CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A casca do caule de Amburana cearensis A C Smith, conhecida popularmente como cumaru, à utilizada para o tratamento de doenÃas respiratÃrias como bronquite e asma. Estudos farmacolÃgicos anteriores mostraram as atividades antiinflamatÃria, antioxidante e antinociceptiva do extrato e molÃculas isoladas do cumaru: incluindo cumarina (CM) e amburosÃdeo A (AMB). Diante do exposto, o objetivo do presente estudo foi realizar uma avaliaÃÃo preliminar da citotoxicidade, e investigar o potencial antiinflamatÃrio e antioxidante da cÃpsula do extrato seco de A. cearensis (CESAC) e da Afrormosina (AFM), com determinaÃÃo do possÃvel mecanismo de aÃÃo. Para tanto, as cÃpsulas foram produzidas a partir do extrato seco (spray-dryer) padronizado pelo teor de AMB e CM por CLAE. A citotoxicidade foi investigada em neutrÃfilo humano (2,5 x 106 cÃlulas/mL) atravÃs dos testes de exclusÃo ao corante azul de tripan, LDH, MTT e avaliaÃÃo do padrÃo de morte celular pelo corante laranja de acridina/brometo de etÃdio. A AFM (10, 50 e 100 Âg/mL) nÃo mostrou citotoxicidade, enquanto que a CESAC (10, 100 e 200 Âg/mL) aumentou o nÃmero de cÃlulas em apoptose e necrose. A CESAC (100-400 mg/kg, v.o.) inibiu o edema de pata em camundongos, o acÃmulo de cÃlulas e os nÃveis de TBARS-MDA no peritÃnio, induzidos por carragenina. No lavado broncoalveolar de ratos desafiados com ovalbumina, a CESAC reduziu o acÃmulo de cÃlulas, bem como a produÃÃo de TBARS-MDA e nitrito/nitrato, alÃm de restabelecer os nÃveis de GSH. Tanto a CESAC (5, 10, 25, 50, 100 e 200 Âg/mL), quanto AFM (3; 6; 12,5; 25; 50 e 100 Âg/mL) reduziram a ativaÃÃo de neutrÃfilos humano induzida por fMLP (em atà 65 % e 66 %, respectivamente) ou PMA (em atà 72 % e 86 %, respectivamente). AlÃm disso, estes inibiram em atà 70 % aproximadamente a atividade de mieloperoxidase, porÃm apenas a CESAC inibiu a atividade da elastase (6-88 % inibiÃÃo). A adiÃÃo de CESAC ou AFM à suspensÃo de neutrÃfilos reduziu tambÃm os nÃveis de TNFα. O CESAC e a AFM mostraram atividade inibitÃria do metabolismo oxidativo de neutrÃfilos mensurado atravÃs de ensaios de quimioluminescÃncia dependente de luminol (QL lum) e lucigenina (QL luc). / The stem bark of Amburana cearensis AC Smith, popularly known as cumaru, is used to treat respiratory diseases like bronchitis and asthma. Previous pharmacological studies showed the anti-inflammatory, antinociceptive and antioxidant, and / or muscle relaxant activities of the the extract and isolated molecules from cumaru, including coumarin (CM) and amburoside A (AMB). Given the above, the objective of this study was to conduct a preliminary assessment of cytotoxicity, and investigate the anti-inflammatory and antioxidant potential of the capsule of the dryed extract from A. cearensis (CESAC) and afrormosin (AFM) to determine the possible mechanism of action. For this, the capsules were produced from the dried extract (spray-dryer), standardized by the content of CM and AMB by HPLC. Cytotoxicity was investigated in human neutrophil (2.5 x 106 cells / mL) through the tests of the exclusion dye trypan blue, LDH, MTT and evaluation of the pattern of cell death by acridine orange / ethidium bromide. AFM (10, 50 and 100 Âg / mL) showed no cytotoxicity, while CESAC (10, 100 and 200 Âg / mL) increased the number of apoptotic and necrotic cells. The CESAC (100-400 mg / kg, po) inhibited the paw edema in mice, the accumulation of cells and MDA-TBARS levels