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Purificação, caracterização e determinação de atividade coagulante da lectina de sementes de Moringa oleiferade Andrade Luz, Luciana 31 January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Moringa oleifera é uma planta tropical com grande importância econômica e de usos
industriais e medicinais. Diferentes partes da planta são aplicadas e o extrato de
sementes é comumente usado na purificação de água para consumo humano. Lectinas
são proteínas ou glicoproteínas de origem não-imune que se ligam bioespecificamente a
carboidratos, com capacidade de aglutinar células de forma reversível; extração e
purificação dessas biomoléculas permite sua aplicação no âmbito biotecnológico. O
objetivo deste trabalho foi investigar a atividade hemaglutinante (AH) em extratos de
diferentes tecidos de M. oleifera, purificar e caracterizar uma lectina de sementes com
propriedades coagulantes (cMoL). AH foi detectada em extratos salinos (NaCl 0,15 M)
de flores e raques da inflorescência (5 %, p/v), sementes, folhas e tecido fundamental do
tronco e casca do tronco (10 %, p/v). cMoL isolada após extração salina e cromatografia
em gel de guar foi ativa na faixa de pH de 4 a 9, termoestável a 100 ºC durante 7 h e
aglutinou eritrócitos de coelho e humanos. AH dos extratos dos tecidos e de cMoL foi
inibida por carboidratos; azocaseína e asialofetuína aboliram a AH de cMoL.
Eletroforese em gel de poliacrilamida em condições redutoras revelou uma banda
polipeptídica principal de 26.5 kDa; cMoL nativa é uma proteína básica e foi purificada
como uma única banda. A verificação da propriedade coagulante foi realizada
utilizando-se uma suspensão de caolin em água (10 g/L) e leitura espectrofotométrica de
absorbância a 500 nm. Preparações de sementes e cMoL apresentaram atividade
coagulante similar ao sulfato de alumínio, o coagulante sintético mais utilizado no
tratamento da água em todo o mundo; após o aquecimento de cMoL não foram
observadas diferenças significativas na coagulação. Em conclusão, lectinas estão
presentes em diferentes tecidos de M. oleifera; preparações lectínicas de sementes e
cMoL podem ser aplicadas no tratamento de água para consumo humano
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Lectina da esponja marinha Tedania ignis: purifica??o, caracteriza??o e intera??o com leishmaniasDias, Anne Shyrley Ferreira 18 August 2006 (has links)
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Previous issue date: 2006-08-18 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Lectin obtained from the marine sponge Tedania ignis was purified and characterized by extraction of soluble proteins (crude extract) in 50mM Borax, pH 7.5. The purification procedure was carried out by crude extract precipitation with ammonium sulfate 30% (FI). The precipitated was resuspended in the same buffer and fractionated with acetone 1.0 volume (F1.0). A lectin was purified from this specific fraction by using an affinity chromatography Sepharose 6B. This lectin preferentially agglutinated human erythrocytes from B type previously treated with papain enzyme. The hemagglutinating activity lectin was dependent of divalent Mn2+ cation and was inhibited by the carbohydrates galactose, xylose and fructose. SDS-PAGE analysis indicated a molecular mass of the lectin around 45 kDa. This protein showed stability until 40?C for 1 h. Further, it showed activity between pH 2.5 and 11.5, with an enhanced activity at pH 7.5. Leishmania chagasi promastigotes stained with Coomassie brilliant blue R-250 were agglutinated by F1,0 and in the presence of galactose this interaction was abolished. These results show that this lectin could be implicated in defense procedures and it will can be used as biological tools in studies with this protozoon / Uma lectina foi purificada e caracterizada da esponja marinha Tedania ignis. O procedimento de purifica??o foi conduzido a partir do extrato bruto obtido por solubiliza??o em tamp?o B?rax 50mM, pH 7,5 e precipita??o prot?ica com 30% de sulfato de am?nio (FI). O precipitado foi dissolvido no tamp?o de extra??o e fracionado com 1,0 volume de acetona (F1,0). A lectina foi purificada desta fra??o por meio de cromatografia de afinidade em Sepharose 6B. A prote?na apresentou uma massa molecular de 45 kDa, conforme determinada por eletroforese em poliacrilamida em SDS, e se mostrou est?vel at? a temperatura de 40?C, por 1 hora. Uma curva de pH foi conduzida entre os valores de pH 2,5 a 11,5, onde observou-se uma maior atividade em pH 7,5. Dentre os eritr?citos humanos testados ela aglutinou preferencialmente os do tipo B tratados com papa?na. A atividade hemaglutinante da lectina foi dependente do c?tion bivalente Mn+2 e foi inibida pelos carboidratos galactose, xilose e frutose. Formas promastigotas de Leishmania chagasi coradas com Coomassie blue R-250 foram aglutinadas por F1,0 e na presen?a de galactose essa intera??o n?o foi observada. Esses resultados indicam que essa lectina pode estar envolvida no processo de defesa e que pode vir a ser utilizada como ferramenta biol?gica nos estudos com esse protozo?rio
