Esse estudo está apresentado em Capítulo 1 (Protocolo de Superovulação com IATF em Bos taurus) e Capítulo 2 [Protocolos de superovulação com IATF em Bos indicus, com 3 experimentos; 1- Momento da administração de LH em vacas Nelore (Bos indicus) superovuladas e inseminadas em tempo fixo; 2- Efeito da administração de progesterona injetável no início do protocolo de sincronização para superovulação com IATF em vacas Nelore; 3- Efeito do número de inseminações em vacas Nelore superovuladas e inseminadas em tempo fixo]. No Capítulo 1 objetivou-se avaliar o momento da retirada do dispositivo de P4 (DIB®) e da administração de LH em vacas Holandesas. Dezesseis vacas receberam DIB (D-1) e 2mg de BE (D0). Superovulou-se com 200mg de FSHp em 8 doses decrescentes a partir do D4. No D6, administrou-se PGF e estabeleceram-se quatro grupos: P24LH48 (retirada do DIB 24h e LH 48h pós PGF); P24LH60 (retirada 24h e LH 60h); P36LH48 (retirada 36h e LH 48h) e P36LH60 (retirada 36h e LH 60h; fatorial 2x2; cross-over). Realizou-se a IATF 12 e 24h pós LH. Os efeitos principais para P24vsP36 e LH48vsLH60 foram: taxa de ovulação (TO; 49,9 &plusmn; 5,7 vs 60,9&plusmn; 4,8% e 53,1&plusmn;5,3 vs 57,5&plusmn;5,4%; P>0,05), estruturas totais (ETot; 4,4&plusmn;0,9 vs 5,0&plusmn;0,9 e 3,8&plusmn;0,7 vs 5,7&plusmn;1,0; P>0,05), embriões transferíveis (ET; 3,0&plusmn;0,7 vs 4,1&plusmn;0,9 e 2,3&plusmn;0,5a vs 4,9&plusmn;0,9b; P<0,05) e embriões congeláveis (EC; 2,9&plusmn;0,7 vs 3,8&plusmn;0,8 e 2,1&plusmn;0,5a vs 4,7&plusmn;0,9b; P<0,05). O LH 60h pós PGF aumentou o número de ET e EC em Holandesas. No Capítulo 2, estudaram-se diferentes protocolos de superovulação com IATF em Nelore. No Experimento 1, vinte vacas foram superovuladas (P24) e tratadas com LH 48h (G-LH48) ou 60h (G-LH60) pós PGF (cross-over). Não houve diferença (P>0,05) para: número de folículos >8mm no LH (FolLH; 12,5±1,5 vs 9,4±1,0) e TO (71,0±4,2 vs 64,6±4,0%). No entanto, verificou-se diferença (P<0,05) para: intervalo primeira/última ovulação (IntOV; 15,0±2,1a vs 21,0±1,7bh), ETot (7,5±1,0a vs 5,1±0,5b), ET (6,2±1,0a vs 3,1±0,5b) e EC (5,9±0,9a vs 2,5±0,5b). O LH 48h pós PGF apresentou maior eficiência em Nelore. No Experimento 2, dez vacas receberam o protocolo P36LH48 e foram divididas em dois grupos no D0: Grupo BE (2mg) + P4 (50mg; G-BE+P4) ou Grupo BE (2mg; G-BE; cross-over). Os resultados para o G-BE+P4 e G-BE foram: emergência da onda folicular (EM; 3,6&plusmn;0,2 e 4,0&plusmn;0,1 d; P>0,05), variação da EM (2,5 a 4,5 vs 3,5 a 4,5d; P=0,06), FolLH (16,2&plusmn;1,4 vs 18,5&plusmn;1,1; P>0,05), IntOV (32,4&plusmn;1,8 vs 33,6&plusmn;1,6h; P>0,05), ETot (7,7&plusmn;0,8 vs 9,2&plusmn;1,2; P>0,05), ET (6,2±0.6 vs 7,2±1,1; P>0,05), EC (5,1&plusmn;0,7 vs 6,3&plusmn;1,0; P>0,05) e ED (0,6&plusmn;0,2 vs 0,8&plusmn;0,2; P>0,05). Não houve efeito da P4 i.m no D0. No Experimento 3, dez vacas foram divididas em: G-1IATF (16h pós LH) e G-2IATF (12 e 24h pós LH; cross-over). Os efeitos dos tratamentos G-1IATF e G-2IATF foram: FolLH (16,2&plusmn;1,4 vs 14,8&plusmn;1,2; P>0,05), ETot (8,2±0,9 vs 7,2±0,8; P>0,05), ET (4,3±0,7 vs 4,2±0,6; P>0,05), EC (2,9±0,6 vs 2,8±0,4; P>0,05) e estruturas não fertilizadas (0,6±0,2 vs 0,8±0,2; P>0,05). Não houve diferença na produção de embriões quando do emprego de uma ou duas IATFs. / This study