Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-07T14:12:03Z No. of bitstreams: 1 Filipe Queiros Gondim Bezerra.pdf: 680484 bytes, checksum: 8941d5bb069bfda96fd37c2db5f99b53 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-07T14:12:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Filipe Queiros Gondim Bezerra.pdf: 680484 bytes, checksum: 8941d5bb069bfda96fd37c2db5f99b53 (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study aimed to determine the effect of seasons on nuclear maturation in vitro and inductions of cell death by apoptosis in sheep oocytes as well as the effect on the ability of develop from oocytes in vitro sheep embryos. The ewes ovaries during the dry season (October to March) and rainy season (April-September) were collected in a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of "slicing" of the follicles from 2 to 6 mm in diameter and selected based on morphology. In this stage were performed 12 repetitions, where the COCs were subjected to maturation, and in vitro fertilization. The percentage of cleaved oocytes was determined on day 3 (D-3) and the oocytes that developed to the stages of 8-16 cells (D-4), morula (D-5) and blastocyst (D-8) after fertilization. The blastocysts quality was assessed with the pigment DAPI and the determination of blastomeres positive for apoptosis and DNA fragmentation by TUNEL test. It was found significant difference (P <0.05) during D-3 and D-4 fertilization stages. No significant difference (P>0.05) was observed on morula and blastocyst in vitro maturation phases and DNA fragmentation (TUNEL). In the stage 25 oocytes were placed in maturity basic medium (MBM). After maturation, we determined the stage of maturity with the nuclear dye DAPI, the enzyme activity of group II caspases with reagent PhiPhiLux-G1D2 and DNA fragmentation (TUNEL). In the stages of nuclear maturation stages of germinal vesicle, metaphase I, telophase I and metaphase II showed no significant difference (P> 0.05). Significant difference (P <0.05) in enzyme activity of caspases in vitro matured oocytes. The DNA fragmentation was not significantly different (P> 0.05). Under the conditions observed in this study, the results indicate that there was no effect of season on in vitro nuclear maturation and apoptosis of oocytes as well as on the development of oocytes and in vitro production of sheep embryos. / Este estudo teve como objetivo determinar o efeito das estações do ano na maturação nuclear in vitro e na indução da morte celular por apoptose em oócitos ovino também como o efeito na capacidade de desenvolvimento de oócitos na produção in vitro de embriões da espécie ovina. Os ovários de ovelhas na estação seca (outubro a março) e chuvosa (abril a setembro) foram colhidos em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram colhidos pela técnica de “slicing” dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro e selecionados com base na morfologia. Nesta etapa foram realizadas 12 repetições, onde os CCOs foram submetidos a maturação, fertilização e cultivo in vitro. A porcentagem de oócitos clivados foi determinada no dia 3 (D-3) e os oócitos que se desenvolveram aos estádios de 8-16 células (D-4), mórula (D-5) e blastocisto (D-8) após a fecundação. A qualidade dos blastocistos foi avaliada com o corante DAPI e a determinação deblastômeros positivos para apoptose e fragmentação de DNA através do teste de TUNEL. Foi encontrada diferença significativa (P < 0,05) nas fases fertilização, D-3 e D-4. Não apresentaram diferença significativa (P > 0,05) às fases de maturação in vitro, mórula e blastocisto e na fragmentação de DNA (TUNEL). Em outra etapa 25 oócitos foram colocados em meio básico de maturação (MBM). Após a maturação, foi determinado o estádio de maturação nuclear com o corante DAPI, a atividade das enzimas Caspases do grupo II com reagente PhiPhiLux-G1D2 e fragmentação de DNA (TUNEL). Nos estádios de maturação nuclear as fases de Vesícula Germinativa, Metáfase I, Telófase I e Metáfase II não apresentaram diferença significativa (P > 0,05). Foi encontrada diferença significativa (P < 0,05) na atividade das enzimas Caspases dos oócitos maturados in vitro. A fragmentação do DNA não apresentou diferença significativa (P > 0,05). Nas condições observadas neste estudo, os resultados permitem concluir que não houve efeito da estação do ano na maturação nuclear in vitro e na apoptose de oócitos também como na capacidade de desenvolvimento de oócitos e na produção in vitro de embriões da espécie ovina.