Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Transvaginal ultrasound-guided follicle aspiration is a non-invasive procedure for oocyte recovery from live animals. In equine medicine there are a few studies about this technique, so there is lack of information. Therefore, to evaluate the effect of follicular aspiration on subsequent fertility in mares, two experiments were conducted using an ultrasound with a setorial probe (5.0MHz). On the first experiment, fifteen Criollo mares were not aspirated and fifteen were assigned to one of three groups according to the diameter of the aspirated follicle: 25-29mm (n=4; Group 1); 30-34mm (n=6; Group 2) or > 35mm (n=5; Group 3), all of them in oestrus. On the second experiment, the follicular aspiration was performed in twenty five mares during dioestrus and thirty one were used as control mares. The number of follicles aspirated was between 4 and 8 and all visualized follicles were aspirated. Follicle aspiration was performed when at least four follicles (> 5mm) were present on both ovaries. In the Experiment I, the pregnancy rates were 75.0% (Group 1), 83.3% (Group 2), 60.0% (Group 3), and 73.3% (Group 4 - Control). In the Experiment II, pregnancy rates were 76.0% in aspirated group and 77.4% in control group. On both experiments, pregnancy rates were similar in treated and control mares (P>0.05). So far the study indicated that next cycle fertility was not affected by the follicular aspiration. / A aspiração folicular transvaginal é um método não invasivo de obter oócitos de animais vivos. Devido à quase inexistência de estudos relacionados à técnica, na espécie eqüina ainda não se conhece bem seus efeitos sobre a fertilidade. Para avaliar o efeito da aspiração folicular sobre a fertilidade de éguas no ciclo subseqüente, foram realizados dois experimentos utilizando um ultra-som de 5,0MHz com transdutor setorial. No primeiro experimento, quinze éguas Crioulas serviram como controle e não foram aspiradas e outras quinze foram distribuídas em três grupos, de acordo com o tamanho do folículo aspirado: 25-29mm (n=4; Grupo 1); 30-34mm (n=6; Grupo2) ou > 35mm (n=5; Grupo 3), todas na fase do estro. No segundo experimento, vinte e cinco éguas foram aspiradas durante o diestro e trinta e uma serviram como éguas-controle, não sendo aspiradas. O número de folículos aspirados por ovário variou de quatro a oito. Todos os folículos visualizados no monitor foram aspirados. A escolha do dia da aspiração foi determinada quando as éguas apresentaram acima de quatro folículos com diâmetro superior à 5mm em cada ovário. No primeiro experimento, as taxas de prenhez foram: 75,0% (Grupo 1), 83,3% (Grupo 2), 60,0% (Grupo 3) e 73,3% (Grupo 4 - Controle). No Experimento II, o grupo de éguas com folículos aspirados apresentou porcentagem de gestação de 76,0% e o grupo controle 77,4%. Nos dois experimentos, a taxa de prenhez das éguas controle e das que foram aspiradas foi similar (P>0,05). Esta pesquisa indica que a fertilidade das éguas no primeiro ciclo pós-aspiração não foi afetada pela técnica.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:54:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TatimaraMariaMiyauchi-dissertacao.pdf: 241249 bytes, checksum: 31d06c5c53ccc213a1ec299452cee268 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Efficiency of in vitro bovine embryo production has been affected by low quantity and quality of recovered oocytes from ultrasound-guided follicular aspiration (OPU). The objective of this study was to evaluate the effect of different synchronization of follicular wave protocols in the production of oocytes and embryos in vitro, of Bos taurus taurus and Bos taurus indicus and heifers. We used three hundred forty-four