is presented in Chapter 1 (Superovulations protocols with FTAI for Bos taurus) and Chapter 2 (Superovulation protocols with FTAI for Bos indicus), in this Chapter are included three experiments [1 - Moment of the application of LH in cows Nelore (Bos indicus); 2 - Effect of the injectable progesterone administration in the day 0 in Nelore cows; 3 - Effect of the number of inseminations in superstimulated and fixed-time inseminated Nelore cows]. On Chapter 1, it went to evaluate the time of intravaginal P4 device (DIBTM) withdrawal and the application of LH in Holstein cows superstimulated with FTAI. Sixteen cows, treated with DIB (D-1) and 2mg of EB (D0) were assigned in four groups (superstimulation with 200mg of FSHp in 8 decreasing doses starting on D4). On D6, PGF was administered and the cows were accomplished in four groups: P24LH48; P24LH60; P36LH48 and P36LH60 (cross-over). The FTAIs were performed 12 and 24h after LH. The main effects for treatments P24 vs P36 and LH48vsLH60 were: ovulation rate (OR; 49.9&plusmn;5.7 vs 60.9&plusmn;4.8% and 53.1&plusmn;5.3 vs 57.5&plusmn;5.4%; P>0.05), total of structures (TS; 4.4&plusmn;0.9 vs 5.0&plusmn;0.9 and 3.8&plusmn;0.7 vs 5.7&plusmn;1.0; P>0.05), transferable embryos (TE; 3.0&plusmn;0.7 vs 4.1&plusmn;0.9 and 2.3&plusmn;0.5a vs 4.9&plusmn;0.9b; P<0.05) and suitable to freezing embryos (FE; 2.9&plusmn;0.7 vs 3.8&plusmn;0.8 and 2.1&plusmn;0.5a vs 4.7&plusmn;0.9b; P<0.05). The LH 60h after prostaglandin increased the TE and FE in Holstein cows. In the Chapter 2, it was studied different superstimulation with FTAI protocols in Nelore. In the first Experiment cows (n=20) were superovulated and treated with LH 48h (G-LH48) or 60h (G-LH60) after prostaglandin. There were no significant (P>0.05) differences in the variables between LH48 and LH60: number of follicles >8mm at the time of LH (FolLH12.5±1.5 and 9.4±1.0), OR [169/249 (71.0±4.2 %) and 120/187 (64.6±4.0%)]. However, there were differences (P<0.05) between G-LH48 and G-LH60 in the variables: interval first/last ovulation (IntOV15.0±2.1a and 21.0±1.7b), TS (7.5±1.0a and 5.1±0.5b), TE (6.2±1.0a and 3.1±0.5b), and FE (5.9±0.9a and 2.5±0.5b). The LH 48h after prostaglandin was more efficient in Nelore cows. In second experiment, ten Nelore cows were divided in two groups (D0): EB plus injectable progesterone group (G-BE+P4); or EB group (G-BE). The results for G-BE+P4 and G-BE were: follicular wave emergency in days (FE; 3.6&plusmn;0.2 and 4.0&plusmn;0.1; P>0.05), variation in FE [(2.5 to 4.5) and (3.5 to 4.5)], IntOV (32.4&plusmn;1.8 and 33.6&plusmn;1.6; P>0.05), TS (7.7&plusmn;0.8 and 9.2&plusmn;1.2; P>0.05), degenerated embryos (0.6&plusmn;0.2 and 0.8&plusmn;0.2; P>0.05), TE (6.2±0.6 e 7.2±1.1; P>0.05), and FE (5.1&plusmn;0.7 and 6.3&plusmn;1.0; P>0.05). The third Experiment, ten Nelore cows were divided in two groups: G-1IATF (16h after LH) or G-2IATF (12 and 24h after LH). The results for G-1IATF and G-2IATF were: FolLH (16.2&plusmn;1.4 and 14.8&plusmn;1.2; P>0.05), TS (8.2±0.9 and 7.2±0.8; P>0.05), TE (4.3±0.7 and 4.2±0.6; P>0.05), FE (2.9±0.6 and 2.8±0.4; P>0.05) and unfertilized structures (0.6&plusmn;0.2 and 0.8&plusmn;0.2; P>0.05). There was no difference on embryo production when the cows were inseminated one (16h) or two (12 and 24h) inseminations.

