Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-02-04T10:49:57Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Carla Caroline Cunha Bastos - 2014.pdf: 2798020 bytes, checksum: 01f91c35952b2cac65bd16b118d8967a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-02-05T14:20:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Carla Caroline Cunha Bastos - 2014.pdf: 2798020 bytes, checksum: 01f91c35952b2cac65bd16b118d8967a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-05T14:20:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Carla Caroline Cunha Bastos - 2014.pdf: 2798020 bytes, checksum: 01f91c35952b2cac65bd16b118d8967a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-04-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Intestinal mucositis is a limiting factor in anticancer therapies by causing gastrointestinal cell destruction reaching the majority of patients undergoing chemotherapy/radiotherapy and is often responsible for treatment discontinuation. Although several studies have already been conducted to treat this disease, there are still no universally accepted and standardized protocols of treatment. Plant species with anti-inflammatory and antioxidant properties have been considered for the treatment of mucositis, among them Bidens pilosa L. (BP) (Asteraceae) and Curcuma longa L. (CL) (Zingiberaceae). In this study, the effects of a formulation containing plant extracts of Bidens pilosa L. (BP) and Curcuma longa L. (CL), both with pharmaceutical technology of mucoadhesion in mice intestinal mucositis induced by 5-fluoruoacil (5-FU) were studied. This formulation was administered orally (gavage) for 6 days in each group of mice at doses of 75mg/kg + BP 3.75 mg / kg CL 100 mg / kg BP + 7.5 mg / kg or 125 mg CL / BP kg + 15 mg / kg CL. The treatment with the formulations occurred during six days, and in parallel with mucositis induction was performed with 5-FU (200 mg / kg, intraperitoneally) from day 4 to day 6. On day 7, the mice were euthanized and the duodenal portion of the intestine of each animal was extracted to perform the histomorphometry technique. From this analysis, the dose of 125 mg/kg mucoadhesive formulation showed best effectiveness results and was then chosen for the realization of the other tests: histopathology analysis, expression of Bax, Bcl-2, p53 and Ki-67 analysis via immunohistochemistry technique; analysis of the activity of myeloperoxidase (MPO) enzyme, and determination of malondialdehyde (MDA) levels. Furthermore, analysis of weight change and hematologic parameters were performed. To prove safety of the formulation, an oral toxicity test of mucoadhesive formulation, and effect evaluation of the plant extracts on the animals’intestine not submitted to mucositis were performed. The mucoadhesive formulation was able to assuage the histopathological damage caused by 5-FU; reduced weight loss, reduced levels of MPO and MDA; stimulated cell proliferation by increasing the expression of Ki-67; besides decreasing apoptosis observed by analyzing the expression of Bax and Bcl-2. The formulation at a dose of 2000mg/kg showed no signs of toxicity. It can be concluded that the formulation under study exerts preventive and/or therapeutic effects to intestinal mucositis with potential to be used with associated to anticancer treatment. / A mucosite intestinal é um fator limitante nas terapias com antineoplásicos por ocasionar destruição celular gastrointestinal atingindo a maioria dos pacientes submetidos à quimioterapia/radioterapia sendo muitas vezes responsável pela interrupção do tratamento. Apesar de vários estudos já terem sido realizados para o tratamento/prevenção desta patologia, ainda não existe nenhum protocolo padronizado aceito universalmente e com eficácia comprovada. Espécies vegetais com propriedades anti-inflamatórias e antioxidantes tem sido consideradas para o tratamento da mucosite, dentre elas a Bidens pilosa L. (BP) (Asteraceae) e a Curcuma longa L. (CL) (Zingiberaceae). Assim, neste estudo, os efeitos de uma formulação contendo os extratos vegetais de Bidens pilosa (BP) e Curcuma longa (CL), aliada à tecnologia farmacêutica de mucoadesão, foram estudados em animais portadores de mucosite intestinal induzida por 5-fluorouracil (5-FU). Esta formulação foi administrada por via oral (gavagem) durante 6 dias em cada grupo de camundongos nas doses de 75mg/kg BP + 3,75 mg/kg CL, 100 mg/kg BP+ 7,5 mg/kg CL ou 125 mg/kg BP + 15 mg/kg CL. O tratamento com as formulações foi de seis dias, sendo que em paralelo foi realizada a indução da mucosite com o 5-FU (200 mg/kg, intraperitonealmente) do 4º