in the peritoneum induced by carrageenan. In bronchoalveolar lavage of mice challenged with ovalbumin, the CESAC reduced the accumulation of cells, as well as production of TBARS, MDA and nitrite / nitrate, and restore the levels of GSH. Both CESAC (5, 10, 25, 50, 100 and 200 Âg / mL), and AFM (3, 6, 12.5, 25, 50 and 100 Âg / mL) reduced the activation of human neutrophils induced by fMLP ( up to 65% and 66%, respectively) or PMA (up to 72% and 86%, respectively). Moreover, they inhibited by 70% about the activity of myeloperoxidase, but only CESAC inhibited elastase activity (6-88% inhibition). The addition of AFM or CESAC in suspension of neutrophils also reduced the levels of TNFα. The CESAC and AFM showed the inhibitory activity of neutrophil oxidative metabolism measured by tests of luminol- (CL lum) and lucigenin-dependent (CL luc) chemoluminescence.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Amburana cearensis is a medicinal plant from Northeast Brazil popularly known as âcumaruâ. Its stem bark has an odor characteristic of the presence of coumarin, being used in alternative medicine for the treatment of bronchitis and asthma. The present study investigated the toxicity, as well as the anti-inflammatory, antioxidant and smooth muscle relaxant activities of isokaempferide (IKPF, 3-metylflavonol) and amburoside A (AMB, phenolic glucoside), bioactive constituents of the plant. The intraperitoneal administration (ip) of IKPF or AMB, in single doses (50-200 mg/kg), showed low toxicity in mice. In primary hepatocyte cultures, only IKPF (100 ug/ml) reduced significantly the cellular viability, as assessed by the MTT test. ICPF and AMB (12.5- 50 mg/kg, ip) presented anti-inflammatory activities, observed initially by inhibitions of the carrageenan (Cg), prostraglandin E2 (PGE2), dextran (Dx), histamine or serotonin-induced paw edemas. Besides, IKPF and AMB (12.5 â 50 mg/kg) produced 39 and 50% reductions, respectively, of neutrophil migration as assessed by histopathological/morphometric analyses of the Cg-induced paw edema. The increase of vascular permeability induced by Dx in mice was also significantly inhibited by IKPF or AMB. Mice pretreatments (oral or ip) with IKPF or AMB (25 and 50 mg/kg) reduced peritoneal Cg or fMLP-induced leucocytes and neutrophil migrations. Also, IKPF and AMB partially prevented fMlP-induced neutrophil degranulation in human blood, as determined by the decrease in 66 and 52% of activities of the enzymes myeloperoxidase and elastase, respectively. The two compounds were not cytotoxic for neutrophil, as assessed by the MTT test. AMB showed hepatoprotective and antioxidant actions in the model of CCl4-induced liver toxicity in rats, as determined by the liver enzymes activity (AST and ALT), catalase, lipoperoxidation (TBARS assay), reduced glutathione, and histological analysis. In the isolated guinea pig trachea, IKPF (10-1000 Âg/ml) and AMB (10- 3000 Âg/ml) produced a concentration-dependent relaxation of the muscle precontracted by carbacol or KCl. The epithelium removal improved IKPF-induced relaxation, but did not alter the AMB effect. IKPF-induced relaxation was inhibited in 41% by L-NAME; 31 and 50% by ODQ (3 and 33 uM); 31% by propranolol and 37% by capsaicin. In the trachea pre-contracted by KCl (40 mM), the pre-incubation with glibenclamide or iberiotoxin, inhibited the IKPF-induced relaxation by 39% and 38%, respectively. On the other hand, 4-aminopyridine did not significantly influence