronometría dentaria. Se aplicó análisis de varianza y una posterior prueba de Tukey para observar diferencias entre grupos articulares. El promedio de edad de los equinos fue de 5.3  3.6 años en el grupo NN, 4.4  3.1 años en el grupo NA, 9.9  4.2 años en el grupo AN y 10.7  3.8 años en el grupo AA. Los grupos NN y NA presentaron una edad significativamente menor (p = 0.001) que los grupos AN y AA. La concentación de proteína en el líquido sinovial fue de 15.2  6.3 mg/mL en las articulaciones NN, 13.4  8.4 mg/mL en las articulaciones NA, 14.4  7.4 mg/mL en las articulaciones AN y 10.8  5.4 mg/mL en las articulaciones AA. No se encontró diferencias significativas (p  0.05) de concentración de proteínas entre los grupos. La concentración de nitrito en el líquido sinovial fue de 29.4  27.9 M en las articulaciones NN, 44.4  32.6 M en las articulaciones NA, 32.6  27 M en las articulaciones AN y 26.3  26.1M en las articulaciones AA. No se encontró diferencias significativas (p  0.05) en la concentración de nitritos entre los grupos de articulaciones. Estos datos sugieren que las articulaciones normales (NN) especialmente en su cartílago son más frecuentes en equinos jóvenes, presentando una leve tendencia a tener un promedio de concentración de proteínas mayor y nitritos detectables en baja concentración, pero si la membrana sinovial se encuentra alterada (AN) se produce un aumento del promedio de los nitritos probablemente por la estimulación de la membrana sinovial al cartílago articular a través de citoquinas. Las articulaciones con mayor alteración (AA) fueron aquellas pertenecientes al grupo de mayor edad promedio y que presentó menor concentración promedio de proteínas y de nitritos, lo que se explicaría por la destrucción tanto de la membrana como del cartílago y por ende, menor cantidad y funcionalidad de los sinoviocitos y condrocitos