Steers (n = 77) and heifers (n = 68) were assigned randomly to one of three treatment groups. Treatment groups were defined as: no implant, implanted twice with trenbolone acetate (Revalor S or H), or implanted twice with estrodial benzoate (Synovex S or H). Animals were fed to an estimated 10 mm backfat thickness and based on visual appraisal, were assigned a harvest date. Carcass characteristics, color space values, sarcomere length, fat and moisture determination, Warner-Bratzler shear force, and protein degradation were all measured. Implanted animals, as a whole, exhibited heavier hot carcass weights and larger ribeye areas than non-implanted animals. Animals implanted with Revalor displayed significantly lower marbling scores and lower yield grades than those from control or Synovex groups. The distribution of quality grades within treatment groups shifted, with implant groups displaying higher percentages of Select carcasses. Gender impacted percentage of extractable fat and marbling scores, with heifers displaying higher values than steers for both measurements. Both implant groups displayed higher (P < 0.05) Warner-Bratzler shear values following a 0- and 14-d aging periods. However, following the 21-d aging period, differences in tenderness were no longer present between non-implanted and implanted animals. Synovex treated animals displayed longer (P < 0.01) sarcomere lengths than control or Revalor. Differences (P < 0.001) in protein degradation were found between treatment groups. Across gender groups, the non-implanted cattle displayed the greatest amount of degradation (62%), followed by Synovex (48%,) and lastly Revalor (33%), all of which were different (P < .05) from each other. These results indicate that use of anabolic implants positively impacted lean muscle growth, yet was a detriment to quality. Also, tenderness was negatively impacted by the use of these compounds. However, this study found by aging product for at least 21 days, tenderness differences between implanted and non-implanted animals were significantly mitigated.

The objectives of this study were to identify signatures of selection in Bos taurus beef and dairy cattle populations and to annotate regions of selection with gene, function and QTL information. Differences in minor allele frequencies, population-average FST, population-specific FST, and integrated extended haplotype homozygosity scores were applied to a subset of the bovine HapMap data to characterize signatures of selection in 7 Bos taurus beef and 5 Bos taurus dairy cattle populations. Numerous single nucleotide polymorphisms (SNP) exhibited evidence of selection across the genome and regions of BTA2 and BTA14 that are considered to be under positive selection in beef and dairy cattle, respectively, were highlighted. The current density of SNP limited our ability to annotate regions putatively under selection because most SNP in the assay were intergenic. This is likely because of the betweenbreed SNP discovery method that was used, which typically identifies SNP with higher allele frequencies.

Este trabalho teve como objetivo comparar diferenças entre as progênies de touros representativos raça Nelore e de três grupos genéticos, Nelore, Angus x Nelore e Brahman x Nelore, quanto ao desempenho pós desmame e quanto às características de carcaça medidas in vivo por ultra-som. Foram selecionados 14 touros representativos da raça Nelore, dois da raça Aberdeen Angus e um touro Brahman. Estes touros foram acasalados com 400 vacas Nelore, que deram origem a uma progênie de 158 machos e 148 fêmeas. Os animais foram criados e recriados a pasto até os 19 meses de idade e, então, terminados em confinamento recebendo dieta com 14,2% de PB e 71,2% de NDT, numa relação volumoso:concentrado de 23:77. Durante a fase de recria foram realizadas três pesagens e uma medida de carcaça por ultra-sonografia, aos 483 dias de idade em média. A fase de terminação em confinamento compreendeu cinco pesagens, realizadas aproximadamente a cada 28 dias, e três medidas de carcaça por ultra-sonografia, sendo que os animais apresentavam as seguintes idades médias em cada avaliação: 570, 598 e 677 dias, respectivamente. As medidas tomadas foram: área de olho de lombo (AOL, no músculo Longissimus dorsi) e espessura de gordura subcutânea entre a 12ª e 13ª costela (EG) e na garupa (P8, sobre o músculo Biceps femoris). Os animais permaneceram confinados até atingirem aproximadamente 5 mm de espessura de gordura subcutânea medida entre as 12ª e 13ª costelas no músculo Longissimus dorsi, no caso, por 127 dias, entre os meses de julho e novembro de 2004. Os animais foram abatidos com 24 a 26 meses de idade. Após o abate, foram coletados medidas de peso da carcaça quente (PCQ) e rendimento de carcaça. O grupo genético com melhor desempenho pós-desmama foi o grupo Angus x Nelore, seguido de Brahman x Nelore e por fim os animais Nelore puros, sendo que os machos foram superiores às fêmeas. Entretanto, durante