results of follicular aspiration. The management regime was semi- confinement of animals with positive energy balance ten days prior to the aspirations. Animals were randomly distributed in the following treatments: TI or control (N=81) - OPU independent of estrous cycle with no previous hormone treatment; TII (N=97) - Estradiol benzoate (3mg), four days before OPU; TIII (N= 97) - Estradiol benzoate (3mg), insertion of subcutaneous implant of Norgestomed and application of D-Chloprostenol Sodium (0.150 mg), four days before OPU; TIV (N= 69) the same treatment used in TIII, plus two doses of FSH (100 to 150 UI) one day before OPU, with an interval of 12 hours, OPU after 12 to 16 hours. Viable recovered oocytes were in vitro matured, fertilized and cultured and presumptive zygotes were cultured until the time of embryo transfer. Zebu showed greater recovery of viable oocytes and total production of embryos in relation to taurine respectively (14.2± 0.7 vs 8.8± 0.5; 17.7± 0.9 vs 11.9± 0.6; 4.3± 0.3 vs 2.1± 0.2). A significant increase in quality and oocyte recovery in groups III and IV in relation to control group, respectively (13.2± 1.0 vs 13.8± 1.1 vs 8.1± 0.8; 16.8± 1.2 vs 17.8± 1.4 vs 10.7± 1.0 , P <0.05). In relation to the total quantity and quality of embryos, all treatments were superior to control (P <0.05), but T IV was superior to other treatments according to the breeds studied. Treatments III and IV showed a greater recovered oocyte number in Bos taurus; the same was not observed in Zebu. A better average conversion was observed in Zebu cows. Bos indicus presented greater quality and recover rate of oocytes in summer compared to winter (15.7± 1.6 vs 12.0± 1.0; 19.3± 1.3 vs 15.3± 1.2). Bos indicus produced more embryos in both seasons and, in winter, both subspecies converted more oocytes into embryos compared with to summer (41.5± 3.5 vs 33.1± 2.4; 28.5± 3.2 vs 19.5± 2.6). Synchronization treatments were efficient in oocyte recovering of Bos taurus donors and Bos indicus embryos. Regarding the season of the year, winter has proved to be the most favorable period for conversion of embryos for the two subspecies. / A eficiência na produção in vitro de embriões bovinos é limitada pela quantidade e qualidade dos oócitos recuperados na aspiração folicular guiada por ultrassonografia (OPU). Objetivou-se com o presente estudo avaliar os efeitos de diferentes protocolos de sincronização da onda folicular na recuperação de oócitos e produção de embriões bovinos in vitro, das subespécies Bos taurus taurus e Bos taurus indicus em diferentes épocas do ano. Foram utilizados trezentos e quarenta e quatro resultados de aspirações foliculares. O regime de manejo dos animais foi o semi- confinamento com balanço energético positivo dez dias antes das aspirações. Os animais foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: T I ou controle (N=81) - OPU independente do ciclo estral - sem tratamento hormonal prévio; T II (N=97) - Benzoato de Estradiol (3mg), cinco dias antes da OPU; T III (N= 97) - Benzoato de Estradiol (3mg), inserção de implante subcutâneo de Norgestomed e aplicação de D-Cloprostenol Sódico (0,150 mg), quatro dias antes da OPU; T IV (N= 69) - mesmo tratamento utilizado em TIII, acrescido de duas aplicações de FSH (100 a 150 UI) um dia antes da OPU, com intervalo de 12 horas, sendo a OPU realizada de 12 a 16 horas após a última aplicação. Os oócitos viáveis recuperados foram maturados, fertilizados e os prováveis zigotos foram cultivados até o momento da transferência dos embriões. Os animais do grupamento genético zebuíno apresentaram maior recuperação de oócitos viáveis, totais e produção de embriões em relação aos taurinos respectivamente (14,2± 0,7 vs 8,8± 0,5; 17,7± 0,9 