ao 6º dia. No 7º dia, os camundongos foram eutanasiados e a porção duodenal do intestino de cada animal foi extraída para realização da técnica de histomorfometria. A partir dessa análise, a dose de 125 mg/kg da formulação mucoadesiva obteve melhores resultados e foi escolhida então para a realização dos demais testes: análise histopatológica; análise da expressão de Bax, Bcl-2, p53 e Ki-67 pela técnica de imunohistoquímica; avaliação da atividade da enzima mieloperoxidase (MPO); e determinação dos níveis de malondialdeído (MDA). Além disso, foi realizada a análise de variação ponderal e a análise hematológica. Para comprovação da segurança da formulação estudada, foi realizado um teste de toxidade oral aguda da formulação mucoadesiva, e avaliação do efeito dos extratos vegetais sobre o intestino dos animais não submetidos à mucosite intestinal. A formulação mucoadesiva foi capaz de amenizar os danos histopatológicos causados pelo 5-FU; reduziu a perda de peso corporal, reduziu os níveis de MPO e MDA; estimulou proliferação celular verificada através do aumento da expressão de Ki-67; além de diminuir a apoptose observada através da análise da expressão de Bax e Bcl-2. A formulação na dose de 2000mg/kg não apresentou sinais de toxicidade. Pode-se concluir que a formulação em estudo exerce efeitos preventivos e/ou terapêuticos frente à mucosite intestinal com potencial para ser utilizada associada ao tratamento anticâncer.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-24T14:47:46Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Raphael Caixeta Serpa - 2015.pdf: 1683705 bytes, checksum: 7ee9a89fe7a14cfa8fcc536da1ebc46c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-24T14:49:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Raphael Caixeta Serpa - 2015.pdf: 1683705 bytes, checksum: 7ee9a89fe7a14cfa8fcc536da1ebc46c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-24T14:49:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Raphael Caixeta Serpa - 2015.pdf: 1683705 bytes, checksum: 7ee9a89fe7a14cfa8fcc536da1ebc46c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-09-30 / Inflammatory bowel diseases (DII) are pathological conditions that affect the gastrointestinal mucosa. Crohn's disease and ulcerative colitis are the most prevalent DII. The current therapy for these diseases aimed to control relapses and are based on the oral administration of anti-inflammatory drugs, immunosuppressants, antibiotics and biological agents. These agents have been used chronically and generally have low efficacy and significant systemic side effects. The use of herbal medicines has shown good results in the treatment of inflammatory diseases, including DII. The Bidens pilosa L. is a species widely used in Brazilian popular medicine and some studies have proven its anti-inflammatory effect. Another strategy to improve DII treatment is to target the active compounds to the colon, thus ensuring the topical treatment of inflammatory diseases, with greater efficiency and safety. Objective: The objective of the present work was to develop multiparticulate systems (pellets) coated with pH-dependent and/or time-dependent polymers, to provide colonic release of the constituents of the Bidens pilosa extract. Materials and Methods: Two different commercial extracts of Bidens pilosa (glycolic and hydroethanolic) were purchased and characterized. These extracts were then concentrated on rotaevaporator under reduced pressure. The amount of total polyphenols was determined by Folin-Ciocauteau colorimetric reaction. Then, microcrystalline cellulose pellets were obtained by extrusion-spheronisation technique using concentrated extracts as binder. The pellets were coated in a fluidized bed with different polymers (ethylcellulose, Opadry® 94k and Eudragit® FS30D). Morphological, size and flow rate analysis were performed and polyphenols content in pellets was determined. Finally, in vitro release of the polyphenols was determined. Results and Discussion: The concentration step resulted in products with total polyphenol content 5 times higher compared to the original extracts. The concentrated extracts were successfully used as a binder in the pellet preparation by extrusion-spheronization. Pellets prepared with the glycolic extract and coated with ethylcellulose showed vacuoles in the coat layer and released almost 100% in 120 minutes. On the contrary, pellets containing the hydroethanolic extract coated with 28% ethylcellulose showed only 30% of polyphenol released after 6 h of experiment; however, these pellets showed incomplete drug release at the end of the experiment. In