o período de terminação em confinamento, as fêmeas apresentaram ganho de peso semelhante aos machos castrados, porém tiveram taxas de ganho de músculo e gordura superiores, em conseqüência da sua maior taxa de maturação. Foram verificados maiores ganhos em AOL nos Angus x Nelore, mostrando a aptidão para produção de carne da raça taurina. As diferenças em ganhos de gordura foram pequenas, provavelmente devido à qualidade da dieta que não permitiu que todo o potencial genético para terminação fosse expressado. Quando o estudo se baseou somente na raça Nelore, foram verificadas diferenças nas características de crescimento pós-desmama e durante a terminação em confinamento, entre as progênies dos touros da raça Nelore, indicativas da existência da variabilidade genética, o que permitiria esperar uma resposta à seleção de animais para as mesmas. Entretanto não houve efeito de touro para velocidade de acabamento e crescimento muscular entre as progênies estudadas. / This work aimed to evaluate differences among sires selected to represent the Nellore breed and among three breed groups (Nellore, Angus x Nellore, Brahman x Nellore) as to their progenies’ post-weaning performance and carcass traits, measured by real time ultrasound. A total of 14, two and one sires of the Nellore, Angus and Brahman breeds, respectively, were mated to 400 Nellore cows, producing a progeny of 158 steers and 148 heifers. The animals were raised on pasture until 19 months of age, then finished in feedlot on a diet containing 14.2% crude protein and 71.2% TDN, with a roughage:concentrate ratio of 23:77. During the growing phase on pasture, the animals were weighed three times and scanned at 483 days of age for Longissimus muscle area (LMA), back fat thickness over the 12th - 13th ribs (backfat) and rump fat (P8 fat). During the finishing phase in feedlot, between July and November 2004, cattle were weighed every 28 days and scanned for LMA, backfat and P8 fat at 570, 598 and 677 days of age. The backfat thickness end-point (5 mm) was reached after 127 days on feed, Animals were slaughtered at 24 to 26 months of age. At slaughter, hot carcass weight and dressing percentage were measured. There were effects of breed group on performance during the growing phase. Angus-sired calves had better performance than Brahman-sire and Nellore-sired calves and Brahman x Nellore calves were superior to straight bred Nellore. Males had better performance than females. However, during the finishing phase, there was no sex effect on weight gain and females had greater muscle and fat gain rate than males, perhaps due to their greater maturity rate. Angus x Nellore animals had greater LMA, showing the meat producing ability of Bos taurus breeds. Breed differences as to backfat gains were slight. This was likely due to diet quality which didn’t allow the animals’ genetic potential to be fully expressed. Within the Nellore breed, post-weaning growth traits were different among the sires, indicating existence of genetic variability. Nevertheless, there were no effects of sire on backfat gain and muscle growth among the progenies studied.

Family 6 Glycosyltransferases (GT6s) are involved in the biosynthesis of complex glycans and can be found in all vertebrates, cyanophages, and some bacteria and unicellular eukaryotes. Understanding variations within family 6 GTs is important because of the roles of their products in cellular recognition, intercellular interactions, pathogenicity, and immunity and is likewise important for understanding the evolution of GTs. PaGT6 (from Parchlamydia acanthamoebae) and α3GT (from Bos taurus) both require a divalent metal ion for catalysis which binds to a DXD motif. In BoGT6a from Bacteroides ovatus a NXN motif replaces DXD, and activity is metal-independent. However, mutating the NXN motif in BoGT6a to DXD did not introduce metal-dependency, indicating that metal-dependency is linked to additional differences. Calorimetric studies have shown that the presence of a divalent metal ion enhances UDP and donor substrate binding to PaGT6 and causes an increase in the entropy of the interaction. Protein modelling of PaGT6 has revealed that the presence of Mn2+ allows a hydrogen bond to form between Asp 97 and UDP-GalNAc, causing the donor substrate to bend and form hydrogen bonds with His 119, Asn 229, Lys 228, and Arg 234. These interactions do not occur in the absence of Mn2+. Investigation of acceptor substrate binding revealed that the presence of UDP enhances acceptor substrate binding to BoGT6a and PaGT6. Calorimetric titrations of BoGT6a with 2-fucosyllactose in the absence and presence of UDP showed that UDP increases the affinity of 2-fucosyllactose 16-fold with little effect on ΔH. Measurements of ΔCp for 2-fucosyllactose binding indicate that there is not a hydrophobic effect for the binding of 2-fucosyllactose. The preferred acceptor substrate for the bovine and Bacteroides GT6 has a β-1,4 linked galactose, but P. acanthamoebae GT6 prefers an acceptor substrate with a β-1,3 linked galactose. The N-terminus of the catalytic domain of bacterial GT6s is truncated by 47 residues relative to the catalytic domain of bovine α3GT. Removal of this region from α3GT results in an unfolded protein, indicating that although this region is not directly involved in substrate binding, it forms interactions necessary for the stability of the catalytic domain. / Includes bibliography. / Dissertation (Ph.D.)--Florida Atlantic University, 2018. / FAU Electronic Theses and Dissertations Collection