vs 11,9± 0,6; 4,3± 0,3 vs 2,1± 0,2; P<0,05). Houve aumento significativo na qualidade e recuperação de oócitos nos tratamentos III e IV em relação ao controle, respectivamente (13,2± 1,0 vs 13,8± 1,1 vs 8,1± 0,8; 16,8± 1,2 vs 17,8± 1,4 vs 10,7± 1,0; P<0,05). Em relação à quantidade de embriões totais e qualidade, todos os tratamentos foram superiores ao controle (P<0,05), porém o T IV foi superior aos outros tratamentos de acordo com as raças estudadas (4,6± 0,6 e 1,5± 0,3). Em relação à recuperação de oócitos de acordo com as raças, os tratamentos III e IV recuperaram mais oócitos nos taurinos; o mesmo não foi observado nos zebuínos. Uma melhor conversão média em embriões foi observada nas fêmeas zebuínas. Nos Bos indicus houve melhor recuperação de oócitos no período do verão em relação ao inverno (15,69± 1,64 vs 12,04± 1,05; 19,32± 1,31 vs 15,30± 1,21; P<0,05). Fêmeas Bos indicus produziram mais embriões nas duas épocas do ano, e no inverno as duas subespécies converteram mais oócitos em embriões em relação ao verão (41,50± 3,50 vs 33,12± 2,40; 28,55± 3,25 vs 19,48± 2,64; indicus vs taurus, respectivamente). Os tratamentos de sincronização foram eficientes para recuperação de oócitos em doadoras taurinas e produção de embriões nas doadoras zebuínas. Quanto à época do ano, foi o inverno o período mais favorável para produção de embriões nas duas subespécies.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TatimaraMariaMiyauchi-dissertacao.pdf: 241249 bytes, checksum: 31d06c5c53ccc213a1ec299452cee268 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Efficiency of in vitro bovine embryo production has been affected by low quantity and quality of recovered oocytes from ultrasound-guided follicular aspiration (OPU). The objective of this study was to evaluate the effect of different synchronization of follicular wave protocols in the production of oocytes and embryos in vitro, of Bos taurus taurus and Bos taurus indicus and heifers. We used three hundred forty-four results of follicular aspiration. The management regime was semi- confinement of animals with positive energy balance ten days prior to the aspirations. Animals were randomly distributed in the following treatments: TI or control (N=81) - OPU independent of estrous cycle with no previous hormone treatment; TII (N=97) - Estradiol benzoate (3mg), four days before OPU; TIII (N= 97) - Estradiol benzoate (3mg), insertion of subcutaneous implant of Norgestomed and application of D-Chloprostenol Sodium (0.150 mg), four days before OPU; TIV (N= 69) the same treatment used in TIII, plus two doses of FSH (100 to 150 UI) one day before OPU, with an interval of 12 hours, OPU after 12 to 16 hours. Viable recovered oocytes were in vitro matured, fertilized and cultured and presumptive zygotes were cultured until the time of embryo transfer. Zebu showed greater recovery of viable oocytes and total production of embryos in relation to taurine respectively (14.2± 0.7 vs 8.8± 0.5; 17.7± 0.9 vs 11.9± 0.6; 4.3± 0.3 vs 2.1± 0.2). A significant increase in quality and oocyte recovery in groups III and IV in relation to control group, respectively (13.2± 1.0 vs 13.8± 1.1 vs 8.1± 0.8; 16.8± 1.2 vs 17.8± 1.4 vs 10.7± 1.0 , P <0.05). In relation to the total quantity and quality of embryos, all treatments were superior to control (P <0.05), but T IV was superior to other treatments according to the breeds studied. Treatments III and IV showed a greater recovered oocyte number in Bos taurus; the same was not observed in Zebu. A better average conversion was observed in Zebu cows. Bos indicus presented greater quality and recover rate of oocytes in summer compared to winter (15.7± 1.6 vs 12.0± 1.0; 19.3± 1.3 vs 15.3± 1.2). Bos indicus produced more