view of these results, the pellets containing hydroethanolic extract were also coated with Eudragit® FS 30D or Opadry® 94k. The in vitro drug release showed no colon-specific release of polyphenols, even in the absence of glycerin. Then, an internal layer of ethylcellulose (10% weight gain) and an external coat of Eudragit FS30D were applied on the pellets. This association resulted in an increase in the colon-specific release efficiency and this formulation should be further studied aiming its future use as a phytomedicine to the treatment of the inflammatory bowel diseases. / As doenças inflamatórias intestinais (DII) são condições patológicas que acometem a mucosa do trato gastrointestinal, sendo suas principais representantes a doença de Crohn e a retocolite ulcerativa. A terapia atual para essas doenças objetiva o controle das recidivas e é baseada na administração oral de antiinflamatórios, imunossupressores, antibióticos e agentes biológicos. O tratamento dessas doenças é crônico e está relacionado a ocorrência de importantes efeitos adversos oriundos da absorção sistêmica dos fármacos. O uso de plantas medicinais tem apresentado bons resultados no tratamento das doenças inflamatórias, aumentando o interesse pelo desenvolvimento de formas farmacêuticas contendo esses produtos de origem vegetal. A espécie Bidens pilosa L. (picão-preto) é bastante utilizada na medicina popular brasileira e estudos tem comprovado o seu efeito antiinflamatório, inclusive em modelos de inflamação intestinal. O tratamento das DII pode ser melhorado não apenas pelo uso de materiais vegetais, mas também pelo desenvolvimento de sistemas capazes de liberar os compostos ativos especificamente no cólon, garantindo assim o tratamento local seguro e eficiente dessas doenças. Objetivo: O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e avaliação de pellets revestidos com polímeros de liberação pH ou tempo-dependente capazes de proporcionar liberação cólon-específica dos constituintes do extrato da Bidens pilosa. Materiais e Métodos: Dois diferentes extratos de Bidens pilosa (extrato glicólico e hidroetanólico) foram adquiridos comercialmente e caracterizados quanto ao teor de polifenóis totais e teor de sólidos. Esses extratos foram então concentrados em rotaevaporador, sob pressão reduzida, e o teor de polifenóis totais nessas preparações foi determinado pelo emprego da reação colorimétrica de Folin-Ciocauteau. Em seguida, pellets de celulose microcristalina foram obtidos pela técnica de extrusão-esferonização, utilizando os extratos concentrados como líquido aglutinante. Os pellets foram então revestidos em leito fluidizado com diferentes polímeros (etilcelulose, Opadry 94k, Eudragit FS30D, ou ainda a associação de etilcelulose + Eudragit FS30D). As caracterizações morfológica, granulométrica, de fluxo e do teor de polifenóis nos pellets foram realizadas. Por fim, a liberação in vitro dos marcadores vegetais foi determinada em aparato III de dissolução da Farmacopéia Norte-Americana. Resultados e Discussão: Os extratos concentrados apresentaram teor de polifenóis totais cerca de cinco vezes maior em comparação com os extratos originais e foram utilizados, com sucesso, na obtenção de pellets. O revestimento dos pellets com os diferentes polímeros aumentou sua esfericidade, diâmetro médio e melhorou seu fluxo. O tipo de extrato (glicólico ou hidroetanólico) incorporado nos pellets afetou a funcionalidade e estrutura dos filmes de revestimento constituídos por etilcelulose, com formação de vacúolos e liberação rápida dos polifenóis (quase 100% em 120 minutos), observada a partir dos pellets contendo extrato glicólico. A liberação prematura dos polifenóis foi evitada pelo emprego do extrato hidroetanólico em pellets revestidos com 28% de ganho de massa de etilcelulose. Esses pellets liberaram cerca de 30% de polifenóis após 6 horas de ensaio, mas a liberação ao final do experimento (10 horas) foi de apenas 46%. Adicionalmente, os pellets contendo extrato hidroetanólico foram revestidos com dois diferentes polímeros acrílicos de solubilidade pH-dependente, o Opadry®94k e o Eudragit® FS 30D. No entanto, esses pellets também apresentaram liberação prematura dos polifenóis, apesar da ausência de glicerina na formulação. Dessa forma, foi proposta a associação da etilcelulose (10% de ganho de massa, como revestimento interno) com o Eudragit FS30D. Os pellets revestidos com essa associação mostraram aumento na eficiência de liberação cólon-específica dos polifenóis presentes nos extratos de Bidens pilosa, e devem ser adicionalmente estudados visando seu futuro emprego como medicamento fitoterápico para o tratamento das doenças inflamatórias intestinais.