Correlations between cattle disposition and meat quality were expected to be found, as well as differences in meat quality traits among contemporary groups, sires, and families nested within sires. Temperament effects on meat quality were evaluated in Nellore × Angus F2 cross cattle (n = 238) over a 3-yr period, with harvests twice a year. Five aspects of temperament -- aggressiveness, nervousness, flightiness, gregariousness, and overall temperament -- were evaluated at weaning and yearling ages, as well as an overall temperament score at slaughter. USDA quality grade, fat thickness, adjusted fat thickness, hot carcass weight, USDA yield grade, and chemical fat were correlated negatively (P < 0.05) with weaning temperament scores, aggressiveness, nervousness, flightiness, gregariousness, and overall temperament. No significant correlation was found between Warner-Bratzler shear and weaning temperament traits. USDA quality grade and live weight were correlated negatively (P < 0.05) with yearling temperament scores, nervousness, flightiness, gregariousness, overall temperament score as well as the temperament score observed at slaughter. Fat thickness and adjusted fat thickness also were correlated negatively (P < 0.05) with yearling gregariousness, yearling overall, and slaughter overall temperament. Yearling gregariousness was correlated positively (P < 0.05) with Warner-Bratzler shear from both ES and NON carcasses. Least squares mean differences were evaluated among contemporary groups, sires, and families nested within sires for overall temperament traits and meat quality traits. Contemporary group differences found were thought to be explained by environmental factors, as seen in contemporary group 5, which had the smallest ribeye possibly caused by the shortest feeding period. Steers sired by 297J had the lowest (calmest) temperament scores, most 12th rib fat, highest numerical yield grade, and the heaviest weights. Sire 437J had steers with the highest (wildest) temperament scores, the least fat and lowest numerical yield grade. This population was designed to identify QTL for economically important traits and appears to be useful for this purpose because of the differences found both between and within families.

Este trabalho teve como objetivo comparar diferenças entre as progênies de touros representativos raça Nelore e de três grupos genéticos, Nelore, Angus x Nelore e Brahman x Nelore, quanto ao desempenho pós desmame e quanto às características de carcaça medidas in vivo por ultra-som. Foram selecionados 14 touros representativos da raça Nelore, dois da raça Aberdeen Angus e um touro Brahman. Estes touros foram acasalados com 400 vacas Nelore, que deram origem a uma progênie de 158 machos e 148 fêmeas. Os animais foram criados e recriados a pasto até os 19 meses de idade e, então, terminados em confinamento recebendo dieta com 14,2% de PB e 71,2% de NDT, numa relação volumoso:concentrado de 23:77. Durante a fase de recria foram realizadas três pesagens e uma medida de carcaça por ultra-sonografia, aos 483 dias de idade em média. A fase de terminação em confinamento compreendeu cinco pesagens, realizadas aproximadamente a cada 28 dias, e três medidas de carcaça por ultra-sonografia, sendo que os animais apresentavam as seguintes idades médias em cada avaliação: 570, 598 e 677 dias, respectivamente. As medidas tomadas foram: área de olho de lombo (AOL, no músculo Longissimus dorsi) e espessura de gordura subcutânea entre a 12ª e 13ª costela (EG) e na garupa (P8, sobre o músculo Biceps femoris). Os animais permaneceram confinados até atingirem aproximadamente 5 mm de espessura de gordura subcutânea medida entre as 12ª e 13ª costelas no músculo Longissimus dorsi, no caso, por 127 dias, entre os meses de julho e novembro de 2004. Os animais foram abatidos com 24 a 26 meses de idade. Após o abate, foram coletados medidas de peso da carcaça quente (PCQ) e rendimento de carcaça. O grupo genético com melhor desempenho pós-desmama foi o grupo Angus x Nelore, seguido de Brahman x Nelore e por fim os animais Nelore puros, sendo que os machos foram superiores às fêmeas. Entretanto, durante o período de terminação em confinamento, as fêmeas apresentaram ganho de peso semelhante aos machos castrados, porém tiveram taxas de ganho de músculo e gordura superiores, em conseqüência da sua maior taxa de maturação. Foram verificados maiores ganhos em