embryos in both seasons and, in winter, both subspecies converted more oocytes into embryos compared with to summer (41.5± 3.5 vs 33.1± 2.4; 28.5± 3.2 vs 19.5± 2.6). Synchronization treatments were efficient in oocyte recovering of Bos taurus donors and Bos indicus embryos. Regarding the season of the year, winter has proved to be the most favorable period for conversion of embryos for the two subspecies. / A eficiência na produção in vitro de embriões bovinos é limitada pela quantidade e qualidade dos oócitos recuperados na aspiração folicular guiada por ultrassonografia (OPU). Objetivou-se com o presente estudo avaliar os efeitos de diferentes protocolos de sincronização da onda folicular na recuperação de oócitos e produção de embriões bovinos in vitro, das subespécies Bos taurus taurus e Bos taurus indicus em diferentes épocas do ano. Foram utilizados trezentos e quarenta e quatro resultados de aspirações foliculares. O regime de manejo dos animais foi o semi- confinamento com balanço energético positivo dez dias antes das aspirações. Os animais foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: T I ou controle (N=81) - OPU independente do ciclo estral - sem tratamento hormonal prévio; T II (N=97) - Benzoato de Estradiol (3mg), cinco dias antes da OPU; T III (N= 97) - Benzoato de Estradiol (3mg), inserção de implante subcutâneo de Norgestomed e aplicação de D-Cloprostenol Sódico (0,150 mg), quatro dias antes da OPU; T IV (N= 69) - mesmo tratamento utilizado em TIII, acrescido de duas aplicações de FSH (100 a 150 UI) um dia antes da OPU, com intervalo de 12 horas, sendo a OPU realizada de 12 a 16 horas após a última aplicação. Os oócitos viáveis recuperados foram maturados, fertilizados e os prováveis zigotos foram cultivados até o momento da transferência dos embriões. Os animais do grupamento genético zebuíno apresentaram maior recuperação de oócitos viáveis, totais e produção de embriões em relação aos taurinos respectivamente (14,2± 0,7 vs 8,8± 0,5; 17,7± 0,9 vs 11,9± 0,6; 4,3± 0,3 vs 2,1± 0,2; P<0,05). Houve aumento significativo na qualidade e recuperação de oócitos nos tratamentos III e IV em relação ao controle, respectivamente (13,2± 1,0 vs 13,8± 1,1 vs 8,1± 0,8; 16,8± 1,2 vs 17,8± 1,4 vs 10,7± 1,0; P<0,05). Em relação à quantidade de embriões totais e qualidade, todos os tratamentos foram superiores ao controle (P<0,05), porém o T IV foi superior aos outros tratamentos de acordo com as raças estudadas (4,6± 0,6 e 1,5± 0,3). Em relação à recuperação de oócitos de acordo com as raças, os tratamentos III e IV recuperaram mais oócitos nos taurinos; o mesmo não foi observado nos zebuínos. Uma melhor conversão média em embriões foi observada nas fêmeas zebuínas. Nos Bos indicus houve melhor recuperação de oócitos no período do verão em relação ao inverno (15,69± 1,64 vs 12,04± 1,05; 19,32± 1,31 vs 15,30± 1,21; P<0,05). Fêmeas Bos indicus produziram mais embriões nas duas épocas do ano, e no inverno as duas subespécies converteram mais oócitos em embriões em relação ao verão (41,50± 3,50 vs 33,12± 2,40; 28,55± 3,25 vs 19,48± 2,64; indicus vs taurus, respectivamente). Os tratamentos de sincronização foram eficientes para recuperação de oócitos em doadoras taurinas e produção de embriões nas doadoras zebuínas. Quanto à época do ano, foi o inverno o período mais favorável para produção de embriões nas duas subespécies.