the effect of IKPF. However, in the muscle pre-contracted with 120mM KCl the relaxant effect of IKPF was significantly reduced and not affected by glibenclamide. In conclusion, results showed that IKPF and AMB present anti-inflammatory, muscular relaxant and/or antioxidant activities, justifying the traditional use of Amburana cearensis in the treatment of respiratory tract diseases that present inflammation, oxidative stress, and bronchoconstriction as pathophysiological characteristics. / Amburana cearensis (Fabaceae) à uma Ãrvore da caatinga nordestina, mais conhecida popularmente como cumaru. Suas cascas (caule) possuem um cheiro caracterÃstico pela presenÃa de cumarina, e sÃo principalmente utilizadas no tratamento da bronquite, tosse e asma. O presente estudo procurou investigar os efeitos tÃxicos e as atividades antiinflamatÃria, antioxidante e relaxante muscular do isocampferÃdio (ICPF, 3-metilflavonol) e/ou do amburosÃdio A (AMB, glucosÃdio fenÃlico) isolados das cascas do caule de A. cearensis. A administraÃÃo intraperitoneal (i.p.) do ICPF ou do AMB em dose Ãnica (50 â 200 mg/kg) mostrou baixa toxicidade em camundongos. Na cultura primÃria de hepatÃcitos apenas o ICPF (100 Âg/ml) reduziu significativamente a viabilidade celular, determinada pelo teste do MTT. O ICPF e o AMB (12,5 â 50 mg/kg, i.p.) apresentaram atividade antiinflamatÃria, observada inicialmente pela inibiÃÃo do edema de pata induzido por carragenina-Cg, prostaglandina E2, dextrano-Dx, histamina ou serotonina e pela reduÃÃo em 39 e 50% respectivamente do infiltrado de neutrÃfilos verificada pela anÃlise histopatolÃgica/morfomÃtrica do edema induzido por Cg. O aumento da permeabilidade vascular induzido pelo Dx em camundongos, foi tambÃm significativamente inibido pelo ICPF ou AMB. O prÃ-tratamento (oral ou i.p.) dos animais com ICPF ou AMB (25 e 50mg/kg) causaram reduÃÃes tanto na migraÃÃo de leucÃcitos quanto neutrÃfilos induzida por Cg ou fMLP no peritÃnio de camundongos. O ICPF e o AMB preveniram parcialmente a degranulaÃÃo de neutrÃfilos humano induzida pelo fMLP, determinada pela reduÃÃo das atividades das enzimas mieloperoxidase e elastase em atà 66 e 52% respectivamente. Os compostos fenÃlicos em estudo nÃo foram citotÃxicos para neutrÃfilos (teste do MTT). O AMB mostrou uma aÃÃo hepatoprotetora/antioxidante no modelo de hepatotoxicidade induzida pelo CCl4 em ratos, determinada pelas enzimas hepÃticas (ALT e AST) e pela catalase, alÃm de TBARS, glutationa reduzida e anÃlise histopatolÃgica. Na traquÃia isolada de cobaia o ICPF (10 â 1000 ÂM) e o AMB (10 â 3000 ÂM) relaxaram de maneira concentraÃÃo-dependente o mÃsculo prÃ-contraÃdo pelo CCh ou KCl. A remoÃÃo do epitÃlio traqueal favoreceu o efeito relaxante do ICPF, mas nÃo modificou o efeito do AMB. O relaxamento induzido pelo ICPF foi inibido em 41% pelo L-NAME; 31 e 50% pelo ODQ (3 e 33 ÂM); 31 % pelo propranolol e 37 % pela capsaicina. Na traquÃia prÃ-contraida pelo KCl (40 mM) a glibenclamida (GLB) ou iberiotoxina reduziram o efeito relaxante do ICPF, enquanto no mÃsculo prÃ-contraÃdo pelo KCL 120mM o efeito do ICPF foi reduzido e nÃo foi afetado pela GLB. Portanto, os resultados apresentados mostram que o ICPF e o AMB possuem atividades antiinflamatÃria, relaxante muscular e antioxidante, o que justifica pelo menos em parte o uso tradicional de A. cearensis no tratamento de doenÃas respiratÃrias onde as caracterÃsticas fisiopatolÃgicas incluem inflamaÃÃo, estresse oxidativo e broncoconstriÃÃo.