AOL nos Angus x Nelore, mostrando a aptidão para produção de carne da raça taurina. As diferenças em ganhos de gordura foram pequenas, provavelmente devido à qualidade da dieta que não permitiu que todo o potencial genético para terminação fosse expressado. Quando o estudo se baseou somente na raça Nelore, foram verificadas diferenças nas características de crescimento pós-desmama e durante a terminação em confinamento, entre as progênies dos touros da raça Nelore, indicativas da existência da variabilidade genética, o que permitiria esperar uma resposta à seleção de animais para as mesmas. Entretanto não houve efeito de touro para velocidade de acabamento e crescimento muscular entre as progênies estudadas. / This work aimed to evaluate differences among sires selected to represent the Nellore breed and among three breed groups (Nellore, Angus x Nellore, Brahman x Nellore) as to their progenies’ post-weaning performance and carcass traits, measured by real time ultrasound. A total of 14, two and one sires of the Nellore, Angus and Brahman breeds, respectively, were mated to 400 Nellore cows, producing a progeny of 158 steers and 148 heifers. The animals were raised on pasture until 19 months of age, then finished in feedlot on a diet containing 14.2% crude protein and 71.2% TDN, with a roughage:concentrate ratio of 23:77. During the growing phase on pasture, the animals were weighed three times and scanned at 483 days of age for Longissimus muscle area (LMA), back fat thickness over the 12th - 13th ribs (backfat) and rump fat (P8 fat). During the finishing phase in feedlot, between July and November 2004, cattle were weighed every 28 days and scanned for LMA, backfat and P8 fat at 570, 598 and 677 days of age. The backfat thickness end-point (5 mm) was reached after 127 days on feed, Animals were slaughtered at 24 to 26 months of age. At slaughter, hot carcass weight and dressing percentage were measured. There were effects of breed group on performance during the growing phase. Angus-sired calves had better performance than Brahman-sire and Nellore-sired calves and Brahman x Nellore calves were superior to straight bred Nellore. Males had better performance than females. However, during the finishing phase, there was no sex effect on weight gain and females had greater muscle and fat gain rate than males, perhaps due to their greater maturity rate. Angus x Nellore animals had greater LMA, showing the meat producing ability of Bos taurus breeds. Breed differences as to backfat gains were slight. This was likely due to diet quality which didn’t allow the animals’ genetic potential to be fully expressed. Within the Nellore breed, post-weaning growth traits were different among the sires, indicating existence of genetic variability. Nevertheless, there were no effects of sire on backfat gain and muscle growth among the progenies studied.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:02:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3637_1.pdf: 6869590 bytes, checksum: 90b7fcd7a9dcdd8962d55d0c762e05e5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O papilomavírus bovino (BPV) é representado por 10 subtipos virais, epiteliotrópicos ou mucosotrópicos, que são transmitidos entre bovinos por meio do sangue contaminado e/ou contato entre epitélios. O vírus pode estar presente na forma latente nos linfócitos do hospedeiro, podendo originar instabilidades cromossômicas. Neste contexto, este estudo teve como objetivo avaliar alterações cromossômicas que podem resultar deste processo de instabilidade. Foram coletadas amostras de sangue periférico de bovinos Bos taurus taurus, as quais foram enviadas para detecção viral, utilizando a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Em seguida, foram estabelecidas culturas de linfócitos para análise citogenética. Foram coletadas amostras de 61 bovinos, apresentando papilomatose (animais sintomáticos) e sem sinais clínicos (animais assintomáticos) e a análise citogenética foi processada em teste cego (em coloração convencional e bandamento C). Os resultados mostraram que no momento da coleta 28 animais não estavam infectados pelo vírus BPV e 33 estavam infectados pelo BPV tipo 1 e/ou 2. O grupo de bovinos infectados foi subdividido em dois subgrupos: sintomáticos e assintomáticos. Analisando os animais infectados pelo BPV, o grupo sintomático (com papilomatose), representado por 17 bovinos, apresentou média de 42,71 % de células apresentando aberrações cromossômicas por indivíduo, enquanto o grupo assintomático (sem papilomatose), representado por 16 bovinos, apresentou uma média de 40,19 %. Foram analisados entre 50 a 100 células por amostra, totalizando 2203 células, das quais 918 (42%) apresentavam uma ou mais aberrações cromossômicas. A taxa de alterações cromossômicas observadas nos bovinos sintomáticos (42,7±7,8) e assintomáticos (40,2±11) foi comparada com os índices de aberrações espontâneas observadas no grupo controle (animais não infectados) (4±2). Para