La méthylation de l’ADN est un phénomène épigénétique qui joue un rôle important dans le développement des mammifères et qui est associé à une répression transcriptionnelle. La méthylation de loci CpG de l’ADN est médiée par les méthyltransférases de l’ADN – les Dnmts. La méthylation joue également un rôle clef dès les stades précoces de la cancérogenèse dans une grande partie des tumeurs où on observe une méthylation, notamment la répression des gènes suppresseurs de tumeurs et une déméthylation, notamment l’expression de séquences d’ADN parasites. Dans une première partie de la thèse, nous nous sommes intéressés à la méthyltransférase de l’ADN Dnmt3L et plus particulièrement à identifier les mécanismes par quels cette méthyltransférase peut réprimer l’expression génique. Dnmt3L, identifiée et clonée en 2000, est caractérisée comme une méthyltransférase dépourvue de son domaine catalytique jouant probablement un rôle dans la régulation de la méthylation de l’ADN plutôt que dans l’ajout de groupes méthyls à l’ADN. Son rôle est fondamental dans l’établissement de l’empreinte génétique maternelle. Des travaux récents, réalisés, notamment par notre équipe, ont permis de montrer que plusieurs Dnmt répriment la transcription non seulement en méthylant l’ADN mais également en interagissant avec les déacétylases d’histones, HDAC. Au regard de ces résultats, nous nous sommes intéressés à évaluer si Dnmt3L est également capable de réprimer la transcription en recrutant une activité HDAC. Des recherches menées de concert avec Rachel Deplus, étudiante en thèse au laboratoire, ont permis de montrer que Dnmt3L interagit avec les déacétylases d’histones, ce qui conduit à la répression de la transcription. Dans l’ensemble, nos résultats ont permis de montrer que Dnmt3L, bien que dépourvue d’activité méthyltransférase, peut, tout comme les autres Dnmt, également réprimer la transcription par le biais de son interaction avec les enzymes HDAC. Dans une deuxième partie majeure de la thèse, nous nous sommes intéressés à l’étude des mécanismes par lesquels la méthylation de l’ADN peut être ciblée au sein du génome. Cette thématique bien que fondamentale, est encore peu connue à l’heure actuelle. Des études très récentes, réalisées dans notre laboratoire, suggèrent que les Dnmt peuvent être recrutées au sein de loci spécifiques suite à leur association avec des facteurs de transcription. Dans le cadre de ma thèse, nous avons pu montrer que la méthyltransférase de l’ADN Dnmt3a interagit in vitro et in vivo avec l’oncoprotéine Myc. Nous avons également pu mettre en évidence que la protéine Myc endogène recrute une activité méthyltransférase de l’ADN. Bien que l’oncoprotéine Myc soit surtout connue pour être un activateur de la transcription, Myc est également décrit pour réprimer la transcription de certains gènes spécifiques. Il était donc raisonnable de proposer que Dnmt3a pourrait être recruté pour réprimer les gènes régulés négativement par Myc. En effet en testant l’activité promotrice du gène p21, un gène connu pour être réprimé par Myc, nous avons démontré que Dnmt3a agit comme un co-répresseur transcriptionnel de Myc. Par des essais d’immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), nous avons démontré que Myc et Dnmt3a forment un complexe stable sur le promoteur du gène p21. D’autre part nous avons montré que la 5 azacytidine, un agent déméthylant, lève la répression médiée par Myc au sein du promoteur du gène p21. En collaboration avec d’autres laboratoires, nous avons également effectué du séquençage au bisulfite du promoteur proximal de ce gène à partir d’ADN provenant de cellules sauvages pour Myc (myc+/+) ou invalidées pour Myc (myc-/-), montrant que la méthylation de ce promoteur est dépendante de la présence de Myc. Ainsi il semble que l’activité méthyltransférase de l’ADN de Dnmt3a soit requise pour sa fonction de co-répresseur des gènes régulés négativement par Myc. Cette étude confirme et valide le nouveau concept du recrutement des Dnmt par des interactions protéine-protéine. Notre travail a également des implications sur la compréhension du rôle de la méthylation de l’ADN dans la tumorigenèse. De plus, cette étude a permis de montrer pour la première fois que l’oncoprotéine Myc n’est pas seulement impliquée dans une répression génique passive (séquestration de co-activateurs) mais également une répression active (recrutement du co-represseur Dnmt3a).

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Aggregatibacter actinomycetemcomitans is strongly associated with aggressive periodontitis and one of several virulence factors is a leukotoxin (LtxA). The toxin has a consequential impact on human leukocytes which leads to an interference with the host ́s defences due to a chain reaction involving activation and release of a pro-inflammatory cytokine; interleukin-1β (IL-1β). As an early phase in this reaction chain the toxin stimulates a massive release of adenosine triphosphate (ATP) from human leukocytes. We hypothesize that leukotoxin-induced pro- inflammatory cell death is initiated by ATP release through pannexin channels in the human monocyte cell membrane. The aim of this study was to investigate if blocking of pannexin channels with carbenoxolone (Cbx) results in a reduction of ATP release. A human monocyte cell line (THP-1 cells) was exposed to purified LtxA, Cbx and oxidized ATP. Colorimetric ATP kit was used to evaluate levels of ATP release and thereafter the samples were read in a spectrophotometer. This study confirms that LtxA induces an ATP release from THP-1 cells. Our conclusion is that blocking of pannexin channels does not result in a statistically significant reduction in ATP release, which indicates that ATP is released by one or several other undetected pathways.