The embryonic development and pregnancy rates are influenced by variations in embryo in vitro production (IVP) systems and protocols for bovine embryos, such as gaseous atmosphere, culture media and the protein supply adopted in the different steps of IVP. Two studies were performed to evaluate the effect of O2 tension on in vitro maturation (IVM) and fertilization (IVF) of bovine oocytes, and the protein supply in the embryonic in vitro culture. Immature Cumulusoocytes complexes (COC) were recovered by transvaginal ultrasound guided follicular aspiration (OPU) from Bos taurus indicus donors from commercial programs and randomly assigned according to the number and quality of the COC. Standard bovine IVM procedure was carried out in modified TCM-199, added of FSH, LH, Oestradiol, EGF, insulin and 10% bovine fetal serum (FCS), for 24h. Frozen semen was selected by Percoll gradient (90, 60 and 30%). The insemination was performed with 2x106 spermatozoa/mL in Fert-Talp with heparin and PHE, for 18 to 22h. Presumptive zygotes were in vitro cultured (IVC) in SOFaaci during 6 to 9 days with 5%CO2, 5%O2 and 90% N2 in air. All steps of IVC were performed in an incubator at 39ºC with satured humidity. The cleavage and blastocyst rates were analysed by GLM procedure. Hatching, quality I blastocyst and pregnancy rates were compared by Chi-square Test with 5% of significance. In experiment I (11 replicates) IVM and IVF of COC (n=1092) were conducted under 5% CO2 (20% O2) in air or in 5%CO2, 5%O2 and 90% N2 (5%O2). Experiment II was divided in two steps (IIa and IIb). In experiment IIa (n=1745 COC), the IVM and IVF was followed by in vitro culture (IVC) in SOFaaci added of 4mg/mL bovine serum albumin (BSA) or 4mg/mL BSA+2% bovine fetal serum (BSA+FCS). In experiment IIb (n=704 COC), after standard IVM and IVF, IVC was performed in the two media of Experiment IIa (BSA and BSA+FCS) and in a third group the SOFaaci was added of 4mg/mL BSA+2% FCS (BSA+FCSD4) on day 4 of IVC. The viability was accessed by morphological evaluation in D2 (cleavage), D7 (blastocysts and quality categories), D9 (hatched blastocysts), D45 (experiment I) and D60 (experiment II; pregnancy rates), considering day zero (D0) as the fertilization day. In experiment I, no differences were found (P>0.05) in cleavage rates (69 and 70%), blastocyst in D7 (37 and 38%) and blastocyst quality I (79 and 74%) in an atmosphere of 5% or 20%O2, respectively. The hatching rate in D9 considering all COC submitted to IVM was higher (P<0.05) for the 5%O2 group (21%) compared to the IVM and IVF group under 20%O2 (11%). A pregnancy rate of transferred embryos at 45 days (n=278) was similar (P=0.15) between treatments (25.8 e 33.6% for 5%O2 e 20%O2 ,respectively ). In experiment IIa blastocyst rates (51%) and quality I blastocysts (41%) in D7, was higher (P<0.05) in BSA+FCS group compared to the BSA group (42 and 30%), respectively. In experiment IIb, blastocyst rates were higher (P<0.05) in group BSA+FCS (47%) and similar between BSA (34%) and BSA+FCSD4 (43%) groups. Blastocyst rates quality I were higher (P<0.05) for groups BSA+FCS (34%) and BSA+FCSD4 (32%), compared to the BSA group (19.9%). A pregnancy rate of the transferred embryos (n=820) was similar between treatments in experiments IIa and IIb. Considering pregnancy rates corresponding only to IVM COC (Experiment IIa), the rates were higher (P<0.05) for the BSA+FCS group (16%) than the BSA group (12%). There was no detrimental effect in IVP of bovine embryos and their pregnancy rates when IVM, IVF and IVC were performed in 5%O2, 5%CO2 and 90%N2. IVP of bovine embryos is increased by the addition of 2% FCS to the IVC medium without any detrimental effect on their morphological quality and pregnancy rates. On the other hand, pregnancy rates related to IVM of COC incremented by the addition of 2% de Fc to the IVC medium SOFaaci+BSA. / Diferenças nos protocolos e sistemas de produção in vitro (PIV) de embriões bovinos incluindo atmosfera gasosa, meios de cultivo e suplementação de proteína utilizados nas diferentes etapas da PIV, influenciam diretamente os