analisar diferenças estatísticas entre os três grupos, foi utilizado o Teste Kruskal-Wallis, seguido do Teste de Mann Whitney. Estas análises mostraram que a variabilidade de células alteradas entre o grupo controle e os infectados por BPV é maior no grupo dos bovinos infectados (P < 0,0001). No entanto, diferenças significativas não foram observadas entre os subgrupos infectados por BPV (P= 0,62). As alterações cromossômicas identificadas nas análises realizadas foram: associação cêntrica (AC), fragmento acêntrico (FA), associação telomérica (AT), associação telomérica por uma cromátide (ATcr), quebra cromatídica (QT), quebra cromossômica (QM), gaps, aneuploidia, poliploidia, adição oudeleção de segmento cromossômico (add ou del) e separação precoce de cromátides (SPcr). As altas taxas de anormalidades cromossômicas (numéricas e estruturais) estão relacionadas à ação do BPV, tendo sido possível a distinção entre animais acometidos por vírus dos animais não infectados

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:03:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3721_1.pdf: 1019481 bytes, checksum: 6ed9b63eeef30792d57f60c470058784 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os papilomavírus constituem uma extensa família de vírus associados a lesões epiteliotrópicas, mas afetando também o tecido mucoso, causando tumores benignos que podem sofrer malignização. A papilomatose bovina é uma doença economicamente relevante, por causar desvalorização do gado a ser comercializado, tanto pela deterioração da pele quanto pela caquexia e morte. Embora não existam dados epidemiológicos, os relatos de produtores e a observação direta indicam que sua incidência no estado de Pernambuco é elevada. O objetivo deste trabalho foi a detecção e tipificação dos diferentes tipos de papilomavírus bovino (BPV), através de PCR, em amostras de verrugas cutâneas coletadas de animais afetados pela papilomatose em uma propriedade leiteira de Pernambuco. Foram analisadas 36 amostras de verrugas cutâneas de 23 bovinos (Bos taurus). Os resultados demonstraram que os primers de detecção geral de BPV, MY09/11 e FAP59/64, não têm alta eficiência, uma vez que não detectaram a ocorrência de BPV em 58,34% e 61,12% das lesões papilomatosas dos bovinos testados. Entretanto, utilizando os primers específicos de tipificação, pelo menos um tipo viral foi detectado em cada amostra de lesão cutânea analisada. Os resultados demonstram a presença de pelo menos um tipo de BPV em quase todas amostras, apresentando maior incidência dos tipos BPV-2 e 3 nos animais avaliados. Além disto, os resultados obtidos indicam a existência de infecção simultânea em 89% dos indivíduos, principalmente por BPV-2 e 3, sendo que 25% dos animais apresentaram co-infecção tripla por BPV-2, 3 e 4. Estes resultados confirmam a presença de diferentes tipos de BPVs no gado afetedo por papilomatose cutânea e sugere que o BPV2 seja o mais freqüente

INTRODUÇÃO: Os programas de preservação de fertilidade baseados na criopreservação de gametas e tecido ovariano têm sido amplamente empregados para salvaguardar o potencial reprodutivo de mulheres em idade reprodutiva. Entretanto,o risco de reintrodução de células malignas após o reimplante do tecido e a dificuldade de aplicação dos protocolos de estimulação ovariana em pacientes estrogênio dependentes, dificultam o acesso destas pacientes aos programas de preservação de fertilidade já estabelecidos. O cultivo de folículos isolados vem se mostrando uma técnica promissora capaz de atender a essas pacientes, com resultados bastante satisfatórios. A recuperação de oócitos fertilizáveis tem se mostrado bem sucedida em camundongos resultando em nascidos vivos; já em outros mamíferos de grande porte,como primatas não humanos e humanos,há escassos relatos da obtenção de oócitos em estagio MII . OBJETIVO: Este estudo teve como objetivo analisar a eficiência do cultivo tridimensional in vitro no desenvolvimento de folículos ovarianos bovinos e a sua influência sobre o metabolismo oxidativo, a geração de estresse oxidativo celular e os níveis de transcritos de genes ligados atividade mitocondrial, apoptose e crescimento e desenvolvimento oocitário. MATERIAL E MÉTODOS: Foi realizado o cultivo in vitro tridimensional de folículos secundários bovinos por 16 dias em meio ?