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar mÃtodos (maceraÃÃo, decocÃÃo e infusÃo) e tempos (30, 60 e 120 min.) de extraÃÃo, alÃm das substÃncias: fraÃÃes clorofÃrmio e acetato, e cumarina pura, em diferentes concentraÃÃes, do extrato aquoso de sementes de cumaru (Amburana cearensis S.) sobre a germinaÃÃo, o desenvolvimento e o crescimento de plÃntulas de alface (Lactuca sativa L.). Para picÃo-preto (Bidens pilosa L.) e carrapicho (Cenchrus equinatus L.) avaliou-se o efeito da concentraÃÃo do extrato e da cumarina pura sobre sementes e plÃntulas. Os experimentos foram realizados no laboratÃrio de AnÃlises de Sementes, Departamento de Fitotecnia da Universidade Federal do CearÃ, em Fortaleza-Ce. O extrato aquoso bruto foi preparado a partir da farinha de sementes de cumaru, sendo utilizado nas seguintes concentraÃÃes: 0,19; 0,39; 0,78; 1,56; 3,13; 6,25; 12,5; 25 e 50 mg/mL, e Ãgua destilada como controle, totalizando dez tratamentos. As sementes das espÃcies testadas foram distribuÃdas em placas de Petri sobre trÃs discos de papel de filtro, previamente umedecidos com o extrato na proporÃÃo de 2,5 vezes o peso do substrato. Posteriormente as placas foram acondicionadas em cÃmara de germinaÃÃo regulada à temperatura de 25 C e fotoperÃodo de 8h luz/16h escuro, por sete dias. Foram analisadas as variÃveis: germinaÃÃo, comprimento da radÃcula e da parte aÃrea das plÃntulas, em um delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetiÃÃes (50 sementes/repetiÃÃo para alface e 25 para picÃo e carrapicho). O mÃtodo mais eficiente foi maceraÃÃo. O tempo de extraÃÃo com melhores resultados foi o de 30 min. A substÃncia mais potente foi a cumarina pura. Verificou-se ainda que a partir de 6,25 mg/mL do extrato ocorreu uma inibiÃÃo em 100% da germinaÃÃo das sementes de alface. A partir da concentraÃÃo 3,13 mg/mL a germinaÃÃo de carrapicho foi totalmente inibida. Para picÃo-preto as concentraÃÃes 1,56; 3,13 e 6,25 mg/mL foram as mais danosas. A cumarina pura foi bastante fitotÃxica para picÃo e carrapicho, pois inibiu a germinaÃÃo de suas sementes nas concentraÃÃes testadas. Todas as concentraÃÃes do extrato testadas apresentaram efeitos tÃxicos Ãs plÃntulas das espÃcies testadas, em maior ou menor intensidade. / The objective of the present work was to evaluate methods (maceration, decoccion and infusion) and times (30, 60 and 120 min. ) of extraction, besides the substances: fractions chloroform and acetate, and pure coumarin, in different concentrations, of the aqueous extract of cumaru seeds (Amburana cearensis S. ) on the germination, the development and the growth of lettuce seedlings (Lactuca sativa L. ). For âpicÃo-pretoâ (Bidens pilosa L.) and âcarrapichoâ (Cenchrus equinatus L.) the effect of the concentration of the extract was evaluated and of the pure coumarin on seeds and seedlings. The experiments were accomplished at the laboratory of Analyses of Seeds, Department of Fitotecnia of the Federal University of CearÃ, in Fortaleza-Ce. The aqueous rude extract was prepared starting from the flour of cumaru seeds, being used in the following concentrations: 0.19, 0.39, 0.78, 1.56, 3.13, 6.25, 12.5, 25 and 50 mg/mL, and water distilled as control. The seeds, of the tested species, they were distributed in plates of Petri on three disks of filter paper, previously humidified with the extract in the proportion of 2,5 times the weight of the substratum. Later the plates were conditioned in germination camera regulated to the temperature of 25 C and of 8h luz /16h dark, for seven days. The variables were analyzed: germination, length of the root and of the aerial part of the seedlings, in a in a casual interlay delineation, with four repetitions (50 seeds/repetition for lettuce and 25 for âpicÃo-pretoâ and âcarrapichoâ). The most efficient method was the maceration. The time of extraction with better results was it of 30 min. The most potent substance was the pure coumarin. It was verified although starting from 6.25 mg/mL of the extract it happened an inhibition in 100% of the germination of the lettuce seeds. Starting from the concentration 3.13 mg/mL the bun of hair germination was totally inhibited. For âpicÃo-pretoâ the concentrations 1.56, 3.13 and 6.25 mg/mL were the most harmful. The pure coumarin was plenty phytotoxicans for âpicÃo-pretoâ and âcarrapichoâ, because it inhibited the germination of your seeds in the tested concentrations. All the concentrations of the extract presented toxicant effects to the seedlings of the tested species, in adult or smaller intensity.