resultados finais de desenvolvimento embrionário e prenhez. Dois experimentos foram conduzidos com o objetivo de avaliar a influência da concentração de oxigênio na maturação in vitro (MIV) e fecundação in vitro (FIV) de oócitos bovinos e da suplementação protéica no cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos. Complexos cumulus-oócitos imaturos (COC) obtidos de fêmeas Bos taurus indicus por aspiração folicular transvaginal guiada por ultra-sonografia (OPU) foram divididos homogeneamente quanto ao número e a qualidade entre os tratamentos, sendo maturados por 24h, em TCM-199 modificado, acrescido FSH, LH, Estradiol, EGF, Insulina e 10% de SFB. Sêmen congelado selecionado por gradientes de Percoll (2 x 106 células/mL) foi utilizado para a fecundação em Fert-TALP com heparina e PHE, por 18 a 22h. Os prováveis zigotos foram cultivados in vitro em SOFaaci por 6 a 9 dias em atmosfera de 5%CO2, 5%O2 e 90% N2. Todas as etapas foram conduzidas em estufa a 39ºC com umidade saturada. Os percentuais de clivagem e de blastocistos foram analisados pelo procedimento GLM. As taxas de eclosão dos blastocistos e de prenhez foram comparadas por Qui-quadrado com significância de 5%. No experimento I (11 repetições), a MIV e FIV dos COC (n=1092) foram realizadas sob atmosfera de 5% de CO2 em ar (20%O2) ou em 5%CO2, 5%O2 e 90% N2 (5%O2). O experimento II foi dividido em 2 etapas (IIa e IIb). No experimento IIa (n=1745 COC) após a MIV e FIV foi realizado o CIV em meio SOFaaci acrescido de 4mg/mL albumina sérica bovina (BSA) ou 4mg/mL de BSA + 2% de soro fetal bovino (BSA+SFB). No experimento IIb (n=704 COC), após a MIV e FIV, o CIV foi conduzido nos dois meios do experimento IIa (BSA e BSA+SFB) e um terceiro grupo onde o SOFaaci+BSA foi suplementado com 2% de SFB no quarto dia de cultivo (BSA+SFBD4). As avaliações morfológicas foram efetuadas no D2 (clivagem), D7 (blastocistos e grau de qualidade), D9 (blastocistos eclodidos) e taxa de prenhez aos 45 (experimento I) e 60 dias (experimento II), considerando-se o dia da fecundação como D0. No experimento I, não houve diferença (P>0,05) nas taxas de clivagem (69 e 70%), blastocistos em D7 (37 e 38%) e blastocistos qualidade I (79 e 74%) entre atmosfera de 5%O2 ou 20% de O2, respectivamente. A taxa de eclosão em D9 sob o total de oócitos MIV foi superior (P<0,05) no grupo 5%O2 (21%) comparado ao grupo MIV e FIV sob 20%O2 (11%). A taxa de prenhez aos 45 dias dos embriões transferidos (n=278) foi semelhante (P=0,15) entre os tratamentos (25,8 e 33,6% para 5%O2 e 20%O2 respectivamente). No experimento IIa, a taxa de blastocistos (51,5%) e de blastocistos qualidade I (41%) em D7, foi superior (P<0,05) para o grupo BSA+SFB em relação ao BSA (42 e 30%), respectivamente. No experimento IIb, a taxa de blastocistos foi superior (P<0,05) no grupo BSA+SFB e semelhante (P>0,05) entre o grupo BSA e BSA+SFBD4. A taxa de blastocistos qualidade I foi superior para os grupos BSA+SFB (34%) e BSA+SFBD4 (32,2%) em comparação ao grupo BSA (19,9%). A taxa de prenhez em relação aos embriões transferidos (n=820) foi semelhante entre os tratamentos nos experimentos IIa e IIb. A taxa de prenhez correspondente aos oócitos colocados para MIV foi superior (P<0,05) para o grupo BSA+SFB (16%) comparado ao grupo BSA (12%) no experimento IIa. Não há comprometimento da PIV de embriões bovinos bem como da taxa de prenhez quando a MIV, FIV e CIV são conduzidas com 5%O2, 5%CO2 e 90%N2. A produção in vitro de embriões é incrementada pela adição de 2% de SFB ao meio de CIV, sem prejudicar a qualidade morfológica dos mesmos e a taxa de prenhez. A porcentagem de prenhez produzida em relação aos COC colocados para MIV é aumentada pela adição de 2% de SFB ao meio de cultivo in vitro SOFaaci+BSA.