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BAKGRUND Under sommaren 2013 lyftes en fråga i Europa om det fanns ett behov av en standard för kommersiella diskmaskiner. Svenska aktörer, exempelvis Svensk dagligvaruhandel, kontrollmyndigheter och Sveriges Kommuner och Landsting, svarade ja. Tidigare forskning har tytt på att otillräckligt rena diskmaskiner kan påverka diskresultatet och att smutsiga ytor kan förorena livsmedel och leda till matförgiftning. SYFTE Att studera diskmaskiners renhet och om detta hade något samband med renheten på diskgodset. METOD Tio restauranger i Örebro kommun valdes ut genom ett bekvämlighetsurval. Diskmaskiner kontrollerades med utgångspunkt från en frågeguide och diskgods testades med ATP-mätare. För att analysera resultaten användes pivottabeller i Microsoft Excel och samband signifikanstestades med Chi2-test. RESULTAT Av tio kontrollerade diskmaskiner bedömdes åtta som smutsiga. Drygt hälften av det testade diskgodset fick godkänt, en liten del fick godkänt med anmärkning och cirka en tredjedel fick underkänt. Det diskgods som var smutsigt hade i större utsträckning diskats i smutsiga maskiner. Sambandet mellan olika rengöringsbrister i maskinerna och diskresultat testades, men signifikant samband konstaterades bara mellan förekomst av rödmögel och smutsigt diskgods. Inga tydliga samband sågs med andra variabler kopplade till diskhanteringen. SLUTSATS Diskgods som för ögat ser rent ut är inte alltid det. Det är en fördel om diskmaskinen rengörs ordentligt, men det finns också visst stöd för att rengöring av området runt omkring maskinen, samt hantering, förvaring och slitage har inverkan på diskgodsets renhet. Att diskutera diskhantering vid kontrollbesök kan leda till att ett viktigt område som ibland hamnar i skymundan uppmärksammas. / BACKGROUND A question regarding the need of a standard for commercial dishwashers was raised in Europe during the summer of 2013. Actors in Sweden said yes. Earlier studies has implied that dirty dishwashers could affect the cleanliness of wash ware and that dirty surfaces could contaminate food and lead to food poisoning. OBJECTIVE The aim of this study was to examine the cleanliness of dishwashers and to see if it had some link to the cleanliness of the wash ware. METHOD Food inspections were made at ten restaurants which were selected through a convenience selection.The dishwashers were checked with a study protokol and wash ware were tested with a luminometer. The results were analysed in Microsoft Excel and possible links were tried statistically with Chi2-tests. RESULTS Eight out of ten dishwashers were dirty. A little more than half of the tested wash ware were clean, a few articles were approved with a mark and about a third were dirty. The dirty wash ware were more often washed in a dirty dishwasher. The links between faults in the dishwashers and the ATP-results of the washed goods were tested, but a significant link were only found between red mould and dirty wash ware. For other factors that could affect the cleanliness of the wash ware, no clear links  were to be seen. CONCLUSION Wash ware that seems to be clean aren’t always clean enough. It’s good to keep the dishwasher clean, but there is also some support for that keeping the area around the dishwasher clean, handle and store the wash ware in a appropriate way and to be using wash ware in a good condition impacts the washing-up result. Highlighting the wash routine can lead to more attention to an area that otherwise might tend to be a little bit forgotten.

Tissue engineering holds great promise for developing functional tissue to repair damaged articular cartilage. However, cartilaginous tissues formed in vitro typically possess poor mechanical properties in comparison to native tissue due to the inability of chondrocytes to accumulate adequate amounts of extracellular matrix (ECM). While mechanical stimuli can enhance the properties of engineered cartilage, it may be more efficient to harness the underlying mechanotransduction pathways responsible. Substantial evidence suggests that the mechanotransduction signaling cascade is initiated by rapid adenosine 5’-triphosphate (ATP) release from chondrocytes (purinergic receptor pathway). Thus, the purpose of this study was to investigate the effects of exogenous ATP supplementation on the biochemical and mechanical properties of tissue engineered cartilage. Primary bovine articular chondrocytes, seeded on MilliporeTM filters, were grown in the presence of 0, 62.5 or 250 µM ATP for a period of four weeks. Both anabolic and catabolic effects were examined and a therapeutic dose range of ATP was determined. ATP stimulation (62.5 - 250 µM) enhanced ECM synthesis by 23 - 43% and long-term collagen accumulation by 16 - 26%, in a dose-dependent manner; however, long-term proteoglycan accumulation decreased as a result of 250 µM ATP. In addition, ATP supplementation significantly improved the mechanical properties of the developed tissues (5- to 6.5-fold increase in tissue stiffness). Interestingly, high doses of ATP (250 µM) also elicited a 2-fold increase in MMP-13 gene expression, 39% increase in MMP-13 activity, and 54% more extracellular inorganic pyrophosphate (ePPi) – an ATP degradation product. Dose-dependent increases in MMP-13 activity suggested that catabolic effects were occurring alongside anabolic effects, which initiated the investigation of a therapeutic dose of ATP. Doses of 31.25 µM and 125 µM ATP were added to cartilaginous tissues and investigated in terms of MMP-13 activity and ECM synthesis. Tissues supplemented with 62.5 – 125 µM ATP exhibited a balance between anabolic and catabolic effects. By harnessing the purinergic receptor pathway, anabolic effects of mechanical stimuli were achieved in the absence of externally applied forces. Understanding how the catabolic effects of ATP are manifested would be valuable in order to further maximize the therapeutic potential of ATP stimulation. / Thesis (Master, Mechanical and Materials Engineering) -- Queen's University, 2010-09-22 14:08:28.114

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