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Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-15T11:47:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) tese.nelson certa.pdf: 11814547 bytes, checksum: 2cbb2aad17bbcac9f45275deb527071a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-15T11:47:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) tese.nelson certa.pdf: 11814547 bytes, checksum: 2cbb2aad17bbcac9f45275deb527071a (MD5) Previous issue date: 2015-07-31 / A ocorrência de tolerância por parte dos micro-organismos contaminantes de alimentos a agentes e/ou tratamentos antimicrobianos clássicos, impõe a busca de tecnologias alternativas para emprego na conservação de alimentos, a exemplo dos óleos essenciais, em especial aqueles obtidos da espécie Rosmarinum officinalis L. (OERO). A ação antimicrobiana do OERO tem sido atribuída ao 1,8-cineol (CIN) frequentemente citado como seu constituinte majoritário. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da exposição a concentrações subinibitórias do OERO e CIN na modificação da tolerância direta e cruzada de algumas bactérias contaminantes de alimentos (Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella Typhimurium). Ainda, foi avaliada a influência dos fatores sigma alternativos σS e σB na tolerância de E. coli MG1655 e L. monocytogenes EGDe, e seus mutantes isogênicos E. coli MG1655 ΔrpoS e L. monocytogenes EGD-e ΔsigB, frente ao OERO e ao óleo essencial de Origanum vulgare L. (OEOV) bem como na modificação da tolerância bacteriana direta e cruzada ao campo elétrico pulsado (CEP). Para isso, foram realizados ensaios de determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e de modificação da tolerância direta e cruzada após exposição das cepas às concentrações subinibitórias (sub-CIMs) (1/2 CIM e 1/4 CIM) do OERO ou do CIN em caldo base carne (18 h) e em modelo base carne (72 h). Para os ensaios de verificação de injúria subletal e interferência dos fatores sigma na tolerância bacteriana, células de E. coli MG1655 e L. monocytogenes EGD-e foram expostas a concentrações inibitórias do OERO ou OEOV para, em seguida, serem cultivadas em meios adicionados de agentes seletivos (NaCl ou sais de bile). Os valores de CIM variaram entre 20 e 40 μL/mL e 40 e 80 μL/mL para o OERO e CIN, respectivamente. Os ensaios de modificação de tolerância não revelaram aumento de tolerância direta e cruzada nas cepas bacterianas testadas. A CIM do OERO e OEOV frente às células mutantes foi menor daquele encontrado frente às células parentais. As células mutantes também apresentaram maior diminuição da sua viabilidade quando tratadas com os óleos essenciais (OES) em relação às células parentais, bem como maior proporção de células apresentando lesão subletal. Ainda, as células mutantes mostraram maior sensibilidade ao CEP quando comparadas as parentais. A ausência dos fatores sigma diminuiu a tolerância direta e ao CEP nas células pré-expostas ao OES em sub-CIMs. Os resultados obtidos neste estudo demonstram que: i) a exposição das cepas bacterianas a sub-CIMs do OERO ou CIN não aumentou a tolerância direta e cruzada; ii) os fatores sigma σS e σB influenciaram a sensibilidade das cepas de E. coli MG1655 e L. monocytogenes EGD-e, respectivamente, frente ao OERO e OEOV ao CEP; e iii) os fatores sigma não influenciaram no aumento da tolerância bacteriaia direta e cruzada ao CEP. Estes resultados demonstram o potencial do OERO e do CIN para uso como antimicrobiano na conservação de alimentos, quando considerado o seu efeito inibitório sobre bactérias contaminantes de alimentos e a ausência de indução de aumento na tolerância bacteriana direta e cruzada. / The occurence of tolerance in food contaminant microorganisms to agents and/or classic antimicrobial treatments has required the search of alternative technologies for use in food preservation, such as essential oils, especially those obtained from the specie Rosmarinum officinalis L. (ROEO). The antimicrobial action of ROEO has been attributed to 1.8-cineol (CIN), frequently cited as its main constituent. The aim of this study was to investigate the effect of exposure to subinhibitory concentrations of ROEO and CIN on the modification of direct tolerance and cross-tolerance of some food-contaminant bacteria (Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella Typhimurium). Still, the influence of alternative sigma factors σS and σB on tolerance of E. coli MG1655 and L. monocytogenes EGD-e, and its isogenic mutant E. coli MG1655 and L. monocytogenes EGD ΔrpoS and ΔsigB to the ROEO and the essential oil of Origanum vulgare L. (OVEO), as well as direct on the modification of the bacterial direct tolerance and cross tolerance the pulsed electric field (PEF) were investigated. For this, assays to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the modification of the direct tolerance and the cross-tolerance after exposure of the strains to subinibitory concentrations (sub-MICs) (1/2 MIC and 1/4 MIC) of ROEO or CIN in meat broth (18 h) and model based meat (72 h) were performed. For verification of sublethal injury and interference of sigma factors on bacterial tolerance, E. coli MG1655 cells and L. monocytogenes EGD-e were exposed to inhibitory concentrations of ROEO or OVEO and further cultivated in media added selective agents (NaCl or bile salts). The MIC values ranged between 20 and 40 μL/mL and 40 to 80 μL/mL for ROEO and CIN, respectively. The tolerance modified assays revealed no increase in either the direct tolerance or the cross-tolerance in the tested bacterial strains. The MIC of ROEO and OVEO against the mutant cells was lower than that found against the parental cells. Mutant cells showed also a greater decrease in viability when treated with essential oils (EOS) compared to the parental cells, as well as a higher proportion of cells with sublethal injury. Still, the mutant cells showed higher sensitivity to PEF when compared to parental cells. The absence of sigma factors decreased the direct tolerance and tolerance to the PEF in cells pre-EOS exposed to sub-MIC. The results of this study show that: i) exposure of the bacterial strains to sub-MICs of ROEO or CIN did not increase the direct or the crosstolerance; ii) the sigma σS and σB factors influenced the sensitivity of strains of E. coli MG1655 and L. monocytogenes EGD-e, respectively, to the OVEO and ROEO and PEF; and i) the sigma factors did not influence the increase in direct bacterial tolerance and cross tolerance to the PEF. These results demonstrate the potential of ROEO and CIN for use as antimicrobials in food preservation, when considering their inhibitory effect on bacterial foodcontaminants and the absence of induction to direct or cross bacterial tolerance.