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Lectinas de Cratylia mollis (Cramoll-1,4) : estudo de uma formulação em gel irradiado e seu efeito no processo de reparação tecidual in vivoRIBEIRO, Maria Helena Madruga Lima 12 December 2011 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-02T15:12:58Z
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Previous issue date: 2011-12-12 / Lectins Cratylia mollis (Cramoll-1,4) have been structurally characterized and their biological and pharmacological effects remain under investigation, since its use as a biopharmaceutical requires further elaboration. The objective of this study was to propose and characterize a gel formulation radiated Cramoll-1,4, and the preservation of properties of lectins in vitro, under the influence of gamma radiation and its activity in tissue repair processes in vivo (skin and bone). Initially, we made the extraction and purification of Cramoll-1,4, was developed a gel formulation using Carbopol as a vehicle, which was irradiated with 60Co gamma rays at a dose of 7,549 kGy h-1. To evaluate the biodistribution, Cramoll-1,4 was incubated with Tc-99 and to characterize the marking was made thin-layer chromatography. Then the gel was used in protocols for tissue repair in vivo, specifically bone tissue and epithelial. The proposed formulation at a concentration of 300 μg retained the hemagglutinating activity in vitro, suggesting a role of "protection", making the inactivation of Cramoll-1,4 radiation. The biodistribution of this gel was evaluated from the labeling with technetium showed that this lectin was captured by the intestine, metabolized by the liver and excreted by the kidneys and does not cross the blood brain barrier. The application of the topical gel irradiated Cramoll-1,4 at a concentration of 300 μg in bone defects was observed that the formulation, promoted an immediate boost in soft tissue, making it difficult, however, direct contact between the formulation and bone tissue. Thus, we observed the formation of fibrous tissue and not the expected new bone formation. In parallel, regular topical application of gel irradiated Cramoll-1,4 at a concentration of 100 μg for the treatment of second-degree skin burns, experimentally induced, sped up the process of granulation, reepithelialization and wound contraction. / Camaratu ou feijão Camaratuba é uma leguminosa da região semi-árida do Nordeste do Brasil. Lectinas de Cratylia mollis (Cramoll-1,4), foram estruturalmente caracterizadas e seus efeitos biológicos e farmacológicos continuam sob investigação, pois seu uso como um produto biofarmacêutico requer maior aprofundamento. O objetivo deste estudo foi propor e caracterizar uma formulação em gel irradiada de Cramoll-1,4, quanto à preservação das propriedades in vitro das lectinas, sob o efeito de radiação gama e sua atividade em processos de reparo tecidual in vivo. Inicialmente foi feita a extração e purificação da Cramoll-1,4, foi desenvolvida uma formulação em gel utilizando-se Carbopol como veículo, que foi irradiada com raios gama de Co60 em uma dose de 7,549 kGy h-1. Para avaliação da biodistribuição, a Cramoll-1,4 foi incubada com Tc-99 e para caracterizar a marcação foi feita cromatografia em camada fina. Em seguida o gel foi empregado em protocolos de reparação tecidual in vivo, mais especificamente tecido ósseo e epitelial. A formulação proposta na concentração de 300 μg manteve a atividade hemaglutinante in vitro, sugerindo um papel de ―proteção‖, dificultando a inativação da Cramoll-1,4 pela radiação. A biodistribuição do referido gel foi avaliada a partir da marcação com tecnécio, mostrou que esta lectina foi captada pelo intestino, metabolizada pelo fígado e excretada pelos rins e não ultrapassa a barreira hematoencefálica. Quanto à aplicação tópica do gel irradiado da Cramoll-1,4 na concentração de 300 μg em defeitos ósseos foi observado que a formulação, promoveu um estímulo imediato no tecido conjuntivo mole, dificultando, entretanto, o contato direto entre a formulação e o tecido ósseo. Assim, observou-se a formação de tecido fibroso e não a esperada neoformação óssea. Em paralelo, a aplicação tópica regular do gel irradiado da Cramoll-1,4 na concentração de 100 μg para o tratamento de queimaduras cutâneas de segundo grau experimentalmente induzidas, acelerou os processos de granulação, reepitelização e retração da ferida.
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