- MEM suplementado, em atmosfera de 5% de CO2 e 20% de O2 (Grupo in vitro - Gvt). Como controles foram incluídos dois grupos: um de folículos secundários isolados frescos não submetidos a cultivo (Grupo imaturos- GI) e outro de folículos extraídos já em estágios pré-antrais mais avançados do desenvolvimentos (Grupo in vivo- Gvv). Para a avaliação do desenvolvimento folicular, foram realizadas análises morfológica e testes de viabilidade, além da expressão por RT- qPCR de genes alvos para a atividade mitocondrial e estresse oxidativo. RESULTADOS: As análises do desenvolvimento dos folículos in vitro mostraram que 81,1% dos folículos secundários apresentaram crescimento, com uma taxa de viabilidade em torno de 84%. Cerca de 50% de oócitos recuperados após o cultivo estavam viáveis pela avaliação morfológica, embora nenhum deles tenha atingido o estágio final de maturação (MII). Além disso, o cultivo não promoveu aumento da expressão de genes ligados a apoptose o que também sugere uma boa viabilidade dos folículos cultivados. O mesmo não ocorreu com o sistema Kit Ligand e c-Kit, considerados como marcadores da capacidade global de crescimento e desenvolvimento folicular, verificou-se uma menor expressão de KL nas células somáticas da parede folicular. Com relação ao metabolismo oxidativo, embora o estado redox, marcado pela produção de NAD e FAD, estivesse bastante aumentado nos folículos produzidos in vitro quando comparado com o controle imaturo fresco e maturado in vivo, não se observou aumento das espécies reativas de oxigênio em oócitos obtidos destes mesmos folículos, podendo sugerir a manutenção da capacidade de controlar o balanço oxidativo por parte destas células. ,Também não houve alteração na expressão de genes ligados à biogênese mitocondrial entre os grupos estudos. CONCLUSÃO: O método de cultivo proposto neste estudo, utilizando o sistema 3D em matriz de gel de alginato, permitiu a maturação parcial de folículos secundários isolados, mantendo a viabilidade e características do metabolismo oxidativo semelhantes a folículos maturados in vivo de mesmo tamanho. Entretanto, há algum grau de comprometimento na saúde global do folículo, especialmente em relação às células somáticas da parede folicular. / The fertility preservation programs based on oocyte and ovarian tissue cryopreservation has been widely employed to safeguard the reproductive potential of these patients. However, the risk of reintroducting malignant cells after ovarian tissue transplantation and the difficulty of applying ovarian stimulation protocols in patients with estrogen dependent diseases hinder the access of these patients to already established fertility preservation programs. Isolated follicle culture appears as a promising technique for these cases, with satisfactory results. The recovery of fertilizable oocytes has been shown to be successful in mice resulting in live births; in other large mammals, such as non-human primates and humans, there are a few reports of the obtention of oocytes in the MII stage. OBJECTIVE: This study aimed to analyze the efficiency of in vitro three-dimensional culture in the development of bovine ovarian follicles and their influence on oxidative metabolism, on cellular oxidative stress generation and on the transcript levels of genes linked to mitochondrial activity, apoptosis and oocyte growth and development. MATERIAL AND METHODS: Three-dimensional in vitro culture of bovine secondary follicles was carried out for 16 days in supplemented ?-MEM medium, in an atmosphere of 5% CO2 and 20% O2 (In vitro Group - Gvt). As controls, two groups were included: one of the fresh none cultured isolated secondary follicles (GI-immature group) and one of follicles isolated in a more advanced preantral stage (in vivo Group-Gvv). For the evaluation of the follicular development, morphological analysis and viability tests were performed, besides the expression by RT-qPCR of target gene for mitochondrial activity and oxidative stress were also evaluated. RESULTS: Analysis of the in vitro follicle development showed that 81.1% of the secondary follicles have grown, with a viability rate of 84%. About 50% of oocytes recovered after culture were viable by morphological evaluation, although none of them had reached the final maturation stage (MII). In addition, the culture did not promote increased on the expression of apoptosis-linked genes which also suggests good viability of the cultured follicles. The same was not observed with the Kit Ligand and c-Kit, considered as markers of the global capacity of follicular growth and development; there was a lower expression of KL in the somatic cells from the follicular wall. In relation to the oxidative metabolism, although the redox state, marked by the production of NAD and FAD, was greatly increased in follicles produced in vitro when compared to the immature controls and the in vivo matured group, there was no increase on the production of reactive oxygen species in the oocytes obtained from these follicles, suggesting that these cells were able to control their oxidative imbalance. Also, there was no alteration in the expression of genes linked to mitochondrial biogenesis between the studied groups. CONCLUSION: The culture method proposed in this study, using the 3D system in an alginate gel matrix, allowed the partial maturation of isolated secondary follicles, maintaining the viability and oxidative metabolism characteristics similar to follicles of the same size matured in vivo. However, there is some degree of impairment in overall health, especially in relation to the somatic cells from the follicular wall.